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复方中药益肝康抑制肝星状细胞增殖的作用机制
目的:探讨活血化瘀复方中药益肝康抑制大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的作用机制.方法:采用IL-1β激活HSC,应用Western blot检测JNK的活化程度;应用活细胞计数试剂盒-CCK-8检测HSC增殖并观察JNK特异性阻断剂SP600125对IL-1β促HSC增殖的影响.应用凝胶电泳移动抑制法测定AP-1的活性.结果:IL-1β有明显促大鼠HSC增殖作用,IL-1β作用培养的HSC 24 h后,吸光值明显高于对照组(1.573±0.026 vs 1.339±0.073,P=0.000);经JNK特异性阻滞剂SP600125预处理后,IL-1β促HSC增殖作用受到抑制,SP600125浓度为10,20及40 μmol/L时,吸光值分别为1.427±0.113,0.772±0.093,0.675±0.074,与对照组(1.560±0.110)相比其增殖反应均明显降低(P=0.03;P=0.000;P=0.000);IL-1β可激活大鼠HSCs JNK信号蛋白,并呈现出一定的时相变化.IL-1β作用HSCs后0,5,15,30,60及1 20 min,JNK活性分别为0.982±0.299,1.501±0.720,2.133±0.882,3.360±0.452,2.181±0.789,1.385±0.368.与0(未加IL-1β)相比,15 min,30 min及60 min均有显著差异(P=0.002,P=0.000,P=0.001).益肝康可抑制IL-1β诱导的HSCs JNK活性(1.610±0.242 vs 3.360±0.452,P=0.000);益肝康可抑制IL-1β诱导的HSCs AP-1活性,经益肝康预处理HSCs1 h后,AP-1活性明显受到抑制(342.43±85.77 vs 597.70±83.96,P=0.005).结论:IL-1β可刺激HSC增殖,细胞内JNK信号转导通路参与了IL-1β促HSC增殖作用;益肝康可通过阻滞JNK/AP-1通路,抑制HSC增殖.
关键词： 益肝康 JNK/AP-1信号转导通路 白细胞介素-1β 肝星状细胞 增殖 -
益肝康等活血化瘀中药抑制IL-1β刺激的HSC增殖及TIMP-1的表达
目的:探讨活血化瘀中药益肝康、丹参小复方、丹参对IL-1β刺激的活化的大鼠肝星状细胞(HSCs)增殖及基质金属蛋白酶抑制因子mRNA(TIMP mRNA)表达的影响.方法:体外培养活化的大鼠HSC,随机分为8组:对照组(A组)、IL-1β 10μg/L(B组)、IL-1β 10 μg/L+益肝康2 g/L干预组(C组)、IL-1β 10μg/L+丹参小复方2 g/L干预组(D组)、IL-1β 10 μg/L+丹参2 g/L干预组(E组)、丹参2 g/L(F组)、丹参小复方2 g/L(G组)、益肝康2 g/L(H组).加药后24 h,应用活细胞计数试剂盒-CCK-8检测各组HSC增殖,采用半定量RT-PCR方法检测各组HSC TIMP-1 mRNA的表达.结果:A组HSC增殖和TIMP-1 mRNA表达强于F、G、H组(1.291±0.09 vs 1.055±0.105,1±0.07,0.883±0.06,P＜0.01;0.591±0.064vs 0.493±0.088,0.458±0.076,0.356±0.046,P＜0.05或P＜0.01);H组HSC增殖和TIMP-1mRNA表达低于F组和G组(P＜0.05);B组HSC增殖和TIMP-1 mRNA表达均明显强于A组(1.575±0.017 vs 1.291±0.09,P＜0.01;1.369±0.097 vs 0.591±0.064,P＜0.01)和C、D、E组(1.575±0.017 vs 0.906±0.09,1.015±0.081,1.097±0.038,P＜0.01;1.369±0.097 vs 0.694±0.078,0.854±0.05,0.898±0.12,P＜0.01);C组HSC增殖和TIMP-1 mRNA表达低于D组和E组(P＜0.05).结论:益肝康等活血化瘀中药能抑制IL-1β刺激的HSCs增殖及TIMP-1 mRNA表达,发挥其抗肝纤维化功效.益肝康抗肝纤维化作用强于丹参小复方和丹参单药.
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拆方益肝康与药物血清对肝星状细胞PDGF及受体表达的影响
目的:探讨益肝康及其拆方丹参小复方(丹参、黄芪、归尾)对肝星状细胞PDGF与受体表达的影响.方法:分别制备益肝康及丹参小复方纯化浸膏、正常大鼠及肝纤维化大鼠药物血清,温育体外培养的HSCRT-PCR和Western blot技术检测PDGF-BB mRNA及蛋白表达,RT-PCR和流式细胞技术检测PDGFR-βmRNA及蛋白表达.结果:益肝康及丹参小复方纯化浸膏使PDGF-BB蛋白表达分别下调了78.79%、56.77%(P＜0.01),使其mRNA表达分别下调了67.13%、43.59%(P＜0.01),使(其)PDGFR-β蛋白表达分别下调了11.61%、6.7%(P＜0.01),使其mRNA表达分别下调了54.85%、30.51%(P＜0.01);正常大鼠益肝康及丹参小复方药物血清使PDGF-BB蛋白表达分别下调了68.05%、49.95%(P＜0.01),使其mRNA表达分别下调了55.87%、38.66%(P＜0.01),使PDGFR-β蛋白表达分别下调了10.98%、6.48%(P＜0.01),使其mRNA表达分别下调了39.67%、21.38%(P＜0.01);肝纤维化大鼠益肝康及丹参小复方药物血清使PDGF-BB蛋白表达分别下调了81.93%、67.31%(P＜0.01),使其mRNA表达分别下调了72.68%、55.49%(P＜0.01),使PDGFR-β蛋白表达分别下调了17.43%、11.15%(P＜0.01),使其mRNA表达分别下调了60.46%、46.47%(P＜0.01),全方作用优于拆方(P＜0.01),肝纤维化大鼠药物血清作用优于正常大鼠药物血清(P＜0.01).结论:益肝康及丹参小复方可显著抑制PDGF与PDGFR-β基因和蛋白表达,此可能是该方抗肝纤维化的主要机制之一,且全方作用优于拆方.
关键词： 益肝康 丹参小复方 肝纤维化 肝星状细胞 血小板衍生生长因子-BB -
拆方益肝康的两种药物血清对HSC活化增殖的影响
目的:探讨中药复方益肝康抗肝纤维化的作用机制及药效学配伍意义.方法:分别给正常大鼠及CCl4造模肝纤维化大鼠灌服益肝康及其拆方-丹参小复方(丹参、黄芪、归尾),提取药物血清,温育体外培养的肝星状细胞.3H-TdR掺入法测定细胞增殖,免疫细胞化学法检测α-SMA表达.结果:两种方法制备的益肝康及丹参小复方药物血清对HSC的3H-TdR掺入及α-SMA表达均有抑制作用A组(正常大鼠药物血清)中,益肝康及丹参小复方药物血清50 mL/L浓度组对3H-TdR掺入抑制作用与对照组相比无显著性差异(P＞0.05),而100、200 mL/L浓度组均具有显著性差异(拆方:14.48%,25.95%vs 0,全方:16.66%,23.77%vs 0,P＜0.01);全方与拆方各浓度组对α-SMA表达的抑制作用与对照组相比均有显著性差异(吸光度:0.042±0.002,0.048±0.001 vs 0.061±0.004,P＜0.01).B组(肝纤维化大鼠药物血清)中:50、100、200 mL/L益肝康及丹参小复方药物血清组对3H-TdR掺入(全方:8.02%,18.36%,29.53%vs 0,拆方:7.44%,16.80%,30.01%vs 0,均P＜0.01)及α-SMA表达抑制作用与对照组相比均具有显著性差异(吸光度:0.038±0.001,0.044±0.002 vs 0.065±0.002,均P＜0.01).相应浓度的全方与拆方药物血清之间对3H-TdR掺入抑制率无显著性差异(P＞0.05),对α-SMA表达的抑制作用全方优于拆方(P＜0.05).肝纤维化大鼠药物血清对3H-TdR掺入及α-SMA表达抑制作用优于正常大鼠药物血清(P＜0.05).结论:益肝康及丹参小复方可抑制肝星状细胞活化增殖,全方作用优于拆方,肝纤维化大鼠药物血清作用优于正常大鼠药物血清.
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拆方益肝康不同药物血清对肝星状细胞胶原代谢及TGF-β1的影响
目的:探讨益肝康抗肝纤维化作用机制、配伍意义,并采用对比血清药理学方法探讨更为科学的中药研究方法.方法:分别制备益肝康及其拆方-丹参小复方正常大鼠(A组,A1组:正常大鼠血清对照组;A2组:正常大鼠丹参小复方血清组;A3组:正常大鼠益肝康血清组)与肝纤维化大鼠(B组,B1组:肝纤维化大鼠血清对照组:B2组:肝纤维化大鼠丹参小复方血清组:B3组:肝纤维化大鼠益肝康血清组)药物血清,温育体外培养的HSC,3H-脯氨酸掺入法检测胶原合成,Western blot技术检测TGF-β1蛋白表达,RT-PCR技术检测TGF-β1 mRNA表达.结果:益肝康及丹参小复方正常大鼠与肝纤维化大鼠药物血清均可抑制HSC胶原合成(100mL/L时A组:2275.00±114.30 cpm,2401.87±108.50 cpm vs 2963.62±128.01 cpm;B组:2205.3l±108.97 clom,2462.70±177.02 epm vs 3179.12±223.34 cpm;200 mL时A组:2372.96±123.3 cpm Vs 2515.37±98.25 cpm vs 3209.38±110.75 cpm;B组:2394.29±1 50.50 cpm vs 2611.25±126.05 cpm vs 3490.46±183.16 cpm,P<0.05或0.01).100 mL时降低TGF-β1基因及蛋白表达(均P<0.01).2组在胶原合成、TGF-β1基因及蛋白表达益肝康组作用优于丹参小复方(均P<0.01),而益肝康组与丹参小复方组比较则B组血清作用优于A组(益肝康组:TGF-β1基因:0.356±0.032 vs 0.568±0.028;TGF-β1蛋白:0.458±0.009 vs 0.639±0.102;丹参小复方组:0.601±0.047 vs 0.810±0.051:0.612±0.126vs 0.860±0.138.P<0.05或LP<0.01).结论:益肝康及丹参小复方均可抑制HSC胶原合成,其主要机制之一是抑制TGF-β1基因和蛋白表达,益肝康更具配伍意义,肝纤维化大鼠药物血清药效优于正常大鼠血清药效.
关键词： 益肝康 肝纤维化 肝星状细胞 转化生长因子beta-1 血清药理学 -
阿德福韦酯联合益肝康治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效观察
慢性乙型肝炎患者体内乙肝病毒持续复制与免疫攻击造成肝细胞炎症破坏和肝组织纤维化，肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发展的必经病理学过程，有效治疗肝纤维对于改善慢性肝病预后、降低病死率至关重要。有效抗肝炎病毒病因治疗下仍需重视抗肝纤维化治疗［1］。
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关键词：
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益肝康药物血清对大鼠肝星状细胞胞浆游离钙效应的抑制作用
目的研究益肝康药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2+]i)增高的作用.方法将32只健康雄性SD大鼠按随机数字表分为4组:肝纤维化模型益肝康组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCL4溶液9周,然后灌服益肝康6 d;肝纤维化模型对照组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCL4溶液9周,然后灌服0.9%氯化钠溶液6 d ;正常大鼠益肝康组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服益肝康6 d ;正常对照组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服0.9%氯化钠溶液6 d.结束后经下腔静脉取血并分离血清.用盲法,采用上述10%血清培养HSCs 24 h并负载好Fluo-3/AM后,使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs [Ca2+]i.结果 (1)经正常大鼠益肝康组及肝纤维化模型益肝康组大鼠血清预处理的HSCs,其[Ca2+]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P＜0.05);且两者与正常对照组间差别均有显著性意义(P＜0.05).结论益肝康能抑制肝星状细胞[Ca2+]i的升高,这可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一.
关键词： 肝纤维化 肝星状细胞 益肝康 激光扫描共聚焦显微镜 胞浆游离钙 -
益肝康对大鼠肝纤维化的防治作用
目的研究中药益肝康对CCl4和猪血清(PS)所致的肝纤维化的防治作用.方法采用CCl4和PS10周法制作SD大鼠肝纤维化模型,用中药益肝康治疗14周.预防组在制模前4周即开始预防用药,于制模结束时停止用药;治疗组在制模结束前4周开始用药治疗,于制模结束后10周停止用药.设正常对照组和模型对照组.进行Mas-son染色肝组织病理切片检查,采用计算机图像分析系统对结果进行分析.结果在两种模型中,对照组、预防组、治疗组假小叶数目、纤维间隔数目间的差别均有显著性意义(P＜0.05);PS造模各组肝组织纤维间隔宽度间的差别有显著性意义(P＜0.05,造模结束后第4周者除外).结论益肝康对上述两种造模方法所致的肝纤维化均具有明显的防治作用.造模前4周即开始预防用药比造模结束前4周开始治疗用药更能有效地防止大鼠肝纤维化的形成.
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益肝康治疗慢性乙型肝炎肝纤维化123例疗效观察
目的探讨中药益肝康对慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效.方法将123例慢性乙型肝炎患者随机分为两组,治疗组给予益肝康袋装浓缩煎剂1袋,2次/d,对照组(40例)给予肝太乐0.2 g,3/d,治疗6个月.分别于治疗前后检测肝功能、血清肝纤维化指标,进行疗效评价.结果治疗组和对照组血浆透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平间差别有显著性意义(P＜0.01);同时,治疗组患者症状改善,肝功能明显好转,白蛋白水平升高.结论益肝康是治疗慢性肝病、肝纤维化的有效药物.
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益肝康口服液的制备及临床疗效观察
益肝康系我院老中医根据多年临床经验,结合中医理论自行研制的纯中药制剂,由党参、黄芪、丹参、苡米、五味子等中药组成,具有益气健脾、养血活血、解毒散结、调节机体免疫功能、增强机体抵抗力的作用.用于慢性乙型肝炎患者,取得了较好的疗效,现报告如下.
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益肝康对实验性肝纤维化大鼠肝细胞的保护作用及超微结构观察
目的:探讨益肝康对实验性肝纤维化大鼠肝细胞损伤的保护作用.方法:采用40%CCl4皮下注射制备大鼠实验性肝纤维化模型,与秋水仙碱对照,观察益肝康对肝功能、肝脏组织病理变化和超微结构变化的影响.结果:益肝康能明显改善实验性肝纤维化大鼠的肝功能,提高血清白蛋白(Alb)、减轻肝细胞脂肪变性和坏死.血清丙氨酸转氨酶(ALT)、Alb和血清球蛋白(Glb)的变化,与对照组比较差异有显著性意义(分别为P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05).益肝康组大鼠肝组织的脂肪变性程度较秋水仙碱组明显减轻,脂肪变性积分分别为2.00±1.36和2.75±0.65(P＜0.05);电镜观察表明益肝康对实验性肝纤维化大鼠肝细胞线粒体等细胞器的损伤具有保护作用.结论:益肝康对CCl4损伤性肝细胞有保护作用,可改善肝功能,对线粒体等细胞器的损伤具有保护作用.
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益肝康的药物血清对大鼠HSCs增殖及PDGF基因表达的影响
目的探讨中药复方益肝康抗肝纤维化的作用机制.方法给正常大鼠灌服益肝康,提取药物血清,温育体外培养的肝星状细胞.3H-TdR掺入法测定细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期,透射电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学法检测PDGF-BB蛋白表达.结果益肝康药物血清显著抑制肝星状细胞的增殖,可使细胞生长周期延长,细胞增殖、活力受抑,并明显抑制PDGF-BB蛋白表达.结论益肝康可抑制肝星状细胞增殖,对PDGF-BB表达的抑制作用可能是该方抗肝纤维化的主要机制之一.
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益肝康拆方药物血清对肝星状细胞TGF-β1及受体影响的研究
目的:探讨益肝康抗肝纤维化作用机制、配伍意义.方法:分别制备益肝康及其拆方--丹参小复方纯化浸膏、正常大鼠及肝纤维化大鼠药物血清,温育体外培养的HSC,RT-PCR和Western blot技术检测TGF-β1 mRNA及蛋白表达,RT-PCR和流式细胞技术检测TβR-I mRNA及蛋白表达.结果:益肝康及丹参小复方纯化浸膏、正常大鼠和肝纤维化大鼠药物血清均可以抑制TGF-β1与受体TβR-I基因及蛋白表达,益肝康作用优于小复方,肝纤维化大鼠药物血清作用优于正常大鼠药物血清.结论:益肝康及丹参小复方抗肝纤维化的主要机制之一是抑制TGF-β1与TβR-I基因和蛋白表达,益肝康全方更具配伍意义,肝纤维化大鼠药物血清与正常大鼠药物血清药效学不同.
关键词： 益肝康 肝纤维化 肝星状细胞 转化生长因子beta-1 血清药理学
