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不同抗原修复方法对cyclin B1在肿瘤中表达的比较
cyclin B1是参与细胞周期G2/M转换的重要调节因子,在部分恶性肿瘤中呈过表达且与预后有关.在免疫组化染色中,cyclin B1定位于细胞核,但在实验过程中,如果按试剂说明采用高温修复方法,cyclin B1多定位于细胞质,核表达率较低,影响其在肿瘤中表达的阳性率.本实验采用不同抗原修复方法比较cyclin B1在膀胱癌和乳腺癌的表达情况,以探讨佳抗原修复方法.
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丁型肝炎肝组织Bcl-2/Bax、Bak表达与细胞凋亡表达
目的:探讨Bcl-2,Bax,Bak及肝细胞凋亡在丁型肝炎发病机制中的意义.方法:采用TUNEL技术和免疫组化单、双标记染色,检测77例丁肝患者肝组织中HDAg,Bcl-2,Bax和Bak表达,以及肝细胞凋亡表达.同时以HDV阴性的67例乙型肝炎患者作对照.结果:Bcl-2,Bax和Bak均以肝细胞质表达为主,HDAg以肝细胞核表达为主.HDAg,Bax和Bak与肝细胞凋亡表达及分布有相关性(t=27.89,P＜0.0l,P＜0.05 t=19.16,P＜0.05 t=18.22),四成分在各型肝炎中的表达强度有显著性差别意义(P＜0.05).结论:HDAg,Bax,Bak和肝细胞凋亡表达强度及阳性细胞分布均与肝组织炎症和病理损害程度相关,HDV感染可诱导肝细胞表达Bax和Bak,增强肝细胞凋亡.
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CDC25B在大肠肿瘤中的表达及意义
目的:探讨CDC25B(cell division cycle 25B,细胞分裂周期蛋白25B)在大肠肿瘤中的表达及临床意义.方法:应用半定量的RT-PCR及免疫组化染色(S-P法)方法检测该基因在大肠癌(RT-PCR法,n=24;S-P法,n=168),大肠腺瘤(RT-PCR法,n=62;S-P法,n=25)及大肠正常黏膜(RT-PCR法,n=10;S-P法,n=20)中的表达.结果:CDC25B mRNA在癌及大肠腺瘤中的相对含量明显高于正常大肠黏膜(1.41±0.07,1.32±0.17vs0.62±0.02,P＜0.01),在大肠腺瘤伴轻-中-重度不典型增生组织中的相对含量逐渐增高(1.25±0.21,1.36±0.19和1.40±0.07,P＜0.01);CDC25B基因翻译蛋白在正常大肠黏膜、腺瘤中未见表达,在大肠癌中以细胞核表达为主,其表达与大肠癌有无远处脏器转移相关(2/46 vs 14/106,P＜0.05);经随访发现CDC25B蛋白阳性表达者,5 a生存率明显降低(25/31vs42/82,P＜0.05).结论:CDC25B可能参与了大肠腺瘤到大肠癌的转变过程,其在大肠癌发展中可能起一定作用,为大肠癌预后不良的危险因素.
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胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤bcl-10核表达与抗幽门螺旋杆菌治疗的长期随访研究
目的 探讨抗幽门螺旋杆菌(Hp)治疗胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的远期效果及bcl-10在肿瘤对抗Hp治疗的反应性判断中的意义.方法 选择12例Hp阳性胃MALT淋巴瘤,用免疫组化的方法检测肿瘤细胞bcl-10表达的情况,给予规范抗Hp治疗,并密切进行内窥镜随访.结果 在单纯抗Hp治疗后6例获得完全缓解(CR),无一例检测到bcl-10核表达.余6例未达CR的病例中4例检测到bcl-10核表达.提示瘤细胞存在bcl-10的核表达,证明肿瘤的发展已与Hp作用无关,也提示临床,目前抗Hp治疗并非此类患者的首选治疗方案.这12例单纯抗Hp治疗CR率为50%(6/12),中位随访时间13.5个月.抗Hp后获得CR中位时间1.5个月,长为6个月.至今,CR持续中位时间为14个月,长达2年.结论 抗Hp治疗可以使相当一部分胃MALT淋巴瘤患者获得CR,bcl-10核表达可能与肿瘤对抗Hp治疗不反应密切相关,但需进一步扩大样本量及延长随访时间证实.
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胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤染色体易位t(11;18)与BCL10的表达
目的检测胃黏膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤的染色体易位t(11;18)(q21;q21)和BCL10蛋白表达的情况.方法采用RT-PCR检测胃MALT淋巴瘤和滤泡性胃炎(FG)中API2-MLT融合及免疫组化检测BCL10蛋白、Ki-67表达情况,并结合临床病理进行分析.结果14例胃MALT淋巴瘤中有3例(2例低恶性,1例低～高恶性)检测到API2-MLT融合,8例FG无此融合.BCL10在FG淋巴滤泡生发中心细胞胞质中弱表达,在胃MALT淋巴瘤中表达明显增强,且42.5%的病例细胞核阳性.胃低～高恶性及弥漫大细胞淋巴瘤(DLBCL)的Ki-67标记率显著强于低恶性MALT淋巴瘤(P＜0.05).BCL10核表达与Ki-67阳性表达之间差异无显著性(P＞0.05),但随Ki-67表达增强,BCL10核表达的概率增加.结论API2-MLT融合和BCL10核表达可能与胃MALT淋巴瘤从低恶性向高恶性转化有关.RT-PCR检测API2-MLT融合是检测t(11;18)(q21;q21)的一项重要工具.
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VEGF-C真核表达载体的构建及蛋白表达
目的构建人血管内皮生长因子(VEGF-C)编码序列基因真核表达载体,为探讨VEGF-C的生物学功能奠定基础.方法根据已公布的序列设计引物,用PCR方法从肿瘤细胞株cDNA中扩增出人VEGF-C编码序列基因片段,测序正确后用限制性内切酶将目的片段插入PcDNA3.1/V5-His-TOPO载体中.采用酶切和PCR鉴定后通过脂质体介导转染至CHO细胞中进行瞬时表达.结论经RT-PCR扩增转染细胞cDNA和Western blotting检测证实重组质粒pcDNA3.1-VEGF-C能在宿主细胞中高效表达.
关键词： 血管内皮生长因子-C 合酶链反应 核表达 -
前列腺癌中KDM5C过表达可作为前列腺特异性抗原复发的预后指标
目前,表观基因调控能够触发前列腺癌的转移和引发雄激素非依赖性前列腺癌。组蛋白赖氨酸脱甲基酶( KDMs )是一种可以去除抑制和激活组蛋白标记的表观酶。 KDM5家族成员能够去除组蛋白H3赖氨酸4的二甲基化(一种激活标记),致使它们成为下调肿瘤抑制的潜在成员,这表明它们的活性能够抑制癌基因。我们在两个独立的根治性前列腺癌切除术组(共822例前列腺肿瘤),采用免疫组化系统性分析KDM5C的表达模式。 KDM5C标记细胞核阳性,与降低前列腺特异性抗原的无复发生存率显著相关。我们的研究表明KDM5C核表达是独立的预后指标。引人注目的是,KDM5C核表达对无进展生存率的预后价值是专门针对Gleason评分为7的肿瘤组。另外,下调KDM5C表达后导致体外前列腺癌细胞的生长阻滞,并诱导调控几个增殖相关的基因,我们的数据表明：KDM5C参与前列腺癌细胞的增殖调控,并有可能成为新的治疗前列腺癌的治疗靶点；此外, KDM5C的过表达是前列腺切除术后治疗失败和肿瘤复发的一个独立的、新的预测指标。
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β-catenin核表达可用于区分深部纤维瘤病和其他良恶性纤维母细胞或肌纤维母细胞病变
深部纤维瘤病(韧带样纤维瘤)是一种克隆性肌纤维母细胞增生性病变,易于局部侵袭、复发但不转移,该病容易与纤维母细胞或肌纤维母细胞病变和平滑肌肿瘤混淆.由于深部纤维瘤病常与伴有家族性腺瘤样息肉病(FAP)的Gardner综合征有关,而后者常有APC基因的突变,因此所有的深部纤维瘤病应有体细胞β-catenin和APC基因突变导致β-catenin的核内积聚,而低度恶性肉瘤和反应性病变一般缺乏β-catenin核表达,作者推测深部纤维瘤病中可能有β-catenin核表达而在其它病变中检测不到.
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人乳腺癌Kaiso的核表达与乳腺癌恶性表型关系的研究
目的 研究BTB/P0Z蛋白家族成员Kaiso在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床病理学参数的关系. 方法 应用免疫组织化学法研究120例不同临床分期乳腺癌组织及39例乳腺增生组织中Kaho的表达情况与亚细胞定位,并对其与乳腺癌临床病理参数进行相关性分析. 结果 免疫组织化学染色表明在120例乳腺癌组织中Kaiso呈明显的核表达,核阳性率为65.00％(78/120),而在39例对照组乳腺增生组织中呈零或极微弱的表达.Kaiso蛋白核表达与乳腺癌组织TNM分期(P=0.000)和淋巴结转移(P=0.001)呈正相关;而与乳腺癌患者的性别、年龄以及乳腺癌组织分化程度均无明显相关性(P＞0.05). 结论 Kaiso在乳腺癌中主要为核表达,且Kaiso的表达与乳腺癌的恶性表型及转移呈正相关,提示Kaiso可能成为乳腺癌新的肿瘤标志物和治疗靶点.
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S100A4细胞核表达与胃癌淋巴结转移相关
目的 探讨S100A4蛋白在胃癌组织中的细胞内定位及其表达情况及与胃癌临床病理参数的关系.方法 分离10对新鲜胃癌组织及配对的正常胃黏膜的核蛋白及浆蛋白,用蛋白印迹法检测S100A4蛋白在细胞内的定位.用免疫组织化学方法检测131例胃癌患者的胃癌组织和20例转移性淋巴结中S100A4蛋白的表达.结果 S100A4蛋白在胃癌组织细胞核的表达阳性率为24.4%(32/131),细胞浆表达阳性率为38.2%(50/131).在32例S100A4核表达阳性的胃癌病例中,30例(93.8%)有淋巴结转移.伴淋巴结转移的胃癌组织中,S100A4细胞核表达阳性率(29.1%)显著高于没有淋巴结转移的胃癌组织中的S100A4细胞核表达的阳性率(7.1%)(P=0.016).结论 在胃癌组织中发现细胞核表达S100A4,并与胃癌淋巴结转移有关.
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Myc-R9-EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定
构建、表达、纯化和鉴定Myc-R9 -EGFP融合蛋白,验证其在体外培养成纤维细胞中的转导活性.从胎猪原始生殖嵴中提取总RNA,反转录cDNA第一链.设计带九聚精氨酸(R9)的特定引物,从cDNA中扩增出猪c-Myc基因,克隆到pET-28a-EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL21.经IPTG诱导表达,Ni2+柱亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达产物后,将Myc-R9 -EGFP蛋白作用于体外培养的猪胎儿成纤维细胞以观察其转导活性.结果显示:Myc-R9 -EGFP融合蛋白原核表达载体构建正确,目的蛋白在诱导后获得了高效表达,经SDS-PAGE和Western blot检测证实融合蛋白片段大小正确,并在体外培养的成纤维细胞中证实了其高转导活性.本实验为进一步研究Myc蛋白的生物学特性和利用重组蛋白建立诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)的研究奠定了基础.
