首页 > 文献资料
-
人外周血淋巴细胞电压依赖性钾通道
目的:观察人外周血淋巴细胞膜上电压依赖性钾通道的特性.方法:膜片钳记录方法.结果:观察到该通道的小激活电压为-38.6士2.1 mV.复极过程中通道关闭常数为109.25±8.5 ms,并可被10 mmol/L的TEA所阻断.结论:人外周血淋巴细胞膜上存在着电压依赖性钾电流,其特性与神经和肌肉细胞膜上的延迟整流性钾电流相类似.
-
大鼠海马神经元急性分离和膜片钳方法的研究
应用酶消化及机械分离法分离出生10～15 d的大鼠海马神经元,从形态学及电生理学方面鉴定细胞活性.结果表明,该法可获得形态和生理特性良好的单个海马神经元.用0.5 μmol/L的TTX阻断Na+通道后,分别记录到典型的全细胞电压依赖性钾离子通道电流以及延迟整流钾通道电流.证实该方法适用于海马神经元膜片钳研究,对深入探讨药物和毒物对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要价值.
-
钾通道阻滞剂四乙基铵敏感性钾电流在肺高压大鼠肺动脉平滑肌细胞中的变化
目的 研究大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)中电压依赖性钾通道(voltage-depending potassium channel,KV)电流在肺高压(pulmonary hypertension,PH)中的变化,及钾通道阻滞剂四乙基铵(tetra-ethylammonium,TEA)对 KV电流的影响.方法 采用全细胞膜片钳技术记录PASMCs的KV电流,观察PH大鼠中KV电流的变化,以及 TEA 对 KV的影响.结果 野百合碱(monocrotaline,MCT)、慢性低氧(chronic hypoxia,CH)明显减小了大鼠PASMCs上记录到的KV电流密度;TEA干预能够明显降低正常和PH大鼠PASMCs的KV电流,并且TEA对KV电流的抑制作用在PH大鼠中明显减小.结论 在CH、MCT诱导的两种PH大鼠模型中,PASMCs的KV开放程度被明显抑制,而且其对应的 TEA敏感性 KV电流明显减小.
-
1-磷酸鞘氨醇促进胰岛素分泌及可能机制研究
目的研究1-磷酸鞘氨醇( sphingosine-1-phosphate, S1P)促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌效应及其分子机制,探索糖尿病治疗药物的作用靶点。方法使用胶原酶P消化SD大鼠胰腺,Histopaque 1077梯度离心获得胰岛,Dispase II消化得到胰岛细胞。不同浓度 S1P(0~20μmol·L-1)干预,观察低糖(2．8 mmol·L-1)和高糖(16．7 mmol·L-1)条件下胰岛素分泌的变化。膜片钳技术记录β细胞电压依赖性钾通道电流(Kv电流),观察S1P干预后Kv电流的变化。钙成像技术记录β细胞内Ca2+浓度,观察不同浓度S1P(0~20μmol·L-1)干预后细胞内的Ca2+浓度变化。结果与低糖组相比,高糖组明显刺激了胰岛素的分泌(P <0．01)。低糖条件下, S1P 没有改变胰岛素分泌量( P >0．05)。高糖条件下,S1P浓度依赖性增加了胰岛素分泌量(P<0．01)。与对照组相比,S1P明显抑制了β细胞Kv电流(P<0．01)。高糖条件下,S1P浓度依赖性升高了胰岛细胞内Ca2+浓度(P<0．01)。结论 S1P可能通过抑制β细胞Kv电流、升高细胞内Ca2+浓度,终促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌。
-
ERK1/2通路在4-AP诱导大鼠肺动脉收缩中的作用
目的 探讨细胞外信号调节激酶-1/2(ERK1/2)通路在4-氨基吡啶(4-aminopyridione,4-AP)阻断正常大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜上电压依赖性钾通道(KV)所引起的肺动脉收缩中的作用.方法 取正常鼠肺动脉制作肺动脉环,分别加入4-AP(KV通道阻断剂),PD98059/U0126+4-AP,比较肺动脉收缩的变化.同时培养肺动脉平滑肌细胞进行Western blot分析4-AP对ERK1/2的影响.结果 ①在血管环试验中,4-AP引起的肺动脉收缩有浓度依赖性;加入20 mmol·L-1 PD98059或2 μmol·L-1 U0126可以抑制4-AP引起的肺动脉收缩.② 4-AP可刺激PASMCs ERK1/2蛋白磷酸化;③ U0126可抑制4-AP引起的ERK1/2蛋白磷酸化.结论 ERK1/2通路参与4-AP阻断正常大鼠肺动脉平滑肌细胞膜上电压依赖性钾通道(KV)引起肺动脉收缩.
关键词： ERK1/2 电压依赖性钾通道 肺动脉 血管环 Western blot -
钾离子通道在抑郁症中的作用
抑郁症是一种常见的心理性疾病,随着社会压力的日益加大,发病率逐渐升高.以往研究证实,抑郁症主要与脑内神经递质(5-羟色胺,去甲肾上腺素等)系统紊乱有关,目前又发现脑内电压依赖性钾离子通道以及双孔钾离子通道也与该疾病有着紧密关系.该文综述了钾离子通道与抑郁症的相关研究进展,为新型抗抑郁药物的研发提出了新的思路.
-
染料木黄酮对大鼠胰岛素分泌的调控作用
我国糖尿病的发病率近年来呈现快速增长的趋势。2型糖尿病以胰岛素分泌相对不足和胰岛素抵抗为主要特征，因此，促进胰岛素分泌是临床治疗2型糖尿病的重要手段。染料木黄酮（genistein）主要来源于豆类植物，大量证据表明染料木黄酮对糖尿病、慢性缺氧、骨质疏松等有一定的预防和治疗作用［1－3］。研究显示，染料木黄酮可改善2型糖尿病大鼠的胰岛素抵抗［1］，但其对胰岛素分泌的作用及机制尚不明晰。本研究采用放免法测定胰岛素分泌，膜片钳测定胰岛β细胞钾离子通道电流等方法，观察染料木黄酮对大鼠胰岛素分泌的影响，并探讨其作用机制。
-
钾通道特性的研究进展
目的介绍钾通道生理特性的研究进展.方法根据钾通道生理特性及其与疾病关系的新资料加以整理. 结果揭示不同离子通道的特性和作用,以及某些神经性疾病、心血管疾病的发生可能与离子通道的编码基因突变有密切关系.结论由于大量各异的钾通道在脑内、心血管内丰富表达,但其所具有的作用大部分尚属未知,对于钾通道及其亚单位的研究还有待于进一步深入.
关键词： 电压依赖性钾通道 ATP 敏感的钾通道 生理特性 -
山奈酚对急性短暂缺氧时大鼠海马CA1神经元电压依赖性钾通道的作用
目的研究山奈酚对正常和急性短暂缺氧时大鼠海马CA1锥体神经元电压依赖性钾通道的作用.方法急性分离大鼠海马CA1区锥体神经元,采用全细胞记录,用含有氰化钾(KCN)60μmol·L-1的标准外液灌流模拟细胞缺氧,观察山奈酚对正常和缺氧时海马CA1区神经元电压依赖性钾通道的作用.结果山奈酚对正常和缺氧时海马CA1神经元电压依赖性K+电流有明显的抑制作用,可同时抑制瞬时外向型钾电流(IA)和延迟整流性钾电流(Ik),具有浓度依赖和电压依赖性;山奈酚对IA的半数抑制浓度(IC50)约为50μmol·L-1,对IK的IC50约为80μmol·L-1.结论山奈酚对正常和缺氧时大鼠海马CA1神经元电压依赖性钾通道有抑制作用,其对钾通道的抑制作用可能参与脑缺血保护.
-
新生大鼠海马神经元原代培养及钾离子通道特性研究
目的建立大鼠海马神经元原代培养方法,记录钾电流并观察其特性.方法无血清培养法进行海马神经元原代培养,从形态学和电生理学方面鉴定细胞活性;全细胞膜片钳技术记录钾电流,从药理学和动力学观察钾通道特性.结果经5～7 d培养,获得胞膜完整、胞质均匀的海马神经元,并记录到典型的全细胞电压依赖性钾电流(IK)、延迟整流钾电流(IKDR),IK和IKDR均为外向电流,激活电压分别为-50 mV和-40 mV,随着去极化程度增加而增加,能被已知的钾通道的阻断剂4-AP和TEA-Cl阻断,IK和IKDR的半数大激活膜电位(V1/2)分别为(22.1676±2.1778)mV(n=6)和(17.8457±1.7767)mV(n=6),斜率因子(κ)分别为(-6.1541±3.0541)mV(n=6)和(-6.5193±2.1894)mV(n=6).结论在该实验条件下培养的海马神经元形态和生理特性良好,较好的表达了电压依赖性钾离子通道特性,适合电生理研究.
-
Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细动脉的调节作用
目的 研究Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细血管的调节作用.方法 以健康6～8周C57BL/6雄性小鼠肠系膜微细动脉作为研究对象,应用丹麦DMT520A离体微血管张力测定系统记录血管张力变化.应用广谱电压依赖性钾通道(Kv)阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1,Kv1.1通道选择性阻断剂TEA分别作用于静息状态,KCl及NE预收缩动脉,记录血管张力变化情况.应用Kv通道阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1作用于血管,观察Kv及Kv1.3通道在0 mmol/L Ca2+及2 mmol/L Ca2+ K-H液中对NE收缩曲线的作用.结果 Kv通道阻断剂4-AP可引起静息状态的血管收缩,并进一步收缩KCl预收缩的血管,但浓度依赖性舒张NE预收缩的动脉,并且与对照组相比,4-AP能明显抑制NE在0 mmol/L Ca2+液中所致的血管收缩[(3.45-±0.24)mN vs(0.11±0.02) mN,P＜0.01].Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1未能收缩静息状态的血管,但可使KCl预收缩的血管发生轻微舒张反应,却明显舒张NE预收缩的动脉,而且PAP-1既可抑制NE在0 mmol/L Ca2+ K-H液中所致的血管收缩[对照组vs PAP-1组:(4.28 ±0.53)mN vs(2.75 ±0.49)mN,P＜0.05],又可抑制在2 mmol/L Ca2+液中的收缩张力[对照组vsPAP-1组:(7.08 ±0.58)mN vs(5.90 ±0.80)mN,P＜0.05].Kv1.1通道选择性阻断剂TEA可引起静息状态的血管收缩,但在0 mmol/L Ca2+液中该作用消失,同时对KCl或NE预收缩的动脉均无明显作用.结论 Kv通道可调节小鼠肠系膜动脉的舒缩反应.其中Kv1.1通道主要发挥血管收缩调节作用,可能与促进血管平滑肌细胞外钙内流有关,而Kv1.3通道主要发挥血管舒张调节作用,可能同时抑制平滑肌细胞内钙释放和细胞外钙内流.
-
梓醇对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及对电压依赖性钾通道亚型表达的影响
目的:考察梓醇对氧糖剥夺的PC12细胞损伤的保护作用及对电压依赖性钾通道亚型表达的影响.方法:采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)合并无糖培养基造成PC12细胞氧糖剥夺模型,给予梓醇预处理24h后,MTT法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态;测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;还原型谷胱甘肽(GSH)含量;Western blot检测PC12细胞内电压依赖性钾通道Kv1.4、Kv1.5、Kv2.1、Kv4.2蛋白的表达.结果:PC12细胞氧糖剥夺损伤后细胞存活率下降,梓醇100μmol/L、10μmol/L能明显对抗氧糖剥夺对PC12细胞的损伤,使细胞存活率明显增加.PC12细胞氧糖剥夺损伤后培养液中LDH释放增多,细胞内SOD活性显著下降,MDA含量升高、GSH含量降低,梓醇能抗氧化应激,抑制细胞LDH释放,升高细胞内SOD活力,升高细胞内GSH含量,降低细胞内MDA含量.PC12细胞氧糖剥夺损伤后,细胞内电压依赖性钾通道Kv1.5和Kv2.1蛋白表达明显上调,梓醇能下调氧糖剥夺PC12细胞内Kv1.5和Kv2.1蛋白表达.结论:梓醇对缺糖缺氧PC12有保护作用,能抗氧化应激损伤,其机制可能与下调电压依赖性钾通道Kv1.5和Kv2.1蛋白表达有关.
-
白杨素对老年大鼠冠状动脉的保护作用及其机制研究
目的:研究白杨素对老年冠状动脉的保护作用及其机制.方法:利用微血管张力记录仪观察白杨素对老年大鼠冠状动脉肌张力的影响,利用Langedorff实验系统观察白杨素对大鼠离体心脏冠脉流量的影响.结果:1.白杨素(10-6,3×10-6,105,3×105,10-4 mol/L)对冠状动脉血管环静息肌张力没有显著影响;2.白杨素或阳性对照药物芦丁(10-6,3×10*,105,3×10-5,10-4 mol/L)对高钾预收缩的青年大鼠冠脉血管环的大舒张百分比为(30.3±4.2)％和(40.4±3.5)％,二者比较有统计学差异(P＜0.05);白杨素或芦丁(10-6,3×10-6,10-5,3×10-5,104 mol/L)对内皮素预收缩的青年大鼠冠脉血管环的大舒张百分比为(31.7±3.3)％和(42.3±4.2)％,二者比较有统计学差异(P＜0.05);白杨素或芦丁(10-6,3×10-6,10-5,3×10-5,104 mol/L)对高钾预收缩的老年大鼠冠脉血管环的大舒张百分比为(58.9±4.1)％和(65.5±4.2)％,二者比较有统计学差异(P＜0.05);白杨素或芦丁(10-6,3×10-6,104,3×10-5,10-4 mol/L)对内皮素预收缩的老年大鼠冠脉血管环的大舒张百分比为(67.6±5.2)％和(78.2±3.2)％,二者比较有统计学差异(P＜0.05);3.白杨素(10-6,3 × 10-6,105,3×10-5,10-4 mol/L)浓度依赖性舒张高钾和内皮素预收缩的青年和老年大鼠的冠脉血管环,对高钾预收缩冠脉环的大舒张百分比分别为(30.3±4.2)％(青年)和(58.9±4.1)％(老年),两组之间有显著性差异(P＜0.05);对内皮素预收缩冠脉环的大舒张百分比分别为(31.7±3.3)％(青年)和(67.6±5.2)％(老年),两组之间有显著性差异(P＜0.05);4.提前孵育电压依赖性钾通道阻断剂4-AP(4-氨基吡啶,10-3 mol/L),使白杨素对高钾或内皮素预收缩老年大鼠冠脉的舒张幅度分别降低了(17.1±3.2)％和(19.4±4.2)％;而提前孵育钙激活的钾通道阻断剂TEA(四乙基铵,10-4 mol/L),对高钾或内皮素预收缩老年大鼠冠脉的舒张幅度没有产生显著影响;5.白杨素(10-6,3×10-6,10-5,3×10-5,10-4mol/L)浓度依赖性增加青年和老年大鼠离体心脏的冠脉流量,大增加幅度分别为(17.3±3.1)％(青年)和(25.4±4.2)％(老年).结论:白杨素对老年大鼠冠状动脉有明显的舒张作用,其舒张作用与激活电压依赖性钾通道有关.
-
电压依赖性钾通道与Miconazole在低氧性肺血管收缩中的作用
目的观察大鼠肺动脉平滑肌细胞(PaSMCs)膜上电压依赖性钾通道(Kv)与细胞色素P450氧化酶抑制剂Miconazole在低氧性肺血管收缩中的作用.方法采用急性酶分离法分离出大鼠肺动脉平滑肌细胞(PaSMCs),利用全细胞膜片钳技术记录PaSMCs的Kv通道的电流特性;用低氧液体灌流PaSMCs造成急性低氧模型,记录低氧作用前后Kv通道的电流变化;用不同浓度的Miconazole作用于PaSMCs,记录加药前后的电流变化.结果低氧液体灌流以及不同浓度的Miconazole对Kv均有明显的抑制作用,且Miconazole的抑制作用具有一定的浓度依赖性,在加用Kv的特异性的阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)后再加用该药不能进一步抑制Kv电流.结论低氧和Miconazole均作用于Kv通道的同一部位,支持PaSMCs膜上的Kv通道在低氧性肺血管收缩中起重要作用,而细胞色素P450氧化酶可调节细胞内的氧化还原状态,可能系一重要的氧感受器.
关键词： 低氧性肺血管收缩 电压依赖性钾通道 Miconazole 膜片钳 -
鱼藤酮及神经肽PACAP27对PC12细胞电压依赖性钾通道亚型Kv2.1和Kv3.1b表达的影响
为探讨电压依赖性钾通道亚基Kv 2.1、Kv 3.1b在神经毒素鱼藤酮及神经肽PACAP27作用下可能的表达变化,本研究采用定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测了PC12细胞Kv 2.1、Kv 3.1b mRNA及蛋白水平的表达.结果显示:(1)鱼藤酮可使Kv 2.1mRNA的表达增高(P＜0.05),但同时却又使Kv 2.1蛋白水平的表达降低(P＜0.01),PACAP不能逆转其作用(P＞0.05);(2)鱼藤酮及PACAP27对Kv 3.1b mRNA的表达无明显影响(P＞0.05),但鱼藤酮却可使Kv 3.1b蛋白水平的表达降低(P＜0.05),PACAP27可以拮抗鱼藤酮导致的蛋白降低(P＜0.01).以上结果提示神经肽PACAP27及鱼藤酮对于Kv 2.1、Kv 3.1b表达的影响在mRNA及蛋白水平存在着差异,PACAP的保护作用可能与其在蛋白水平增加Kv 3.1b的表达有关.
-
木黄酮对小鼠胰岛β细胞上电压依赖性钾电流的影响
目的:研究酪氨酸激酶抑制剂木黄铜活性对胰岛β细胞中电压依赖性钾电流的影响,探讨酪氨酸激酶在胰岛β细胞中的作用.方法:原代培养小鼠胰岛β细胞,经0.1mmol/L酪氨酸激酶抑制剂木黄酮急性处理处理或者慢性处理12 h后,运用全细胞电流记录的方法观察电压依赖性钾电流的改变.结果:木黄酮急性处理可显著抑制小鼠胰岛β细胞的电压依赖性钾电流.木黄酮处理12 h后,小鼠胰岛β细胞的电压依赖性钾电流较对照组明显减小,降低为对照组的59.3%8.5%(P＜0.01,n=6).结论:木黄酮抑制小鼠胰岛β细胞中电压依赖性钾电流,提示酪氨酸激酶活性抑制在胰岛β细胞功能损害中具有重要作用.
-
氯沙坦对胰岛素分泌的影响
目的 研究氯沙坦对大鼠胰岛素分泌的影响,提供氯沙坦促胰岛素分泌作用的理论依据.方法 胶原酶P法分离纯化得胰岛.用胰岛素分泌实验来验证胰岛活性与功能,并且使用胰岛素分泌实验、膜片钳技术、钙成像技术研究氯沙坦促胰岛素分泌作用的机制.结果 胰岛在2.8 mmol/L、8.3 mmol/L葡萄糖情况下胰岛素分泌量递增.高糖环境中,氯沙坦促进了胰岛素的分泌,抑制了KV电流,使细胞内钙离子浓度明显升高.结论 胰岛具备良好的实验条件.对于大鼠胰岛β细胞,氯沙坦促进胰岛素分泌的机制与抑制KV电流、增加细胞内钙离子浓度相关.
