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枸杞多糖对锰中毒小鼠神经发生和学习记忆的影响
目的 探讨枸杞多糖(Lyeium barbarum polysaccharides,LBP)对锰中毒小鼠神经发生和学习记忆的影响.方法 选择健康成年昆明小鼠随机分5组,分别为对照组,锰中毒组,锰中毒加LBP高、中、低剂量组.LBP和氯化锰分剐采用灌胃和腹腔注射方法 给药.用Morris水迷宫训练测试其空间学习争记忆能力;用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记神经发生细胞.结果锰中毒组平均逃避潜伏期高于对照组(P＜0.05),穿越平台区次数明显低于对照组(P＜0.05);锰中毒加LBP各剂量组海马齿状回(DG)内BrdU阳性细胞数目显著高于锰中毒组(P＜0.05).结论 LBP可能通过促进海马神经发生,从而影响小鼠的学习记忆能力.
关键词： 枸杞多糖 锰中毒 学习记忆 神经发生 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 -
BrdU作为脂肪干细胞标记示踪法的可行性
目的:研究BrdU标记猪脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的佳剂量及时间,探讨其作为干细胞标记示踪方法的可行性.方法:自中华实验猪背部提取脂肪组织,采用贴壁法分离培养ADSCs,取第3代细胞以终浓度分别为10、15、20、25及30 μmol/L BrdU进行标记:另一孔不含BrdU作为对照组,分别培养12、24、48、72及96 h.免疫荧光法检测各组细胞BrdU标记率,找出BrdU的佳标记方法,通过台盼蓝排斥试验、MTT及细胞凋亡检测,观察BrdU对ADSCs生长情况的影响.对第3代的ADSCs采用佳标记方法后更换普通培养基继续培养,适时传代,连续检测第4、5、6、7、8代ADSCs的BrdU标记率.结果:原代培养的ADSCs的形态主要为长梭形,第3代ADSCs经BrdU标记后胞核呈红色荧光,随浓度的升高及时间的延长,BrdU阳性标记率逐渐升高,以终浓度20μmol/L BrdU标记48 h后阳性率达90%以上,且连续传5代标记率仍达40%.MTT、台盼蓝排斥试验及细胞凋亡检测发现BrdU对ADSCs生长增殖基本无影响.结论:BrdU标记ADSCs的佳剂量和时间为20 μmol/L和48 h,该方法标记率高,对细胞影响小,可用于动态研究ADSCs在移植体内生长、分化.
关键词： 脂肪干细胞 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 标记 -
BrdU体外标记脂肪成体干细胞的实验研究
目的 探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记脂肪成体干细胞(adipose-derived adult stem cells,ADASCs)的可行性.方法 将兔脂肪组织用Ⅰ型胶原酶消化,分离培养ADASCs,第三代ADASCs融合约50%时,加入终浓度25 μmol/L的BrdU孵育48h,BrdU免疫组化染色,检测标记情况.然后通过显微镜下形态学观察、台盼蓝排斥试验、MTT试验,观测BrdU对ADASCs生长增殖的影响.结果 BrdU对ADASCs的生长增殖基本没有影响.结论 BrdU标记ADASCs可行且较理想.
关键词： 脂肪成体干细胞 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 标记 -
甘草黄酮的抗抑郁作用及对海马脑区神经再生的保护作用
观察宁夏地区栽培甘草( Glycyrrhiza uralensis Fisch.)中获得的甘草总黄酮提取部位(licorice flavonoids,LF)对大鼠慢性不可预见性应激抑郁模型(chronic unpredicted stress model of depression,CUs)的干预作用及对模型造成的海马齿状回(dentate gyrus,DG)颗粒细胞层下区(subgranular zone,SGZ)神经再生(neurogenesis)能力损害的保护作用,研究LF抗抑郁作用及可能的机制.通过对大鼠实施9种不同的刺激建立慢性应激抑郁模型,造模28天的同时采用不同剂量的LF(300、100和30 mg·kg-1)连续干预.采用旷场实验(open field test,OFT)、强迫游泳实验(forced swimming test,FST)和悬尾实验(tail suspension test,TST)判断LF的抗抑郁作用,放免法测定血清皮质酮含量,共聚焦显微镜对海马齿状回SGZ中5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5'-bromo-2'-deoxyuridine,BrdU)标记的新生祖细胞(progenitor)进行分析、计数.与模型组相比,LF能够增加旷场实验中抑郁模型大鼠的直立次数、穿格数及减少粪便粒数；减少强迫游泳实验和悬尾实验中抑郁模型大鼠的不动时间；300 mg·kg-1剂量LF能降低血清皮质酮水平,同时恢复大鼠海马齿状回SGZ中BrdU标记的新生祖细胞数量.结果提示,甘草总黄酮提取部位对慢性不可预测应激引起的大鼠抑郁行为具有良好的抗抑郁药理活性,并且在较大剂量下能对应激引起的海马神经再生损害起到保护作用.
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丹酚酸B对脑缺血再灌注大鼠神经细胞损伤和神经发生的影响
本文旨在观察丹酚酸B对脑缺血再灌注大鼠神经发生和神经细胞损伤的影响,探讨丹酚酸B促进机体功能恢复的作用环节.研究采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,治疗给药,用BrdU法观察海马齿状回颗粒下层(sub-granular zone,SGZ)和侧脑室下层(sub-ventricular zone,SVZ)神经发生的变化;尼氏体染色观察神经细胞损伤;平衡杆法观察肢体功能恢复.结果显示,缺血后再灌注7 d,模型组SGZ和SVZ的BrdU细胞明显多于假手术组(P＜0.05),丹酚酸B(10 mg·kg-1)显著增加SGZ和SVZ的BrdU细胞数目(P＜0.01 vs模型组);缺血再灌注14 d,模型动物缺血侧海马CA1区和皮层神经细胞明显减少,丹酚酸B(10 mg·kg-1)明显改善神经细胞损伤(P＜0.01 vs模型组);同时,丹酚酸B(10 mg·kg-1)明显促进缺血动物肢体功能恢复.以上结果表明,丹酚酸B能够增加脑缺血大鼠SVZ和SGZ的BrdU细胞数目,改善缺血区神经细胞损伤,促进肢体功能恢复,提示促进神经发生是丹酚酸B改善脑功能的重要环节.
关键词： 丹酚酸B 脑缺血 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 海马 -
5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的技术探讨
①目的探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记骨髓间充质干细胞的可行性.②方法利用密度为1.073g/mL的Percoll分离骨髓的单核细胞,以含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基培养与扩增MSCs细胞,纯度可达95%左右.用BrdU标记骨髓间充质干细胞24、48、72和96小时后的检测标记率.③结果随着标记时间的延长,标记率逐渐增高,标记72小时后标记率在85%以上.④结论用BrdU标记骨髓间充质干细胞的佳时间是72小时,佳浓度为10μg/mL.
关键词： 骨髓间充质干细胞 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 骨髓细胞移植 -
全骨髓贴壁法获纯化骨髓间充质干细胞向神经干细胞的诱导分化
目的:来源于骨髓间充质干细胞的神经干细胞是近研究的一个热点.实验拟进一步验证通过全骨髓贴壁法分离纯化骨髓间充质干细胞并诱导分化为神经干细胞的效率,并对其的体内外标记进行了观察.方法:实验于2006-11/2007-05在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所完成.①实验材料:选取出生4周左右Wistar大鼠,雌雄不拘,SPF级,体质量200 g左右,由青岛市实验动物和动物实验中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:选用出生4周左右Wistar大鼠,由其股骨和胫骨分离纯化骨髓间充质干细胞,加碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子诱导其分化为神经干细胞,并进行免疫组织化学鉴定.以5.溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记神经干细胞,在24孔板中进行细胞免疫组织化学和免疫荧光鉴定.将标记的神经干细胞定位注入大鼠基底节区,1周后取脑作石蜡切片,进行免疫组织化学和免疫荧光染色.结果:获得了较纯化的骨髓间充质干细胞,经诱导72 h后,部分细胞增殖分裂成小圆形,呈团簇状半悬浮状态.继续培养72 h可见细胞呈现典型神经元样改变,细胞伸出两个或多个突起,胞体呈多角形或不规则形,折光性较强,细胞突起之间相互连接成网状,可见细胞核及核仁,经诱导后有巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞表达.采用BrdU掺入DNA合成期的神经干细胞,1周后体内外标记阳性率＞85%.结论:采用全骨髓贴擘法可获得较纯化的骨髓间充质干细胞,其在适宜的诱导分化条件下可诱导分化神经干细胞.BrdU可作为神经干细胞体内示踪的理想标记物.
关键词： 骨髓间充质干细胞 神经干细胞 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 诱导分化 -
BrdU标记法检测不同年龄阶段小鼠神经前体细胞的增殖潜能
背景:BrdU是胸腺嘧啶核苷类似物,常用来标记前脑室管膜下区具有增殖潜能的神经前体细胞.目的:建立不同年龄阶段BrdU标记方法,系统分析不同年龄阶段神经前体细胞增殖特点以及变化规律.方法:选取胚胎期小鼠、新生小鼠、成年小鼠和老年小鼠各5只,腹腔注射BrdU,观察不同年龄阶段神经前体细胞增殖潜能及不同年龄阶段前脑衰老细胞,探讨微环境对神经前体细胞增殖潜能的影响.结果与结论:胚胎期小鼠、新生小鼠、成年小鼠和老年小鼠前脑室管膜下区BrdU+细胞分别为(897.20±22.38),(262.17±26.26),(76.67±5.63),(43.8±2.61)个,随年龄增加细胞增殖潜能逐渐降低(P < 0.05).成年小鼠和老年小鼠脑室周围有大量β-半乳糖苷酶染色阳性衰老细胞,说明随年龄增加脑内β-半乳糖苷酶染色活性增强,衰老细胞逐渐增多,神经前体细胞生存微环境失衡可能与神经前体细胞增殖潜能下降有关.
关键词： 神经前体细胞 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 β-半乳糖苷酶 增殖 衰老 -
神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤
背景:近年来,神经干细胞移植已成为治疗神经退行性疾病和中枢神经系统损伤的研究热点.目的:探讨神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的研究进展.方法:以“neural stem cells,stem cell transplantation,ischemic brain injury”为检索词,检索Pubmed 数据库1990至2012年相关文献;以“神经干细胞,干细胞移植,缺血性脑损伤”为检索词,检索CNKI数据库2005至2012年相关文献.分析神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的内容,排除重复研究.结果与结论:①体外分离培养的神经干细胞有胚胎来源、脐血来源和成体来源,主要采用机械分离法和胰酶消化法进行分离.②目前体外培养的神经干细胞分离鉴定的标记物有巢蛋白、波形蛋白1、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、神经元特异性烯醇化酶等.③神经干细胞的分化调节是通过正负双重作用实现的,负性调节是通过对称性的分裂来增加神经干细胞数量,包括Notch信号途径和一些生长因子等.正性调节诱导神经干细胞分化,包括参与细胞合成的骨形态发生蛋白信号途径等.④神经干细胞移植的时间窗选择在实验动物脑缺血两三周后,时间过早和过晚均不适合细胞的存活.神经干细胞通过脑立体定位仪直接进行脑内移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤,移植后可见细胞在局灶性脑缺血大鼠脑室内和梗死中心均可长期存活,并可广泛迁移,移植神经干细胞后观察到其运动行为学评分有明显提高.缺血性脑卒中的神经干细胞移植治疗还存在一些问题需要解决,未来的临床应用前景广阔,是缺血性脑卒中患者的新希望.
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脑心通对实验性脑缺血大鼠梗死体积和神经巢蛋白的影响
目的：观察缺血再灌注损伤（IRI）后大鼠不同时间点梗死体积、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记的阳性细胞和神经巢蛋白（Nestin）的表达，探讨脑心通对其影响。方法制作大鼠大脑中动脉缺血（MCAO）模型，2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测定大鼠脑缺血再灌注（IR）后梗死体积；免疫组化法测定第3、7、14天和21天缺血侧 BrdU标记的阳性细胞和Nestin的平均荧光强度值。结果 TTC染色发现IR后第7天大鼠脑梗死体积大，不同剂量的脑心通实验组与模型组间差异显著（P＜0.01）；IR第3天，模型组、不同剂量脑心通组海马齿状回颗粒下层（SGZ）及室管膜下区（ SVZ）已出现BrdU阳性细胞和Nestin表达，第7天时其平均荧光强度值高，各组内不同时间点BrdU阳性细胞和 Nestin平均荧光强度值差异显著（P＜0.01）；而组间比较无差异（P＞0.05）。结论脑心通胶囊对减轻 IR损伤后实验鼠梗死体积有一定的促进作用；但未发现脑心通胶囊对SVZ、SGZ区域BrdU阳性细胞和Nestin表达有促进作用。
关键词： 脑缺血再灌注 神经巢蛋白 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 脑心通胶囊 梗死体积 -
BrdU标记家兔成纤维细胞的体外及体内实验观察
目的 用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记家兔皮肤成纤维细胞,确定佳标记方法,探讨其作为成纤维细胞示踪方法的可行性.方法 取12-16周龄健康中国大耳白兔颈部皮肤,胶原酶消化,分离并培养成纤维细胞.取第3代细胞,加入终浓度分别为2.5、5、10和15μg/ml的BrdU共培养,MTT法检测细胞的生长情况.分别用2.5、5、10和15μg/ml的BrdU标记第3代细胞,标记6、12、24和48 h后,采用免疫荧光法检测各组细胞的标记阳性率.以佳剂量及时间标记家兔成纤维细胞,与壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶混合后,注入兔颈内动脉,1周后,免疫荧光法观察植入细胞.结果 加入BrdU 48 h内,各浓度的BrdU对家兔成纤维细胞生长的影响均不明显.标记剂量及标记时间均可影响标记率,但标记时间的影响更大.5 μg/ml剂量标记24 h,标记率可达(94.50±2.08)%,再加大标记剂量或延长标记时间,标记率提高不明显.以该方法标记的家兔成纤维细胞注入家兔颈内动脉1周后,可在兔颈内动脉观察到大量标记细胞.结论 BrdU对家兔成纤维细胞的佳标记方法为5μg/ml标记24 h,该方法对细胞影响小,标记率高,适用于成纤维细胞体内示踪.
关键词： 成纤维细胞 组织工程 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 细胞标记 -
BrdU体内示踪骨髓基质干细胞生物学状态的效果分析
目的:探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)体内示踪骨髓基质干细胞(BMSCs)生物学状态的效果.方法:抽取健康成年比格狗骨髓,在传代培养中进行BrdU标记并鉴定,体外实验中测定细胞周期、凋亡率和细胞活力;在体内实验中将标记BrdU的骨髓基质干细胞植入自体股骨头缺损处,另一侧单纯植入自体骨作为对照,记录成骨量与分子标记物的表达情况.结果:骨髓基质干细胞的BrdU体外标记率为85.2％.BrdU组的细胞凋亡率为3.62+ 1.33％,未标记组为3.52+ 1.08％;BrdU组与未标记组的细胞成活率分别为96.31+ 1.39％和95.20+ 2.10％,两组对比差异均无统计学意义(P＞0.05).移植侧BrdU标记的骨髓基质干细胞免疫组化观察可见BrdU免疫组化染色阳性,阳性率为81.6％.骨髓基质干细胞移植侧缺损区的骨钙素、I型胶原阳性细胞表达数量与强度明显高于对照侧缺损区;骨髓基质干细胞移植侧成骨量为17.46±2.12％,对照侧为9.06+ 1.24％,两两对比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:BrdU在体外示踪骨髓基质干细胞能有效反映细胞的生物学状态,体内示踪显示移植的骨髓基质干细胞能成活,能促进骨组织形成和坏死骨修复.
关键词： 骨髓基质干细胞 生物学状态 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 体内示踪 生物学标记 -
枸橼酸咖啡因对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞增生与凋亡及长期学习能力的影响
目的：研究枸橼酸咖啡因(CC)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经细胞增生与凋亡及长期学习记忆能力的影响。方法7日龄SD新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组、CC组，每组16只；HIBD组及CC组经左颈总动脉结扎并缺氧制作HIBD模型，CC组在HI前、HI后0 min、24 h、48 h、72 h给予CC 20 mg/kg腹腔注射，假手术组和HIBD组分别在同一时间点给予等量生理盐水腹腔注射；同时从生后10日龄起腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记新生细胞，剂量50 mg/kg，每12 h 1次，共5次。12日龄时每组随机选取8只大鼠处死，免疫组织化学染色检测海马齿状回颗粒下层5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)和海马CA1区活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(活化Caspase-3)的表达情况， TUNEL法测定海马CA1区神经细胞凋亡情况，其余各组大鼠28日龄时行Y迷宫学习和记忆能力测试。结果三组新生大鼠脑组织中均可见BrdU阳性细胞，差异有统计学意义(F=101.38，P<0.01)；HIBD组、CC组BrdU阳性细胞数均较假手术组增多，差异有统计学意义(P<0.05)。三组新生大鼠海马CA1区均可见活化 Caspase-3阳性细胞，差异有统计学意义(F=379.77，P<0.01)；CC组活化 Caspase-3阳性细胞较HIBD组显著减少，但仍多于假手术组，差异有统计学意义(P<0.05)。三组新生大鼠海马CA1区中均可见TUNEL阳性细胞，差异有统计学意义(F=505.92，P<0.01)，以HIBD组多，假手术组少，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Y迷宫实验结果，各组大鼠达标所需训练总次数的差异有统计学意义(F=32.05，P<0.01)，以HIBD组所需训练次数多。24 h后正确反应率在三组间的差异也有统计学意义(F=24.99，P<0.01)，以HIBD组大鼠正确反应率低。结论枸橼酸咖啡因可以改善HIBD大鼠长期学习记忆力，其机制可能与通过减少缺氧缺血后神经细胞的凋亡有关。
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有氧训练对阿尔茨海默病模型大鼠海马齿状回神经发生的影响
目的:观察有氧训练对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠齿状回(DG)神经发生的影响.方法:SD大鼠48只,随机分为假手术组(侧脑室注射生理盐水),有氧训练组(侧脑室注射Aβ25-35+4周有氧训练)和实验组(侧脑室注射Aβ25-35).3组大鼠行Morris水迷宫行为学检测,免疫组织化学方法检测海马DG BrdU阳性细胞数,以确定有氧训练对细胞存活的影响;微管相关蛋白免疫组化染色观察新生神经元的突起生长.结果:①与假手术组比,实验组逃避潜伏期显著延长(P＜0.05);有氧训练组与实验组比,逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05);有氧训练组逃避潜伏期与假手术组比,差异无统计学意义.②与假手术组比,实验组DG BrdU阳性细胞数显著减少(P<0.05).③与假手术组比,实验组DG新生神经元突起的数量明显减少(P<0.05).④与实验组比,有氧训练可改善DG BrdU阳性细胞的显著减少(P<0.05)、保护神经元突起的生长(P<0.05).结论:Aβ25-35能诱导AD大鼠模型的建立,损害新生神经元突起生长和新生神经元的存活;有氧训练可改善Aβ25-35损害的大鼠新生神经元突起生长和新生神经元的存活.
关键词： 阿尔茨海默病 神经发生 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 微管相关蛋白 -
壳寡糖对施万细胞增殖能力影响的研究
目的:研究壳寡糖(chitooligosaccharides,COS)对大鼠施万细胞活力和增殖能力的影响,探讨其促神经再生的机制.方法:体外培养并纯化大鼠施万细胞,S100β免疫荧光细胞化学染色和流式细胞仪对细胞纯度进行鉴定.四甲基偶氮唑盐比色法(methyl-thiazol-tetrazolium,MTT)观察不同质量浓度COS(0.25、0.5、1.0 mg/mL)作用24 h和48 h对施万细胞活力的影响.Hochest33342标记细胞,采用细胞计数法,绘制壳寡糖作用的施万细胞生长曲线.5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)标记观察COS作用48 h对施万细胞增殖的影响.结果:免疫荧光细胞化学染色和流式细胞仪结果显示施万细胞纯度可达95%以上.MTT结果显示培养48 h后,中、高剂量的COS组(0.5、1.0 mg/mL)可使施万细胞活力增加.生长曲线显示,与对照组相比,COS可促进施万细胞增殖.BrdU标记结果显示,COS可显著增加BrdU阳性细胞数.结论:COS可促进施万细胞的活力和增殖能力.
关键词： 壳寡糖 施万细胞 四甲基偶氮唑盐比色法 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 增殖 大鼠 -
兔骨髓间充质干细胞的分离、体外培养、鉴定和体外标记
目的:探讨分离、体外培养、鉴定及体外标记兔骨髓间充质干细胞(bone marrw-derived mesenchymal stem cells,MSCs)的方法,为进一步的实验研究打下基础.方法:选择健康幼龄新西兰大耳白兔,于双侧髂后上嵴及胫骨上端内侧部行骨髓穿刺提取骨髓.采用全骨髓培养法(直接贴壁法)分离培养MSCs,对第2、3、4、5、6代MSCs应用MTT法测定生长曲线,分析MSCs的生长规律.对MSCs进行形态学观察,通过流式细胞术对CD34、CD44、CD45、CD105这4种MSCs表面抗原进行鉴定,证明所培养的细胞为MSCs.采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxyuridine,BrdU)体外标记兔MSCs,检测其标记阳性率.结果:全骨髓培养法培养的原代MSCs接种4天后可以被观察到,形态均匀成梭形,生长增殖迅速,符合MSCs生长的特性,7～8 d MSCs融合接近80%,传代培养生长良好.MSCs生长曲线呈S型,由生长曲线分析可知,MSCs在培养第4～8 d为高速生长期,MSCs在第3～5代生长为旺盛.经流式细胞术鉴定,CD34(-)、cD45(-)、CD44(+)、CD105(+),证明所培养的细胞为较纯的MSCs.BrdU体外标记兔MSCs的阳性率达到85%～90%.结论:应用本实验方法,可以分离、纯化培养兔骨髓问充质干细胞且操作简便,效率高,经济实用.所培养的MSCs体外生长稳定、增殖速度快、贴壁率高、可连续传代,可用于MSCs功能及应用的进一步研究.应用BrdU体外标记兔MSCs是安全可靠的.
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利福平对U20S细胞增殖和代谢的影响
目的:观察利福平对U20S细胞增殖和代谢的影响.方法:常规培养人U20S细胞株,分别加入不同浓度的利福平(50、250、500、750、1000μg/mL),分别采用四唑盐(MTT)法测定24h、48h细胞增殖率,测定24h细胞外液LD含量、LDH活性,ELISA法测定细胞5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)摄取量.结果:利福平可以剂量依赖性地抑制细胞增殖(P<0.01),增加细胞外液LD含量和LDH活性(P<0.05,P<0.01),降低细胞DNA合成量.结论:高浓度利福平明显抑制U20S细胞的增殖和DNA合成,并影响细胞的代谢能力,提示在骨关节结核局部用药时需注意控制药物浓度.
关键词： U20S细胞 增殖 代谢 利福平 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 -
枸杞多糖对Aβ1~40诱导大鼠学习记忆功能减退的影响
目的：探讨枸杞多糖（LBP）对阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆功能减退的影响。方法 SD健康大鼠随机分为5组：AD模型组，LBP高、中、低剂量干预组，空白对照组，每组24只。通过双侧海马注射Aβ1~40，建立AD大鼠模型。采用LBP连续灌胃6周作用于AD大鼠，观察各组大鼠行为学、海马SOD、GSH-Px活性和MDA含量以及BrdU标记阳性细胞表达的变化。结果（1）与AD模型组比较，LBP低、中、高剂量组潜伏期明显缩短、过平台次数明显增加（P<0.05）。（2）与AD模型组比较，LBP低、中、高剂量组海马SOD、GSH-Px活性明显升高、MDA含量明显降低（P<0.05）。（3）与AD模型组比较，LBP低、中、高剂量组齿状回BrdU阳性细胞表达明显增多（P<0.05）。（4）LBP中、低剂量组比较，上述各指标均有明显差异（P<0.05）。LBP高、中剂量组比较，上述各指标均无明显差异（P>0.05）。结论 LBP可能通过提高海马SOD、GSH-Px活性、降低MDA含量以及增强齿状回BrdU阳性细胞表达，改善AD大鼠学习记忆功能。
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电刺激小脑顶核对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的脑保护作用
目的 探讨电刺激小脑顶核对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的脑保护作用及其机制.方法 新生7日龄SD大鼠90只,随机分成假手术组、模型组、电刺激组,每组各30只.每组再分为A、B、C3组,每组各10只.采用结扎左侧颈总动脉并吸入氮氧混合气体2h制作新生大鼠HIBD动物模型.电刺激组手术后第2天即开始电刺激治疗,电刺激20 min/次,2次/d,其中A、B组电刺激7d,C组28d.假手术组、模型组不予电刺激治疗,相应时段仅予抓捉固定.所有A组处死前8h腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),B组不予药物.电刺激治疗7d后,A、B组均经40 g/L多聚甲醛心脏灌注后断头取脑组织,分别做连续冠状切片,免疫组织化学方法测定脑组织切片神经干细胞标志物BrdU和巢蛋白的表达.c组电刺激28d后行迷宫实验,检测电刺激对HIBD大鼠智能的影响.各组均同时进行脑组织切片HE染色.应用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 模型组BrdU和巢蛋白阳性细胞计数均低于假手术组(Pa＜0.05);假手术组BrdU和巢蛋白阳性细胞计数均低于电刺激组(Pa＜0.05).HE染色见假手术组神经细胞形态正常,胞质丰富,细胞排列整齐;模型组可见大量明显的坏死灶,神经细胞数量减少;电刺激组神经细胞变性坏死较少,多数细胞形态相对正常.迷宫实验显示模型组第1、2天达标所需的反应次数均明显多于假手术组(Pa＜0.05);电刺激组第1、2天达标所需反应次数也均明显多于假手术组(Pa＜0.05);但其明显少于模型组大鼠第1、2天达到标准所需的反应次数(Pa＜0.05).结论 电刺激小脑顶核可以通过促进脑组织神经干细胞的增殖与分化对HIBD大鼠发挥脑保护作用.
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BrdU示踪的恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞的免疫组化染色观察
目的 观察BrdU示踪标记的恒河猴血管内皮细胞移植替代同种异体角膜内皮细胞后角膜内表面免疫组化染色,探索血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞的可行性.方法 体外培养恒河猴视网膜脉络膜血管内皮细胞,培养增生至第2代后置于含BrdU(10μg· mL-1)的1640培养液中传代72 h,通过离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面,术后取角膜行HE染色及抗BrdU免疫组化染色,观察角膜后表面的细胞分布及有无后弹力膜样组织,并观察角膜后表面细胞能否被抗BrdU染色着染.结果 HE染色显示,实验组角膜内表面可见细胞层生长,细胞后方未见后弹力膜样物质,抗BrdU免疫组化染色阳性,示该细胞为培养的BrdU示踪的血管内皮细胞；对照组角膜组织HE染色显示,角膜内表面光滑,未见细胞样结构,BrdU染色呈阴性,未见棕黄色着色的细胞样组织.结论 BrdU可成功示踪标记体外培养的血管内皮细胞,恒河猴血管内皮细胞能够在撕除后弹力层的角膜内表面生长.
关键词： 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 角膜移植 恒河猴 免疫组化染色
