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RCA技术的应用及研究进展
滚环复制是噬菌体感染细菌后进行自我复制普遍采取的一种形式.这种复制形式可在同温下对环状单链DNA进行相对无限单链扩增.近年来在一些基因检测技术的研究中被广泛采用,并将与之有关的技术统称为滚环放大(rollingcircle amplification,RCA)技术[1].因为滚环复制的模板必须是封闭的单链环状DNA,许多研究者将这种特性用于单核苷酸多态性(SNP)及病毒基因检测和基因表达图谱等的研究中,还有一些实验直接将滚环的无限复制作为一种单纯的信号级联放大系统,并由此衍生出许多相关技术.本文综述了当前RCA技术及其相关的研究进展,并展望了该技术的应用前景.
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PCR在单疱病毒基因检测中的应用及其意义
单疱病毒(herpes simplex virus,HSV)是一种DNA病毒,基因组DNA约有15kb大小,编码72个基因和70种不同的蛋白质,有核衣壳和周围的包膜结构,分Ⅰ和Ⅱ两种类型,其突出特性是潜伏感染,即使有循环抗体存在,HSV亦能在宿主内终身潜伏.HSV-1主要引起单疱性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK);HSV-2与生殖器疱疹等性传播疾病和宫颈癌密切相关;HSV-1和HSV-2均可引起病毒性脑炎
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清心Ⅱ号对病毒性心肌炎心肌纤维化内皮素1及转化生长因子β1表达的干预作用
目的 研究清心Ⅱ号对病毒性心肌炎心肌纤维化内皮素1(ET-1)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的干预及抗病毒作用.方法 150只清洁级体重14～16 g健康雄性BALB/c小鼠,采用随机数字表法分出10只作为正常组;其余140只作为造模组,采用腹腔注射含不同浓度柯萨奇病毒B3(CB3)半数组织培养感染剂量为10-5的病毒液3次,每次每只2 mL,首次1∶2000浓度CVB3病毒液,2周后腹腔接种1∶1600浓度CVB3病毒液,4周后腹腔注射1∶800浓度CVB3病毒液.60d后模型构建成功,存活小鼠94只.随机选取90只,分为清心Ⅱ号高、中、低剂量组各20只,卡托普利组20只,模型组10只.正常组和模型组给予生理盐水灌胃,治疗组分别给予卡托普利和清心Ⅱ号高、中、低剂量灌胃.实验结束后颈椎脱臼法处死动物,采集心脏组织液氮速冻.分别应用免疫组化方法检测TGF-β1含量,放免法检测各组血浆ET-1含量,RT-PCR技术检测CVB3RNA,VG染色观察各组纤维化形成情况,并检测胶原阳性面积占测量面积的百分比,即容积分数.结果 VG染色后正常组含少量胶原纤维,分布于血管周围;模型组心肌细胞排列紊乱,胶原纤维含量与正常组比较增生明显(P＜0.05);TGF-β、ET-1、CVB3RNA模型组及各治疗组均高于正常组(P＜0.05);治疗后各治疗组胶原纤维较模型组减少(P＜0.05),清心Ⅱ号各治疗组随剂量增加胶原纤维逐渐减少;各治疗组TGF-β1、ET-1、CVB3RNA与模型组比较均相应减低(P＜0.05),清心Ⅱ号高剂量组TGF-β1与正常组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);对减少ET-1,清心Ⅱ号高剂量组与卡托普利组疗效相当(P＞0.05).结论 血浆ET-1与TGF-β1在病毒性心肌炎心肌纤维化形成过程中发挥重要作用,清心Ⅱ号具有抗病毒、抗心肌纤维化作用.
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ERK1/ET1在慢性心肌炎病毒持续感染与纤维化作用及清心Ⅱ号干预机制
目的:ERK1/ET1在慢性心肌炎病毒持续感染与纤维化表达及清心Ⅱ号干预作用.方法:150只清洁级体重14 ～ 16 g健康雄性Balb/e小鼠,采用随机数字表法分出10只作为正常组,其余140只采用腹腔注射含不同浓度柯莎奇病毒B3半数组织培养感染剂量=10-5(coxsackie virus B3tissue culture infective dose50=10-5,CVB3 TCID50=10-5)的病毒液3次,每次每只2 mL,首次1∶2000浓度CVB3病毒液,2周后腹腔接种1∶1600浓度CVB3病毒液,4周后腹腔注射1∶800浓度CVB3病毒液,60天后模型构建成功,存活小鼠94只.随机选取90只,分为清心Ⅱ号高、中、低剂量组各20只,卡托普利组20只,模型组10只.正常组和模型组给予生理盐水灌胃,治疗组分别给予卡托普利和清心Ⅱ号高中低剂量灌胃.实验结束,摘眼球取血后颈椎脱臼法处死动物,采集心脏组织液氮速冻.用放射免疫法测各组血浆内皮素1(endothelium 1,ET1)含量;RT-PCR病毒、P-ERK1基因检测;MASSON染色观察各组纤维化形成情况,并检测胶原阳性面积占测量的面积的百分比的即容积分数.结果:造模后ET1、ERK1、CVB3RNA模型组及各治疗组均高于正常组(P＜0.05);MASSON染色后正常组含少量胶原纤维,分布于血管周围;模型组心肌细胞排列紊乱,胶原纤维与正常组比较增生明显(P＜0.05);治疗后各治疗组ERK1、ET1、CVB3RNA与模型组比较相应均减低(P＜0.05),P-ERK1各治疗组均接近正常组(P＞0.05),各治疗组胶原纤维较模型组减少(P＜0.05),清心Ⅱ号各治疗组随清心Ⅱ号剂量增加ERK1、ET1、CVB3RNA逐渐减少,高剂量组胶原含量接近于正常组(P＞0.05),清心Ⅱ号高中低剂量组与卡托普利组疗效相当(P＞0.05).结论:在慢性病毒性心肌炎心肌细胞中CVB3RNA持续存在,ET1与ERK1在心肌病毒持续感染及心肌纤维化形成过程中发挥重要作用,清心Ⅱ号可显著减少ET1、ERK1在心肌的表达,且具有清除柯莎奇病毒及显著抗心肌纤维化作用.
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84例乙肝病毒基因检测阳性孕妇宫内胎儿乙肝感染率调查
近年,育龄妇女慢性乙型肝炎发病率逐渐增多,乙肝病毒可通过胎盘,使胎儿感染发病.目前宫内胎儿乙肝病毒感染情况如何,临床报道很少,并且意见不一.我们自1994～1997年对84例乙肝病毒基因(HBV DNA)阳性慢性乙肝孕妇宫内胎儿感染状况进行调查分析,现总结报道如下.
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胎盘组织中柯萨奇B组病毒基因检测的临床意义
本文通过对自然流产妇女胎盘组织中柯萨奇B组病毒基因(CVB RNA)的检测,从分子生物学的角度进一步阐明CVB感染与自然流产的关系.
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乙肝病毒基因检测和基因治疗真相揭密
湖北襄樊的乙肝患者许某,化验检查为乙肝"大三阳",肝功长期保持正常,身体没有明显不适,正常上班,医生建议他定期复查,暂不用药.但是,乙肝"大三阳"总是他的一块心病,老是让人担心,半年前,看到电视广告说近诞生了一种新的乙肝特效检测和治疗方法,叫作"乙肝基因检测和乙肝基因治疗",治疗乙肝"大三阳"有神效.他原本将信将疑,但是后来见各地电视及报纸上乙肝广告都是这样宣传的,于是就前往某承包性质医院,进行了一个疗程的所谓"基因治疗".不料治疗后"大三阳"不但没有转阴,肝功反而出现异常,转氨酶反复升高,时感疲乏,食欲不振.这到底是怎么回事?
