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抑肽酶对脑出血大鼠水通道蛋白4和9表达的影响
目的 探讨抑肽酶对脑出血大鼠脑组织中水通道蛋白(aquaporin,AQP)-4、9(AQP-4、9)表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抑肽酶组,建立大鼠脑出血模型,测定脑组织含水量,采用RT-PCR法检测脑组织中AQP-4、9mRNA表达的变化;Western blot法检测脑组织中AQP-4、9蛋白含量的变化.结果 RT-PCR结果显示假手术组AQP-4、9mRNA含量低(0.36±0.14、0.42±0.11)(P＜0.05),抑肽酶组AQP-4、9mRNA含量(0.54±0.15、0.67±0.27)低于模型组(0.72±0.34、0.93±0.03)(P＜0.05);Westernblot结果显示模型组AQP-4、9蛋白在脑组织中的表达量(202.78±21.18、243.11±12.48)明显高于假手术组(134.33±10.21、101.12±9.45)和抑肽酶组(177.41±9.07、204.56±16.43),而抑肽酶组AQP-4、9蛋白表达量明显高于假手术组(P＜0.05);假手术组脑组织含水量低[(61.23±0.36)%](P＜0.05),而模型组脑组织含水量高[(86.98±1.06)%](P＜0.05).结论 抑肽酶对脑出血大鼠的保护作用,可能是通过抑制AQP-4、9在脑组织中的表达,从而减轻脑水肿.
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水通道蛋白4在创伤性脑水肿中的表达及其对血脑屏障通透性的影响
目的 探讨水通道蛋白-4(AQP-4)在大鼠创伤性脑水肿中的表达及其对血脑屏障(BBB)通透性的影响.方法 按照改进的Feeney自由落体撞击法建立大鼠创伤性脑损伤(TBI)模型,用磁共振成像(MRI)对大鼠脑水肿进行检测,干/湿比重法和伊文思蓝(EB)测定法观察大鼠TBI后不同时相脑组织含水量和BBB通透性的变化,并采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测AQP-4 mRNA的表达,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测AQP-4蛋白的表达.结果 TBI后MRI表现为T1WI的低信号或等信号、T2WI高信号.TBI后4 h伤区脑组织含水量及EB含量开始增多,AQP-4 mRNA、AQP-4蛋白表达开始增高并逐渐上升,24 h达到高峰,随后逐渐下降,伤后72 h仍维持在较高水平(P＜0.05).AQP-4 mRNA、AQP-4蛋白表达与脑组织的含水量及EB含量呈正相关.结论 创伤性脑损伤后早期AQP-4 mRNA、AQP-4蛋白表达的变化与血脑屏障通透性的改变及脑水肿的形成和发展密切相关.可能通过上调水通道蛋白AQP-4的表达,增加血脑屏障的通透性,参与脑水肿的形成.
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微创穿刺引流术治疗高血压性基底节区脑出血的效果
目的 研究微创穿刺引流术治疗高血压性基底节区脑出血的效果及血清水通道蛋白4 (AQP4)和Toll样受体4(TLR4)的表达.方法 纳入高血压性基底节区脑出血患者122例,根据治疗方案分为对照组和观察组,每组61例,对照组用保守药物治疗,必要时行开颅血肿清除术,观察组采用早期微创穿刺引流术;对比2组28 d美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)和日常生活活动能力量表(ADL)评分,观察治疗1周和2周脑水肿体积、血清AQP4和TLR4水平,随访6个月,比较2组治疗有效率、并发症发生率和复发率.结果 与对照组比较,观察组28 d的NIHSS评分显著降低,ADL评分明显升高(P＜0.05),治疗1周和2周脑水肿体积、血清AQP4及TLR4水平明显降低(P＜0.05).观察组总有效率明显高于对照组(88.5％ vs 73.8％),并发症发生率和复发率明显低于对照组(8.2％ vs 21.3％,6.6％ vs 19.7％,P＜0.05).结论 早期微创穿刺引流术治疗高血压性基底节区脑出血有较高的安全性和有效性,可改善神经功能康复和生活能力,减轻脑水肿,降低血清AQP4和TLR4表达水平.
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丁基苯酞对脑缺血大鼠大脑皮质水通道蛋白4表达的影响
目的 观察丁基苯酞对脑缺血大鼠大脑皮质水通道蛋白4(AQP4)表达的影响,探讨其对缺血性脑损伤的防护作用机制.方法 选择SD大鼠140只,采用四血管结扎的大脑中动脉闭塞模型,将制模成功后48只大鼠随机分为脑缺血组24只、丁基苯酞组24只;另选24只为假手术组.丁基苯酞组按剂量又分为0.3 mg/kg组、1.0 mg/kg组、3.0 mg/kg组,各组8只.分别于1 d、1周和1个月测定脑组织依文思蓝(EB)含量和脑含水量;免疫组织化学法检测AQP4蛋白表达.结果与假手术组比较,脑缺血组大鼠1 d、1周脑组织EB含量和脑含水量明显升高、AQP4表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与脑缺血组比较,丁基苯酞组1 d、1周脑组织EB含量和脑含水量明显降低、AQP4表达有不同程度升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0 01).结论 大鼠脑缺血后AQP4表达呈现时程性变化,丁基苯酞对AQP4有调节作用.
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大鼠脑缺血再灌注后脑组织水通道蛋白4的表达及丹参川芎嗪干预作用的研究
目的 探讨水通道蛋白4 (AQP4)在大鼠脑缺血再灌注后的表达及丹参川芎嗪的干预作用.方法 选择健康大鼠100只,随机分为假手术组,模型组,低剂量药物干预组(低剂量组),高剂量药物干预组(高剂量组),每组25只.各组大鼠又按术后时间(6、24 h和3、5、7 d)分为5个亚组,每亚组5只.分别对大鼠进行Longa评分,干湿重法测定脑组织含水量;免疫组织化学法检测脑组织AQP4的表达.结果 术后大鼠行为异常,3d明显,7d恢复至术前水平.在同时间点,与假手术组比较,低剂量组、高剂量组和模型组大鼠脑组织含水量、AQP4表达明显升高(P＜0.01);与模型组比较,低剂量组、高剂量组脑含水量、AQP4表达明显降低(P＜0.01),高剂量组明显低于低剂量组(P＜0.01).而模型组、低剂量组、高剂量组各时间点比较,差异有统计学意义(P＜0.01).AQP4表达水平与脑含水量呈正相关(r=0.871,P＜0.01).结论 脑缺血再灌注后,脑组织AQP4的表达变化与脑水肿的动态变化存在时间上的一致性;丹参川芎嗪可以改善大鼠神经缺损症状,减轻脑水肿,降低AQP4表达水平.
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活血化瘀法治疗脑出血的实验研究进展
脑出血为现代医学“出血性脑卒中”的一种.其发病急,病情重,致死率及致残率高,为社会、家庭及患者带来了沉重的负担.目前,现代医学对于出血量少的脑出血采取内科保守对症治疗,中量至大量出血采用外科手术治疗,具有一定的局限性.
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视神经脊髓炎的再认识
视神经脊髓炎(NMO)又称为Devic病或Devic综合征[1].主要累及视神经和脊髓的免疫介导的脱髓鞘疾病.发病时双侧视神经、视交叉和脊髓出现严重的髓鞘脱失,临床表现为双侧同时或相继出现球后视神经炎和急性严重的横贯性脊髓炎,迅速发生而导致失明和截瘫甚至死亡.NMO在东方人的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病中较多见,在东亚国家NMO约为48％.NMO平均发病年龄39岁,不同人种女性患病均明显多于男性,女性患者占90％[2].现就NMO的免疫病理及临床特征,诊断治疗等的进展作一综述.
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甘油果糖联合地塞米松对小鼠脑出血灶周水通道蛋白和基质金属蛋白酶表达及神经功能的影响
目的 评测联合应用甘油果糖和地塞米松对小鼠神经功能损害及出血灶周围组织中水通道蛋白4(AQP-4)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响. 方法 将96只雄性昆明小鼠,随机分为对照组24只、模型组24只、地塞米松治疗组24只、甘油果糖联合地塞米松治疗组(联合组)24只;后三组建立脑出血模型后,并给予给予相应药物治疗.于造模术后12 h、1d、3d和5d,每个时间点6只,应用改良神经功能损害程度评分(mNSS)对各组小鼠进行神经功能评估后处死小鼠;随后分别应用干湿重法检测脑水含量;应用反转录聚合酶反应(RT-PCR)技术分析脑组织中AQP-4、MMP-9 mRNA表达. 结果 各治疗组与模型组比较,联合组mNSS高(F=4.56,P＜0.05)脑含水量低(F=5.38,P＜0.05).AQP-4、MMP-9表达水平低(F=4.02、4.68,P＜0.05). 结论 地塞米松能够通过调控AQP-4和MMP-9转录表达,而减轻脑水肿,改善脑出血小鼠神经功能,对脑组织具有保护作用;若联合应用高渗性脱水剂(甘油果糖)可进一步抑制神经功能损害及脑水肿的进展.
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水通道蛋白4抗体在视神经脊髓炎谱系疾病视网膜微观结构损伤中作用的探讨
目的 采用光学相干断层扫描(OCT)方法评价视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)患者的视网膜微观结构损伤,并探讨水通道蛋白4抗体(AQP4 Ab)在这一损伤过程中的作用.方法 回顾性分析2012年1月至2017年1月海军总医院收治的伴有视神经炎(ON)的40例(59只ON眼)NMOSD患者临床资料,根据AQP4 Ab是否阳性分为两组:AQP4 Ab阳性NMOSD组(简称抗体阳性组),25例(37只ON眼);AQP4 Ab阴性NMOSD组(简称抗体阴性组),15例(22只ON眼).同时选取年龄和性别相匹配的健康对照者共10例(20只健康眼)为健康对照组.使用频域OCT完成视盘区视网膜神经纤维层厚度(RNFL)检查.比较3组各临床特征及RNFL的差异.结果 3组性别构成比和年龄的差异无统计学意义.抗体阳性组ON眼的视力损伤较抗体阴性组ON眼更严重(P=0.02);抗体阳性组与抗体阴性组的病程(2.6年、1.9年)、ON发作次数(2次、1次)、长节段横贯性脊髓炎比例(48.0％、66.7％)、颅内NMOSD特异性病灶比例(32.0％、53.3％)、自身抗体阳性比例(52.0％、20.0％)的差异均无统计学意义(P值分别为0.13、0.08、0.25、0.18、0.06).抗体阳性组和抗体阴性组ON眼的颞侧、上侧、鼻侧、下侧象限以及平均RNFL均小于健康对照组(P值均＜0.05).抗体阳性组ON眼的上侧、下侧RNFL分别为61.0 μm、62.0 μm,明显小于抗体阴性组(94.5 μm、97.0 μm)(P值分别为0.03、0.01).结论 RNFL可用来评估NMOSD患者视网膜微观结构损伤,AQP4 Ab阳性的NMOSD患者RNFL变薄更明显,提示AQP4 Ab在NMOSD视网膜病理损伤中起一定作用.
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凝血酶和血红蛋白对大鼠水通道蛋白的影响及与脑积水的相关性研究
目的 探讨凝血酶和血红蛋白对水通道蛋白(AQP)的影响及AQP与脑积水的相关性.方法 取清洁级健康雄性SD大鼠84只,采用随机数字表法分为对照组、凝血酶组及血红蛋白组,分别通过枕大池注射等渗盐水(0.3 ml)、凝血酶[0.3 ml(10 U/ml)]及血红蛋白[0.3 ml(150 mg/ml)]制作脑积水模型,按照缺失补足的方式,保持各组大鼠24只.观察造模后1、3、7、14 d时的相对侧脑室面积、AQP1和AQP4的表达及AQP与相对侧脑室面积的相关性.结果 (1)相对于对照组,凝血酶组与血红蛋白组在1、3、7、14 d均显示脑积水,且在1 d时明显,分别为[(6.94±0.19)%和(6.58±0.15)%比(3.40±0.13)%、(6.06±0.12)%和(5.79±0.09)%比(3.55±0.15)%、(5.80±0.13)%和(5.58±0.08)%比(3.78±0.18)%、(5.66±0.14)%和(5.47±0.13)%比(3.52±0.18)%],差异均有统计学意义(P<0.01).(2)AQP1的增加主要在脑室脉络丛上皮细胞基底膜与顶膜,AQP4的增加主要在脑室室管膜细胞.1、3、7、14 d时AQP1与AQP4的相对表达量,对照组分别为1.09±0.07和1.30±0.15、0.91±0.06和1.18±0.12、1.33±0.17和1.16±0.08、1.22±0.11和1.00±0.10,凝血酶组分别为4.40±0.14和3.69±0.11、3.88±0.11和3.17±0.07、3.55±0.07和2.86±0.13、3.36±0.07和2.70±0.07,血红蛋白组分别为4.24±0.07和3.55±0.10、3.77±0.08和3.04±0.09、3.46±0.07和2.76±0.08、3.31±0.10和2.62±0.08;凝血酶组与血红蛋白组在各时点的AQP1与AQP4的相对表达量均明显高于对照组,组间差异均有统计学意义(均P<0.01);血红蛋白组各时点的AQP1与AQP4 mRNAs的相对表达量与凝血酶组的差异均无统计学意义(均P>0.05);在凝血酶组和血红蛋白组中,相对于1 d时,AQP1与AQP4的表达在3、7、14 d有明显下降(均P<0.01);相对于3 d时,AQP1在7、14 d均有明显下降(均P<0.05),AQP4在14 d时下降,差异均有统计学意义(均P<0.05).(3)凝血酶组各时点AQP1(r=0.983,P<0.01)及AQP4(r=0.987,P<0.01) 相对表达量与相对侧脑室面积呈正相关;血红蛋白组各时点AQP1(r=0.964,P<0.01)及AQP4(r=0.962,P<0.01)相对表达量与相对侧脑室面积呈正相关.结论 蛛网膜下腔注射凝血酶与血红蛋白后可引起脑室及其周围区域AQP1与AQP4的表达增加,凝血酶与血红蛋白可能是蛛网膜下腔出血后脑积水的重要介导因素.
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β-七叶皂甙钠对大鼠缺血性脑水肿及水通道蛋白4表达的影响
目的 研究β - 七叶皂甙钠对大鼠脑梗死后脑水肿及水通道蛋白4(AQP4)表达的影响. 方法 取SD雄性大鼠150只,体质量240～300 g.随机分为β - 七叶皂甙钠治疗组60只,对照组60只,假手术组30只.各组大鼠又按缺血时间不同(6 h和1、3、5、7 d)分为5个亚组,其中治疗组和对照组每亚组各12只,假手术组每亚组6只.用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,向治疗组大鼠腹腔注射β - 七叶皂甙钠(5 mg·kg-1·d-1),对照组及假手术组在相应时间点注射等量等渗盐水.于造模后6 h和1、3、5、7 d断头取脑.采用干湿重法观察脑水肿的动态变化,通过HE染色观察脑梗死区的病理学变化,应用免疫组化方法检测脑组织AQP4的表达. 结果 ① 脑梗死后6 h,病变侧大脑半球脑含水量开始增多,至3 d时达高峰,以后逐渐下降,7 d时仍高于假手术组.治疗组及对照组脑含水量组内不同时间点比较差异均有统计学意义(F=30.704,F=36.703,均P<0.01);各时间点治疗组及对照组梗死侧大脑半球脑含水量均明显高于假手术组(均P<0.01),治疗组均低于对照组(P <0.05～0.01).②脑梗死后6 h,梗死侧AQP4表达水平即增高,3 d时达高峰,以后逐渐下降,7 d时仍高于假手术组;治疗组和对照组各组内各时间点比较差异均有统计学意义(F=20.878,F=28.489,均P<0.01).治疗组及对照组各时间点AQP4的表达均高于假手术组(均P<0.01),治疗组AQP4的表达均明显低于对照组(P<0.05～0.01).AQP4表达水平与脑含水量呈正相关(r=0.972, P<0.001). 结论 β - 七叶皂甙钠能明显减轻脑梗死后脑水肿及降低AQP4的表达,β - 七叶皂甙钠可能通过抑制AQP4的表达而减轻脑水肿.
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以后区综合征为首发症状的视神经脊髓炎谱系疾病8例临床分析
视神经脊髓炎（neuromyelitis optica ，NMO）是一种主要累及视神经和脊髓的中枢神经系统自身免疫性炎性疾病。中枢神经系统水通道蛋白4（aquaporin‐4，AQP‐4）抗体是其较为特异的免疫标志物。目前国际视神经脊髓炎诊断小组（the international panel for NMO diagnosis ，IPND）对2006年NMO的Wingerchuck诊断标准进行修订提出新诊断标准，将NMO归入视神经脊髓炎谱系疾病（neuromyelitis optica spectrum disorders ，NMOSD）。新标准提出 NMOSD的6个核心特征：视神经炎、急性脊髓炎、后区综合征、其他急性脑干综合征、有M RI病灶的嗜睡症或急性间脑综合征、有M RI病灶的大脑综合征，后区综合征是其中一个重要的核心特征［1］。本文回顾性分析以后区综合征（不明原因的恶心、呕吐或呃逆）起病的8例NMOSD患者的临床资料特点，旨在为临床诊疗提供参考资料。
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甘露醇对缺血性脑水肿水通道蛋白4表达水平的影响
目的 研究大鼠脑缺血后水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP-4)的表达水平及甘露醇对其影响.方法 构建大脑中动脉闭塞模型,随机分为甘露醇治疗小剂量组(0.5g/kg)(n=52)、大剂量组(1.0g/kg)(n=32)和对照组(n=52),于梗死后6h、12h、1d、 5d各时间点随机抽取5只大鼠处死;另设假手术组5只.取脑组织分别作含水量、血脑屏障通透性测定(以伊文思蓝为示踪剂)及采用逆转录一聚合酶链反应(reverse transcription-polyrnerase chain reaction,RT-PCR)分析AQP4信使核糖核酸(Messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达水平.结果 小剂量组、大剂量组及对照组缺血侧脑组织含水量在梗死后上升,3d到达高峰(P<0.05),各组间差异无统计学意义(P>0.05);小剂量组,大剂量组及对照组缺血侧脑组织伊文思蓝含量在梗死后上升,1d到达高峰(P<0.05),各组间差异无统计学意义(P>0.05);对照组缺血侧梗死灶周围皮质AQP-4 mENA表达水平在梗死后1d到达高峰,5d开始回降,但仍处高水平(P<0.05),小剂量组、大剂量组与对照组相比显著降低(P<0.05),小剂量组与大剂量组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 大鼠缺血性卒中后缺血倜梗死灶周围皮质AQP-4 mENA表达水平动态变化规律提示,AQP4与脑水肿的发生发展密切相关;甘露醇可明显降低缺血侧梗死灶周围皮质AQP-4 mRNA表达水平,提示甘露醇对AQP-4有抑制作用.
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脑缺血再灌注大鼠脑组织水孔蛋白4的动态表达及其与脑水肿的关系
目的 探讨水孔蛋白4(aquaporin-4,AQP-4)在大鼠脑缺血再灌注后的动态表达及其与脑水肿的关系.方法 60只健康成年雄性SD大鼠,随机分成2组:大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)组和假手术组,采用Longa、Berderson、平衡木评分法进行行为学评分,干-湿重法测定脑组织含水量,HE染色观察大鼠脑组织的病理改变,免疫组化法检测脑组织AQP-4的表达.结果 MCAO/IR组大鼠行为学异常,以48 h和72 h为著,7 d时已基本恢复至正常水平;脑含水量24 h开始升高(82.42%±0.12%),48 h达高峰(85.40%±0.10%),并持续到72 h(84.87%±0.15%),7 d时下降至大致正常水平.脑水肿及炎性细胞浸润,以48 h和72 h为著.AQP-4阳性表达于梗死后6 h开始增多(110.0±4.4),48 h～72 h达高峰(126.2±2.6;140.1±1.2),7 d时有所下降(111.3±8.0),但仍处于较高水平,与假手术组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脑缺血再灌注后脑组织AQP-4的表达的变化与脑水肿的动态变化存在时间上的一致性,提示AQP-4可能参与了早期脑缺血再灌注后脑水肿形成的病理生理过程,而后期可能与脑内多余水分的清除有关.
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2015年视神经脊髓炎谱系疾病诊断标准国际共识介绍以及应用中值得注意的问题
视神经脊髓炎(NMO)是不同于多发性硬化(MS)的一种中枢神经系统特发性炎症性疾病.对NMO高度特异性的水通道蛋白-4(AQP4)抗体的发现加深了人们对NMO的认识,并扩展了视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)的概念.本文介绍2015年NMOSD诊断标准国际共识以及应用中值得注意的问题,并对新标准提出自己的看法.
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水通道蛋白4抗体检测的方法学比较及其临床意义
目的 比较经典分析法和水通道蛋白4(AQP4)抗体分析法对AQP4抗体检测率的异同,并探讨该抗体对区分中国视神经脊髓炎(NMO)和多发性硬化(MS)患者的诊断准确度.方法 选择44例NMO和46例MS患者的血清,采用经典分析法检测血清中的NMO-IgG(AQP4),AQP4抗体分析法检测血清中AQP4抗体.结果 90份血清中,两种方法检测结果均为阳性的36份,两种方法检测结果均为阴性的45份,经典分析法阳性但AQP4抗体分析法阴性血清4份,AQP4抗体分析法阳性但经典分析法阴性血清5份,2种方法的阳性率、阴性率差异无统计学意义(P=1.000).2种方法一致性检验Kappa=0.798,P=0.000.经典分析法检测NMO患者NMO-IgG的灵敏度为77.3%,阳性预测值85.0%,特异度87.0%,阴性预测值87.0%,诊断正确率为82.2%,Youden指数74.3%.AQP4抗体分析法检测NMO患者AQP4抗体的灵敏度为88.6%,阳性预测值95.1%,特异度95.7%,阴性预测值89.8%,诊断正确率为92.2%,Youden指数84.3%.结论 两种AQP4抗体检测方法对区分MS与NMO都具有高灵敏度与特异度,但是抗AQP4抗体分析法对NMO诊断具有更高的诊断准确性,值得推广.
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水通道蛋白4基因多态性与多发性硬化、视神经脊髓炎的相关性
目的 探讨水通道蛋白4(AQP-4)基因的常见基因多态性与中国北方汉族人多发性硬化(MS)、视神经脊髓炎(NMO)的相关性.方法 收集2002-2013年于北京大学人民医院、首都医科大学附属北京天坛医院和首都医科大学附属复兴医院神经内科住院和门诊的MS(n =93)、NMO(n=32)、视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD,n=35)、临床孤立综合征(CIS,n=14)患者,并收集2011-2013年来自北京大学人民医院的健康医护人员作为健康对照组(n=109),通过高分辨率熔解曲线法进行6个选定AQP-4单核苷酸多态性(SNP)的基因分型.利用x2检验比较上述各组之间SNP的等位基因及基因型频率,经Bonferroni法行校正分析,并进一步据NMO组的血清AQP-4抗体进行分层分析.结果 与健康对照组[98/206 (47.6％)]相比,MS[68/186 (36.6％)]、NMOSD组[23/68(33.8％)]rs162007位点的A等位基因频率明显降低(OR=0.635,95％ CI0.424 ～0.952,P=0.028;OR=0.563,95％ CI0.318 ～0.998,P=0.048),经Bonferroni校正后,差异无统计学意义.与健康对照组[74/200(37.0％)]比较,CIS组[16/28(57.1％)]rs3763043位点的T等位基因频率明显升高(OR=2.270,95％CI1.018 ～5.061,P=0.041),经Bonferroni校正后,差异无统计学意义.经分层分析亦未发现NMO组AQP-4抗体阳性者与阴性者之间的差异.结论 AQP-4基因的常见基因多态性与中国北方汉族人MS和NMO无明显相关性,且与NMO中AQP-4抗体阳性者无关,提示AQP-4的常见基因多态性与NMO等疾病的遗传易患性无关.
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免疫荧光检测人血清视神经脊髓炎免疫球蛋白G的实验方法
目的 建立检测神经脊髓炎免疫球蛋白G(NMO-IgG)的间接免疫荧光方法,描述其注意事项.方法 选择C57小鼠小脑、中脑、肾脏和胃冰冻切片作为基质.人血清经稀释、豚鼠肝粉预处理后,滴加于封闭液处理的上述切片,4℃过夜后滴加荧光素结合的羊抗人IgG的抗体,封片、荧光显微镜观察.实验通过荧光双标技术确定NMO-Igc结合部位与AQP4表达位置是否一致.结果 测定了182份人血清,通过间接免疫荧光法证实部分NMO、MS、脊髓炎、视神经炎患者血清有NMO-IgG结合到小鼠的软脑膜、脑膜下和脑、脊髓的毛细血管部位.荧光双标技术显示NMO-IgG的结合位置与AQP4表达的位置完全一致.豚鼠肝粉-PBS液对照及空白对照无特异荧光.结论 以C57小鼠的小脑、肾脏和胃冰冻切片作为基质,通过间接免疫荧光法能成功检测出人血清中的NMO-IgG抗体,有助于我们对NMO进行诊断与鉴别诊断.
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神经丝蛋白轻链在视神经脊髓炎谱系疾病诊断和预后中的意义
目的 研究脑脊液中轴索损伤标志物神经丝蛋白轻链(NFL)检测对视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)诊断及预后的意义.方法 收集2014年1月至2016年8月就诊于海军总医院的NMOSD患者61例作为试验组(NMOSD组),同期就诊的因其他疾病如神经症、偏头痛等行腰椎穿刺者 24例作为正常对照组.收集NMOSD组临床、影像学资料及两组脑脊液标本,以酶联免疫吸附实验方法检测两组脑脊液中NFL浓度并进行比较.比较不同亚型的NMOSD患者脑脊液NFL水平,采用多元线性回归方法分析患者脑脊液中NFL浓度的影响因素.结果 NMOSD组脑脊液NFL浓度[2 729.00(14 862.00) pg/ml]较正常对照组[299.50(308.00) pg/ml]明显升高,差异有统计学意义(进行以10为底的对数转换后行t检验, t=8.588, P=0.000).NMOSD患者年龄(b=0.017, P<0.01)、扩展残疾状况量表评分(b=0.078, P<0.05)、病灶强化与否(b=0.478, P<0.01)对lg(NFL)有影响.性别、病程、血水通道蛋白抗体阳性率对NMOSD患者脑脊液中NFL浓度高低无明显影响.结论 脑脊液NFL水平有助于评估NMOSD患者病情轻重及有无进展趋势.
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不同基质的间接免疫荧光法同时检测血清和脑脊液水通道蛋白4抗体在视神经脊髓炎诊断中的应用
目的 探讨基于猴视神经和稳定转染水通道蛋白4 (AQP4)细胞的间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,ⅡFA)同时检测血清和脑脊液AQP4-IgG在视神经脊髓炎(NMO)中的应用.方法 应用猴视神经/细胞IIFA,同时检测32例NMO、41例多发性硬化(MS)和33例神经系统非炎性疾病(NIND)患者血清和脑脊液AQP4-IgG以及20名健康人血清AQP4-IgG,并进行对比分析.结果 (1)无论采用视神经IIFA还是细胞IIFA,与MS和NIND患者及健康人相比,NMO患者血清AQP4-IgG阳性率显著升高[视神经IIFA:NMO 46.9％ (15/32),MS 7.3％ (3/41),NIND3.0％ (1/33),健康人0(0/20),P＜0.01;细胞IIFA:NMO 84.4％ (27/32),MS 2.4％ (1/41),NIND 3.0％ (1/33),健康人0(0/20),P＜0.01],与MS及NIND患者相比,NMO患者脑脊液AQP4-IgG阳性率显著升高[视神经ⅡFA:NMO 21.9％ (7/32),MS 0(0/41),NIND 0(0/33),P＜0.01;细胞IIFA:NMO 56.3％ (18/32),MS 0 (0/41),NIND 0 (0/33),P＜0.01];血清标本(视神经IIFA46.9％,细胞IIFA 84.4％)在诊断NMO时的敏感度明显高于脑脊液标本(视神经IIFA 21.9％,P＜0.05;细胞IIFA 56.3％,P＜0.05),两种标本特异度差异无统计学意义;同时检测血清和脑脊液,可提高血清AQP4-IgG诊断的敏感度(视神经IIFA:46.9％比50.0％;细胞IIFA:84.4％比87.5％),而特异度无改变.(2)无论血清还是脑脊液标本,与视神经IIFA(血清标本46.9％,脑脊液标本21.9％)相比,细胞IIFA具有更好的敏感度(血清标本84.4％,P＜0.01;脑脊液标本56.3％,P＜0.01),特异度差异无统计学意义.结论 (1)视神经IIFA检测AQP4-IgG有助于NMO诊断,但敏感度低于细胞IIFA;(2)同时检测血清和脑脊液AQP4-IgG在诊断NMO时具有更好的临床价值.
