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抑制gankyrin的表达对肝癌细胞系HepG2增殖的影响
目的:探索通过RNA干涉技术抑制gankyrin的表达对肝癌细胞系HepG2增殖及细胞周期的影响.方法:建立稳定表达靶向gankyrin的shRNA的HepG2细胞系.通过Western blotting验证基因表达的抑制效果.采用细胞计数及MTT法检测细胞的增殖能力.流式细胞仪分析细胞周期.结果:抑制gankyrin基因的表达显著抑制了HepG2细胞的生长,与转染阴性对照shRNA质粒细胞相比,细胞计数示细胞数目明显减低(d6:24.4×103±5.2×103vs123.3×103±2.8×103,P＜0.05),MTT分析显示细胞增殖率明显下降(144 h:7.53±0.50vs16.30±0.38,P＜0.05),流式细胞分析示细胞周期阻滞在G1期(G1:71.63±3.60%vs52.57±2.82%,P＜0.05).结论:在HepG2细胞中抑制gankyrin的表达可有效抑制细胞生长并导致细胞周期的阻滞.利用RNA干涉技术抑制gankyrin的表达可能会成为一种有效的肝癌基因治疗手段.
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肿瘤相关基因Gankyrin在胰腺癌组织中表达的临床意义
目的 研究肿瘤相关基因Gankyrin在胰腺癌组织中表达的临床意义.方法 采用免疫组织化学染色法检测Gankyrin在62例胰腺癌及对应癌旁组织中的表达情况,分析其与肿瘤病理参数的相关性及其对胰腺癌患者预后的影响.结果 胰腺癌及癌旁正常胰腺组织Gankyrin阳性表达率分别为72.5％(45/62)及19.4％(12/62),癌组织的阳性表达率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.001).胰腺癌组织Gankyrn表达与TNM分期、肿瘤分化及转移相关(P＜0.05),而与患者年龄、性别及肿瘤位置无关(P＞ 0.05);Gankyrin阳性者的术后3年生存率为17.8％ (8/45),阴性者为41.2％(7/17),Gankyrin阳性表达者术后生存时间显著短于阴性表达者(P=0.034).结论 Gankyrin在胰腺癌组织中高表达,其表达与患者预后不良密切相关.
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RNA干扰靶向沉默Gankyrin对结肠癌增殖及侵袭的影响
目的：观察靶向沉默Gankyrin 基因对结肠癌细胞SW620在增殖和侵袭方面的影响。方法：通过体外合成针对Gankyrin基因的siRNA，通过脂质体转染SW620细胞，设立对照组检测细胞增殖、凋亡、细胞周期及侵袭能力。结果：细胞转染后，实验组的倍增时间为25．6±0．8小时，对照组倍增时间为21．7±0．6小时（P＜0．01）；细胞周期检测实验组的G1期细胞为68．3±0．7脖、S期细胞为29．6±0．9脖，对照组的G1期细胞为44．1±0．3脖、S期细胞为4．8±0．4脖（P＜0．01）；细胞凋亡检测实验组AnnexinV ＋PI-细胞比例为8．93±0．21脖，明显高于对照组1．31±0．06脖（P＜0．01）；细胞侵袭实验实验组细胞侵袭能率为34．2±0．3脖，明显低于对照组的53．9±0．6脖（P＜0．01）。结论：siRNA干扰Gankyrin基因表达能够明显降低SW620的增殖和侵袭能力，提示Gankyrin可作为结肠癌基因治疗的潜在靶点。
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原癌基因gankyrin在乳腺浸润性导管癌中的表达研究
目的 探讨gankyrin在乳腺浸润性导管癌中的表达水平及其在乳腺癌发生发展中的作用机制.方法 采用蛋白免疫印记的方法检测28例乳腺浸润性导管癌的癌与癌旁组织中gankyrin的表达水平;采用经典的分子克隆技术构建gankyrin的真核表达质粒;利用双报告基因技术检测p53活性的变化;利用蛋白免疫印记技术检测p53、p21和Bax的蛋白水平.结果 gankyrin在28例乳腺浸润性导管癌癌组织的表达明显高于癌旁组织,在MCF-7细胞中,过表达的gankyrin明显抑制了p53的转录活性,使p53、p21和Bax的蛋白水平显著降低.结论 gankyrin对p53的负调控在乳腺浸润性导管癌的发生过程中起重要作用.
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干涉Gankyrin基因表达对小鼠乳腺癌转移的影响
目的 建立稳定干涉癌基因Gankyrin的4T1-luc细胞株,探讨Gankyrin对小鼠乳腺癌转移的影响.方法 采用慢病毒感染和抗性筛选方法获得稳定干涉Gankyrin的乳腺癌细胞株4T1-luc/shGankyrin,通过蛋白质印迹和实时定量PCR方法分别在蛋白质和mRNA水平检测Gankyrin的干涉效果；选用BALB/c小鼠进行4T1细胞原位种植,利用活体成像技术实时观测小鼠体内肿瘤生长和肿瘤转移情况,并对小鼠肺转移瘤进行病理学分析.结果 采用免疫印迹和实时定量PCR,检测稳定敲低Gankyrin 4T1细胞在蛋白质水平和mRNA水平的表达,均明显低于对照细胞,与对照细胞相比,不同干涉序列的4T1细胞mRNA水平分别为对照细胞的4.9％、25.1％、69.8％.利用活体成像进行细胞数与细胞发光强度的检测,选择细胞数与发光强度基本一致的#2细胞株进行小鼠原位种植,其产生的转移瘤进行实时观测,结果显示敲低Gankyrin的4T1细胞诱导的肺转移瘤荧光强度为3.02×106,而对照细胞为10.9×106,同时病理学证实了对照细胞产生的肺转移瘤免疫组织化学Gankyrin染色阳性,而敲低Gankyrin的4T1细胞的肺转移瘤免疫组织化学Gankyrin染色阴性.结论 采用慢病毒感染的方法可以有效建立稳定敲低Gankyrin表达的细胞株；Gankyrin稳定干涉后对小鼠乳腺癌转移具有明显的抑制作用.Gankyrin有可能成为新的肿瘤治疗靶点.
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Gankyrin与消化系统肿瘤关系的研究进展
消化系统肿瘤与多种肿瘤相关基因的异常表达密切相关,Gankyrin是一种癌基因,于肝癌、结直肠癌、胰腺癌等消化系统肿瘤中高表达,并通过依赖泛素的蛋白酶解系统介导多种转录因子、细胞周期调控蛋白以及抑癌蛋白如p53、Rb等的降解.研究表明,Gankyrin在消化系统肿瘤形成及细胞的生长周期调控中发挥重要作用,在消化系统肿瘤的早期诊断及判断预后方面具有一定的应用前景,同时也可能成为消化系统肿瘤基因治疗的潜在靶点.
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下调 gankyrin 通过调节β-catenin/cyclin D1信号通路抑制胃癌细胞增殖
背景：Gankyrin 是一个含锚蛋白重复序列的原癌蛋白，其高表达参与了多种恶性肿瘤的发生、发展进程。目的：探讨下调 gankyrin 表达对胃癌细胞增殖能力的影响及其可能机制。方法：以携带 gankyrin siRNA 的慢病毒载体转染人胃癌细胞株 MKN28，分别采用 MTT 实验、流式细胞术和蛋白质印迹法检测下调 gankyrin 表达对 MKN28细胞增殖、细胞周期分布及其β-catenin/ cyclin D1信号通路的影响。结果：慢病毒载体的转染效率在90%以上，转染gankyrin siRNA 后，MKN28细胞 gankyrin 蛋白表达显著受抑（P ﹤0.01）。与未转染慢病毒和转染对照病毒的细胞相比，转染 gankyrin siRNA 的 MKN28细胞体外生长于第3天起显著受抑，细胞周期 G1期细胞比率增高，S 期细胞比率降低，细胞中的β-catenin 和 cyclin D1表达水平降低，差异均有统计学意义（P ﹤0.01）。结论：下调胃癌细胞中的 gankyrin 表达可通过抑制β-catenin/ cyclin D1信号通路引起细胞周期 G1期阻滞和细胞增殖抑制，gankyrin 有望成为胃癌靶向治疗的新靶点。
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Gankyrin蛋白在喉鳞癌中表达的实验研究
目的：研究Gankyrin蛋白在喉鳞癌组织及喉鳞癌Hep-2细胞系中的表达。方法免疫组织化学方法检测24例喉鳞癌组织、相应癌旁组织及10例正常组织,免疫细胞化学法检测Hep-2细胞系中Gankyrin蛋白的表达与分布,并计算阳性细胞率,进行统计分析。结果喉鳞癌组织及Hep-2细胞系中,Gankyrin蛋白主要表达于细胞核。喉鳞癌组织中Gankyrin蛋白表达阳性细胞率(58.5%)明显高于相应癌旁组织(11.4%)及正常组织(18.1%),且差异有统计学意义(均P<0.01)。结论喉鳞癌组织及喉鳞癌Hep-2细胞系中均有Gankyrin蛋白的表达,可为Gankyrin在喉鳞癌中表达的后续相关研究提供理论依据。
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siRNA沉默Gankyrin基因对喉鳞癌Hep-2细胞生物学行为的影响
目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默Gankyrin基因对喉鳞癌Hep-2细胞的生物学行为影响.方法:用siRNA沉默喉鳞癌Hep-2细胞中的Gankyrin基因,运用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot)技术检测转染前后Gankyrin mRNA及蛋白的表达.采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,细胞划痕损伤实验和Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测Gankyrin下调后p53蛋白的表达.结果:qRT-PCR和Western blot结果显示,Gankyrin siRNA组Gankyrin mRNA和蛋白的相对表达量均低于对照siRNA组和未处理组(P＜ 0.001).CCK-8法显示Gankyrin siRNA组细胞增殖速度明显下降(P＜ 0.001).流式细胞仪检测结果表明,Gankyrin siRNA组细胞凋亡率[(7.70±1.12)％]明显高于对照siRNA组[(2.34±0.32)％]和未处理组[(1.82±0.29)％],差异有统计学意义(P＜0.001);与两对照组相比,Gankyrin siRNA组G1期比例增加,S期比例减少,差异有统计学意义(P＜ 0.001).细胞划痕损伤实验和Transwell小室实验显示Gankyrin siRNA组的细胞迁移能力明显减弱(P＜0.01);Matrigel侵袭实验显示Gankyrin siRNA组细胞侵袭能力与对照siRNA组和未处理组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Gankyfin表达下调增加了Hep-2细胞中p53蛋白的表达,差异有统计学意义(P＜ 0.001).结论:Gankyfin表达下调能抑制Hep-2细胞的增殖和迁移,可能与细胞凋亡、细胞周期改变及p53的表达密切相关.
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Gankyrin真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达
目的:构建Gankyrin基因的真核表达载体并转染NIH3T3细胞,获得稳定转染Gankyrin的NIH3T3细胞株,研究Gankyrin在真核细胞中的表达及功能.方法:通过RT-PCR方法从肝癌细胞SMMC-7721,中扩增获得人Gankyrin编码区基因,克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP上,利用阳离子脂质体转染NIH3T3细胞,经G418筛选获得稳定表达的细胞克隆.RT-PCR检测Gankyrin转染细胞后的转录;荧光显微镜观察确定Gankyrin在细胞中的定位分布;MTT法测定Gankyrin对细胞生长、血清依赖性及对地塞米松诱导细胞凋亡的敏感性影响.结果:重组表达载体pIRES2-EGFP-Gankyrin构建成功.Gankyrin在NIH3T3细胞中获得了有效转录及表达,并在细胞核和细胞浆中均广泛分布.Gankyrin可以显著促进NIH3T3细胞的增殖,降低血清依赖性并提高对地塞米松致细胞凋亡的耐受能力.结论:建立了稳定表达Gankyrin的NIH3T3细胞株,为进一步研究奠定了理论基础.
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57例胃癌组织中Gankyrin表达的临床意义
[目的]研究gankyrin在胃癌组织中的表达及其临床意义.[方法]采用免疫组化染色方法检测gankyrin在手术切除的57例胃癌及其癌旁组织中的表达水平,分析其临床意义.[结果] Gankyrin在胃癌组织中表达水平显著高于癌旁组织(P＜0.01);gankyrin表达水平在不同年龄和不同性别患者间差异均无统计学意义(P＞0.05);而在不同病理分化程度(P=0.033)、有无淋巴结转移(P=0.020)及不同TNM分期(P=0.022)患者间差异有统计学意义;Kaplan-Meier分析提示gankyrin高表达胃癌患者预后不良(P=0.029).[结论]Gankyrin高表达与胃癌恶性进展密切相关,可能是胃癌诊断与治疗的重要靶点.
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Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶表达差异研究
目的 v探讨Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶中表达的临床意义.方法 选取112例胃癌患者手术切除的胃癌原发灶1 12例、转移灶43例,应用免疫组化染色方法,比较Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶中的表达阳性率,并分析其与临床参数的相关性及对患者预后的影响.结果 Gankyrin在胃癌转移灶中的表达阳性率高于原发灶(P＜0.05).胃癌患者原发灶中Gankyrin表达阳性率与肿瘤较低的分化程度、较晚的TNM分期及肿瘤转移均有关(均P＜0.05).胃癌转移患者转移灶与原发灶中Gankyrin的表达呈正相关(r=0.58,P＜0.05).胃癌患者及胃癌转移患者中Gankyrin表达阳性者的预后较差.结论 Gankyrin在胃癌原发灶及转移灶中的表达与胃癌恶性程度有关,在转移灶中的表达阳性率高于原发灶,对患者预后有一定的预测价值.
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G蛋白偶联雌激素受体和Gankyrin蛋白在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义
目的:研究新型雌激素受体G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)和Gankyrin在卵巢子宫内膜异位症中的表达及其临床病理意义,探讨二者在卵巢子宫内膜异位症发生、发展中的作用.方法:采用免疫组织化学法检测GRER和Gankyrin蛋白在卵巢子宫内膜异位症患者的异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜中的表达情况及定位分布,结合临床资料分析其与卵巢子宫内膜异位症分期的关系,并评估两者之间的相关性.结果:GPER蛋白在异位、在位及正常内膜中的阳性表达率分别为63.6％,51.5％,21.2％,异位及在位内膜组的阳性表达显著高于正常内膜组(均P＜0.0125),而异位与在位内膜间差异无统计学意义(P＞0.0125);Gankyrin蛋白在异位、在位及正常内膜中的阳性表达率分别为69.7％,36.4％,9.1％,组间两两比较差异均有统计学意义(均P＜0.0125).在位内膜中,GPER蛋白表达在增生期高于分泌期(P＜0.05),Gankyrin蛋白在增生期与分泌期的表达差异无统计学意义(P＞0.05).GPER和Gankyrin蛋白的表达与卵巢子宫内膜异位症的临床分期有关,二者在Ⅲ～Ⅳ期的阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ期(均P＜0.05).GPER和Gankyrin蛋白在异位内膜中的表达呈正相关(rs=0.640,P＜0.01).结论:GPER和Gankyrin的表达与卵巢子宫内膜异位症的发生、发展及临床分期有关,二者可能通过相互作用促进异位病灶的形成.
关键词： 卵巢子宫内膜异位症 G蛋白偶联雌激素受体 Gankyrin 雌激素 -
Gankyrin在肝癌细胞系中的表达
目的检测肝癌细胞系中癌基因Gankyrin的表达.为在肝癌细胞中对Gankyrin基因进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞.方法对肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、HHCC进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting检测.结果Gankyrin基因在3种肝癌细胞系中均有表达.结论多种肝癌细胞系中均有Gankyrin基因的表达,HepG2、SMMC-7721、HHCC均可作为阳性靶细胞,进行Gankyrin基因的RNA干涉研究.
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ShRNA抑制gankyrin基因在肝癌细胞中表达的研究
目的构建靶向癌基因gankyrin的短发夹状RNA(shRNA),观察其在肝癌细胞株HepG2中对gankyrin基因表达的抑制作用.方法设计、合成三对针对gankyrin的shRNA序列,连接到带有人U6启动子的载体质粒pGenesil-1中,构建重组质粒pGenesil-1-Gankyrin1、pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3,稳定转染HepG2细胞,采用RT-PCR及Western blot 检测对gankyrin表达的抑制效果.结果酶切分析和测序证实pGenesil-1-Gankyrin1、pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3构建成功;其中pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3对gankyrin的表达有明显的抑制作用.结论构建的pGenesil-1-Gankyrin重组质粒能有效抑制gankyrin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达.
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Gankyrin 在胃癌及癌前病变中的表达及临床病理学意义
目的：探讨Gankyrin在胃癌及癌前病变中的表达及临床病理学意义。方法采用免疫组织化学法检测Gankyrin在30例正常胃黏膜、60例慢性萎缩性胃炎、30例胃黏膜上皮异型增生和84例胃癌组织中的表达，同时分析Gankyrin表达和胃癌临床病理学特征的关系。结果 Gankyrin在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、胃黏膜异型增生和胃癌组织中均有不同程度的表达，而且表达差异有统计学意义。 Gankyrin在胃癌中的表达与临床分期和转移相关，与患者的年龄、性别以及肿瘤的大小、组织学分级没有相关性。结论 Gankyrin不仅参与胃癌的早期发生，而且也参与胃癌的发展，Gankyrin有望成为胃癌诊断和防治的靶标。
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乙肝病毒X蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控Gankyrin表达
目的:研究乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)对Gankyrin表达水平的影响以及Wnt/β-catenin信号通路在HBX基因调控Gankyrin表达中的作用.方法:HBX腺病毒表达载体(Ad-HBX-GFP)感染转染2种人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721细胞,Si-HBX分子(Si-HBX oligo)用LipofectamineTM 2000转染入HepG2.2.15细胞,用RT-PCR和Western blot法检测HBX与Gankyrin的表达情况;β-catenin腺病毒载体转染HepG2、SMMC-7721细胞,用Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况;在沉默β-catenin表达的HepG2、SMMC-7721细胞中过表达HBX基因,Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况.结果:①HepG2.2.15细胞中Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于HepG2细胞(P＜0.05).②HepG2与SMMC-7721细胞系中Ad-HBX-GFP组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于绿色荧光蛋白腺病毒表达载体(Ad-GFP)组(P＜0.01).③HepG2.2.15细胞中Si-HBX组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均低于Si-阴性对照(Si-NC)组(P＜0.01).④在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达HBX后,Ad-HBX-GFP组β-catenin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组(P＜0.01).⑤在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达β-catenin后,β-catenin腺病毒表达载体(Ad-β-catenin-GFP)组Gankyrin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组(P＜0.01).⑥在HepG2与SMMC-7721细胞系中沉默β-catenin后,过表达HBX基因,Si-β-catenin腺病毒表达载体(Ad-si-β-catenin-RFP)组与红色荧光蛋白腺病毒表达载体(Ad-RFP)组相比,Gankyrin的蛋白表达水平未见升高(P＜0.01).结论:HBX-Wnt/β-catenin-Gankyrin信号转导通路存在与肝癌细胞中,抑制β-catenin的功能可阻遏HBX对Gankyrin的上调作用,本结果将可能为肝癌的治疗提供新的思路.
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Gankyrin致肿瘤的分子机制研究进展
Gankyrin是一种含有226个氨基酸的癌基因,它由7个锚蛋白重复序列组成.研究表明,Gankyrin蛋白在肝癌、胰腺癌、结肠癌等多种肿瘤组织中高表达,并与肿瘤恶性程度相关,提示其在肿瘤发生发展中起到重要作用.
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Gankyrin在喉鳞癌组织中的表达及临床意义
目的:研究Gankyrin在喉鳞癌组织中的表达及Gankyrin的表达水平与其临床病理特征间的关系.方法:应用qRT-PCR及Western Blot技术检测16例新鲜喉鳞癌组织、相应癌旁组织中Gankyrin mRNA及Gankyrin蛋白的表达;免疫组织化学方法检测Gankyrin蛋白在50例喉鳞癌组织蜡块及癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果:16例新鲜喉鳞癌组织与癌旁组织相比,Gankyrin mRNA及Gankyrin蛋白在喉鳞癌组织表达增加(均P ＜0.05).50例喉鳞癌组织蜡块中Gankyrin蛋白表达阳性率(34/50,68％)明显高于相应癌旁组织(6/50,12％),差异有统计学意义(P＜0.05).喉鳞癌组织中的Gankyrin蛋白表达水平与肿瘤病理分化程度、临床分期相关(均P＜0.05).结论:Gankyrin在喉鳞癌组织高表达且与喉鳞癌的发生发展密切相关.
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GST-Gankyrin融合蛋白的原核表达及抗体制备
目的:为进一步研究在肝癌上过表达的癌相关基因Gankyrin的功能,进行GST-Gankyrin融合蛋白表达载体的构建、原核表达、及抗体制备.方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从人肝癌细胞系hepG2中扩增Gankyrin Cdna编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒Pgex-4T2中,经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌DH-5α,经IPTG诱导获得表达,并将Gankyrin蛋白免疫家兔,经过Western blot检测抗Gankyrin抗体的产生.结果:成功构建了Gankyrin原核表达载体,并在大肠杆菌DH-5α中获得表达,Western blot检测证实获得了抗Gankyrin抗体.结论:成功表达了Gankyrin蛋白并制备了其特异性抗体.
