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冠心Ⅴ号合剂干预急性心肌梗死模型大鼠心室重构及心肌TLR4信号通路研究
目的:观察冠心Ⅴ号合剂对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠心室重构及心肌TLR4信号通路的影响.方法:雄性SD大鼠56只,采用冠状动脉左前降支结扎法建立急性心肌梗死模型,分别给予冠心Ⅴ号合剂小剂量(0.5 g/ml)、中剂量(1 g/ml)、大剂量(2 g/ml)及血脂康胶囊连续干预4周,以心脏彩超观察心脏结构及心功能,荧光定量PCR法检测TLR4mRNA、Myd88mRNA、NF-κBmRNA表达.结果:模型组实验大鼠心功能明显下降,梗死区心肌组织TLR4mRNA、Myd88mRNA、NF-κBmRNA表达上调,与空白组、假手术组比较差异有统计学意义;药物干预组各组上述指标均低于模型组;冠心Ⅴ号合剂大剂量组上述指标低于余治疗组,差异有统计学意义.结论:冠心Ⅴ号合剂能够抑制急性心肌梗死大鼠TLR4信号通路并改善心室重构.
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TLR4与心肌缺血再灌注损伤的研究进展
Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)属于模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)家族,是固有免疫的基本成员.越来越多的研究表明,TLRs在心肌缺血再灌注损伤的炎症反应中起了重要作用,其中TLR4的研究为广泛.心肌细胞在缺血再灌注后合成释放一些物质能与TLR结合,激活核转录因子等而产生炎症反应,影响左心室重塑.本文就TLR4在心肌缺血再灌注损伤中的作用作一综述,初步阐明TLRs影响心肌缺血再灌注损伤的机制,为临床治疗提供新思路.
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芍药内酯苷通过TLR4通路对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及Tollip表达的调控作用
芍药内酯苷为白芍中的主要活性成分.本文研究芍药内酯苷通过调节TLR4通路和Tollip表达治疗实验性溃疡性结肠炎的药效作用.应用三硝基苯磺酸治疗大鼠溃疡性结肠炎模型,通过测定TNF-α、IL-1、IL-10、5-HT、MPO,结合病理组织切片和TLR4通路和Tollip相关蛋白的表达,观察芍药内酯苷对溃疡性结肠炎的疗效.研究结果显示,芍药内酯苷可通过显著降低TNF-α、IL-1、IL-10、5-HT水平,显著降低TLR4、MyD88和NF-KB p65的蛋白表达和上调Tollip的表达,发挥治疗溃疡性结肠的作用.由此可见,芍药内酯苷可作为治疗溃疡性结肠炎的潜在天然药物.
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TLR4信号通路在重症急性胰腺炎大鼠中介导肠黏膜炎症反应机制的研究
目的:研究TLR4信号通路在重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠中介导肠黏膜炎症反应机制.方法:将20只SD大鼠随机分成SAP组和对照组,每组10只.SAP组采用4.5%牛磺胆酸钠逆行注射胰胆管建模(1 mL/kg),对照组则采用0.9%氯化钠溶液注射.比较两组大鼠小肠的NF-κB活性、TLR4蛋白和mRNA水平,血清TNF-a、IL-6、IL-10水平,以及胰腺、小肠组织病理评分.结果:SAP组大鼠的胰腺、小肠组织病理评分、血清炎症因子(TNF-a、IL-6、IL-10)水平、小肠NF-κB活性、TLR4蛋白和mRNA水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:TLR4信号通路在SAP的发展起到了重要的作用,作为炎症反应的"闸门",可通过一系列信号转导调控炎性介质的释放和引起SAP各器官损伤,可能作为治疗SAP并肠黏膜屏障功能障碍的潜在靶点.
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炎性信号通路与缺血性脑卒中
缺血性脑卒中是指各种原因所致的脑组织缺血、缺氧性坏死，出现相应神经功能缺损的疾病，其中炎症反应是导致缺血后神经损伤的重要原因，故阻断炎性信号通道成为治疗缺血性脑卒中的靶点。对缺血性脑卒中炎性信号通道及目前各种作用于信号通路上的药物进行综述。
关键词： 缺血性脑卒中 TLR4信号通路 核转录因子-κB通路 MAPK信号通路 -
N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺抑制失血性休克大鼠肠黏膜损伤
目的 探讨N (2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(NLAG)对失血性休克大鼠肠黏膜屏障的作用及其对TLR4/Myd88信号通路表达的影响.方法 清洁级SD大鼠30只,随机分为假手术组(Sham)、失血性休克组(HS)和NLAG组,每组10只.按大鼠总血容量35％放血建立HS模型,HS组自体血回输复苏,NLAG组于HS后腹腔注射NLAG.于HS发生后4h处死大鼠,观察小肠组织病理学结果;检测血中肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)和D-乳酸浓度;ELISA检测血清中TNF-α、IL-6、IL-10浓度;Westem-blot法检测TLR4、Myd88、NF-κB蛋白表达水平.结果 NLAG抑制脓毒症引发的全身炎症反应,降低血浆中I-FABP、D-乳酸含量,下调血浆中TNF-,IL-6和IL-10含量;抑制肠损伤,改善肠屏障功能,降低肠粘膜TLR4、Myd88、NF-κ B蛋白表达水平.结论 NLAG抑制HS大鼠肠黏膜损伤可能与下调炎症因子和TLR4/Myd88信号通路有关
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刺五加多糖对Lewis荷瘤小鼠抗肿瘤免疫调节作用及机制的研究
目的:探讨刺五加多糖(ASPS)对Lewis荷瘤小鼠TLR4信号转导通路的调控机制.方法:用C57BL/6建立Lewis实体型荷瘤小鼠模型,随机分为生理盐水组(NS组)、阿霉素组(ADM组)和ASPS低、中、高剂量组,灌胃给药25 d后,称重计算瘤重、抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数.收集荷瘤小鼠眼球血,ELISA检测外周血中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12p70的分泌情况.采用实时荧光定量PCR (Q-PCR)和Western blot法分别检测荷瘤小鼠脾细胞中TLR4相关节点TLR4、MyD88、TRAM、TRAF6、NF-κB p65、AP-1基因和蛋白的表达水平.结果:与NS组相比,ASPS中剂量组荷瘤小鼠的瘤重明显降低,抑瘤率和免疫器官指数显著升高(P＜0.05).与NS组相比,ASPS显著促进荷瘤小鼠外周血TNF-cα、IL-1p和IL-6的分泌(P＜0.05),对IL-12p70的产生无显著影响(P＞0.05).ASPS显著上调TLR4信号通路中TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κB p65、AP-1基因和蛋白在荷瘤小鼠脾脏中的表达(P＜0.05),而对TRAM无显著作用(P＞0.05).结论:TLR4信号通路可能是ASPS在Lewis荷瘤小鼠体内发挥免疫调节及抑制肿瘤作用的通路之一.
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Toll样受体4信号通路与有氧运动康复疗法干预慢性心肌损伤
Toll样受体（ TLRs）为Toll蛋白家庭中的一个成员，TLR4是早发现、研究深的TLRs。随着TLR4在心肌损伤中的作用进一步阐明，其在心脏疾病中的治疗作用将会产生广阔的应用前景。 TLR4信号通路的鉴定对于诊断慢性心肌损伤的病理检查具有较好的借鉴价值，同时，有氧运动康复疗法作为一种非药物疗法，日益受到广泛的关注，有氧运动康复疗法可改善心肌功能，使心肌产生适应性变化。本文就TLR4信号通路与有氧运动康复疗法干预慢性心肌损伤进行综述。
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慢性胰腺炎患者胰腺和血清中TLR4信号通路关键因子的检测及其意义
目的:检测慢性胰腺炎(CP)患者胰腺和血清中Toll样受体4(TLR4)信号通路关键应答基因的表达,阐明TLR4信号通路在CP发生发展过程中的意义.方法:收集24例CP和6例胰腺正常的良性病变患者的手术胰腺组织标本,分别进行TLR4 mRNA原位杂交和髓样分化蛋白88 (MyD-88)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)免疫组织化学染色,利用电脑分析系统测量各个指标的积分光密度(IA)值.采集84例CP患者及30例正常成人的空腹静脉血,ELISA法检测血清可溶性TLR4 (sTLR4)、TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素12(IL-12)的水平,分光光度法检测血浆内毒素脂多糖(LPS)的水平.分析血浆LPS水平与各细胞因子的相关性.结果:与正常对照组比较,CP组患者胰腺组织TLR4 mRNA、MyD88、TNF-a表达水平均显著增加(P＜0.01),分别是正常对照的4.2、6.1及10.2倍；末梢血LPS、sTLR4、TNF-a、IL-6和IL-12水平与正常对照组比较均升高(P＜0.05或P＜0.01)；Bivariate相关分析,伴有内毒素血症的CP患者血浆LPS水平与血清TNF-α、IL-6、IL-12水平呈正相关关系(r=0.859,P＜0.01; r=0.688,P＜0.01; r=0.539,P＜0.05).结论:LPS-TLR4信号通路及应答基因产物在CP患者胰腺及外周血中均上调,其在CP急性发作期和炎症进展过程中发挥重要作用.
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抑制TLR4信号通路对小鼠肝原位种植瘤的影响
目的 TLR4信号通路可能和肝癌发生发展相关,文中旨在构建小鼠肝癌原位种植模型,通过体内实验研究抑制肝癌H22细胞TLR4信号通路对小鼠肝种植瘤的影响.方法 构建TLR4基因沉默siRNA慢病毒载体,并转染小鼠肝癌H22细胞.实验分为空白对照组、空载体组及干扰载体组,空白对照组H22细胞未做处理,空载体组为未转入TLR4基因沉默siRNA慢病毒载体的H22细胞,干扰载体组为转入TLR4基因沉默siRNA慢病毒载体的H22细胞.计算各组小鼠肝种植瘤的体积,Western blot和免疫组化检测TLR4、MyD88、NF-κB、TRAM蛋白分子的表达.结果 干扰载体组肝癌移植瘤体积[(568.3±90.3)mm3]较空白对照组及空载体组[(1303.0±194.1)?(1385.0±137.0)mm3 ]减小(P<0.05).Western blot 和免疫组化检测干扰载体组肝癌移植瘤TLR4?MyD88?NF-κB?TRAM 蛋白的表达比空白对照组和空载体组降低(P<0.05). 结论 下调TLR4 信号能抑制小鼠肝癌原位种植瘤生长.其机制可能通过MyD88 依赖性途径作用NF-κB 信号及非MyD88 依赖性途径作用TRAM 接头蛋白.
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曲古霉素A对CD14+单核细胞活化及TLR4信号通路的影响
目的:研究曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对CD14+单核细胞活化状态及Toll样受体4(TLR4)炎性信号通路的影响及其具体机制.方法:分离健康人外周血CD14+单核细胞,用20 nmol/L浓度TSA孵育24 h后收集细胞,RT-qPCR方法检测TLR4及下游炎症因子基因mRNA表达水平,以流式细胞分析检测细胞表面TLR4蛋白表达量,以ChIP-qPCR方法检测TLR4基因启动子区组蛋白H3乙酰化水平变化,以Transwell法检测单核细胞趋化能力,以细胞黏附力实验检测单核细胞的黏附能力.结果:TSA刺激能够增加CD14+单核细胞的趋化和黏附能力,上调CD14+单核细胞中TLR4及下游炎症因子TNF-α、MCP-1和IL-6的表达,提高TLR4基因启动子区组蛋白H3乙酰化水平.结论:TSA能够诱导CD14+单核细胞活化,提高TLR4启动子区组蛋白乙酰化修饰水平,促进TLR4信号通路基因过度表达.
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TGA与LPS竞争抑制妊娠期糖尿病孕妇外周血单核细胞TLR4经典信号通路
目的 研究半乳糖醛酸( TGA)与内毒素( LPS)同时刺激妊娠期糖尿病孕妇外周血单核细胞及其对LPS-Toll样受体4(TLR-4) -核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的抑制作用.方法 选取妊娠期糖尿病孕妇30例,抽取外周静脉血15 ml,分离出单核细胞,分别加入LPS、TGA、TGA(0~1. 0 mg/ml)联合LPS刺激并培养, Western blot法检测 TLR4 及NF-κB p65蛋白表达量,ELISA法检测培养液中肿瘤坏死因子-α( TNF-α)、白介素-1 ( IL-1 )、白介素-10 ( IL-10 )水平. 结果 单独LPS或TGA刺激,其下游TLR4、NF-κB p65蛋白表达量及TNF-α、IL-1、IL-10水平均较未处理组高,差异有统计学意义(P<0. 05);同时加入TGA及LPS刺激,其TLR4、NF-κB p65蛋白表达量及TNF-α、IL-1、IL-10水平均较单独LPS或TGA刺激低,但较未处理组高,差异均有统计学意义( P<0. 05);各组TLR4 与NF-κB p65 蛋白表达量之间呈正相关性( P<0. 01 ). 结论 TGA与 LPS可竞争抑制 LPS-TLR4-NF-κB信号通路,对妊娠期糖尿病的预防及治疗起到指导作用.
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三磷酸腺苷对脂多糖诱导内皮祖细胞表达炎症因子的影响及其机制
目的:分析三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)表达炎症细胞因子的影响,并探讨其机制.方法:采用密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,用RT-PCR检测LPS(1 mg/mL)诱导EPCs表达炎症细胞因子的情况,低浓度的ATP(5 μmol/L)对LPS诱导EPCs表达细胞炎症因子的影响,不同浓度(5,50 μmol/L)的ATP对EPCs中TLR4,MyD88和CD14 mRNA表达的影响;Western印迹检测LPS(1 mg/mL)对EPCs表达TLR4调节蛋白MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况,低浓度ATP(1,5 μmol/L)对LPS诱导EPCs表达TLR4,MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况.结果:EPCs高表达TLR4,其配体LPS(1 mg/mL)显著上调IL-1β,MCP-1和ICAM-1的mRNA表达(均P＜0.01),并呈时间依赖性上调MyD88和CD14蛋白的表达,同时活化ERK和NF-κB信号通路.低浓度ATP抑制LPS诱导的IL-1β,MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达(均P＜0.05),同时也下调LPS诱导的TLR4,MyD88和CD14蛋白的表达(P＜0.01或P＜0.05),并抑制LPS诱导的NF-κB信号通路的活化(P＜0.05).结论:ATP在低浓度时通过负性调节TLR4信号通路而抑制LPS诱导的炎症细胞因子在EPCs中的表达.
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TLR4信号通路与抑郁症的研究进展
TLR4信号通路参与调节固有免疫反应与适应性免疫反应,其与抑郁症免疫炎症过程关系密切,但其具体机制尚不十分明确.抑郁症的病理生理过程包括了多种分子机制和信号通路,抑郁症患者及抑郁动物模型的外周循环系统或中枢神经系统均存在TLR4信号通路的变化.体内TLR4信号通路的激活与“应激-炎症-抑郁”途径以及“肠漏”假说密切相关,然而目前外周与中枢TLR4信号通路的关系尚未明确.TLR4信号通路可能为抑郁症抗炎治疗的潜在靶点.
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耳穴贴压对睡眠剥夺大鼠脾脏TLR4信号通路关键基因mRNA表达的影响
目的:通过观察耳穴贴压对PCPA(对氯苯丙氨酸)致睡眠剥夺大鼠toll受体4信号通路中TLR4(Toll样受体4)、MyD88(髓样分化蛋白88)、IRAK1(IL-1R受体相关激酶1)、TRAF6(肿瘤坏死因子受体活化因子6)、NF-κB(核因子-κB)、TRIF(诱导干扰素β的TIR基域接头分子)等关键基因mRNA表达的影响,来探讨耳穴贴压治疗失眠症的作用机理及其与机体免疫功能的关系.方法:将大鼠随机分为4组:对照组、模型组、安定组、耳贴组.腹腔注射PCPA以建立睡眠剥夺大鼠模型,以磁珠贴压双侧耳穴进行干预5d,采用实时荧光定量PCR技术检测toll受体4信号通路关键基因mRNA表达量的变化.结果:模型组大鼠经睡眠剥夺后TLR4、IRAK1、TRAF6、NF-κB与TRIF等关键基因mRNA表达均较对照组升高约1倍,经耳穴贴压和安定干预后其表达都明显下降至对照组水平,差异均具有显著性(P＜0.05).结论:大鼠经睡眠剥夺后TLR4信号通路关键基因表达均升高,经耳穴贴压和安定干预后基本恢复至正常水平,说明失眠对机体的免疫功能有明显影响,耳穴贴压治疗失眠症可能与调节了机体的免疫功能有关.
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TLR-4信号通路对COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞合成分泌IFN-γ、PDGF-AB的影响
目的：探讨TLR-4信号通路在COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞合成分泌IFN-γ、PDGF-AB中的作用。方法：消化、分离及纯化COPD大鼠原代肺动脉平滑肌细胞（PASMCs），并随机分为：对照组、LPS组、TLR-4抑制剂组（TAK242）、LPS＋TAK242组； RT-PCR、Western blot法检测各组PASMCs 中TLR4和 NF-κB 的基因表达水平；ELISA法检测PASMCs上清液中IFN-γ、PDGF-AB的水平。结果：与对照组比较，LPS组TLR-4和NF-κB 的基因表达水平及上清液中IFN-γ、PDGF-AB的表达水平显著升高（P ＜0．05），而TAK242组显著降低（P ＜0．05）；使用TAK242预处理后，再给予相同浓度LPS刺激，与LPS组相比，其表达水平显著下降（P ＜0．05）。结论：LPS介导的TLR4信号通路参与COPD大鼠PASMCs 合成分泌IFN-γ、PDGF-AB因子的调控，进而影响炎症反应及肺血管重塑。本实验为临床早期干预COPD提供了理论依据。
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氧化苦参碱抗流感病毒药效及机制研究
目的：研究氧化苦参碱的抗流感病毒活性及其潜在机制。方法：培养MDCK和A549细胞，并设空白对照组(DMSO，0.5%)、病毒处理组、阳性对照组(利巴韦林，200μmol/L)和氧化苦参碱处理组(12.5、25、50、100 mol/L)，每组重复6孔。空斑抑制法测定氧化苦参碱抗病毒药效；构建荧光素酶报告质粒，并用Western blot和ELISA检测氧化苦参碱对流感病毒诱导的细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)启动子转录、TLR4-Myd88-TRAF6-NF-κB信号通路活化及炎性因子释放的影响。结果：空斑抑制实验显示氧化苦参碱在12.5～100μmol/L范围内可显著降低流感病毒复制，其半数有效浓度(EC )为19.95μmol/L。启动子荧光素酶报告质粒检测显示12.5μmol/L氧化苦参碱可显著降低流感病毒诱50导的TLR4、MyD88和TRAF6转录(P＜0.05)；Western blot检测显示12.5μmol/L氧化苦参碱可显著降低流感病毒诱导的TLR4-Myd88-TRAF6-NF-κB通路的活化(P＜0.05)；ELISA检测显示12.5μmol/L氧化苦参碱可显著降低流感病毒诱导的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8、IFN-β和IFN-γ释放(P＜0.05)。结论：氧化苦参碱具抗流感病毒活性，其潜在机制可能与其抑制流感病毒诱导的TLR4-Myd88-TRAF6-NF-κB信号通路活化有关。μ与病毒处理组比较，
