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地高辛抑制豚鼠心室肌细胞Na+,K+-ATP酶和人胚肾上皮细胞系HERG钾通道电流
强心苷类药对Na+,K+-ATP酶的作用在低浓度时为兴奋、在高浓度时呈抑制作用[1].应用膜片钳技术观察地高辛(Digoxin)对豚鼠心室肌细胞Na+,K+-ATP酶电流(Ip)的作用还未见报道.此外,由于很多药物的心脏不良反应是通过抑制人ether-a-go-go-related基因(HERG)编码的快速激活的延迟整流钾通道(Ikr)而引起QT间期延长和尖端扭转性室速(TdP)[2].本研究初步探讨地高辛对豚鼠心室肌细胞Ip电流和对人胚肾上皮细胞系(human embryonic kidney cell line,HEK-293)上HERG/Iκr钾通道的影响及地高辛治疗心功能不全和引起心脏毒性反应的机制.1材料与方法1.1动物、细胞系、质粒来源及地高辛配制:普通级豚鼠,8~12周龄,体质量250 ~ 300 g,雌雄不拘,由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供[合格证号SCXK(鄂)2004-007].HEK-293细胞,中国科学院上海生科院细胞资源中心.编码Ikr的HERG基因的真核细胞表达载体pcgi-EGFPHERG(南京师范大学生命科学院张朝教授馈赠).地高辛(郑州大学药学院药物化学研究所提供)溶于二甲基亚砜中配制成10 mmol/L的母液.
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曲霉菌素诱导人胚肾细胞毒性机制
目的研究曲霉菌素诱导人胚肾细胞毒性作用机制.方法结晶甲紫法用于细胞存活率研究.琼脂糖凝胶及Burton法研究细胞核DNA断裂片段.以水解特异性底物Ac-DEVD-AMC活性为研究指标,测定胞浆半胱天冬酶(caspase)-3类蛋白酶活性.采用蛋白质印迹法检测细胞半胱天冬酶-3蛋白表达.采用荧光标记探针、流式细胞仪技术研究细胞核DNA核型及细胞活性氧的产生.结果曲霉菌素浓度依赖性地诱导人胚肾细胞凋亡,大效应浓度为1.0 mg*L-1.BAF, 半胱天冬酶-3蛋白抑制剂和N-乙酰半胱氨酸(活性氧抑制剂)能显著性抑制曲霉菌素诱导人胚肾细胞凋亡作用.结论半胱天冬酶类及活性氧调节曲霉菌素诱导的人胚肾细胞凋亡.
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pREP8和pREP4质粒对HEK293细胞β2-肾上腺素受体的表达及其介导cAMP蓄积的影响
以质粒携带某一亚型受体的cDNA转染细胞株,通过亚细胞克隆得到稳定表达某亚型受体的亚克隆细胞株,是肾上腺素受体(AR)研究中常用的方法.我们近的研究发现,α1A-、α1B-和α1D-AR全长cDNA分别由pREP8、pREP4和pREP9质粒携带 (pREP8/α1A 、pREP4/α1B、pREP9/α1D),转入人胚肾(HEK293)细胞并稳定表达后,均显著增加原先细胞天然β2-AR的表达量及其介导的cAMP蓄积大效应.本研究拟排除上述作用是由于携带外源cDNA的质粒本身带来的影响,而非转入α1-AR的影响.
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肾综合征出血热病毒对人胚肾原代细胞感染作用的研究
近年来对该病进行了广泛研究,但其发病机理尚不清楚.为了搞清肾综合征出血热病毒(HFRSV)对肾组织的损伤机理,本文首次选用易饲养、敏感、高效的人胚肾原代细胞直接攻击HFRSV.为确保结果的准确性,改用了胶原酶温和消化法,取得令人满意的结果.现将结果报告如下.
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丁酸钠诱导结肠癌细胞株凋亡的实验研究和机制探讨
丁酸钠是膳食纤维在肠道厌氧菌作用下产生的一种4碳短链脂肪酸(丁酸)钠盐.研究发现,丁酸钠可通过不同途径诱导多种肿瘤细胞的凋亡[1].本研究通过观察丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29的促凋亡作用及其对p53三个重要靶基因p21 waf1、Bax和Gadd45的调控,同时以人胚肾293细胞(二倍体)作对照,观察丁酸钠对正常细胞的毒性作用,旨在进一步探讨其抗肿瘤机制.
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影响麻疹免疫效果原因探讨
麻疹是一种由麻疹病毒引起的呼吸道急性传染病 . 在无麻疹疫苗时代 , 人人出麻疹 , 全球的麻疹发病率和死亡率都是很高的 . 1954年 Endres等用人胚肾细胞分离出第一株麻疹病毒 - Edmonston(Ed)株 , 为研制麻疹疫苗 (MV)奠定了基础 .60年代初发达国家已经开始使用 MV. 1958年我国汤飞凡等成功分离出麻疹病毒 . 我国于 1965年批准使用京 55、长 47和沪191三株疫苗株进行活疫苗生产 , 并在全国逐步推广使用MV. 特别是在我国实行计划免疫后 , MV免疫覆盖率大大提高. 经 3次计划免疫审评 , 以省、县、乡为单位儿童四苗免疫接种率 85% 的目标得到实现 . 我国 1995年报告麻疹发病率较计划免疫实施前下降 98% [1]. 但是 , 当前仍有部分县麻疹发病率较高 . 尽管研究表明 MV免疫效果在 95% 以上 , 而实际应用中却达不到此指标 , 人为控制条件也难以达到理想效果 , 说明还有其它的原因导致抗体阳性率不高 , 本文对影麻疹免疫效果的原因进行探讨 .