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汉防己甲素联合屈洛昔芬对K562细胞bcr/abl表达的影响
为了研究汉防己甲素(Tet)联合屈洛昔芬(DRL)对K562细胞株凋亡相关因子bcr/abl mRNA及蛋白表达的影响,Tet(1μmol/L)和DRL(5μmol/L)单用及联合应用于K562细胞一定时间后,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测K562细胞bcr/abl mRNA和蛋白表达的变化.结果表明:Tet和DRL单独应用对K562细胞bcr/abl mRNA及蛋白表达均无影响,两药联合应用于48小时K562细胞bcr/abl mRNA表达开始下调,K562细胞P210BCR/ABL蛋白表达于72小时开始下调.结论:Tet和DRL联合应用可下调K562细胞bcr/abl的表达,这可能是两药联用逆转耐药的机制之一.
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应用蛋白质芯片对汉防己甲素单用及与屈洛昔芬伍用逆转白血病细胞耐药机理的研究
本研究的目的是应用蛋白质芯片检测汉防已甲素(Tet)单独及与屈洛昔芬(Drol)伍用对作用的白血病细胞表面的耐药蛋白,包括P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MBP1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)表达的作用,为逆转剂的临床应用提供理论依据.选择位于膜表面P-gp、MRP1、BCRP耐药蛋白及其相应的抗体为研究体系,制备蛋白芯片,直接对逆转剂作用12、24和48小时的K562/A02细胞进行检测.结果表明:Tet和Drol联合作用24小时时检测到P-gp表达下调(Tet+Drol组:85.27±3.095,对照组:93.67±2.748,P＜0.05).经逆转剂单独及联合作用K562/A02细胞48小时时均检测到P-gp表达下调,且联合应用两药对P-gp表达下调作用明显(Tet+Drol:82.62±3.227,Tet:86.44±2.906,Drol:87.23±2.049,对照组:93.67±2.748,P＜O.05).检测结果与流式细胞仪检测结果一致.结论:逆转剂Tet和Drol对K562/A02细胞的P-gp下调呈时间依赖性.联合作用24小时时出现下调P-gp表达,单独作用48小时均下调P-gp表达,联合用药时下调作用明显.不同检测时间均未见下调MBP1和BCRP的表达.
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汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡相关性的研究
本研究旨在探讨汉防己甲素(tetrandrine,Tet)联合屈洛昔芬(droloxifene,DRL)对耐药细胞系K562/A02的逆转作用与诱导凋亡有无相关性.采用Annexin V/PI法测定耐药调节剂汉防己甲素、屈洛昔芬单独或联合应用后细胞凋亡的情况.结果发现0.62μg/ml汉防己甲素或1.94 μg/ml屈洛昔芬单独作用于K562细胞48小时后均可诱导一定比例的细胞凋亡,作用呈时间依赖性,两者联合应用作用增强.0.62μg/ml汉防己甲素或1.94μg/ml屈洛昔芬单独作用于K562/A02细胞均不能诱导细胞凋亡,两者联合应用72小时可诱导小部分细胞凋亡.结论:汉防己甲素,屈洛昔芬逆转耐药的机理与诱导K562/A02细胞凋亡无关.
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细胞内钙与K562/A02细胞多药耐药相关性的研究
本研究旨在探讨白血病耐药细胞的发生及其逆转机制与细胞内钙离子浓度的关系.用甲基四唑蓝法(MTT)测定柔红霉素(daunomycin,DNR)的细胞毒性,用Fura-2/AM方法测定耐药细胞株K562/A02及其敏感株K562的静息[Ca2+]i水平,并观察了柔红霉素及耐药调节剂汉防己甲素(Tetrandrine,Tet)、屈洛昔芬(droloxifene,DRL)单独或联合应用后细胞内游离钙离子浓度的变化.结果表明:1μmol/L Tet,5μmol/L DRL均能增加DNR 对耐药细胞系K562/A02的细胞毒作用,IC50(半数抑制量)分别为(7.28±2.06)μg/ml,(7.58±3.44)μg/ml,逆转倍数为2.94和2.82倍.两药联合作用明显增强,IC-50为(1.66±0.41)μg/ml,逆转倍数达12.9倍.静息状态下K562/A02细胞的游离钙离子浓度显著高于K562细胞.1 μmol/L Tet,5μmol/L DRL单独作用于K562/A02细胞引起[Ca2+]i的明显升高,两者联合应用有拮抗作用.结论:K562/A02细胞内Ca2+浓度的增高可能是导致其耐药的原因之一,但耐药调节剂Tet,DRL对耐药细胞[Ca2+]i的影响在其逆转耐药中的作用有待进一步研究.
关键词： [Ca2+]i多药耐药 汉防己甲素 屈洛昔芬 K562细胞 A02细胞 -
汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡
目的探讨汉防己甲素(Tet)联合屈洛昔芬(Drol)对耐药细胞系K562/A02的逆转作用及其与诱导凋亡的关系.方法采用甲基四唑蓝法(MTT)测定柔红霉素(DNR)的细胞毒性;采用DNA凝胶电泳法观察Tet、Drol单独及联合应用对K562/A02细胞凋亡诱导作用的影响.结果 0.62 μg/ml Tet、1.94 μg/ml Drol均能增加DNR对K562/A02的细胞毒作用,其半数抑制量IC50分别为7.28±2.06 μg/ml和7.58±3.44 μg/ml,逆转倍数分别为2.94倍和2.82倍.两药联合作用明显增强,其IC50为1.66±0.41 μg/ml,逆转倍数达12.9倍.0.62 μg/ml Tet、1.94 μg/ml Drol单独及联合应用均不会诱导K562/A02细胞凋亡.结论单独应用Tet、Drol可部分逆转K562/A02细胞的耐药性,两药联用具有明显协同效应.Tet、Drol逆转耐药的机理与诱导K562/A02细胞凋亡无关.
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几度吹唤——喜睹内分泌治疗药研发新貌
1选择性雌激素受体调节剂用于防治骨质疏松选择性雌激素受体调节剂(Selective estrogen receptor modulator,SERM)是一类人工合成的非激素制剂,可与雌激素受体结合,选择性地作用于不同组织的雌激素受体,在不同的靶组织分别产生类雌激素或抗雌激素作用.由于不同结构的特点,对各种受体的亲和力可有所差异,从而在组织中发挥不同的生物效应.主要品种有他莫昔芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬.与第1代他莫昔芬相比,雷洛昔芬抗雌激素作用更强,雌激素样作用更弱.当雌激素受体被配体如17-β雌二醇激活后,受体-配体复合物形成,并和热休克蛋白脱离后形成二聚体,二聚体和不同基因启动区的雌激素应答单位结合形成雌激素-受体-DNA复合物,刺激基因转录.雷洛昔芬与雌激素与雌激素受体结合的部位相同,但两者的结合力、结合机制、导致受体结合结构的变化的差异是不同基因转录的原因.雌激素和雷洛昔芬对靶器官作用不同的其他原因尚有受体多发亚型、不同受体亚型的激活和对抗作用及受体亚型选择性表达有关.
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汉防己甲素联合屈洛昔芬对K562和K562/A02细胞NF-κB蛋白表达的影响
目的 研究汉防己甲素(Tet)和屈洛昔芬(DRL)单独及联合用药后对K562细胞及其耐药细胞株K562/A02的核因子κB(NF-κB)表达的影响,以进一步探讨其逆转多药耐药的作用机制.方法 采用免疫细胞化学及Western blotting法分别检测Tet(1μmol/L)、DRL(5 μmol/L)单独及联合作用于K562和K562/A02细胞后NF-κB核转位水平和胞核NF-κB蛋白表达水平的变化.结果①K562/A02细胞NF-κB核转位水平[(65.0±4.2)%]及胞核NF-κB蛋白表达(3.545±0.219)明显高于K562细胞[(39.6±0.9)%和2.366±0.141](P＜0.01);②Tet、DRL单独及联合作用6、12 h,对K562细胞NF-κB核转位水平及胞核NF-κB蛋白表达水平无明显影响(P＞0.05);③两药单独及联合作用6、12 h,可明显降低K562/A02细胞NF-κB蛋白核转位水平和胞核NF-κB蛋白表达水平(P＜0.05和P＜0.01),两药联合作用增强(P＜0.05),作用12 h较作用6 h效果更显著(P＜0.05).结论K562/A02细胞的胞核NF-κB蛋白表达水平明显高于K562细胞,NF-κB的活化可能参与了K562/A02细胞耐药的发生;抑制NF-κB活化可能参与了Tet和DRL逆转K562/A02细胞多药耐药过程.
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汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞多药耐药的研究
汉防己甲素(Tetrandrine, Tet)是防己科植物粉防己的主要活性成分,研究表明它可以调节多种P-糖蛋白(P-gp)介导的多药耐药(MDR)细胞株的耐药性[1].屈洛昔芬(Drolo-xifene, Drol)是他莫昔芬的衍生物,比他莫昔芬作用强、不良反应小.为探讨Tet和Drol联合逆转MDR作用,观察了Tet和Drol单独或联合对K562/A02细胞的体外耐药逆转作用.
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屈洛昔芬抑制小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3增殖和诱导凋亡的作用
目的研究屈洛昔芬对血管内皮细胞的生长抑制和凋亡诱导作用.方法用MTT法测定屈洛昔芬对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3的增殖抑制率.用Hoechst 33258荧光染色及Tunel法检测屈洛昔芬诱导细胞凋亡的作用.结果屈洛昔芬显著抑制bEnd.3细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性.12、24、36、48、60、72 h的IC50分别为20.31、16.91、12.36、10.66、9.22、8.72μmol·L-1.Hoechst 33258荧光染色及Tunel法检测均可见典型的凋亡阳性细胞.结论屈洛昔芬体外可抑制血管内皮细胞生长,且该抑制作用至少部分与诱导细胞凋亡有关.
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耐药逆转剂对耐药细胞内钙离子浓度的影响
目的:探讨耐药逆转剂对耐药细胞K562/A02内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的影响.方法:用Fura-2/AM方法测定耐药细胞株K562/A02及其敏感株K562的静息[Ca2+]i水平,并观察耐药调节剂汉防己甲素(Tet)、屈洛昔芬(Drol)单独或联合应用后细胞内[Ca2+]i浓度的变化.结果:静息状态下K562/A02细胞的[Ca2+]i浓度显著高于K562细胞.1μmol*L-1Tet或5μmol*L-1 Drol单独作用于K562/A02细胞引起[Ca2+]i浓度的明显升高,两者联合应用有拮抗作用.结论:K562/A02细胞内[Ca2+]i浓度的增高可能是导致其耐药的原因之一,但耐药调节剂Tet、Drol对耐药细胞[Ca2+]i的影响在其逆转耐药中的作用有待进一步研究.
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汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞耐药的研究
目的:探讨汉防己甲素(Tet)联合屈洛昔芬(Drol)对耐药细胞系K562/A02的逆转作用.方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测定柔红霉素(DNR)的细胞毒性.结果:1μmol*L-1 Tet、5μmol*L-1 Drol均能增加DNR对耐药细胞系K562/A02的细胞毒作用,半数抑制量(IC50)分别为(7.28±2.06)mg*L-1和(7.58±3.44)mg*L-1,逆转倍数分别为2.94和2.82倍.两药联合应用后作用明显增强,IC50为(1.66±0.41)mg*L-1,逆转倍数达12.9倍.结论:单独应用Tet、Drol可部分逆转K562/A02细胞的耐药性,两药联用具有明显协同效应.
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屈洛昔芬对妊娠大鼠黄体细胞凋亡和C-myc、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响
目的：观察屈洛昔芬对妊娠大鼠黄体细胞凋亡的影响，并分析黄体中C-myc，Bax和Bcl-2蛋白表达与屈洛昔芬所诱导的黄体细胞凋亡间的可能联系.方法：大鼠于妊娠第2天口服给予屈洛昔芬20 mg·kg-1后，分别于第4天和第8天取卵巢，HE染色和TUNEL法检测黄体中凋亡细胞的存在，免疫组织化学方法观察黄体中C-myc，Bax和Bcl-2蛋白的表达，同时测定卵巢重量、蛋白质含量及血中孕酮水平.结果：大鼠经屈洛昔芬处理后，第4天卵巢黄体中出现明显的凋亡细胞，第8天时更加明显.卵巢重量、蛋白质含量及血清孕酮水平在第8天时显著下降.屈洛昔芬处理组大鼠卵巢黄体中C-myc蛋白表达在第4天即显著增加，Bax蛋白表达的显著增加在第8天可观察到，而Bcl-2蛋白在卵巢黄体中的表达无明显改变.结论：屈洛昔芬可诱导妊娠大鼠着床前黄体细胞凋亡，C-myc蛋白及Bax/Bcl-2蛋白表达的增加可能与该过程有关.
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屈洛昔芬对假孕大鼠黄体细胞凋亡和Bax、Bcl-2蛋白表达的影响
目的:研究屈洛昔芬对假孕大鼠黄体细胞凋亡和Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.方法:HE染色观察大鼠卵巢黄体组织学变化,TUNEL法检测黄体中凋亡细胞的存在,免疫组织化学方法观察假孕大鼠卵巢黄体中Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果:成年假孕大鼠卵巢黄体自然退化中黄体细胞凋亡出现在假孕第13天,15天时可观察到凋亡细胞的显著增加.Bax和Bcl-2蛋白在黄体细胞中的表达在整个黄体自然退化中无显著改变.20mg@kg-1假孕大鼠第2天口服给予20mg@kg-1屈洛昔芬后,第8天观察时黄体中出现凋亡细胞,且假孕期从(15.5±1.1)天缩短至(12.8±1.6)天.经屈洛昔芬作用后,假孕大鼠黄体中Bax蛋白的表达增加而Bcl-2蛋白表达下降.结论:成年假孕大鼠卵巢黄体自然退化中有细胞凋亡的发生,屈洛昔芬可加速假孕大鼠黄体细胞凋亡的出现并可缩短假孕期.Bax和Bcl-2蛋白的表达在假孕不同时间时无明显改变,而屈洛昔芬所诱导的Bax/Bcl-2的增加可能与该药物对黄体细胞凋亡的促进作用有关.
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蛋白激酶C与K562/A02细胞多药耐药相关性的研究
目的探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在K562/A02细胞多药耐药的产生及其逆转中的作用.方法用放射免疫法检测了耐药细胞株K562/A02及其敏感株K562的静息PKC活性水平,并观察了柔红霉素(daunomycin,DNR)以及耐药调节剂粉防己碱(tetrandrine,Tet)、屈洛昔芬(droloxifene,Drol)单独或联合应用后细胞PKC活性的变化.结果静息状态下耐药细胞株K562/A02的PKC活性显著高于敏感株K562,有效调节浓度的Tet、Drol单独作用于K562、K562/A02细胞均可显著下调其PKC活性,联合应用有显著协同性.1μg/mLDNR可显著下调K562细胞的PKC活性,部分下调K562/A02细胞的PKC活性,有效调节浓度的Tet、Drol单独或联合应用均可加强其作用.结论PKC参与K562/A02细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的形成,Tet、Drol逆转K562/A02细胞的MDR可能与下调其PKC活性有关.
