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超抗原SEB对CD8+T细胞凋亡诱导配体表达的影响
为了探讨超抗原SEB对CD8+T细胞凋亡诱导配体在细胞胞内和膜表面表达的影响,以SEB及PHA刺激PBMC,用免疫荧光染色结合三色流式细胞术,分析比较刺激前后PBMC中CD8+T细胞三种主要的凋亡诱导配体TRAIL、FasL和TNF-α在细胞胞内和膜表面表达的变化.结果表明,SEB上调FasL在CD8+T细胞胞内(34.8%至42.5%)和TRAIL在CD8+T细胞膜表面(7%至20.7%)的表达,SEB还可同时上调TNF-α在CD8+T细胞膜表面(7%至45.7%)及胞内(23.9%至88.7%)的表达.说明SEB能上调不同凋亡诱导配体在CD8+T细胞膜表面或胞内的表达,这可能是SEB影响CD8+T细胞效应功能的方式之一.
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TRAIL及其受体DR5参与动脉粥样硬化的发生
目的 探讨肿瘤坏死因子(INF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体DR5与动脉粥样硬化(AS)之间的关系.方法 冠心病(CAD)组61例,正常对照组22例.应用酶联免疫吸附法测定血浆可溶性TRAIL(sTRAIL)和可溶性DR5(sDR5)水平.免疫组织化学测定冠状动脉TRAIL和DR5蛋白表达情况.结果 CAD组血浆sTRAIL和sDR5水平均显著性升高(P<0.001,P<0.05).3支血管病变组和双支血管病变组血浆sTRAIL和sDR5水平均分别显著高于单支血管病变组和正常对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05).TRAIL和DR5主要表达于平滑肌细胞的胞质,TRAIL还可表达于As中的巨噬细胞.AS组冠状动脉的TRAIL和DR5表达明显高于非AS组(P<0.01,P<0.05).结论 TRAIL及其受体DR5可能参与了AS的进展,其浓度越高,冠状动脉病变越重.
关键词： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 受体 动脉粥样硬化 凋亡 免疫组织化学 -
TRAIL基因对人白血病Jurkat细胞生物力学特性的影响
本实验研究将人类肿瘤坏死因子相关凋亡配体(TNF-related apoptosis inducing ligand)的cDNA序列作为目的基因导入RevTet-On后,利用在Jurkat中所建立起的四环素调控TRAIL基因表达系统,作为研究肿瘤细胞凋亡前后生物流变学特性变化的细胞模型.我们通过测量用强力霉素诱导TRAIL基因表达前后细胞生物力学特性的变化,研究TRAIL基因对Jurkat细胞生物力学特性的影响.结果显示TRAIL基因的表达对Jurkat细胞有明显的促凋亡作用.TRAIL基因表达后,细胞表面电荷密度减少,流动性下降.而且,本实验表明,TRAIL基因诱导的细胞凋亡引起了Jurkat细胞膜的二级结构改变.
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TRAIL和EGFR配体寡肽与力达霉素辅基蛋白融合蛋白制备过程的优化
目的对以包涵体形式表达的 TRAIL 和 EGFR 配体寡肽与力达霉素辅基蛋白融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 的制备过程进行优化。
方法对大肠杆菌原核表达 Ec-LDP-TRAIL 目的蛋白的温度、诱导物浓度、起始菌体密度及时间等条件进行优化；在Ni2+亲和层析纯化蛋白过程中对样品预处理以及纯化缓冲液成分进行优化；对纯化后蛋白的分步透析复性过程进行一系列优化，并通过基于 ELISA 的结合活性实验分析Ec-LDP-TRAIL 与肿瘤细胞的结合能力。
结果经过工艺优化后，纯化后的融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL纯度达95%以上，复性后 LB 培养基活性蛋白收率约为2.2 mg/L，与初始复性条件相比提高近2倍。复性后融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 显示出能够与人表皮癌 A431和人大细胞肺癌 H460细胞的结合活性。
结论融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 制备过程的优化为后续研发和生产奠定了实验基础，同时也为其他以包涵体形式表达的基于 TRAIL 的抗肿瘤蛋白药物的制备提供借鉴。关键词： 包涵体 重组融合蛋白质类 蛋白质复性 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 -
TRAIL及其受体DR4/DR5在急性肾脏移植排斥反应中作用的探讨
目的探讨新型肿瘤坏死因子超家族成员TRAIL及共受体DcR4/DcR5在急性肾脏移植排斥反应作用.方法利用流式细胞术对正常人及发生急性肾脏移杆排斥患者外周血单个细胞(PBMC)表面的TRAIL分布进行探讨;用免疫组织化学的方法对正常人肾脏和急性排斥坏死肾脏病理切片DR4和DR5进行分析.结果正常人PBMC几乎不表达TRAIL,急性肾脏热电厂斥患者PBMC高表达TRAIL,进一步证实其为IFN-γ+细胞表达;正常人肾脏表达的DR4和DR5低,但急性肾排患者高表达DR4和DR5.结论TRAIL及其受体DR4/DR5之间的作用可能参与了肾脏急性排斥反应.
关键词： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 死亡受体4 死亡受体5 肾脏移植 移植排斥 -
肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体对2型糖尿病大鼠内皮依赖性血管舒张功能的影响
目的 观察TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)对T2DM大鼠主动脉内皮依赖性血管舒张功能的影响及其可能的机制. 方法 选取4周龄雄性SD大鼠,分为正常对照组(NC,n=10)与模型组(n=40),随机将模型组分为T2DM亚组(n=10)与TRAIL亚组(TRAIL,n=10).TRAIL干预6周后,检测各组FPG及FIns水平,计算ISI.检测NC组与TRAIL亚组血清TRAIL水平.观察大鼠离体主动脉内皮依赖性血管舒张反应,并检测主动脉一氧化氮(NO)含量、内皮型一氧化氮合酶活性(eNOS).结果 与NC组比较,T2DM亚组FPG、FIns水平升高(P＜0.01),ISI降低(P＜0.01),血清TRAIL水平降低(P＜0.01);血管内皮功能失调,乙酰胆碱(Ach)引起的血管大舒张率降低(P＜0.01),血管中NO含量及eNOS阳性表达降低(P＜0.01或P＜0.01).TRAIL亚组血管Ach的舒张反应改善(P＜0.01);血管中NO含量增加且eNOS阳性表达上调(P＜0.05或P＜0.01);FPG、FIns降低,ISI提高(P＜0.01). 结论 TRAIL改善T2DM大鼠内皮依赖性血管舒张功能的同时,可促进具有血管保护作用的NO生成.
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TRAIL 及其受体在肾脏疾病的研究进展
肿瘤坏死因子（TNF）相关的凋亡诱导配体（TRAIL）是肿瘤坏死因子超家族中重要的促凋亡细胞因子。TRAIL 通过与死亡受体（DR）结合发挥促凋亡效应，同时该效应受诱骗受体（DcR）的调节，进而发挥抗凋亡、促增殖等作用。TRAIL 同各类受体结合所致的病理损伤效应参与糖尿病肾病（DN）、狼疮肾炎（LN）、移植性肾病等肾脏疾病进展，并与其预后密切相关。本文将简要介绍 TRAIL、TRAIL 受体的结构与功能及其在肾脏疾病中的作用。
关键词： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 受体 肾脏疾病 -
Bcl-XL小分子干扰RNA逆转人结肠癌获得性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的耐药
目的 探讨Bcl-XL小分子干扰RNA(siRNA)在逆转人结肠癌细胞获得性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)耐药中的作用.方法 以Bcl-XL siRNA转染获得性TRAIL耐药的人结肠癌DLD1-TRAIL/R细胞24 h,并用TRAIL蛋白处理,通过细胞计数和流式细胞仪检测细胞的存活率,并通过Western blot法检测各种凋亡相关蛋白的活化情况.结果Bcl-XL siRNA能有效下调DLD1-TRAIL/R细胞中Bcl-XL蛋白的表达水平,并且能够有效地逆转其对TRAIL蛋白的耐药.DLD1-TRAIL/R细胞经过Bcl-XL siRNA和TRAIL蛋白共同处理2 h后,其细胞凋亡率＞50%;共同处理4 h后,其细胞存活率＜40%;而对照组和TRAIL蛋白处理组的细胞凋亡率和生存率无明显变化(P＜0·05).Western blot法检测结果表明,经Bcl-XL siRNA与TRAIL蛋白联合处理后,DLD1TRAIL/R细胞中caspase-8、caspase-9、Bid、caspase-3以及多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP)均明显活化,细胞色素C的释放显著增加.结论 Bcl-XL siRNA能够有效逆转结肠癌细胞获得性TRAIL耐药,这将为治疗肿瘤耐药提供一种新的思路.
关键词： Bcl-xl 小分子干扰RNA 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 耐药 -
肿瘤细胞对TRAIL敏感性与其表面DR5表达水平的相关性研究
目的探讨肿瘤细胞表面DR5表达水平与其对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性之间的关系.方法利用抗DR5特异性单克隆抗体,采用流式细胞仪技术直接检测不同肿瘤细胞系表面DR5的表达水平,并采用TRAIL凋亡检测试剂盒检测肿瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性,研究两者之间的关系.结果不同肿瘤细胞表面DR5的表达水平分别为:U937细胞 97.9%、Jurkat细胞 95.1%、SW480细胞 93.8%、HCT116 细胞86.2%、HL-60细胞 64.2%、HeLa细胞 46.6%、K562 细胞13.1%;TRAIL诱导的细胞凋亡率分别为:U937细胞 72.6%、Jurkat细胞 85.2%、SW480细胞 78.6%、HCT116细胞 70.2%、HL-60细胞 60.1%、HeLa细胞 45.4%、K562 细胞12.3%.经统计学分析,两者之间呈现非常明显的正相关(r=0.997, P<0.001).结论肿瘤细胞对TRAIL的敏感性与其表面DR5表达水平有关,表明DR5的表达水平在TRAIL诱导细胞凋亡方面起着十分重要的作用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 死亡受体5 细胞凋亡 -
人突变型TRAIL体外诱导脑恶性胶质瘤细胞凋亡的研究
目的观察人突变型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)体外诱导人脑胶质瘤细胞的凋亡作用.方法设计90个碱基突变的人TRAIL全长基因,分四段合成,然后拼接获得全长寡核苷酸,插入原核表达载体pGEX-2T,转化E.coli DH-5α,丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析法分离、纯化融合蛋白,凝血酶切得到单纯的TRAIL蛋白.MTT法和流式细胞仪定量分析纯化产物体外对人A172、U87、U251和鼠C6脑恶性胶质瘤细胞的凋亡作用.结果突变型TRAIL原核表达产物为可溶性,体外可明显诱导人A172、U87、U251脑胶质瘤细胞凋亡,而对C6鼠胶质瘤细胞无明确的凋亡诱导作用.结论原核表达突变型TRAIL在体外具有明显诱导脑胶质瘤细胞凋亡的作用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 胶质细胞瘤 细胞凋亡 -
人突变型TRAIL在大肠杆菌中的表达及诱导多种肿瘤细胞的凋亡
目的:研究突变型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)的表达及体外诱导多种恶性肿瘤细胞的凋亡作用,为TRAIL临床治疗恶性肿瘤提供实验依据.方法:分段合成TRAIL寡核苷酸,并改变其中90个碱基,然后全长拼接,克隆入原核表达载体pGEX-2T,转化E.coli DH 5α,丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达,亲和层析分离纯化融合蛋白,凝血酶酶切得到TRAIL蛋白.MTT法和流式细胞仪定量分析纯化产物对多种肿瘤细胞的诱导凋亡作用.结果:突变型TRAIL表达产物为可溶性,对人BGC823胃腺癌、A549肺腺癌、H69小细胞肺癌、KB鼻咽癌、A172人脑胶质细胞瘤、SKNSH人成神经细胞瘤株有明显的诱导凋亡作用.结论:原核表达突变型TRAIL具有明显的诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡的作用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 肿瘤细胞 细胞凋亡 大肠杆菌 -
凋亡与桥本甲状腺炎
在探讨桥本甲状腺炎(HT)发病机制的研究中,近来认为死亡受体/肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)可导致甲状腺滤泡细胞破坏.根据目前报道,TRAIL仅仅特异性地作用于甲状腺上皮细胞,而不同于Fas/FasL还可造成甲状腺成纤维细胞和血管平滑肌细胞的损害.结合HT病纤维变性的临床症状,TRAIL致甲状腺滤泡细胞的凋亡中似乎比FasL更具有说服力.bc1-2的作用需进一步研究.
关键词： 桥本甲状腺炎 凋亡 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 FasL Bc1-2 -
大蒜素上调TRAIL表达诱导宫颈癌细胞凋亡机制研究
目的 观察大蒜素对人宫颈癌Hela、Caski细胞的生长抑制作用,大蒜素作用前后TRAIL及其受体DR4、DR5的表达以及Caspase-3、8、9活性变化,探讨大蒜素诱导宫颈癌细胞凋亡作用及其机制.方法 (1)2009-2010年于河北医科大学第二医院,体外培养Hela、Caski细胞,MTT法检测不同浓度大蒜素对细胞的生长抑制作用.(2)RT-PCR方法 检测大蒜素对细胞TRAIL mRNA表达的影响.(3)流式细胞仪检测大蒜素作用前后细胞TRAIL及其受体DR4、DR5的表达.(4)检测大蒜素对HeLa、Caski细胞Caspase-3、8、9活性的影响.结果 (1)大蒜素对细胞有不同程度的生长抑制作用,随着药物浓度的增加以及作用时间的延长,细胞毒作用逐渐增强.(2)大蒜素处理细胞12h后TRAIL mRNA表达水平明显升高,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(3)大蒜素处理细胞24h后TRAIL蛋白表达水平上调.(4)大蒜素作用48h后,两种细胞半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、8、9的活性明显增强.结论 大蒜素对Hela和Caski细胞具有生长抑制作用;上调TRAIL表达.进而活化Caspase-3、8、9,是大蒜素诱导细胞凋亡的重要机制.
关键词： 大蒜素 宫颈癌 凋亡 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 半胱氨酸蛋白酶 -
TRAIL及其受体DR5在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中的表达和意义
目的 研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其死亡受体5(DR5)在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中病变不同时期的表达及与细胞凋亡的关系.方法 建立病毒性心肌炎小鼠模型,于注射病毒后第7、10、14、21、28天取心肌组织,HE染色做心肌病理积分,TUNEL法检测凋亡细胞百分率,免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织中TRAIL和DR5蛋白及mRNA的表达.结果 病毒感染组小鼠和正常对照组小鼠心肌组织中均存在TRAIL和DR5蛋白和mRNA的表达.病毒感染后第14天,病毒感染组小鼠心肌组织中TRAIL蛋白表达高于同期正常对照组(P<0.05)和第7天病毒感染组(P<0.05),组间比较差异有统计学意义(F=9.17,P<0.01).病毒感染后第10、14、21天,病毒感染组小鼠DR5蛋白表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=13.32,P<0.01).且TRAIL和DR5蛋白的表达与心肌病理积分、心肌细胞凋亡率密切相关(P<0.05).病毒感染组第10天TRAIL mRNA表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=10.86,P<0.01).病毒感染组第10、14天DR5 mRNA表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=22.75,P<0.01).结论 病毒性心肌炎小鼠发病中期,TRAIL及其受体DR5在心肌组织中出现高表达,且与病理积分、心肌细胞凋亡率成正相关,TRAIL及其受体DR5可能通过调控心肌细胞凋亡参与病毒性心肌炎的病理过程.
关键词： 柯萨奇病毒 心肌炎 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 死亡受体5 细胞凋亡 -
携带TRAIL基因的条件复制型腺病毒载体的构建及其辐射诱导表达
目的：构建携带早期生长反应基因-1（Egr-1）启动子和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）基因的条件复制型腺病毒载体 pAd-Egr1-TRAIL-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K，观察其联合2.0 Gy X射线照射对人乳腺癌 MDA-MB-231细胞 TRAIL 表达的影响。方法：以 pMD18T-Egr1为模板，成功克隆Egr-1序列，将TRAIL基因置于下游，构建条件复制型腺病毒载体 pShuttle-Egr1-TRAIL-hTERT-E1 A-E1 Bp-E1B55K （CRAd.pEgr1-TRAIL），病毒包装后感染细胞，给予 X 线照射，利用 Real time PCR 法检测TRAIL mRNA 表达水平，ELISA法检测 TRAIL蛋白表达水平。实验设对照（control）组、2 Gy组、空病毒（CRAd.p）组、CRAd.p ＋2 Gy组、CRAd.p-Egr1-TRAIL组和CRAd.p-Egr1-TRAIL ＋2 Gy组。结果：成功构建 pAd-Egr1-TRAIL-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K，并进行了病毒包装。以病毒滴度5感染复数（MOI）感染MDA-MB-231细胞24 h后给予2.0 Gy X射线照射，4 h后MDA-MB-231各组细胞中TRAIL mRNA表达水平开始升高，8 h后各组表达达峰值；CRAd.pEgr1-TRAIL＋2.0 Gy组mRNA表达水平升高为明显，约为对照组的160倍（P＜0.01），随后表达水平逐渐下降；6 h后各组 MDA-MB-231细胞中 TRAIL蛋白表达水平开始升高，24 h后各组TRAIL蛋白表达水平达峰值，48 h后TRAIL蛋白表达水平下降，但仍未降至正常水平；与其他各组比较，CRAd.pEgr1-TRAIL ＋2.0 Gy组TRAIL蛋白表达水平升高明显（P＜0.01）。结论：成功获得条件复制型腺病毒载体，联合2.0 Gy X射线照射可使 MDA-MB-231细胞中 TRAIL mRNA和蛋白表达水平升高。
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NCTD对白血病细胞DR5表达的影响
目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)对白血病细胞死亡受体(DR)5表达的影响.方法不同浓度NCTD处理K562和HL-60细胞16 h后,流式细胞术分析DR5表达和细胞内活性氧(ROS)相对含量;通过免疫印迹技术分析激酶JNK1的表达.结果 NCTD以浓度依赖方式上调DR5表达,细胞内活性氧含量和JNK1表达也随NCTD浓度增大而增加.结论 NCTD可能通过ROS/JNK途径上调DR5表达.
关键词： 去甲斑蝥素 活性氧 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 死亡受体5 -
NCTD和IFN-γ对Jurkat细胞mTRAIL表达的影响
目的 研究NCTD和IFN-γ对T细胞Jurkat TRAIL 表达的影响.方法 培养Jurkat,用不同浓度的IFN-γ和NCTD处理细胞,流式细胞术分析细胞表面TRAIL表达和细胞内活性氧水平.结果 IFN-γ以浓度依赖的方式上调Jurkat细胞TRAIL表达,而NCTD可增强IFN-γ对TRAIL的上调效应;NCTD可增加细胞内活性氧的表达.结论 NCTD可能通过活性氧调节的信号途径协同IFN-γ增强TRAIL的表达.
关键词： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 去甲斑蝥素 活性氧 -
膜型凋亡诱导配体脱落可能参与肺腺癌对TRAIL耐受
TRAIL可选择性、高效地诱导肿瘤细胞凋亡,虽然肺腺癌等部分肿瘤对TRAIL耐受,但其高效、低毒的优势吸引人们不断探索增敏策略.TRAIL与功能性受体DR4、DR5在细胞膜脂筏内组装为死亡诱导信号复合物(DISC)；而诱骗受体DcR1和DcR2通过竞争结合TRAIL阻断凋亡.肺腺癌A549对TRAIL高度耐受,除DcR1外,MMP-2可能通过酶切跨膜型TRAIL的脱落而降低DISC组装,从而参与其耐药.阐明膜结合型TRAIL脱落机制可能为提高肺腺癌对TRAIL的敏感性提供新策略.
关键词： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 基质金属蛋白酶-2 脂筏 姜黄素 -
大鼠肝癌发生过程中肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体及核转录因子-κB的表达
目的:探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及核转录因子κB(NF-κB)在大鼠肝癌发生过程巾的表达及意义.方法:应用免疫组织化学SP法,对二乙基亚硝胺(DEN)诱发的大鼠肝癌发生过程中TRAIL及NF-κB的动态表达进行检测.结果:二乙基亚硝胺诱发的肝癌为肝细胞癌,大鼠肝癌癌变过程大致经过肝细胞损伤期、肝细胞增生-硬化期和肝细胞癌变期3个阶段.在正常大鼠肝、损伤期及增生硬化期偶见少量肝细胞呈TRAIL阳性表达,进入癌变期,TRAIL阳性细胞数量增多,主要位于癌结节内.在正常大鼠肝,偶见少量肝细胞呈NF-κB阳性表达,随着肝癌发生发展,阳性表达细胞逐渐增多,至诱癌晚期,可见大量NF-κB阳性表达细胞,均比正常肝组织表达高.结论:TRAIl及NF-κB可能与肝癌的发生发展密切相关.
关键词： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 核转录因子-κB 肝癌发生 免疫组织化学 大鼠 -
TRAIL对糖尿病大鼠主动脉的保护作用
4周龄雄性SD大鼠经高脂喂养8周后予小剂量链脲佐菌素腹腔注射以建立糖尿病模型,分为糖尿病组和瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis ligand,TRAIL)干预组,另选正常SD大鼠为对照组.TRAIL干预3个月.与糖尿病组相比,TRAIL干预组总胆固醇、甘油三酯、血糖、胰岛素显著降低,大鼠主动脉粥样斑块病变面积及光镜下内膜厚度减小[(23.8±5.7)％对(47.6±7.8)％].提示TRAIL可减轻糖尿病大鼠动脉粥样硬化病变.
关键词： 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 糖尿病 实验性 动脉粥样硬化
