首页 > 文献资料
-
转染NDRG2基因抑制乳腺癌细胞增殖
目的 观察NDRG2对于乳腺癌细胞系增殖的影响.方法 用重组NDRG2腺病毒转染低表达NDRG2的人乳腺癌细胞系Bcap37,用Western blot检测NDRG2的表达;用MTT、流式细胞仪检测细胞增殖能力.结果 NDRG2的表达对Bcap37细胞生长具有抑制作用;Bcap37细胞病毒转染组出现G_1期阻滞(G_1期捕获),与未转染的Bcap37细胞(1.0%)和空载体重组腺病毒感染的Bcap37细胞(2.0%)相比,重组NDRG2腺病毒感染的Bcap37细胞中凋亡细胞明显增多,感染48 h后达12.0%,感染72 h后达21.5%.结论 在乳腺癌细胞系Bcap37中,过表达NDRG2可有效抑制细胞增殖并导致细胞周期的阻滞和诱导细胞凋亡.
-
胃癌组织中NDRG2蛋白表达的研究
目的：探讨NDRG2蛋白在胃癌组织中的表达，分析其与胃癌患者相关临床病理学特征及生存期的关系。方法免疫组织化学法检测20例正常胃黏膜、40例早期胃癌和40例中晚期胃癌组织中NDRG2蛋白的表达。结果NDRG2蛋白在中晚期胃癌中的表达显著低于早期胃癌和正常胃黏膜组织；NDRG2蛋白表达与年龄、淋巴结转移、肿瘤大小及生存期相关。结论 NDRG2蛋白在中晚期胃癌组织中低表达，提示其可作为胃癌诊断的一种特异性标志物； NDRG2与胃癌多项临床病理指标相关，提示其可作为胃癌预后的一个重要指标。
-
NDRG2 siRNA对宫颈癌Hela细胞顺铂化疗敏感性影响的研究
目的:探讨人源N-myc下游调节基因2(N-Myc downstream-regulated gene 2,NDRG2)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞的化疗增敏作用.方法:利用化学合成的针对NDRG2特异性siRNA借助脂质体转染宫颈癌Hela细胞.采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测NDRG2 mRNA和蛋白在宫颈癌Hela细胞的表达情况.通过MTT法检测该细胞在顺铂作用下的体外存活率.结果:化学合成的NDRG2特异性siRNA oligomer可使Hela细胞的NDRG2表达水平明显降低,增强了顺铂对Hela细胞体外生存的抑制能力.转染Negative-control oligomer的Hela细胞与转染NDRG2 siRNA oligomer HSS126269的Hela细胞相比,其存活情况出现明显差异,IC50值分别为(6.69±0.33)和(1.69±0.25) μg/L,差异有统计学意义,t=17.311,P=0.003.结论:抑制NDRG2表达可以提高宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,具有一定的临床应用前景.
-
NDRG2在结直肠癌基因治疗中的研究进展
抑癌基因NDRG2是多种肿瘤组织与正常组织间的差异表达基因，参与调节肿瘤细胞的增殖与分化，在肿瘤的发生、发展和转归中起重要的调节作用。在结直肠癌组织中，NDRG2表达量明显低于正常组织，且NDRG2低表达病例分期更晚、预后更差。目前尽管参与结直肠癌演变的大量遗传学分子框架已经基本明了，但NDRG2的生物学功能尚未完全阐明，其在结直肠癌基因治疗领域的价值还需探索。
-
肝癌中NDRG2、AKT2 mRNA及其磷酸化蛋白的表达
目的：检测不同病理级别原发性肝细胞癌中N-myc下游调节基因2( NDRG2)和蛋白激酶B2( AKT2) mRNA及其磷酸化蛋白的表达水平。方法收集不同病理级别原发性肝细胞癌组织及癌旁正常肝组织标本各30例,检测标本中NDRG2、AKT2 mRNA及其磷酸化蛋白的表达情况,并对其间的相互关系进行分析。结果30例原发性肝细胞癌组织中NDRG2 mRNA表达低于瘤旁组织(P<0．05),AKT2 mRNA与瘤旁组织无明显差异(P>0．05),两者均与病理级别无关(P>0．05),且NDRG2与AKT2表达无相关性(P>0．05)。在高表达474位丝氨酸磷酸化的AKT2蛋白(P-AKT2-SER474)分子的标本中,两个NDRG2磷酸化分子多为低表达,相反,在低表达P-AKT2-SER474分子的标本中,两个NDRG2磷酸化分子多为高表达。结论在mRNA表达水平,还不能认为NDRG2与AKT2之间有相关性。在蛋白质水平,NDRG2的磷酸化不依赖于AKT2的磷酸化,且NDRG2与AKT2的磷酸化作用可能存在竞争关系。
-
NDRG2对肝星形细胞活化及TGF-β1/Smad通路的影响
目的 探讨NDRG2(N-Myc downstream-regulated gene 2)调控肝星形细胞活化的方式及机制. 方法 通过细胞免疫荧光和Western blot的方法检测肝星形细胞中NDRG2的定位及表达;利用腺病毒载体上调肝星形细胞中NDRG2的表达,检测高表达NDRG2对肝星形细胞活化的影响;Western blot检测TGF-β1/Smad通路,阐明NDRG2调控肝星形细胞活化的机制.结果 NDRG2在肝星形细胞的胞质中表达,其表达水平在肝星形细胞活化的过程中逐渐下降;利用腺病毒载体上调肝星形细胞中NDRG2的表达能够抑制肝星形细胞的活化;肝星形细胞活化后,Smad3的蛋白表达增加,而NDRG2能够使Smad3的表达降低. 结论 NDRG2通过影响TGF-β1/Smad通路调控肝星形细胞的活化.
关键词： NDRG2 肝星形细胞 TGF-β1/Smad通路 -
结直肠癌中NDRG2基因的表达及临床意义
目的：探讨NDRG 2基因在结直肠癌组织中mRNA的表达情况及其与临床病理特征之间的关系。方法：通过实时定量PCR检测68例结直肠癌组织及其配对癌旁组织中NDRG 2 mRNA的表达情况,同时完成5a随访,进而分析病人临床病理特征与术后生存率之间的关系。结果：(1) NDRG 2在68例结直肠癌组织中的mRNA表达量明显低于其配对癌旁组织(P<0.01),差异有统计学意义；(2)TNM分期早(TNM 1)的结肠癌组NDRG 2 mRNA的表达量高于分期晚(TNM 2/3/4)的结肠癌组(T1 VS. T2+3+4,P=0.04)；而其余临床病理特征对于结直肠癌组NDRG 2 mRNA表达量的影响无显著差异性(P>0.05)；(3)NDRG 2表达水平与结直肠癌病人生存率未见明显相关性(P>0.05)。结论：NDRG 2基因参与结直肠癌的发生发展过程,但具体机制尚未明确。NDRG 2在核酸层面的表达与部位、分化程度、浸润深度、Dukes分期、淋巴结侵犯、术前干预、复发及转移均无明显关系,仅与TNM分期有关,这为进一步探讨结直肠癌的分子诊断及治疗提供理论依据。
-
质粒介导的NDRG2 shRNA抑制其在人肿瘤细胞HHCC中的表达
目的构建含有针对MDRG2的shRNA的质粒,抑制NDRG2在HHCC细胞中的表达.方法用PCR方法从人基因组DNA中扩增出336bp的U6启动子,与29bp的NDRG2靶序列的反向重复序列和pSNAV质粒相连.连接后的pSNAVU6质粒转染入HHCC细胞,检测它们对NDRG2表达的影响.结果pSNAVU6重组质粒能抑制NDRG2的表达.结论针对NDRG2的短的发夹RNA能抑制NDRG2在HHCC细胞中的表达.
-
NDRG2基因的克隆、表达及抑瘤活性研究
目的克隆、表达抑癌基因NDRG2,纯化后考察其对肿瘤细胞的抑制作用.方法将NDRG2基因克隆进pQE30/M15表达载体,经DNA测序,IPTG诱导表达,SDS-PAGE测定表达量及相对分子质量,复性后浓缩,脱盐,亲和层析纯化,对纯化表达产物进行一系列检测,考察其抑瘤作用.结果克隆构建的表达载体经DNA测序证明构建正确,表达产物相对分子质量为39 977,表达量为40.05%,纯度为94%,等电点为6.3,表达蛋白N端氨基酸序列正确,NDRG2蛋白对肿瘤细胞有较强抑制作用.结论构建了NDRG2的pQE30/M15表达载体并取得高表达,该蛋白对7901和HHCC肿瘤细胞均有抑制作用,为基因功能研究奠定了基础.
-
NDRG2在上皮性卵巢癌中的表达及与预后的关系
目的:探讨NDRG2在上皮性卵巢癌中的表达及其与预后的关系.方法:收集新鲜的上皮性卵巢癌和正常卵巢组织各15例,采用real-time PCR检测和比较其NDRG2 mRNA的表达.收集上皮性卵巢癌病理切片96例进行免疫组化检测其NDRG2蛋白的表达,并收集患者的临床病理资料,随访患者的生存情况,分析NDRG2蛋白的表达与上皮性卵巢癌患者临床病理特征和预后的关系.结果:上皮性卵巢癌组织中NDRG2 mRNA和蛋白的表达均显著低于正常卵巢组织(P＜0.05).NDRG2在上皮性卵巢癌组织中的表达随着上皮性卵巢癌病理分期的升高而降低,而且其表达降低和患者不良预后显著相关(P=0.002),但其表达和不同上皮性卵巢癌的病理类型、分化程度以及年龄均无明显相关性.去除手术病理分期的影响,NDRG2表达下调和肿瘤细胞减灭术的满意程度以及术后规范化疗是三个影响上皮性卵巢癌预后的重要因素.结论:NDRG2在上皮性卵巢癌中的表达下降,并与患者的不良预后呈显著正相关.
-
NDRG2通过调控CD24影响肝癌细胞侵袭能力的研究
目的:阐明NDRG2 (N-Myc downstream-regulated gene 2)在肝癌细胞中对CD24的调控及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响.方法:Western blot检测低转移性的肝癌细胞Huh7、高转移性的肝癌细胞系MHCC97h及正常人肝细胞系L-02中NDRG2和CD24的表达;通过腺病毒载体上调MHCC97h细胞中NDRG2的水平,或利用siRNA下调Huh7细胞中NDRG2的表达,检测CD24的变化以及细胞侵袭能力的改变.结果:MHCC97h细胞中NDRG2基因和蛋白的表达水平低于Huh7细胞,而CD24的表达水平高于Huh7细胞;在MHCC97h细胞中上调NDRG2可以抑制CD24的表达并抑制其侵袭能力,而在Huh7细胞中下调NDRG2的表达可以提高CD24的水平及细胞的侵袭能力.结论:NDRG2可能通过影响CD24参与调控肝癌细胞的侵袭能力.
-
抑癌基因NDRG2对人结肠癌细胞系Caco-2增殖的影响
目的:采用重组慢病毒系统,在过表达和抑制NDRG2 (N-myc downstream regulated gene 2)基因后,检测人结肠癌细胞系Caco-2的增殖情况.方法:分别采用NDRG2过表达慢病毒载体pLenti6-NDRG2和NDRG2干涉慢病毒载体pLKO.1-shNDRG2制备病毒并感染Caco-2细胞,经14天耐药的筛选,获得稳定感染的细胞株；采用Real time RT-PCR和Western blot方法明确NDRG2在稳转细胞株中的表达情况,同时采用MTT方法检测细胞的增殖能力,通过流式细胞仪检测细胞周期变化情况.结果:Real time RT-PCR和Western blot结果表明,在慢病毒pLenti6-NDRG2稳定感染的Caco-2细胞中,NDRG2表达上调；pLKO.1-shNDRG2稳定感染的Caco-2细胞中,NDRG2的表达下调.MTT实验结果表明,NDRG2过表达细胞株中细胞的增殖能力下降,而pLKO.1-shNDRG2慢病毒感染Caco-2后细胞的增殖能力明显增加；流式细胞术结果显示,过表达NDRG2使Caco-2细胞在G0/G1期细胞增多而S期的细胞减少,抑制细胞内源性NDRG2后G0/G1期细胞减少而S期细胞增多.结论:通过过表达和抑制NDRG2基因,验证了NDRG2作为抑癌候选基因能够有效抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖.
-
敲除NDRG2基因的AD模型小鼠的构建与鉴定
目的:构建与鉴定NDRG2基因全身敲除的阿尔茨海默症(AD)小鼠模型.方法:将NDRG2-/-、APP/PS1进行饲养杂交繁殖,将通过PCR技术鉴定基因型为NDRG2+/-APP/PS1的子一代小鼠再与NDRG2-/-小鼠回交获得子二代小鼠,提取子二代小鼠的基因组DNA,再利用PCR方法扩增NDRG2和APP/PS1基因片段,并进行琼脂糖凝胶电泳检测,获得4种基因型的小鼠.结果:选取基因型为NDRG2-/-APP/PS1的小鼠即为全身NDRG2敲除且淀粉样蛋白基因过表达的阿尔茨海默症模型小鼠.应用PCR方法鉴定NDRG2基因全身敲除的AD小鼠模型.成功获得NDRG2基因全身敲除的AD小鼠,该基因型小鼠有繁殖能力,其繁殖符合孟德尔遗传规律.结论:成功构建NDRG2基因敲除的阿尔茨海默症模型小鼠,为进一步研究NDRG2基因在阿尔茨海默症病理发展过程中的作用机制及新的治疗方法的研究提供模型基础.
-
应用组织芯片技术研究抑癌候选基因NDRG2在淋巴瘤组织中的表达及其意义
目的:应用组织芯片技术分析抑癌候选基因NDRG2在人类淋巴瘤组织、淋巴结正常组织及淋巴结良性病变组织中的表达情况.方法:采用小鼠抗NDRG2单克隆抗体的免疫组织化学ABC法,研究NDRG2在不同淋巴结组织的表达,并分析NDRG2在不同淋巴结组织中的表达差异.结果:免疫组化结果显示,淋巴瘤组织与淋巴结良性病变组织中DNRG2的表达相比呈显著性差异(P<0.05),淋巴瘤组织与正常淋巴结组织中DNRG2的表达相比呈显著性差异(P<0.05).淋巴结良性病变组织与正常淋巴结组织中DNRG2的表达相比呈显著性差异(P<0.05).正常淋巴结,淋巴结良性病变及淋巴瘤组织中NDRG2的阳性表达率分别为92.5%(37/40)、67.5%(27/40)和18.51%(15/81),3者间比较,差异有统计学意义.结论:NDRG2在淋巴瘤组织中呈低表达,提示其可能对淋巴瘤的发生或发展有重要作用,这不仅为研究淋巴瘤的发病机制进一步提供了线索,而且对淋巴瘤的诊断和治疗具有重要意义.
-
NDRG2在热应激抗肝癌细胞侵袭中的作用和分子机制研究
目的:探讨NDRG2在热疗诱导的热应激抗肝癌细胞侵袭中所发挥的作用和机制研究.方法:构建NDRG2过表达和干涉表达的HepG-2细胞稳转细胞株,通过Transwell和Western-blot方法检测了和细胞侵袭力和细胞内NDRG2、MMP-2和MMP-9的表达量变化;构建荷瘤鼠模型,通过HE染色及免疫组化方法检测并对比了热对肿瘤细胞向周围肌肉组织的侵袭抑制作用.结果:给予NDRG2过表达的HepG-2细胞45℃、30min热处理后,细胞内NDRG2的表达明显增高,同时伴随细胞侵袭力、MMP-2和MMP-9的表达明显降低(P＜0.05).与对照组相比,45℃的局部热作用能有效抑制肿瘤细胞对周围肌肉组织的侵袭,而干涉细胞内NDRG2的表达则降低了热对肿瘤细胞侵袭的抑制.对其机制的研究中发现,给予对照和NDRG2过表达的HepG-2细胞45℃,30min热刺激后,HSP70在热后6h表达量开始升高,而在两个组之间没有显著差异;对照组的HepG-2细胞在给予热处理后ERK1/2的磷酸化水平降低;NDRG2的过表达不仅降低了细胞中ERK1/2的本底水平,还降低了热作用早期对ERK1/2的诱导;进一步分别应用ERK1/2,p3 8MAPK和JNK三个激酶的抑制剂作用于NDRG2被敲除的HepG-2细胞,经过热处理后ERK1/2抑制剂组可以明显抑制HepG-2细胞的侵袭.结论:热应激所诱导NDRG2的表达量与肝癌细胞的侵袭力呈现一种负相关性;在热应激抗肝癌细胞侵袭的作用中,是通过影响NDRG2-ERK1/2通路而实现的.
-
NDRG2与GFAP在不同脑区星形胶质细胞的表达与分布
目的:观察NDRG2 (N-myc下游调节基因2)与GFAP(胶质纤维酸性蛋白)在不同脑区星形胶质细胞的表达与分布.方法:利用免疫荧光NDRG2与GFAP双标技术以及Western Blot技术观察皮层、海马及纹状体等不同脑区星形胶质细胞NDRG2和GFAP的表达与分布.结果:免疫荧光结果显示NDRG2阳性细胞广泛而均匀地分布于不同脑区,并与GFAP存在较好的共定位;NDRG2与GFAP标记的星形胶质细胞形态不尽相同.Western Blot结果显示NDRG2在皮层中表达比海马和纹状体多,而GFAP在海马中表达比皮层和纹状体多.结论:NDRG2广泛表达于不同脑区星形胶质细胞,并于GFAP存在较好的共定位.
-
NDRG2通过影响CD24调控乳腺癌细胞的粘附能力
目的:阐明NDRG2(N-Myc downstream-regulated gene 2)在乳腺癌细胞中对CD24的调控及其对乳腺癌细胞粘附能力的影响.方法:RT-PCR和Western blot方法检测乳腺癌细胞MCF-7及Bcap-37中NDRG2和CD24的表达；通过腺病毒上调MGF-7细胞中NDRG2的表达,或利用siRNA下调Bcap-37细胞中NDRG2的表达,检测CD24基因和蛋白的变化.粘附实验检测改变NDRG2表达水平后对MCF-7及Bcap-37细胞粘附能力的影响.结果:MCF-7细胞中NDRG2基因和蛋白的表达水平低于Bcap-37细胞,而CD24的表达水平高于Bcap-37细胞；在MCF-7细胞中通过腺病毒载体上调NDRG2可以抑制CD24的表达并抑制其粘附能力,而在Bcap-37细胞中利用siRNA下调NDRG2的表达可以提高CD24的水平及细胞的粘附能力；结论:NDRG2通过影响CD24参与调控乳腺癌细胞的粘附能力.
-
抑癌候选基因NDRG2对结肠癌细胞SW620的迁移和侵袭力的影响
目的:观察NDRG2对结肠癌SW620细胞侵袭、转移等生物学行为的影响,探讨其可能的调节机制.方法:用阳离子脂质体转染方法分别转染pcDNA3.1-Ndrg2和SiRNA-Ndrg2于SW620细胞内48h,上调/下调NDRG2的表达;检测NDRG2基因mRNA 及蛋白表达水平的变化;通过划痕试验及transwell细胞侵袭试验进一步对上调/下调NDRG2表达水平后的结肠癌细胞迁移和侵袭能力进行分析.结果:pcDNA3.1-Ndrg2转染SW620后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显升高,细胞的迁移和侵袭能力下降;SiRNA-Ndrg2转染SW620后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞的迁移和侵袭能力上升,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:NDRG2作为抑癌候选基因能够降低结肠癌细胞转移和侵袭能力.
关键词： NDRG2 结肠癌 划痕试验 transwell细胞侵袭实验 -
抑制NDRG2基因表达对宫颈癌Hela细胞紫杉醇化疗敏感性的影响
目的:NDRG2是N-Myc downstream regulated gene家族的成员之一,与细胞增殖和分化相关.前期研究发现,抑制NDRG2表达可以提高宫颈癌Hela细胞对于顺铂的化疗敏感性,本研究采用RNA干扰技术抑制人宫颈癌Hela细胞中NDRG2基因的表达研究其对Hela细胞紫杉醇化疗敏感性的影响.方法:利用化学合成的针对NDRG2特异性siRNA瞬时转染Hela细胞株,采用RT-PCR和Western Blot检测NDRG2 mRNA和蛋白表达情况,通过MTT法检测其与对照细胞在顺铂作用下的体外存活率差异.SPSSll.0统计包处理,采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果:在mRNA和蛋白水平,化学合成的NDRG2特异性siRNA oligomer可使Hela细胞的NDRG2表达水平明显降低.在0.1、1、10、100、500、1000 μg/mL紫杉醇浓度组,Negative-control和NDRG2siRNA细胞的相应细胞存活率分别为97.21±2.38、90.09±2.42、83.35±3.86、62.93±3.75、18.22±5.46、1.14± 0.67和99.62±3.15、94.91±3.83、85.71±2.93、58.59± 3.36、17.99±3.40、0.73±0.34,组间比较P值均大于0.05,差异无统计学意义.结论:抑制NDRG2表达不影响宫颈癌Hela细胞在紫杉醇作用下的细胞存活率,不能提高其对紫杉醇的化疗敏感性.进一步拓展了对该基因的功能认知.
-
抑癌候选基因NDRG2在甲状腺癌组织中的表达及其意义
目的:研究抑癌候选基因NDRG2在人类甲状腺癌组织及其癌旁组织中的表达情况.方法:收集30例甲状腺癌组织及其癌旁组织,提取总RNA,应用半定量RT-PCR方法检测NDRG2 mRNA的表达水平.分别提取30例组织的总蛋白,应用蛋白印迹技术检测其NDRG2的蛋白表达水平.结果:RT-PCR结果显示,30例甲状腺癌组织中,有25例NDRG2的mRNA水平明显降低,蛋白印迹结果显示,30例甲状腺癌组织中发现25例NDRG2的蛋白水平明显下降,与RT-PCR检测结果一致.结论:NDRG2在甲状腺癌组织中呈低表达,提示其可能对甲状腺癌的发生或发展有重要作用影响.
