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组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A (trichostatin A,TSA)对脓毒症急性肺损伤的保护作用.方法 建立盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)诱导的脓毒症小鼠模型.取90只清洁级雄性BALB/c小鼠,按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、脓毒症+DMSO(二甲基亚砜)组(DMSO组)、脓毒症+TSA(1 mg组)、脓毒症+TSA(5 mg组)、脓毒症+TSA(10 mg组),每组15只小鼠.TSA组在CLP术前12h进行腹腔注射TSA(1,5,10 mg/kg).假手术组仅行开腹,不予以结扎穿孔.术后24 h收集标本,酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液中(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β (IL-1β)水平;留取肺组织,测定肺组织湿/干比(W/D);苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理学改变;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测肺组织凋亡蛋白的表达.另外120只小鼠用于观察各组小鼠生存率.采用SPSS 23.0统计软件,两组样本比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析检验.小鼠生存率采用Log-rank检验进行单因素分析.结果 与假手术组相比,CLP组W/D(P=0.021)、TNF-α(P=0.0001)、IL-1β(P=0.000 6)、病理评分(P=0.001 6)、肺组织凋亡指数(P=0.000 9)、凋亡蛋白(P＜0.05)明显升高,而小鼠生存率下降(P=0.000 1).与DMSO组相比,TSA干预组W/D、TNF-α、IL-1β、病理评分、肺组织凋亡指数、凋亡蛋白明显下降(P＜0.05),TSA 10 mg干预组生存率明显升高(P=0.007 2).结论 TSA对脓毒症急性肺损伤具有保护作用,其机制可能是通过降低炎症反应和减少细胞凋亡.
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曲古霉素A对脊髓损伤大鼠神经行为学及组织学保护作用观察及机制探讨
目的 观察曲古霉素A(TSA)对脊髓损伤(SCI)大鼠神经行为学及组织学保护作用,并探讨其保护机制.方法 60只大鼠其中40只建立急性SCI模型后分为模型(M)组、低剂量(LD)组、中剂量(MD)组及高剂量(HD)组,术后腹腔注射50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml TSA生理盐水溶液;另取10只仅做椎板切除术为假手术(S)组,剩余10只不做处理为对照(C)组,注射生理盐水溶液.术后评估神经行为学变化;处死后观察其脊髓组织病理学变化,并对比脊髓细胞凋亡情况;对比脊髓组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白3(Caspase3)mRNA和蛋白表达情况.结果 BBB运动评分及斜板试验大角度比较,C组、S组高,MD组其次,LD组、HD组稍低,M组低,除LD组与HD组比较、C组与S组比较差异无显著性(P>0.05),其他每两组间比较差异均有显著性(P<0.05),M组、LD组、MD组、HD组随时间的延长呈显著升高趋势(P<0.05),C组、S组随时间的延长变化不显著(P>0.05).病理学观察发现,M组组织结构严重破坏、细胞病变明显;3剂量组均不同程度改善,MD组改善为明显.脊髓细胞凋亡率、Caspase3 mRNA和蛋白相对表达量组间比较,C组、S组低,MD组其次,LD组、HD组稍高,M组高,除LD组与HD组比较、C组与S组比较差异无显著性(P>0.05),其他每两组间比较差异均有显著性(P<0.05).PCNA mRNA和蛋白相对表达量比较,MD组高,LD组、HD组其次,M组稍高,C组、S组低,除LD组与HD组比较、C组与S组比较差异无显著性(P>0.05),其他每两组间比较差异均有显著性(P<0.05).结论 TSA对SCI大鼠神经行为学及组织学具有保护作用,其中100μg/ml保护作用佳,可能与上调PCNA mRNA和蛋白、下调Caspase3 mRNA和蛋白表达有关.
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曲古霉素A和5-氮杂胞苷对高糖诱导损伤的胰岛β细胞的保护作用
目的 探讨高糖诱导下曲古霉素A(TSA)和5-氮杂胞苷(5-AzaC)对胰岛β细胞增殖、凋亡及功能的影响. 方法 体外培养大鼠胰岛素瘤(RIN-m5f)细胞至指数增长期,根据干预方案分为空白对照(NC)组、高糖诱导(HG)组、0.05、0.10 μmol/L TSA干预组、0.63、1.25 μmol/L 5-AzaC干预组、0.10 μmol/L TSA+1.25 μmol/L 5-AzaC联合干预组.检测RIN-m5f细胞增殖活性、细胞凋亡率、葡萄糖刺激胰岛素分泌能力. 结果 0.05、0.10 μmol/L TSA干预组、0.63、1.25 μmol/L 5-AzaC干预组及联合干预组的细胞增殖活性均高于HG组,而细胞凋亡率均低于HG组(P＜0.05).在3.3 mmol/L及25 mmol/L葡萄糖刺激时,各组葡萄糖刺激胰岛素分泌量均高于HG组(P＜0.05). 结论 TSA和5-AzaC可抑制高糖诱导的胰岛β细胞凋亡和恢复β细胞的胰岛素分泌功能.
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曲古霉素A对结直肠癌Lovo细胞株5-氟尿嘧啶化疗敏感性的影响及可能机制的研究
目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)对结直肠癌Lovo细胞株5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗敏感性的影响及可能的机制.方法 实验分为对照组、5-Fu组、TSA组、TSA预处理组、TSA+ 5-Fu联合组.分别于加药后24、48和72 h用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况,Transwell法检测干预24h后的细胞侵袭力,流式细胞术检测干预24h后细胞凋亡率的变化,Western blot法检测干预24h后细胞中胸苷酸合酶(TS)蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,5-Fu组、TSA预处理组及TSA+ 5-Fu联合组细胞24、48、72 h生长受到抑制(P＜0.05);与5-Fu组相比,TSA预处理组及TSA+ 5-Fu联合组48、72 h细胞生长抑制明显(P＜0.05);TSA预处理组与TSA+ 5-Fu联合组生长抑制率差异无统计学意义(P＞0.05).干预24h后,对照组、5-Fu组、TSA组、TSA预处理组及联合组细胞穿膜数分别为(25.0±4.2)、(16.8±2.8)、(19.6±2.5)、(8.2±3.2)、(6.5±2.6)个,组间差异有统计学意义(P＜0.05),凋亡率分别为(4.26±1.36)％、(11.66±3.18)％、(8.57±2.69)％、(39.79±8.53)％、(45.18±10.07)％,组间差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,各用药组细胞穿膜数下降、细胞凋亡率升高(P＜0.05),TSA预处理组及TSA+ 5-Fu联合组细胞穿膜数、细胞凋亡率较5-Fu组变化明显(P＜0.05),而TSA预处理组与TSA+ 5-Fu联合组之间细胞穿膜数、细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).对照组与5-Fu组细胞TS蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);与对照组及5-Fu组相比,TSA组、TSA预处理组及TSA+ 5-Fu联合组细胞TS蛋白表达下调(P＜0.05),而TSA组、TSA预处理组及TSA+ 5-Fu联合组细胞TS蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TSA能够增强5-Fu对结直肠癌Lovo细胞的化疗敏感性,这种作用可能是通过下调TS蛋白实现的.
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应用基因芯片技术筛选曲古菌素A诱导肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP差异表达的凋亡基因
目的 应用基因芯片技术筛选曲古菌素A(TSA)处理顺铂耐药肺癌细胞株A549/CDDP后的凋亡相关基因的表达变化,筛选TSA治疗顺铂耐药肺癌的靶分子.方法 TSA处理A549/CDDP细胞24h,以未经TSA处理的A549/CDDP细胞作为对照组,提取两组细胞总RNA并反转录为cDNA,采用NimbleGen全基因组表达芯片检测基因表达情况,以NimbleScan 2.5软件结合GO分析比较TSA处理组与对照组基因表达谱的变化,从差异表达基因中筛选出与凋亡和增殖相关的基因.结果 与对照组相比,共筛选到TSA上调的凋亡相关基因85个以及下调的细胞增殖和生长相关基因43个.GO分析发现,这些基因的分子功能主要是调节细胞凋亡和细胞对化学刺激的抵抗作用,以及参与细胞生长、增殖、细胞生物质量维持等生物过程.TSA不仅激活了线粒体凋亡通路,而且激活了死亡受体相关凋亡通路,下调了与细胞耐药相关的基因BAG3和ABCC2.结论 TSA改变了A549/CDDP细胞中凋亡和增殖基因的表达,这些基因可能在TSA治疗顺铂耐药肺癌中发挥了重要作用.
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曲古霉素A联合环巴胺对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响
目的 本实验旨在研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A (TSA)联合Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环巴胺(CYA)干预对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响并初步探讨其可能机制.方法 采用CCK8方法检测曲古霉素A、环巴胺作用24 h对PANC-1细胞50％抑制浓度(IC50).用Hochest 33258荧光染色观察曲古霉素A、环巴胺单独及联合处理PANC-1细胞24 h后凋亡;荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测Hedgehog信号通路关键分子及凋亡相关基因mRNA表达的变化;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、活化胱天蛋白酶-3,活化胱天蛋白酶-8,活化胱天蛋白酶-9)及Hedgehog通路关键分子蛋白(Gli1、Smo、Ptc-1)表达的改变;细胞免疫荧光标记法检测Gli1蛋白表达的变化.结果 Hochest 33258染色显示,曲古霉素A及环巴胺均可诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,24 h IC50分别为(0.51 ±0.07) μmol·L-1和(33.6±2.3)μmol·L-1,两者联合指数为0.835,具有低度协同作用.曲古霉素A及环巴胺干预后Bcl-2 mRNA表达下降,Bax mRNA表达上调,尤以联合组明显.曲古霉素A0.5μmol · L-干预可抑制Gli1 mRNA的表达,联合环巴胺20 μmol·L-后对Hedgehog通路的抑制效应进一步增强,降低Gli1、Smo mRNA表达量,上调Gli3 mRNA的表达.Western印迹结果显示,曲古霉素A0.5μmol· L-1、环巴胺20μmol·L-单独及联合处理PANC-1后,凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9活化程度进一步上升,凋亡抑制因子Bcl-2的表达明显下降,Hedgehog信号关键分子蛋白Gli1、Smo、Ptc-1表达均明显下降,以联合组为明显.细胞免疫荧光结果也显示Gli1表达明显下降.结论 曲古霉素A、环巴胺可协同抑制Hh通路,诱导胰腺癌PANC-1细胞的凋亡.
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曲古霉素A对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及相关机制
[目的]探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A (trichostatinA,TSA)对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制.[方法]应用不同浓度的TSA处理子宫内膜癌HEC-1B细胞72h,Western blotting法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平及p21蛋白,荧光定量PCR方法检测p21基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率.[结果]经TSA作用后,人子宫内膜癌HEC-1B细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA及蛋白表达增加；同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加.[结论]TSA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖和诱导细胞凋亡.
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曲古霉素A诱导胃癌细胞系BGC-803凋亡的机制研究
目的 利用曲古霉素A(TSA)处理人胃癌细胞系BGC-803后观察细胞增殖情况并研究了凋亡相关基因表达量的变化.方法 本研究通过TSA处理胃癌细胞系BGC-803细胞后,利用MTT、Real-time PCR、Western blot等试验方法,采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析.结果 75 ng/mL的TSA处理48 h相较其他试验组,可显著抑制胃癌细胞系BGC-803细胞增殖(P＜0.05),且其抑制作用具有剂量、时间依赖性;使促凋亡蛋白BAX、Caspase-3的mRNA、蛋白表达量升高,从而发挥促进细胞凋亡的作用.结论 TSA诱导BGC-803调亡是通过Caspase依赖途径进行的,且随着时间和剂量的增加,TSA对胃癌细胞的抑制效果越来越显著.
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曲古霉素A增强肺癌细胞对放射线敏感性及机制
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)增强人非小细胞肺癌(NSCLC)A549对γ-射线敏感性作用及机制.方法:以TSA(0.5μM)预处理细胞18h,再以5Gyγ-射线照射细胞,24h后采用MTT法检测细胞存活率,AnnexinV-PI染色检测细胞凋亡,Western blot法检测胞浆中和线粒体促凋亡蛋白Bax的表达,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位变化.结果:5Gyγ-射线照射可轻度降低细胞存活率,仅有少量细胞发生凋亡,以TSA预处理再以γ-射线处理细胞,细胞存活率显著下降,凋亡细胞明显增多,伴有线粒体膜电位下降,以及Bax蛋白的激活,表现在线粒体Bax表达较单纯照射组显著增高.结论:TSA通过促进Bax蛋白的活化激活线粒体凋亡途径,增强增强A549细胞对γ-射线的敏感性.
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曲古霉素A对人胃癌细胞的抑制作用及其机制探讨
组蛋白去乙酰基酶抑制剂(HDACi)是一类新型抗肿瘤药物.曲古霉素A(TSA)是目前研究为广泛的HDACi之一,已发现其对多种肿瘤细胞具有明显抑制作用,但关于TSA对胃癌作用的研究尚少.目的:观察TSA对人胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期以及相关基因表达的影响,探讨其抑制人胃癌细胞的可能作用机制.方法:以不同浓度TSA(0～1μmol/L)处理人胃癌细胞株AGS和HGC-27.CCK-8实验检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,real time RT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞凋亡、细胞周期相关基因mRNA和蛋白水平的表达.结果:TSA能剂量依赖性地抑制AGS、HGC-27细胞增殖(P=0.000),对两者的半数致死浓度分别约为0.25 μmol/L和0.5μmol/L.TSA能诱导AGS、HGC-27细胞发生G0/G1期和G2/M期阻滞,以G0/G1期阻滞更为明显.TSA对AGS细胞的诱导凋亡作用强于HGC-27细胞(P＜0.05).TSA尚能上调p21、p53、Bax mRNA和蛋白表达,下调Bcl-2、CDK2、cyclin D1 mRNA和蛋白表达,作用均呈时间依赖性(P＜0.05).结论:TSA抑制人胃癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用可能是通过调节细胞凋亡、细胞周期相关分子、激活多种肿瘤相关信号通路实现的.
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双孔钾通道KCNK16在大鼠胰岛中的表达及调节
目的 观察双孔钾通道KCNK16在大鼠胰岛中的表达情况,并探讨促进β细胞胰岛素分泌的刺激因素对其表达的调节.方法 采用实时定量PCR和组织化学染色技术观察KCNK16在大鼠胰岛及其他组织中的表达.分别用葡萄糖、催乳素、软脂酸以及曲古菌素A(TrichostatinA,TSA)处理大鼠胰岛24h,实时定量PCR和Western印迹法检测KCNK16的表达水平.以ELISA检测TSA处理大鼠胰岛24 h后葡萄糖和KC1刺激的胰岛素分泌水平.不同浓度和时间的TSA处理INS1-E细胞,实时定量PCR检测KCNK16的表达水平.结果 KCNK16在大鼠胰岛中高表达.葡萄糖、催乳素和脂肪酸并不影响大鼠胰岛KCNK16的表达.TSA显著增强大鼠胰岛葡萄糖和KC1刺激的胰岛素分泌(P＜0.05),同时显著下调KCNK16的mRNA和蛋白表达(P＜0.01).在INS1-E细胞,TSA抑制KCNK16的表达作用呈浓度和时间依赖性(P＜0.05).结论 KCNK16在大鼠胰岛中特异性高表达,且其表达水平能被TSA显著下调,KCNK16表达的下调有可能介导了TSA增强的胰岛素分泌.
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曲古霉素A和5-氮杂胞苷对细胞因子诱导损伤的胰岛β细胞的保护作用
目的 探讨细胞因子白细胞介素-1β和干扰素-γ诱导下曲古霉素A(TSA)、5-氮杂胞苷(5-AzaC)及其联合干预对胰岛p细胞增殖、凋亡及功能的影响.方法 采用白细胞介素-1β和干扰素-γ诱导大鼠胰岛素瘤细胞(RIN-m5f)损伤,用TSA、5-AzaC对其进行干预.具体分组:空白对照组、细胞因子诱导组、0.05/0.10 μmol/L TSA干预组、0.63/1.25 μmol/L 5-AzaC干预组、0.10 μmol/L TSA+ 1.25 μmol/L5-AzaC联合干预组.用MTT法检测RIN-m5f细胞的增殖活性,流式细胞技术检测细胞凋亡率及酶联免疫吸附法测定葡萄糖刺激胰岛素分泌能力.结果 0.05/0.10 μmol/L TSA干预组、0.63/1.25μmol/L 5-AzaC干预组、0.10 μmol/L TSA+ 1.25tμmol/L 5-AzaC联合干预组细胞增殖活性分别为70.1％/79.2％、67.3％/82.9％和89.1％,高于细胞因子诱导组的33.9％(P＜0.05);其凋亡率分别为10.3％/10.5％、7.9％/9.6％和8.2％,低于细胞因子诱导组的16.6％(P＜0.05);各组葡萄糖刺激胰岛素分泌能力均比细胞因子诱导组升高(P＜0.05).结论 TSA和5-AzaC可以促进细胞因子诱导的胰岛β细胞增殖,抑制其凋亡和恢复p细胞的胰岛素分泌功能.
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曲古霉素A对肺腺癌细胞株NCI-H1299增殖的抑制作用及其机制
背景与目的:曲古霉素A(trichostatin A,TSA)是具有组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases,HDAC)强效非竞争性抑制剂,对血液系统肿瘤和实质性肿瘤均有较强的生长抑制作用.本文观察HDACs抑制剂TSA对体外培养的肺腺癌NCI-H1299细胞株的增殖、凋亡和周期以及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测不同浓度(0.1、0.2、0.4、2.0 μmol/L)的TSA对人肺腺癌NCI-H1299细胞株体外增殖的影响,流式细胞术检测药物处理后细胞周期及凋亡率的变化;Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平的变化:Real-time PCR检测NCI-H1299细胞内p21、CyclinBl、Bcl-2和Bax的基因表达.结果:TSA能明显抑制NCI-H1299细胞的体外生长,其抑制作用呈明显的剂量和时间依赖性.TSA诱导后,流式细胞术检测结果显示细胞阻滞于G_2/M期,细胞凋亡增加.TSA可明显提高NCI-H1299细胞内组蛋白H4的乙酰化水平,诱导p21和Bax的mRNA表达增加,同时抑制Bcl-2和CyclinBl表达.结论:TSA可通过诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期而发挥体外抗肺腺癌细胞生长的作用,其机制可能与组蛋白乙酰化水平的提高以及调控相关基因p21、Bar、Bcl-2和CyclinBl的表达变化有关.
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组蛋白去乙酞化酶抑制剂对乏氧宫颈癌HeLa细胞放射敏感度的影响
目的:观察组蛋白去乙酸化酶抑制剂曲古霉素A (trichostatin A,TSA)对乏氧状态下人宫颈癌HeLa细胞放射敏感度的影响.方法:应用不同浓度TSA作用经乏氧预处理的人宫颈癌HeLa细胞12、24、48和72 h,MTT法检测HeLa细胞的增殖率,计算半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC(50))和IC(10)值;克隆形成实验检测TSA (IC(10))作用24 h对乏氧HeLa细胞的放射增敏效应;免疫细胞化学法检测TSA (IC(10))对HeLa细胞中乏氧诱导因子-1α (hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋自表达的影响.结果:TSA对乏氧宫颈癌HeLa细胞的增殖率有明显的抑制作用,且随着TSA浓度的增加和作用时间的延长,其抑制作用逐渐增强.与乏氧照射组比较,TSA (IC10)作用乏氧HeLa细胞24 h,可增加细胞的放射敏感度(P<0.05).乏氧HeLa细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达明显高于常氧组细胞;与乏氧组比较,TSA (IC10)作用乏氧HeLa细胞24 h后,细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达下调.结论:TSA可能通过抑制乏氧HeLa细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达而发挥放射增敏效应.
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曲古霉素A体外诱导膀胱癌细胞凋亡及细胞周期阻滞的机制探讨
目的:观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古霉素A(TSA)对体外培养膀胱癌细胞生长情况及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 μmol/L)的TSA对人膀胱癌T24细胞生长的影响.透射电镜观察TSA(0.4 μmol/L) 诱导后膀胱癌细胞的形态学变化;流式细胞术检测处理后膀胱癌细胞周期分布及凋亡率的变化;Western 印迹法检测处理后膀胱癌细胞组蛋白乙酰化水平的变化;FQ-PCR检测处理后膀胱癌细胞p21CIP1/WAF1、cyclin A和cyclin E mRNA的表达.结果:TSA体外能明显抑制T24细胞生长,且抑制作用呈明显的剂量、时间依赖性.TSA(0.4 μmol/L)诱导后,透射电镜下可见大量具有凋亡形态特征的T24细胞;流式细胞术检测示细胞阻滞于G0/G1期,并且出现典型的亚二倍体(Sub-G1)峰;TSA可明显提高组蛋白乙酰化水平,并诱导p21CIP1/WAF1的mRNA表达和抑制cyclin A的mRNA表达,而对cyclin E无明显作用.结论:TSA可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞而发挥体外抗膀胱癌作用,其作用机制可能涉及组蛋白乙酰化水平以及相关基因(p21CIP1/WAF1、cyclin A)表达的调控.
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曲古霉素A对肺腺癌细胞NCI-H1299增殖抑制作用及机制
目的 观察组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase)抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对体外培养肺腺癌NCI-H1299细胞生长情况及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 MTT法检测不同浓度(0.1、0.2、0.4、2.0 μmol/L)的TSA对人肺腺癌NCI-H1299生长的影响,流式细胞术检测处理后NCI-H1299细胞周期分布及凋亡率的变化;Western印迹法检测处理后人肺腺癌NCI-H1299组蛋白H4乙酰化水平的变化;Real-Time PCR检测处理后人肺腺癌NCI-H1299、p21、cyclin B1、Bcl-2和Bax的表达.结果 TSA体外能明显抑制NCI-H1299细胞生长,且抑制作用呈明显的剂量、时间依赖性.0.4 μmol/L TSA诱导后,流式细胞术检测示细胞阻滞于G2/M期;TSA可明显提高NCI-H1299组蛋白乙酰化水平,并诱导p21和Bax的mRNA表达和抑制Bcl-2和cyclin B1的mRNA表达.结论 TSA可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞而发挥体外抗肺腺癌细胞株作用,其作用机制可能涉及组蛋白乙酰化水平以及诱导调控相关基因p21、Bax、Bcl-2和cyclin B1.
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曲古霉素A对小鼠骨髓源性树突状细胞表型和功能的影响
目的 未成熟树突状细胞(immature dendritic cells, imDCs)诱导免疫耐受的作用受到越来越多的重视,如何保持其未成熟状态成为研究热点.文中旨在研究曲古霉素A (Trichostatin A, TSA)对小鼠骨髓源性树突状细胞(dendritic cells, DCs)表型和功能的影响.方法 取小鼠骨髓单核细胞,在含重组小鼠粒/巨细胞刺激因子(recombinant mouse granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, rmGM-CSF)和重组小鼠白介素-4(recombinant mouse interleukin 4, rmIL-4)完全培养基中诱导其向DCs分化,并与第6天收集疏松贴壁细胞分为空白组(不另外添加任何药物)和TAS组(加入100ng/ml)组,分别继续培养48h.流式细胞仪测定各组DCs表面共刺激因子的表达,ELISA试剂盒检测IL-12p40细胞因子分泌的变化,混合淋巴细胞增殖实验检测不同组DCs对T淋巴细胞增殖能力的影响.结果 与空白组比较,TSA显著下调DCs表面共刺激因子的表达和减少细胞因子IL-12p40的分泌,且其诱导的DCs显著降低同种异基因T淋巴细胞增殖能力.结论 TSA能够抑制DCs的成熟和诱导imDCs的产生.
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曲古霉素A对CD14+单核细胞活化及TLR4信号通路的影响
目的:研究曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对CD14+单核细胞活化状态及Toll样受体4(TLR4)炎性信号通路的影响及其具体机制.方法:分离健康人外周血CD14+单核细胞,用20 nmol/L浓度TSA孵育24 h后收集细胞,RT-qPCR方法检测TLR4及下游炎症因子基因mRNA表达水平,以流式细胞分析检测细胞表面TLR4蛋白表达量,以ChIP-qPCR方法检测TLR4基因启动子区组蛋白H3乙酰化水平变化,以Transwell法检测单核细胞趋化能力,以细胞黏附力实验检测单核细胞的黏附能力.结果:TSA刺激能够增加CD14+单核细胞的趋化和黏附能力,上调CD14+单核细胞中TLR4及下游炎症因子TNF-α、MCP-1和IL-6的表达,提高TLR4基因启动子区组蛋白H3乙酰化水平.结论:TSA能够诱导CD14+单核细胞活化,提高TLR4启动子区组蛋白乙酰化修饰水平,促进TLR4信号通路基因过度表达.
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曲古霉素A增强抗肿瘤药物对膀胱癌T24细胞的杀伤作用
目的 观察HDAC抑制剂曲古霉素A(TSA)和针对DNA的抗癌药物联用对膀胱癌T24细胞的杀伤作用.方法 用MTT法测定TSA单用及分别与ADM、MMC和DDP联用对T24细胞的抑制率,用金氏公式法判断联合用药的效果.结果 TSA分别与ADM、MMC、DDP联合用药对T24细胞的抑制率均随着浓度的增加而明显增加,TSA与MMC联用的协同作用明显,而TSA与ADM和DDP在中低剂量下联用亦表现为协同作用.结论 HDAC抑制剂TSA可明显增强针对DNA的抗癌药物对膀胱癌细胞的杀伤作用,有希望应用于晚期膀胱癌的化疗方案中.
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曲古霉素A治疗膀胱癌的体内外研究
目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)对膀胱癌的体内外杀伤作用.方法 用MTT法检测TSA对膀胱癌细胞生长的抑制作用;Hochest染色观察细胞凋亡;Western blot检测乙酰化组蛋白3和survivin表达的变化,观察膀胱灌注TSA对膀胱癌模型大鼠肿瘤生长的抑制作用.结果 TSA对膀胱癌细胞的抑制率均随着浓度的增加而明显增加;TSA下调膀胱癌细胞survivin的表达;TSA与阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)和顺铂(DDP)联用具有明显的协同作用;经TSA膀胱灌注可明显抑制膀胱癌模型大鼠肿瘤生长,肌浸润癌比例明显低于未治疗组;TSA膀胱灌注联合MMC腹腔注射抑制肿瘤作用更明显.结论 TSA可明显抑制膀胱肿瘤的生长,并且能增强抗癌药物对膀胱癌细胞的杀伤作用.
