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植入前遗传学诊断的方法及应用
植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)是指对体外受精胚胎的遗传物质进行分析,诊断胚胎是否有某些遗传异常,确定该胚胎是否适合移植,选择不致造成遗传学疾患的胚胎植入宫腔,从而获得正常胎儿的诊断方法.PGD的步骤包括激素诱导超促排卵,获得卵母细胞,用常规体外受精(in vitro fertilization,IVF)或卵母细胞单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)受精,体外培养至6～8个细胞期或囊胚期,在此期间通过显微操作对胚胎或卵母细胞进行活检,取得单个或多个细胞进行遗传学检测,再将2～3个经分析正常的胚胎移植入子宫腔内.PGD是一种更早期的产前诊断方法,避免了选择性流产和多次流产可能造成的危害以及伦理道德观念的冲突.
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微创取精术结合卵母细胞单精子显微注射治疗阻塞性无精子症的研究
我们采用微创手术,从阻塞性无精子症患者获取精子再进行卵母细胞单精子显微注射(ICSI)治疗,观察其妊娠效果.资料与方法1.一般资料:2001年9月至2002年11月在我院就诊的男性阻塞性无精子症患者20例,平均年龄(30.3±2.9)岁.病因检查:输精管先天缺如8例,输精管道炎症8例,输精管部分切除术后4例.患者配偶平均年龄(29.2±2.4)岁,女方的不育因素为:输卵管阻塞3例,子宫内膜异位症1例,16例未发现异常.
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实施ICSI后对复苏胚胎的妊娠结局
目的 讨论卵泡浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection ICSI)与常规体外受精(in vitro fetrilizationⅣF)受精方式对冷冻胚胎的解冻和移植后对临床妊娠的影响.方法 慢速冷冻IVF或ICSI周期中剩余的优质胚胎,随后用快速融解法复苏后进行移植.观察各组胚胎冷冻解冻后的胚胎存活率及相关指标和临床妊娠率.结果 50例患者中,IVF组为30个周期,妊娠4例,妊娠率为13.33%,ICSI组为20个周期,妊娠5例,妊娠率为25%,ICSI组冷冻胚胎优胚率、复苏后胚胎存活率、存活胚胎累积细胞数与复苏胚胎的累积细胞数百分比(累积细胞存活率)和存活胚胎累积评分与复苏细胞累积评分的百分比(累积评分率)有显著差异.结论 冷冻胚胎的优胚率及复苏后获得高质量的胚胎是影响解冻胚胎移植的临床妊娠率重要因素.
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HMG对小鼠卵母细胞外成熟的影响
目的 探讨人绝经期促性腺激素(H MG)对卵母细胞体外成熟(IVM)的影响.方法 选取8～12周龄雌鼠,腹腔注射HMG,48h后处死取卵巢,穿刺卵巢表面获得卵母细胞.将所得卵母细胞随机分成二组.对照组添加FSH、HCG各75IU/L,实验组为HMG组FSH、LH各75IU/L.18h后对成熟卵行单精子显微注射,比较各组的受精率、卵裂率、优质胚胎率.结果 ①二组卵母细胞成熟率、受精率、卵裂率的差异无统计学意义(P＞0.05).②HMG组优质胚胎率较高,相比对照组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IVM培养液添加HMG有利于胚胎的发育.
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HCG对小鼠卵母细胞体外成熟的影响
目的 探讨人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)对卵母细胞体外成熟(in vitro matueation,IVM)的影响.方法 选取8～12周龄雌鼠,腹腔注射HMG,48h后处死取卵巢,穿刺卵巢表面获得卵母细胞.将所得卵母细胞随机分成四组,HCG浓度分别为0、75、150、300IU/L.18h后对成熟卵行单精子显微注射,比较各组的受精率、卵裂率、优质胚胎率.结果 ①四组卵母细胞成熟率、受精率、卵裂率的比较差异无统计学意义(P＞0.05).②HCG浓度为75、150IU/L时优质胚胎率较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IVM培养液中添加适当浓度HCG有利于胚胎的发育.
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颗粒细胞在卵母细胞体外成熟中的作用
目的 探讨颗粒细胞在卵母细胞体外成熟(in vitro matueation,IVM)过程中发挥的作用.方法 选取8～12周龄的CD-1(R)雌鼠,取卵前48h腹腔注射HMG.取卵日处死小鼠,开腹取卵巢,于卵巢表面穿刺获得GV期卵母细胞.将所得的卵母细胞随机分成三组:A组保留颗粒细胞,B组为混合培养组,将一半的卵母细胞脱去颗粒形成裸卵与另一半的颗粒细胞卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte comeplexes,COCs)共同培养,本组只观察DOs部分,C组全部脱去颗粒细胞.将各组卵母细胞置于含FSH(75IU/L)和HCG(150 IU/L)的G1中培养24h后,对成熟卵行单精子显微注射.观察各组间卵母细胞的成熟率及受精后胚胎发育情况.结果 ①三组间成熟率比较差异无统计学意义(P＞0.05),但A、B组略高.②A、B组优质胚胎率明显高于C组(P＜0.05),且A组与B组间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 颗粒细胞在卵母细胞成熟过程中发挥着重要作用:①单独对DOs体外成熟,后期发育不佳.②DOs与COCs共培养效果较好.
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不同浓度促卵泡生成素对小鼠卵母细胞体外成熟的影响
目的：探讨不同浓度促卵泡生成素(FSH)对卵母细胞体外成熟(in vitro matueation,IVM )的影响。方法选取8~12周龄雌鼠,腹腔注射 HMG,48h 后处死取卵巢,穿刺卵巢表面获得卵母细胞。将所得卵母细胞随机分组,置于不同浓度 FSH(0,38,75,150,300IU/L)的培养基中,组别由 A~E 表示。培养24h 后,脱去颗粒细胞观察卵子成熟率。对成熟卵行单精子显微注射,观察受精率及胚胎发育情况。结果①C、D、E 组较其他组有较高的成熟率,差异有统计学意义(P <0.05),且这三组间差异无统计学意义(P >0.05)。②C、D 组较其他组有较高的优质胚胎率(P <0.05),C、D 二组间差异无统计学意义(P >0.05),但 C 组略高于 D 组。结论培养液中 FSH 浓度影响 IVM 结局：①当浓度<75IU/L 时,成熟率下降。②当浓度在75~150IU/L 时,胚胎发育较好。
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无精症患者睾丸取精行ICSI获临床妊娠2例
例1,26岁.月经正常,婚后3年未孕.双方染色体检查正常.男方精液常规检查为无精症.2001年5月15日睾丸穿刺结果示左侧睾丸每高倍视野2～3个活精子,右侧睾丸每高倍视野0～3个活精子,确诊为阻塞性无精症.于2001年6月GnRHa方案超促排卵,注射HCG 36h后在B超下经阴道取卵.获成熟卵5个,同时睾丸穿刺取精、研磨、孵化.取卵后5h行卵母细胞单精子显微注射(ICSI).5个卵子均受精,获Ⅰ级胚胎4个,Ⅱ级胚胎1个.7月12日在B超引导下,用TDT移植管植入胚胎4个.7月26日尿HCG阳性,8月10日血β-HCG 1000IU/L.8月9日阴道超声检查:宫内可见两个胚囊,(1)9.9×5.2cm,胚芽胎心好;(2)8.3×6.3cm,胚芽胎心不清.
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促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养中的应用
目的：评价卵泡刺激素和人绒毛膜促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养过程中的应用价值。方法收集控制性超促排卵周期行单精子显微注射（ICSI）过程中得到的未成熟卵母细胞（MⅠ期和 GV 期），随机分为加促性腺激素培养组和不加促性腺激素培养组，培养24～28 h 后成熟卵母细胞进行 ICSI 授精，并观察胚胎发育情况，记录成熟率、受精率、卵裂率和优胚率。结果对于 MⅠ期卵母细胞，是否使用促性腺激素不影响其24 h成熟率、受精率、分裂率和优胚率（P ＞0．05）。对于 GV 期卵母细胞，培养液中加入促性腺激素能提高优质胚胎率（31．3％ vs 4．2％，P ＜0．05），但两组的成熟率、受精率和卵裂率差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论控制性超促排卵中获得的未成熟卵母细胞进一步体外培养，无论是否添加促性腺激素都可自然成熟，在 GV 期卵母细胞的体外培养过程加入促性腺激素可获得更高的优胚率。
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用体外受精失败的卵细胞行单精子显微注射妊娠1例
女方30岁,男方39岁.因结婚3年余不孕于2000年9月2日来我中心就诊.女方诊断为双输卵管阻塞,男方精液常规分析:活动力Ⅲ级,射精后30min 活动率为0.45,精子密度70×109/L.符合体外受精(IVF)指征.
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多种因素对卵母细胞浆内单精子显微注射结果影响的探讨
目的:研究进行卵母细胞浆内单精子显微注射(ICSI)过程中诸多因素的影响.方法:对263个周期行ICSI的患者的各种因素,包括不孕原因、促排方案、精液来源及质量等进行受精率、卵裂率、优质胚胎率及妊娠率的比较.结果:男方因素合并女方PCOS、附睾穿刺获得精子、HMG方案、取卵数目介于20～30及月经第3天血E2浓度对优质胚胎的获得有影响,但是对妊娠率没有明显的影响.结论:所观察、研究的各种因素对妊娠率影响不明显.
