首页 > 文献资料
-
PRRSV非结构蛋白Nsp2PL2域结构及其去泛素化酶功能
为了解PRRSV非结构蛋白Nsp2的PL2域结构及功能,本研究通过构建PL2、PL2融合Ub的Strep标签的原核表达质粒,表达获得纯度95％以上的蛋白,进行结晶.结果表明PRRSV PL2蛋白的聚集状态具有浓度依赖性,优化出短粗和长细两种晶型的蛋白晶体.通过细胞内外实验了解PL2的去泛素化酶特征.将纯化的Ub-PL2-Strep蛋白分别与K48、K63或KO(线性)泛素化的蛋白孵育,检测蛋白体外去泛素化酶活性;将构建的PL2真核表达载体与不同位点泛素质粒共转染以了解PL2去泛素化酶活性及作用模式.结果表明PL2蛋白具有去除K48、K63及线性泛素化修饰的广谱去泛素化酶作用.PL2蛋白高二硫键含量,多聚特性影响规则晶体及衍射图的形成.PL2蛋白结构及功能的研究为PRRSV致病机制及药物靶点的筛选提供了依据.
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV) PL2域 蛋白结晶 去泛素化 -
BRCC36的生物学功能及在心血管疾病中的研究进展
BRCC36是2003年从BRCC复合物中发现的一种亚基，该蛋白参与了蛋白酶体的活性、DNA修复调控、细胞信号转导及细胞周期控制等多种细胞生理过程，在肿瘤形成、血管生成、心肌保护中发挥重要作用。本文综述BRCC36结构功能以及在心血管疾病中的研究进展。
-
去泛素化酶OTUB1影响p97/NPL4复合体形成调控肿瘤发生
目的 探讨去泛素化酶卵巢肿瘤蛋白(OTU)域所含泛素乙酰结合蛋白1(OTU domain containing ubiquitin aldehyde-binding protein 1,OTUB1)调控p97/含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)泛素化参与肿瘤发生的机制.方法 通过生物信息学分析和免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、免疫荧光、CCK-8(Cell Counting Kit-8)检测法等分子生物学及细胞生物学方法,分析和检测OTUB1在肿瘤中的表达情况,OTUB1与p97的相互作用,OTUB1对p97蛋白水平、泛素化修饰水平的影响,OTUB1对核蛋白定位同系物蛋白4(nuclear protein localization 4 homolog,NPL4)和p97复合体形成的影响,以及敲低OTUB1对细胞增殖能力的影响和对p97抑制剂的应答机制.结果 癌基因组图集(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析发现OTUB1在多种肿瘤中异常表达,Co-IP结果显示,OTUB1与p97存在相互作用,在细胞中过表达野生型OTUB1后p97泛素化水平下调,而过表达OTUB1活性缺失突变体则p97泛素化水平无变化;敲低OTUB1后p97泛素化水平上调,且p97和NPL4相互作用减弱.敲低OTUB1细胞增殖能力减弱,使用p97抑制剂处理后细胞生长不再受明显调控.结论 OTUB1与p97相互作用并调控p97的泛素化和p97与NPL4复合体的形成,进而调控肿瘤发生.
-
去泛素化酶与肿瘤相关性的研究进展
泛素-蛋白酶体途径是大多数细胞内蛋白质降解的主要方式,去泛素化酶(Deubiquitinating enzymes,DUBs)可以逆转这一过程,对其进行反向调节.此外,去泛素化酶可以稳定抑癌基因,从而抑制了肿瘤的发生.对去泛素化酶及其抑制剂的深入研究,为抗肿瘤药物的靶向治疗提供理论依据.本文将重点对去泛素化酶及其在肿瘤中的作用进行综述.
-
抗肿瘤新靶点USP7及其抑制剂的研究进展
泛素-蛋白酶体系统(UPS)的失控与肿瘤、神经退行性疾病、病毒感染等疾病密切相关,以该系统为导向的药物研发已逐渐引发关注,其中蛋白酶体抑制剂硼替佐米(万珂)作为抗肿瘤药物已成功上市.泛素特异性蛋白酶7(USP7)是UPS中的一种关键性酶,作为去泛素化酶参与细胞内肿瘤抑制、DNA修复及免疫应答等过程中诸多重要蛋白的活性调控.本文介绍泛素特异性蛋白酶7及其抑制剂,强调泛素特异性蛋白酶7抑制剂在抗肿瘤治疗中的潜在应用价值.
-
蛋白质泛素化、去泛素化与肿瘤发生的关系
泛素蛋白水解酶体途径(Ubiquitin proteasome pathway, UPP)是细胞质和核内蛋白ATP 依赖性的非溶酶体降解途径,高效并高度选择性地进行细胞内蛋白转换,还参与某些重要蛋白质的编译后修饰和改造.
-
泛素化对固有免疫应答的调控研究进展
泛素化是一种广泛存在且非常重要的可逆的蛋白质翻译后修饰,在蛋白质的稳定性、活性、细胞内定位以及免疫系统的调控过程中发挥了重要的作用.固有免疫应答是机体应对病原微生物感染的第一道屏障.病原体入侵机体后,通过病原体相关的分子模式(PAMPs)与免疫细胞的模式识别受体(PRRs)结合,激活一系列的信号通路,进而启动固有免疫应答.泛素化修饰和去泛素化在其中多条信号通路中起到调控作用.因而致力于研究泛素化在固有免疫中的调控作用,对免疫相关性疾病的诊断和治疗具有重要意义.
-
泛素特异性蛋白酶与肿瘤关系的研究
随着泛素化与肿瘤之间的关系越来越明朗,这一关系的反向调控过程,即去泛素化,近也开始备受关注.目前认为,去泛素化酶在调控与肿瘤相关的许多途径当中有重要作用.而泛素特异性蛋白酶是去泛素化酶家族中的一个亚家族,与肿瘤发生有着不可替代的联系.该文主要从细胞周期调控、DNA损伤修复、信号通路调控等方面来介绍泛素特异性蛋白酶与肿瘤发生和治疗的关系.
-
去泛素化酶与肿瘤发生及发展关系的研究进展
去泛素化酶具有逆转泛素化的作用，其大多数研究还保留在分子生物学领域，在转化医学研究中尚未引起充分的重视。目前研究发现，去泛素化酶的目的蛋白通过各种途径影响肿瘤的发生、发展，如细胞凋亡和自噬、炎性反应和肿瘤的关系、肿瘤缺氧、肿瘤信号通路、细胞周期的调节和DNA损伤等。现就去泛素化酶与肿瘤发生、发展的关系及研究进展作一综述。
-
泛素特异性蛋白酶7的表达与男性不育的相关性
目的 探讨弱精子症(asthenozoospermia)和少弱精子症(oligoasthenozoospermia)患者精子中泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin specific peptidase 7,USP7)的表达及其与男性不育的相关性.方法 随机选取就诊于重庆医科大学附属第二医院妇产科生殖医学中心的不育症患者120例,根据2010年世界卫生组织标准进行精液参数常规分析,包括精子浓度和运动能力,分为弱精子症组(A组)37例、少弱精子症组(OA组)26例和正常精子(normozoospcrmia)组(N组)57例.采用免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测USP7在人精子中的定位与表达变化,并进行相关性分析.结果 USP7定位于精子尾部中段和主段,与N组(1.63±0.76)相比,在A组(0.86±0.53)或OA组(0.62±0.43)精子中USP7蛋白的表达下降(P＜0.01).经相关分析,USP7蛋白水平与精子浓度(r=0.455 0,P=0.005 3)、前向运动精子百分率(r=0.431 2,P=0.008 7)和总活动率(r=0.443 8,P=0.006 7)呈正相关.结论 USP7表达下降与人精子活力和浓度降低有关,其可作为评估男性生育力的指标之一.
-
BAP1及其抑癌作用研究新进展
BAP1是泛素羧基末端水解酶家族中的一员,其基本功能是去除底物蛋白质的泛素化修饰.BAP1还是多种细胞功能调控的关键分子,通过依赖或不依赖其去泛素化功能,调节基因表达、细胞周期、细胞分化、细胞凋亡和DNA损伤应答等.由于BAP1在细胞内的重要作用,其基因突变或表达水平的下调能够显著提高多种肿瘤的易患性,但具体的致病机制目前尚不清楚,有待进一步的研究,这也为未来肿瘤治疗带来新的契机.
-
蛇床子素增强TNF-α对骨肉瘤细胞凋亡诱导活性及机制研究
目的：观察蛇床子素增强肿瘤坏死因子对骨肉瘤细胞的凋亡能力及其机制。方法将骨肉瘤细胞系HOS分为对照组、TNF-α组及蛇床子素联合TNF-α组和蛇床子素+TNF-α+CYLD siRNA组；MTT法检测HOS细胞的细胞活力，Annexin V/PI染色检测HOS细胞的凋亡，免疫共沉淀联合Western blot法检测HOS细胞RIP1蛋白的泛素化，Western blot法检测HOS细胞caspase-8的活化和CYLD去泛素化酶的相对表达量。结果与对照组比较，TNF-α组、蛇床子素+TNF-α组对HOS细胞活力的抑制率增加[（12.5±0.9）％、（58.6±3.8）％比0，P﹤0.05]，TNF-α组、蛇床子素+TNF-α组对HOS细胞凋亡诱导率提高（8.3±0.5）％、（39.9±2.5）％比（1.9±0.3）％，P﹤0.05]，而蛇床子素+TNF-α+CYLD siRNA组的HOS细胞活力抑制率、HOS细胞凋亡诱导率均低于蛇床子素+TNF-α组[（22.1±1.2）％比（58.6±3.8）％，P﹤0.05；（13.5±0.9）％比（39.9±2.5）％，P﹤0.05]。与对照组、TNF-α组比较，蛇床子素+TNF-α组RIP1泛素蛋白相对表达量降低（0.28±0.02比1.00±0.07、0.81±0.06，P﹤0.05），蛇床子素+TNF-α组活化的caspase-8蛋白的相对表达量明显提高（0.46±0.04比0.01±0.01、0.08±0.02，P﹤0.05），蛇床子素+TNF-α组CYLD蛋白的相对表达量也明显增加（0.81±0.05比0.28±0.02、0.30±0.02，P﹤0.05）。与蛇床子素+TNF-α组比较，蛇床子素+TNF-α+CYLD siRNA组RIP1泛素蛋白相对表达量增加（0.77±0.05比0.28±0.02，P﹤0.05），显示CYLD siRNA能显著抑制蛇床子素对TNF-α的协同作用。结论蛇床子素通过上调去泛素化酶CYLD的表达水平，促进TNF-α依赖的RIP1蛋白的去泛素化，进而诱导骨肉瘤细胞caspase-8的活化和凋亡的发生。
-
雷公藤红素促进RIP1蛋白的去泛素化增强TNF-α对结肠癌细胞的凋亡诱导活性的研究
目的 探讨中药活性成分雷公藤红素对TNF-α体外抗结肠癌活性的影响并研究其机制.方法 用雷公藤红素联合TNF-α体外治疗结肠癌细胞系SW480,MTT法检测SW480细胞的细胞活力.SW480细胞用雷公藤红素联合TNF-α治疗后,Annexin V/PI染色法检测细胞的凋亡,Western blot法检测细胞caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化和对CYLD蛋白表达的影响,并用免疫共沉淀法检测SW480细胞RIP1蛋白的泛素化水平.结果 雷公藤红素联合TNF-α对结肠癌细胞系SW480的细胞活力抑制率和凋亡诱导活性均显著高于雷公藤红素及TNF-α单治疗组.雷公藤红素联合TNF-α对SW480细胞caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化显著高于雷公藤红素及TNF-α单治疗组,且两者联合治疗后,caspase-8的活化时间显著早于caspase-9和caspase-3.SW480细胞用雷公藤红素联合TNF-α治疗后,其RIP1蛋白的泛素化水平显著低于雷公藤红素及TNF-α单治疗组.进一步研究发现,雷公藤红素能显著诱导SW480细胞CYLD蛋白的表达,而TNF-α对CYLD的表达水平无影响,当用小干扰RNA沉默CYLD的表达后,雷公藤红素对TNF-α的协同效应丧失.结论 雷公藤红素通过促进RIP1蛋白的去泛素化增强TNF-αL对结肠癌细胞的凋亡诱导活性.
-
HAUSP表达水平对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨调控疱疹病毒相关泛素特异性蛋白酶(HAUSP)对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建HAUSP过表达及低表达质粒,转染胶质瘤 U87、U251细胞,上调或下调胶质瘤细胞中 HAUSP表达水平.荧光定量PCR、Western blot检测胶质瘤细胞中HAUSP mRNA和蛋白表达水平;利用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡变化.同时检测各组细胞NANOG mRNA 和蛋白表达情况.结果 成功构建稳定HAUSP过表达和低表达U87、U251细胞株;与空白对照组相比,HAUSP过表达组细胞中,HAUSP的mRNA、蛋白水平均明显增加,NANOG mRNA水平无明显变化,但NANOG蛋白水平增加,同时细胞增殖能力增强,细胞凋亡水平降低;与空白对照组相比,HAUSP干扰组细胞中,HAUSP的mRNA、蛋白水平表达均降低,NANOG mRNA水平无明显变化,但NANOG蛋白水平降低,同时细胞增殖能力减弱,细胞凋亡水平增加.结论 HAUSP过表达可促进胶质瘤细胞的增殖,这一过程中伴随着NANOG蛋白水平的增高.因此,HAUSP可能通过维持NANOG去泛素化状态而维持胶质瘤细胞的增殖活性.
-
去泛素化酶影响低氧诱导因子-1α泛素化过程的研究进展
低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)是一种具有氧依赖性的核转录调控因子。在缺氧条件下HIF-1α大量聚集于细胞浆，继而转入细胞核促进靶基因转录表达，增强肿瘤的增殖、侵袭和转移能力；常氧条件下，HIF-1α的合成与降解水平保持相对平衡，其降解主要通过泛素-蛋白酶体途径实现。大量研究已经证实，去泛素化酶不仅可以有效逆转HIF-1α的泛素化-蛋白酶体降解过程，也可以通过各种途径促进肿瘤的发生发展，本文就去泛素化酶影响HIF-1α泛素化过程的作用机制作一综述。
-
头帕肿瘤综合征蛋白与肿瘤坏死因子受体介导的坏死样凋亡
头帕肿瘤综合征蛋白(cylindromatosis，CYLD)是一种去泛素化酶，其C-末端USP结构域具有催化功能，可移除受体相互作用蛋白激酶1(receptor interacting protein kinase 1，RIPK1)的K63连接泛素链，调节RIPK1的泛素化水平，从而参与调节肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1， TNFR1)介导的RIPK依赖的细胞坏死样凋亡等病理生理过程。阐明CYLD对RIPK1去泛素化调节的详细机制，寻找针对CYLD的特异性抑制剂，可为与坏死样凋亡相关的损伤与疾病提供治疗的新策略。
-
HAUSP调控网络在肿瘤的研究进展
HAUSP(又称为USP7)是泛素特异性修饰酶家族(ubiquitin specific processing enzymes,USP)成员之一,能催化水解泛素分子C-末端的肽链连接,发挥去泛素化作用,参与调节多种癌蛋白、抑癌蛋白的细胞内水平以及亚细胞定位,影响转录因子活性,在肿瘤的发生、发展中有着重要作用.本文旨对HAUSP调控网络在肿瘤中的研究进展进行综述.
关键词： 脑肿瘤 泛素特异性修饰酶家族 去泛素化 治疗 -
乳腺癌1号基因相关蛋白在肾透明细胞癌中的表达及与临床特征及预后的关系
目的 探讨乳腺癌1号基因相关蛋白(BAP1)在肾透明细胞癌中的表达及与临床特征及预后的关系.方法 选取肾透明细胞癌样本共136例,采用免疫组化染色的方法检测样本中的BAP1表达情况,分析BAP1表达与患者临床资料的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线评估BAP1表达与肾透明细胞癌患者预后的关系.结果 癌组织中BAP1表达阳性率为54.4％,癌旁组织的BAP1表达阳性率为69.1％,癌旁组织的BAP1阳性率显著高于癌组织(χ2=6.227,P=0.013),肾透明细胞癌组织BAP1表达阴性的患者其肿瘤大径>4 cm、pT3～4、TNM分期Ⅲ～Ⅴ期和Fuhrman分级3～4级的比例显著高于癌组织BAP1表达阳性的患者(P<0.05),BAP1表达阳性的患者其预后显著优于表达阴性的患者,差异有统计学意义(HR=0.382,95 CI％:0.193～0.755,P=0.0056).结论 BAP1在肾透明细胞癌患者病情进展中具有重要作用,BAP1表达与临床分期及生物学行为密切相关,且其癌组织中阳性表达患者与预后不良相关.
-
去泛素化酶Rpn11在套细胞淋巴瘤中的表达及其临床病理意义
目的:探讨去泛素化酶Rpn11蛋白在套细胞淋巴瘤(MCL)中的表达及其临床病理意义.方法:收集20例初治MCL的标本及资料,以10例反应性增生淋巴组织标本为对照,免疫组化检测组织中Rpn11蛋白的定位及表达,分析Rpn11表达与患者的临床病理指标的关系.结果:Rpn11蛋白定位于细胞核和细胞浆.MCL病理组织中Rpn11蛋白表达阳性率85％,高于对照组织40％(P=0.03).套细胞淋巴瘤组织中Rpn11蛋白表达的阳性率与患者的Ann Arbor分期、血清白蛋白水平、Ki-67指数均相关(P＜0.05),与呈阴性表达的MCL比较,Rpn11阳性者分期更晚、白蛋白水平更低、Ki-67指数更高.而Rpn11表达与患者的MIPI分组、B症状、骨髓浸润、β2-微球蛋白无关(P＞0.05).结论:Rpn11蛋白在MCL病理组织中的表达较对照组织为高,Rpn11可能是MCL预后较差的指标.
-
去泛素化酶X染色体连锁的泛素特异肽酶9的研究进展
X染色体连锁的泛素特异肽酶9(ubiquitin-specifitin peptidase 9 x-Linked,USP9X)是去泛素化酶中的一种.泛素化与去泛素化是重要的蛋白质翻译后修饰,去泛素化酶能从特异性底物上移除泛素异肽酶类从而逆转泛素化进程.USP9X在许多生物进程(包括胚胎发育、细胞黏着与极化、凋亡、转录调控等)中都有着重要的作用.迄今为止,已发现USP9X在多种类型的恶性肿瘤中都存在着表达异常,而且与肿瘤的分期及预后相关,甚至还可能参与了肿瘤化疗的耐药,是近年来研究的热点.因此,针对USP9X的靶点治疗将会为难治性肿瘤开辟出一条新的路径,对其更进一步研究有着深远意义.
关键词： 去泛素化 X染色体连锁的泛素特异肽酶9 肿瘤 耐药
