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蛋白C预测外科ICU患者死亡风险的初步研究
目的 评价抗凝标志物蛋白C(PC)及其他凝血相关指标预测外科ICU患者死亡风险的能力.方法 本研究为病例对照研究,纳入华中科技大学附属同济医院2011年8至12月252例外科ICU患者及30名健康对照者,检测其凝血、抗凝及炎症相关指标,包括活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、纤维蛋白原含量、D-二聚体含量、纤溶酶原活性、PC活性、抗凝血酶活性、血栓调节蛋白含量、C反应蛋白含量.同时获取其急性生理学与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分等相关临床信息.采用单因素方差分析、Kruskal-Wallis检验及曼-惠特尼U检验比较存活组、死亡组与健康对照组间上述各指标的差异；各指标预测能力评价采用ROC曲线下面积；评估ICU结局的独立危险因素采用单变量及多变量Logistic回归分析.结果 入院28 d后存活患者与死亡患者的PC活性分别为(70.2±22.7)％和(48.6±29.8)％,差异有统计学意义(t =2.84,P＜0.01)；APACHEⅡ评分分别为(21.0±8.2)分和(29.5 ±10.9)分,差异有统计学意义(t=2.51,P＜0.05)；凝血酶原时间分别为(12.9±3.5)s和(18.8±10.2)s,差异有统计学意义(t=-2.13,P＜0.05)；PC活性与APACHEⅡ评分联合预测外科ICU患者死亡风险准确性高于其他指标(曲线下面积=0.806)；在校正了一些凝血参数和患者临床特征的影响后,PC活性＜47.5％[OR =6.40,95％可信区间(CI):2.526 ～ 16.216,P＜0.001]与APACHEⅡ评分(OR=1.123,95％ CI:1.012 ～1.250,P＜0.05)为外科ICU患者死亡的独立危险因素.结论 PC活性降低预示外科ICU患者死亡风险增加,与APACHEⅡ评分联合应用可更准确地评估患者预后.(中华检验医学杂志,2013,36:339-342)
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血浆蛋白C活性测定对支气管哮喘患者病情和预后的评估
目的：研究血浆蛋白C活性（ PC∶A）测定对支气管哮喘患者病情和预后的评估价值。方法回顾性队列分析研究。选择天津医科大学总医院于2010年至2012年间收治的支气管哮喘患者202例，男77例，女125例，年龄（41.2±11.4）岁。采用IL ACL TOP 700型血液凝固仪测定PC∶A。采用ROC评价PC∶A的诊断性能。利用χ2检验对PC∶A和临床病理因素进行关联性分析。用Cox回归模型对预后影响因素进行分析。用Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果 PC∶A测定结果分别为健康对照组（102.2±13.6）％、间歇发作组（104.8±11.9）％、轻度持续组（136.3±15.8）％、中度持续组（129.0±13.5）％、重度持续组（126.8±14.7）％，各组间PC∶A水平差异有统计学意义（F＝7.15，P＜0.01）。轻度、中度和重度持续组PC∶A水平均高于健康对照组（q值分别为16.83、19.94、11.37）和间歇发作组（q值分别为15.54、12.15、10.66），差异均有统计学意义（P＜0.05）。中度持续组和重度持续组PC∶A水平均显著低于轻度持续组（ q值分别为3.82和4.30，P＜0.05）。在接受6个月的规则治疗后，部分控制组和未控制组的PC∶A水平均显著高于控制组（ q值分别为12.45和9.91，P＜0.05）。 PC∶A评价哮喘患者接受治疗6个月后病情未得到完全控制的临界值为118.0％时，曲线下面积为0.892（95％CI：0.851～0.936）。χ2检验分析显示，PC∶A与嗜酸性粒细胞数量、血清总IgE、合并过敏性鼻炎和肺功能（ FEV1％）有关联性（ P＜0.01）。 Cox回归模型和生存分析显示，在接受6个月规则治疗后的血浆PC∶A是哮喘患者第7～12个月内哮喘急性发作风险的独立预后评价指标，血浆PC∶A高于临界值的哮喘患者的急性发作风险增加。结论哮喘患者血浆PC∶A水平显著增高，并与患者病情严重程度、哮喘控制水平和哮喘严重发作风险相关，可作为评价患者病情发展和哮喘控制的有效指标。
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遗传性蛋白C缺陷症四个家系的分子发病机制研究
目的 对4个遗传性PC缺陷症家系进行临床表型诊断和基因型分析.方法 分别用发色底物法和凝固法测定4个家系先证者及家系成员的血浆PC:A、TPS:A和FPS:A;PC:Ag和FPS:Ag的测定采用ELISA法.采用凝血酶生成试验检测患者凝血功能的变化.PCR法扩增先证者PC和PS基因的全部外显子及其侧翼序列,PCR产物纯化后直接测序,检测其基因突变.结果 先证者1的PC:A为36%,PC:Ag 为57%,TPS:A为48%,FPS:A为18%,FPS:Ag为23.7%,基因分析显示其PC基因2号、7号和8号外显子分别存在L-34P、K150del和A209V 的杂合突变,其中L-34P和A209V来自父亲,K150del来自母亲;先证者2的PC:A为46%,PC:Ag为64.4%,TPS:A为36%,FPS:A为19.5%,FPS:Ag为20.9%,其PC基因的2号和7号外显子分别存在T66C的多态性和R147W的杂合突变,PS基因的14号外显子存在Tyr519stop的杂合突变,其中PC突变来自母亲,PS突变来自父亲.凝血酶生成试验显示先证者2及其父母的抗凝功能减弱,其中PS缺陷的先证者和其父亲的外源性活化蛋白C抑制凝血酶生成的能力下降,而其母亲没有明显变化.先证者3的PC:A为33%,PC:Ag为48.42%,其PC基因同时存在R147W和R178W突变;先证者4的PC:A为21%,PC:Ag为18.36%,基因检测结果显示先证者4是R178W和D255H的双杂合子.结论 遗传性PC缺陷症或PC、PS联合缺陷症是导致4例先证者出现静脉血栓的原因.杂合PC基因突变(L-34P、A209V、R147W、R178W和D255H)是导致4例先证者遗传性PC缺陷症的原因.
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老年脑梗死患者蛋白C系统及抗凝血酶系统测定的研究
目的探讨老年脑梗死患者血浆抗凝系统蛋白C系统及抗凝血酶系统的水平变化及临床意义.方法酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定蛋白C(PC)、总蛋白S(TPS)、游离蛋白S(FPS)及凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)的含量,发色底物法测定活化蛋白C(APC)和抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)活性.结果与对照组相比,老年脑梗死患者急性期PC、FPS、ATⅢ明显下降[(2.89±1.04)μg/ml、(7.85±2.26)μg/ml、(77.21±25.43)%;(3.42±1.13)μg/ml、(9.34±3.01)μg/ml、(97.28±20.42)%;P＜0.05],恢复期无差异(P＞0.05);APC、TAT在脑梗死急性期及恢复期明显增高(P＜0.01).随病情加重PC、FPS显著下降,而TAT明显升高;有TIA病史的脑梗死患者FPS水平明显低于无TIA病史者[(6.54±2.97)μg/ml,(7.99±1.13)μg/ml;P＜0.01].PC、FPS与血脂间无相关性.结论老年脑梗死患者存在凝血的激活,抗凝系统的异常参与了老年脑梗死的病理过程.
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凝血因子和抗凝蛋白检测诊断急性静脉血栓栓塞症
目的 探讨急性静脉血栓栓塞症(venous thromboembolism,VTE)患者凝血因子与抗凝蛋白水平对评估其患病风险的影响和意义.方法 采用一期凝固法、发色底物法,检测76例急性静脉血栓栓塞症患者(VTE组)和81例健康对照人群(对照组)的凝血因子活性(FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅩ、FⅪ、FⅫ),抗凝蛋白(antithrombin activity) AT、PC活性. 结果 (1)VTE组与健康对照组凝血因子与抗凝蛋白值的比较:VTE组FⅡ、FⅤ、FⅧ、FⅨ、FⅩ、FⅪ和FⅫ均较健康对照组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01).VTE组PC值较健康对照组显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01).VTE组AT、FⅦ值与健康对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)Logistic回归分析显示:VTE主要危险因素为FⅧ、FⅩ活性异常升高、PC活性异常下降,与健康对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)用ROC曲线分析:FⅧ、FⅩ和PC对VTE早期诊断的价值,FⅧ、FⅩ和PC的AUC值分别为:0.934、0.765和0.350.结论 除FⅦ因子外,其余凝血因子活性异常升高与急性VTE显著相关,其中FⅧ敏感性、特异性大,对于诊断急性VTE价值大.FⅧ活性异常增高与PC活性异常降低是急性VTE独立危险因素.
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活化蛋白C在脂多糖诱导小胶质细胞活化中的作用
目的：探讨活化蛋白C在脂多糖诱导的小胶质细胞活化中的作用。方法取新生1日龄Sprague-Dawley大鼠，分离脑组织，原代培养小胶质细胞并进行分离纯化及鉴定。纯化小胶质细胞随机分成4组，分别为脂多糖组（1.0μg/ml脂多糖，12 h后给予10μl磷酸盐缓冲液）、脂多糖+活化蛋白C组（1.0μg/ml脂多糖，12 h后给予0.1μg/ml活化蛋白C）、活化蛋白C组（10μl磷酸盐缓冲液，12 h后给予0.1μg/ml活化蛋白C）和对照组（相应时间点各10μl磷酸盐缓冲液）。观察各组小胶质细胞形态变化，并通过免疫荧光标记技术检测肿瘤坏死因子-α及蛋白酶活化受体-1的表达情况。采用方差分析及LSD检验进行统计分析。结果成功培养小胶质细胞，且纯度≥99%。脂多糖组小胶质细胞形态出现活化，肿瘤坏死因子-α表达较对照组明显增强（2.11±0.35与1.38±0.28，LSD检验，P=0.002）；脂多糖+活化蛋白C组脂多糖诱发的小胶质细胞形态学改变被逆转，肿瘤坏死因子-α的表达与对照组差异无统计学意义（1.35±0.36与1.38±0.28，LSD检验，P＞0.05）。脂多糖+活化蛋白C组蛋白酶活化受体-1的表达明显高于对照组（4.60±0.84与2.64±0.41，LSD检验，P=0.008）和脂多糖组（2.44±0.86，LSD检验，P=0.002）；但活化蛋白C组和脂多糖组蛋白酶活化受体-1的表达与对照组差异均无统计学意义（2.62±0.69、2.44±0.86与2.64±0.41，LSD检验，P值均＞0.05）。结论活化蛋白C可通过上调小胶质细胞蛋白酶活化受体-1的表达，抑制脂多糖诱导的小胶质细胞活化及肿瘤坏死因子-α的表达，从而保护炎症诱发的脑组织损伤。
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重组人蛋白C在CHO/dhfr+细胞中的表达与分析
目的:人蛋白C具有重要的抗凝功能,与复发性血栓性疾病、蛋白C缺陷症、创伤等有重要关系.血源蛋白C成本高、工艺复杂且存在纯度、稳定性、安全性等问题,研制重组人蛋白C具有必要性.目前尚无此类产品上市.本研究拟从人肝细胞中克隆蛋白C的cDNA,构建人蛋白C的哺乳动物细胞表达载体,实现重组人蛋白C在CHO/dhfr+中的表达.方法: 用RT_PCR从人胎肝细胞mRNA中扩增人蛋白C的全长cDNA片段,将之克隆入pGEM_T载体并测序.目的片段插入真核表达载体pIRESneo以构建重组表达质粒.磷酸钙共沉淀法转染CHO/dhfr+细胞,G418筛选抗性克隆.Western 印迹法检测细胞培养上清.Hitrap Q进行色谱纯化.表达产物经蛙蛇蛇毒激活后以APTT法测定抗凝活性.结果:RT_PCR扩增到长1*!386*!bp的DNA片段,序列与已报道的人蛋白C一致.所构建的表达质粒pIREShPC转染CHO/dhfr+细胞,经G418加压筛选得到7株表达细胞.Western印迹法检测发现表达产物能与抗人蛋白C单克隆抗体结合,相对分子质量与人蛋白C一致.Hitrap Q纯化重组蛋白回收率＞60%.表达产物抗凝活性略低于天然人蛋白C.
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抗凝蛋白C与冠状动脉粥样硬化严重程度相关性研究
目的 研究抗凝蛋白(PC)与冠状动脉病变程度的关系.方法 199例观察者依据临床、冠脉造影、平板结果 分为AMI、UAP及正常对照组,于各种治疗前采血检测PC,各组进行比较.结果 PC与临床分型及冠脉积分有一定相关性,与病变支数没有相关性.结论 抗凝蛋白C水平与冠状动脉病变程度有一定相关性,抗凝系统的异常在冠心病的发病中起一定作用.
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蛋白C基因C5498T致Ⅰ型遗传性蛋白质C缺陷症
目的对一个遗传性I型蛋白C(PC)缺陷症家系进行基因突变的检测.方法分别用ELISA和发色底物法测定血浆蛋白C活性和抗原.用PCR法对先证者PC基因的9个外显子及其侧翼、内含子2序列进行扩增,PCR产物纯化后直接测序,检测其基因突变.突变位点经限制性内切酶分析证实.结果先证者的蛋白C活性和抗原分别为26%和1.43 g/L.先证者表现为PC基因外显子3区杂合错义突变C5498T,引起Arg15→Trp.在基因启动子区存在2405C/T、2418A/G、2583A/T多态性.结论该突变导致遗传性I型PC缺陷症.
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凝血酶调节蛋白基因对脐静脉内皮细胞抗凝功能的调控
目的将含人凝血酶调节蛋白(hTM)基因的真核表达载体质粒pcDNA3.1/hTM转染体外培养的脐静脉内皮细胞(HUVECs),观察外源凝血酶调节蛋白的表达及其所致的HUVECs抗凝功能的改变.方法由阳离子脂质体介导将pcDNA3.1/hTM质粒转入内皮细胞中,半定量RT-PCR测定各组hTM mRNA的表达强度;免疫组化法检测hTM在内皮细胞膜上的表达;测定各组内皮细胞对蛋白C(PC)的激活;半自动凝血仪测定内皮细胞-PC反应液对正常血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)的影响.结果HUVECs pcDNA3.1/hTM质粒转染率约为10%,TM mRNA和TM蛋白的表达强度都有明显提高.重组质粒转染组、空载质粒组及未转染组PC反应液中活化蛋白C(activated protein C,APC)的含量分别是(2.80±0.43)μg/ml、(0.75±0.08)μg/ml、(0.85±0.11)μg/ml.APTT值在重组质粒转染组、空载质粒组、未转染组、未激活PC组和正常对照组中分别为(51.68±2.73)s、(38.38±2.44)s、(39.65±2.39)s、(33.93±1.73)s和(34.60±1.86)s.PT值在各组中分别为(21.89±1.66)s、(20.56±1.74)s、(20.42±2.04)s、(19.57±1.36)s和(20.16±1.35)s.结论pcDNA3.1/hTM质粒能被导入内皮细胞中,表达的TM分子具有生物学活性,能明显提高对PC的激活.激活的PC能明显抑制血浆内源性凝血途径使APTT延长,也使外源性凝血途径受到轻度抑制.
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血栓性疾病患者抗凝蛋白检测的临床意义
目的 探讨血栓性疾病患者蛋白C(PC)、蛋白S(PS)和抗凝血酶(AT)活性水平检测在排除常见获得性血栓危险因素中的临床意义.方法 检测85例血栓性疾病患者与50名正常健康对照者血浆PC、PS、AT活性水平,并作比较分析.结果 85例血栓性疾病患者中位年龄42(17～69)岁.其中≤45岁者60例(70.6%).动脉血栓组和静脉血栓组患者PC、PS、AT活性均明显低于正常对照组(P<0.01);复发组PC、PS、AT平均活性低于初发组(P<0.01);年龄≤45岁患者组PC、PS、AT平均活性低于45岁以上组(P<0.01).共有26例(30.6%)患者存在抗凝蛋白活性降低;PS活性降低的发生率高(10.6%),其次为PC活性降低(8.2%),AT活性降低和联合活性降低(各占5.9%).结论 无明确常见获得性血栓危险因素的血栓患者发病年龄较轻,且普遍存在抗凝蛋白水平低下;抗凝蛋白活性降低不仅与血栓性疾病的发生有关,而且与血栓复发密切相关.
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非创伤性股骨头坏死患者的血液学改变
目的测定非创伤性股骨头坏死(nontraumatic osteonecrosis offemoral head,NONFH)患者的血液学指标变化,筛选敏感分子标记物用于早期诊断和筛选高危人群.方法研究对象共分三组:(1)NONFH早期组(塌陷前期)30例,(2)NONFH晚期组(塌陷后期)30例,(3)正常对照组30例.各组对象均抽取空腹肘静脉血.应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、血浆蛋白C(PC)、D-二聚体(D-Dimer)含量;发色底物法测定血浆纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI)活性.结果(1)NONFH早、晚期组血小板GMP-140含量均高于正常对照组,血浆PC含量均低于正常对照组,D-Dimer含量均高于正常对照组,Pal活性均高于正常对照组(P均＜0.05).骨坏死情况越严重,各项指标上升或降低的趋势越明显,而且各项指标早、晚期组间比较差异均有显著性(P均＜0.05).(2)经判别分析,筛选出Pal、D-Dimer、PC三个指标,建立NONFH早期、晚期和正常对照三类判别函数式.NONFH早期:Y1=-26.396 6+41.491 6X10+0.0512X4+4.139 0 X1;NONFH晚期:Y2=-66.756 6+82.131 5X10+0.108 2X4+2.723 3X1;正常对照组:Y3=-26.7049+20.5695X10+0.032 7X4+6.190 0X1.回代判对率97.78%.结论(1)NONFH患者各期均存在高凝和低纤溶状态.(2)PAI、D-Dimer、PC为NONFH患者的血液学敏感指标.
关键词： 股骨头坏死 酶联免疫吸附测定 纤溶酶原激活剂抑制剂 蛋白质C 判别分析 -
纤溶和凝血因子在急性肺血栓栓塞症发病机制中的作用
目的:测定急性肺血栓栓塞症(APT)患者凝血和纤溶因子的血浆含量,探讨其在发病机制中的作用.方法:对44例APT患者(APT组)和56例健康查体者(对照组)应用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA法)定量测定血浆tPA、PAI-1、PC、FPS和vWF:Ag抗原水平.结果:与对照组相比,APT组tPA、PAI-1和vWF:Ag血浆含量水平较高,FPS水平较低,且差别有显著统计学意义.结论:PAI-1及vWF:Ag产生、释放增多和FPS血浆含量减低在急性肺血栓栓塞症的发病机制中具有重要作用.
关键词： 肺栓塞 纤溶酶原激活物抑制物1 蛋白质S 蛋白质C -
测定静脉血栓患者ProC Global的临床价值
目的:研究蛋白C系统功能筛选试验(ProC Global)的测定对静脉血栓形成患者的临床价值.方法:采用SYSMEXCA-7000型血液凝固仪测定D-二聚体(DD)、凝血因子Ⅷ(FⅧ)、凝血因子V(FV)、纤溶酶原活化剂抑制物-1(PAI-1)、蛋白C活性依赖凝固时间标准化比值(PCAT-NR).结果:PCAT-NR水平正常的患者其高凝状态程度较轻,多数患者治疗效果较好;PCAT-NR水平降低的患者多数伴有高凝状态,且预后不良.患者组PCAT-NR水平与各项参数水平呈负相关.结论:PCAT-NR水平减低与患者高凝状态和病程发展趋势有关,对临床进行治疗及疗效监测具有重要意义.
关键词： 静脉血栓形成 蛋白质C 因子Ⅷ 因子 纤溶酶原激活物抑制物1 -
多器官功能障碍综合征患者血浆蛋白C水平与预后的关系
目的:探讨血浆蛋白C水平在判断多器官功能障碍综合征(MODS)患者预后的意义.方法:30例MODS患者存活组12例,死亡组18例,对比2组患者于入院第1,3,5,7天血浆蛋白C的水平,并分析入院第1天不同蛋白C水平与预后的关系.结果:死亡组患者入院第1,3,5,7天血浆蛋白C水平均低于存活组患者,且入院第1天蛋白C水平降低者其病死率升高.结论:血浆蛋白C水平可作为判断MODS患者预后的指标.
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老年脓毒症患者抗凝血纤溶系统功能改变的研究
脓毒症可导致患者发生弥散性血管内凝血、急性呼吸窘迫综合征或者多器官功能衰竭等致死性并发症,文献显示,患者年龄越大,预后越差[1].在老年人群中,脓毒症病死率更高.有研究表明,患者凝血、抗凝血、内皮等系统功能的异常与炎症的发生发展密切相关[2].笔者对97例老年脓毒症患者进行上述各系统参数测定,探讨脓毒症对老年患者各系统的影响以及与预后的相关性.
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高压氧预处理对窒息性心脏停搏复苏大鼠血浆蛋白质C活化的影响
目的：探讨高压氧预处理对窒息性心脏停搏复苏大鼠血浆蛋白质C活化的影响。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠105只，70～90日龄，体重260～320 g，采用随机数字表法分为3组：心脏停搏组（ CA组，n＝5）、心脏停搏复苏组（ CA∕R组，n＝50）和高压氧预处理组（ H组，n＝50）。采用呼气末夹闭气管窒息法建立大鼠心脏停搏复苏模型。 H组给予连续3d高压氧预处理（纯氧舱压力2个绝对大气压力，稳压吸氧45 min，控制氧浓度＞95％后，20 min匀速降压至常压，1次∕d）后制备心脏停搏复苏模型。 CA组不进行复苏。 CA∕R组和H组于自主循环恢复后3、6、12和24 h时随机取5只大鼠，CA组于心脏停搏30 min时，经腹主动脉取血标本5 ml，采用ELISA法测定血浆活化的蛋白质C（ APC）浓度，记录窒息至心脏停搏时间、自主心率恢复时间和复苏成功情况。结果与CA组比较，CA∕R组和H组自主循环恢复后各时点血浆APC浓度降低（ P＜0．05）；与CA∕R组比较，H组窒息至心脏停搏时间延长，自主心率恢复时间缩短，复苏成功率升高，自主循环恢复后各时点血浆APC浓度升高（ P＜0．05）。结论高压氧预处理可促进窒息性心脏停搏大鼠复苏后血浆PC活化，有助于改善高凝状态。
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SP-C对重组肺表面活性物质活性的影响
目的探讨不同浓度的肺表面活性物质(PS)相关蛋白C(SP-C)与合成脂质构成的重组PS活性的变化.方法从新鲜猪肺的灌洗液中提取PS,从PS中分离出SP-C.将二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱和棕榈酰油酰磷脂酰甘油按60:20:20的重量比混合,即为合成脂质(SL),将SP-C按1%、2%、3%(与脂质的重量比)加入SL中,制成三种重组PS:RS-1、RS-2和RS-3.将上述物质溶于生理盐水中即为实验液体.用气泡型表面张力计测定各实验液体的表面张力.将PS缺如的未成熟胎兔随机分为4组:PS、SL、RS-3和对照组.分别向PS、SL和RS-3组气道内注入PS、SL、RS-3液;对照组未注入任何物质.然后进行人工通气,通气后5、10、15、20min测定各组潮气量.结果PS的小表面张力(γmin)为(0.9±0.3)mN/m,SL的γmin为(22.6±1.3)mN/m,明显高于PS(P＜0.01);随SP-C浓度的增加γmin逐渐降低,RS-3的γmin降至(0.7±0.1)mN/m(与PS相比,P＞0.05).通气20min时,PS组、RS-3动物的潮气量分别达到(25±7)ml/kg、(25±4)ml/kg,明显高于对照组和SL组(P＜0.01).结论不含SP-C的合成脂质表面活性低,加入SP-C后构成的重组PS表面活性明显增强.
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窒息新生儿体内三大抗凝因子活性的研究
目的:探讨窒息缺氧对新生儿血浆蛋白C、S、抗凝血酶Ⅲ(AT -Ⅲ)活性的影响.方法:我院新生儿科于2004年9月至2005年12月采用发色底物法分别测定出生时、3d、7d的56例窒息新生儿血浆蛋白C、抗凝血酶Ⅲ活性,用凝固酶法测定蛋白S的活性.正常对照组为同期出生的健康新生儿51例.结果:出生时、3d窒息组与正常对照组血浆蛋白C、S、抗凝血酶Ⅲ活性均有不同程度下降,窒息组下降明显,其差异有非常显著意义(P均＜0.01).结论:窒息新生儿3d内血浆蛋白C、S、抗凝血酶Ⅲ活性明显降低,并与窒息的程度有关,血浆蛋白C、S、抗凝血酶Ⅲ降低明显窒息愈重,常合并多个组织器官损害,但未达到DIC标准.
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乙型脑炎病毒C蛋白编码基因重组质粒构建与表达
目的 构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)C蛋白编码基因重组子并鉴定.方法 以JEV SA14-14-2株总RNA为模板,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增JEV C蛋白编码基因,克隆至pMD19-T Simple载体测序.为便于分析JEV C蛋白编码基因重组子在哺乳动物细胞中的表达,在JEV C蛋白编码基因5′端附加FLAG 序列,并亚克隆至pcDNA 3.1(+)载体中,构建重组子pJc并经酶切及DNA测序分析.脂质体法将pJc转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞.免疫荧光检测转染的CHO细胞中JEV C蛋白分布与表达.结果 pJC经BamH I/EcoR I酶切释出的插入子片段(414 bp)分别与预期结果相符合.所编码的融合蛋白主要分布于胞质,少量分布于胞膜.结论 pJC成功构建,转染的CHO细胞可表达JEV C蛋白.
