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中药猪苓多糖抑瘤作用机理的初探
猪苓多糖是我国中药中的扶正固本药物,对某些肿瘤生长有抑制作用,但其机理尚未明确。本实验确定了猪苓多糖注射液对小鼠S180瘤的生长有抑制作用,并检测了猪苓多糖注射液对荷瘤小鼠脾细胞淋转、NK活性及脾组织IL-5 mRNA表达的影响,以期初步揭示猪苓多糖注射液的抑瘤作用机理。材料与方法 动物:BALB/c纯系小鼠,雌雄各半,8~12周龄,体重18~20克,一级动物,河北省实验动物中心提供,合格证号:04-0039。 细胞株:①肿瘤细胞株:S180瘤株为本校微生物免疫教研室张元杏教授惠赠。②NK敏感细胞株:YAC-1小鼠胸腺瘤细胞系,由本校实验动物中心吕占军教授惠赠。
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中药油脂类纱条灭菌方法的实验研究
中医治疗外伤、疮疡所使用的各种纱条都是多味中草药经加工,与黄蜡、香油混合制成,属油脂类织物.由于纱条含的油脂和药物对蒸汽穿透有一定影响,因此油脂类纱条灭菌问题一直未能有效解决.应用细菌学方法,选用生肌橡皮纱条作为油脂类纱条的代表性药用纱条,通过实验确定了中药油脂类纱条快捷、简便、有效的灭菌方法及设备.
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CuSO4对2.2.15细胞的影响
目的:探讨硫酸铜(CuSO4)对2.2.15细胞代谢及HBV复制和表达的影响及其机制.方法:采用MTT法检测CuSO4对2.2.15细胞的毒性,流式细胞仪检测细胞周期.透射电镜法,Annexin V/PI双染后双变量流式细胞仪观察CuSO4对2.2.15细胞凋亡的影响,采用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)检测不同浓度的CuSO4作用后2.2.15细胞上清中HBsAg,HBeAg的P/N值,Taq man荧光定量PCR检测不同浓度CuSO4作用后上清中HBVDNA滴度.结果:MTT实验确定CuSO4在培养液中对2.2.15细胞的大无毒剂量是128 μmol/L.CuSO4作用后可引起细胞周期的改变,肝癌细胞被阻滞在G2+M期,且呈量效相关性.但是未发现CuSO4有诱导凋亡的作用,CuSO4干预12 d的结果显示2.2.15细胞上清中HBsAg,HBeAg的滴度及HBMDNA的复制水平与对照组无明显差别.结论:CuSO4有明显的细胞毒作用,可引起肿瘤细胞周期的改变及细胞坏死,提示了铜的抗癌作用的分子机制,CuSO4短期处理2.2.15细胞后暂未发现其对HBV复制和表达的影响.
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乙型肝炎病毒基因组前-前-S基因区的分子流行病学研究
目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组是否存在前-前-S编码基因,并探讨前-前-S基因与HBV基因型分布之间的关系.方法:自慢性乙型肝炎患者血清中提取病毒基因组DNA,首先应用多引物-多聚酶链反应(PCR)进行HBV基因型分型,之后将前-前-S区扩增,TA克隆到pGEM Teasy载体后进行单克隆测序,利用Vector 8.0软件进行序列分析.结果:选择15例患者,经过HBV基因型分型实验确定基因型为B型者1例,B/C混合型者5例,C型9例.自15例患者血清中提取的HBV基因组中扩增出前-前-S基因片段,TA克隆后选择31个克隆进行测序,测序结果证明这31个克隆均编码前-前-S基因.结论:前-前-S区编码在B、C基因型中均为普遍存在的现象.
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食管鳞状细胞癌基因组改变的确认
食管癌是具侵袭性的癌症之一,居全球恶性肿瘤病死率的第六位。全球约70%的食管癌患者在中国,食管鳞状细胞癌是常见的病理类型(>90%)。目前,临床上对于食管鳞状细胞癌的早期诊断和治疗非常有限,患者5年生存率仅为10%。然而,直到目前对于导致食管鳞状细胞癌发病的完整基因组事件仍知之甚少。本组对158例食管鳞状细胞癌病例进行一次全面的基因组分析:其中17例食管鳞状细胞癌病例进行全基因组测序,71例进行外显子测序,在71例进行外显子测序的53例加上另外的70例未使用全基因组和全外显子测序,并进行阵列比较基因组杂交分析。本实验确定8个明显突变的基因,其中有6个是众所周知的肿瘤相关基因( TP53、 Rb1、CDKN2A、PIK3CA、 NOTCH1、NFE2L2),另两个基因在食管鳞状细胞癌中未被描述(AD-AM29、FAM135B)。值得注意的是,FAM135B被确定为新的肿瘤相关基因,并鉴定其促进食管鳞状细胞癌细胞恶性程度的能力。此外,MIR548K是编码在扩增11q13.3~13.4区域的microRNA,它是一种新的癌基因,功能实验证明MIR548K增强食管鳞状细胞癌细胞的恶性表型。本组还发现几个重要的组蛋白调控基因MLL2(又称作KMT2D)、ASH1L、MLL3(KMT2C)、SETD1B、CREBBP 和EP300在食管鳞状细胞癌中频繁发生改变。信号通路分析结果揭示一些体细胞变异主要与Wnt、细胞周期以及Notch信号通路相关。基因组分析结果表明,食管鳞状细胞癌和头颈部鳞状细胞癌共享某些共同的致病机制,且食管鳞状细胞癌的形成与饮酒有关。本文着重探讨新的生物学标志物和致瘤性的途径,提高食管鳞状细胞癌的治疗策略。