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齿瓣石斛的化学成分及其抗氧化活性
目的:了解齿瓣石斛的化学成分,明确其功效的物质基础,为其开发利用提供依据.方法:运用硅胶、Rp-18(十八烷基硅烷)和凝胶柱色谱法分离纯化齿瓣石斛的化学成分,并根据其理化性质和波谱数据鉴定化合物结构.采用ABTS法对得到的酚酸类成分进行抗氧化活性筛选.结果:从齿瓣石斛的乙醇提取物中分离得到9个化合物,分别鉴定为2,3,4,9-四氢-1H-吡啶骈[3,4-b]吲哚-3-甲酸(1),脱氧胸腺嘧啶核苷(2),腺苷(3),N-反-对香豆酰酪胺(4),N-反-对阿魏酰酪胺(5),4-羟基-3-甲氧基苯甲醛(6),对羟基苯甲醛(7),3,4-二羟基苯甲酸甲酯(8)和4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸(9)等9个化合物.其中化合物5有较好的清除抗氧化活性自由基(ABTS)的作用,其半数抑制率(IC50)为1.61 mmol·L-1；化合物9有较弱的清除抗氧化活性自由基(ABTS)的作用,其半数抑制率(IC50)为35.72 mmol·L-1.结论:所有化合物均为首次从齿瓣石斛中分离得到,其中化合物5和化合物9具有一定的抗氧化活性.
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不同真菌对2种药用石斛种子共生萌发的效应
兰科石斛属植物兜唇石斛Dendrobium aphyllum和齿瓣石斛D.devonianum均为传统中药材,有着极高的药用价值.研究利用3种从不同兰科植物中分离得到的内生真菌在不同光照条件下与这2种石斛植物种子在树叶、松树皮和椰糠混合基质上进行共生萌发试验.研究结果表明,胶膜菌属Tulasnella FDaI7菌株及瘤菌根菌属Epulorhiza FDd1菌株分别能有效地促进兜唇石斛和齿瓣石斛种子的萌发及幼苗建成,石斛与真菌存在共生专一性.共生培养60 d,接菌FDaI7的兜唇石斛种子,原球茎或幼苗形成率分别为14.46％,12.07％;接菌FDd1的齿瓣石斛种子,二者形成率分别为44.36％,42.91％.在2种光照条件下,已形成的原球茎均能够进一步发育为幼苗,而持续黑暗条件会导致幼苗白化或畸形.研究结果为2种石斛的野外回归奠定了理论基础,也为这2种药用石斛人工仿生态栽培的种苗扩繁提供了新的方法.
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不同内生真菌对齿瓣石斛幼苗生长的效应
石斛属植物根部存在大量功能未知的内生真菌,从中筛选获得生长阶段有效共生真菌是药用石斛仿生态栽培深入开展的关键.该研究利用单菌丝团分离法从齿瓣石斛植株根部分离得到的6株内生真菌,与齿瓣石斛无菌播种幼苗进行共生培养实验.培养90d以后,与对照组相比,FDdS-1,FDdS-2,FDdS-4菌株处理对幼苗产生明显致死或致病作用,而接种FDdS-5,FDdS-9,FDdS-12菌株处理的齿瓣石斛幼苗则健康生长,并表现出不同的生长效应,其中,FDdS-5菌株对幼苗的株高、鲜重、干重、茎粗和根数都有显著的促进作用,FDdS-9菌株仅对幼苗的株高有显著促进作用,而FDdS-12菌株则对齿瓣石斛幼苗的生长产生抑制作用.显微观察发现FDdS-5菌株处理的幼苗根部皮层形成菌丝团共生结构,可以判定FDdS-5为齿瓣石斛的菌根真菌.经分子鉴定,菌株FDdS-5和FDdS-9分别和蜡壳菌属Sebacina的2种真菌相似度高.将FDdS-5菌株应用于齿瓣石斛的仿生态栽培,可望能有效的促进齿瓣石斛幼苗生长和缩短幼苗生长周期,研究结果为齿瓣石斛的野外回归和人工栽培提供了技术支撑.
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齿瓣石斛的位点特异性PCR鉴别
目的设计出齿瓣石斛的位点特异性鉴别引物,仅通过PCR就能完成对齿瓣石斛真伪进行准确鉴别.方法根据齿瓣石斛及其他枫斗类、黄草类石斛的rDNA ITS序列数据库,设计了齿瓣石斛的位点特异性PCR鉴别引物JB-Chiban-01S和JB-Chiban-01X.然后,对38种石斛属植物模板DNA进行了PCR扩增,阳性者即为齿瓣石斛正品.结果当退火温度设定为58℃时,只有齿瓣石斛的模板DNA能被扩增出来,而其他的37种石斛属植物均为阴性.该鉴别反应重复性好,已在鉴别齿瓣石斛时发挥重要作用.结论运用位点特异性鉴别引物能成功地对齿瓣石斛进行PCR鉴别,与DNA测序鉴别方法相比,位点特异性PCR具有高效、准确、简便、省时等优点.
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多重位点特异性PCR鉴别霍山石斛、铁皮石斛与齿瓣石斛药材
为建立同时鉴别霍山石斛、铁皮石斛及齿瓣石斛的多重位点特异性PCR法,解决上述石斛属药材真伪掺杂的难题.通过比对石斛药材ITS及trnL-trnF序列,设计引物,建立多重PCR鉴别法,并对不同来源的霍山石斛、铁皮石斛及齿瓣石斛样品进行特异性扩增,根据特异性条带大小进行鉴别.结果在退火温度为61℃、循环数为35时,齿瓣石斛、铁皮石斛和霍山石斛分别可扩出584、397和211 bp的特异性条带.本文所建立的方法对齿瓣石斛和霍山石斛的低检测限为1.2 ng,铁皮石斛低于0.24 ng,其对铁皮石斛、齿瓣石斛和霍山石斛的混伪检出限分别为1％、1％和5％.表明多重位点特异性PCR法能特异性鉴别霍山石斛、铁皮石斛及齿瓣石斛.
关键词： 霍山石斛 铁皮石斛 齿瓣石斛 多重位点特异性PCR 掺伪鉴别 -
铁皮石斛中多糖和甘露糖含量测定方法的改进及与齿瓣石斛的比较研究
目的：改进铁皮石斛中多糖和甘露糖的含量测定方法并对铁皮石斛与齿瓣石斛中的多糖和甘露糖含量进行分析比较。方法：采用硫酸-苯酚法测定石斛中多糖的含量；采用高效液相色谱法测定石斛中甘露糖的含量。结果：多糖在2.54～12.87 mg· L-1范围线性关系良好（r＝0.9990），平均回收率为99.02％，RSD为2.6％（n＝6）；甘露糖的平均回收率为101.5％，RSD为1.7％（n＝9）。6批铁皮石斛药材多糖平均含量为45.94％，甘露糖平均含量为32.33％；9批齿瓣石斛药材多糖平均含量为45.12％，甘露糖平均含量为37.88％。结论：所建方法操作比较简单，准确可靠，重现性好，可用于控制铁皮石斛的质量。铁皮石斛与齿瓣石斛多糖含量相当，齿瓣石斛甘露糖含量高于铁皮石斛。
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齿瓣石斛化学成分研究
目的 研究齿瓣石斛的化学成分.方法 应用硅胶、凝胶和制备液相层析等方法分离得到单体化合物,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物的结构.结果 从齿瓣石斛体积分数95％乙醇提取物中分离得到25个化合物,分别鉴定为3-羟基-4′,5-二甲氧基联苄(1),3,4′,5-三羟基-3′-甲氧基联苄(2),3,4′,5-三羟基联苄(3),N-反式-香豆酰酪胺(4),N-反式-对羟基苯乙基咖啡酰胺(5),对羟基苯丙酰酪胺(6),N-顺式-香豆酰酪胺(7),2,5-二羟基4-甲氧基-9,10-二-氢菲(8),2,4,7-三羟基-9,10-二-氢菲(9),柚皮素(10),二氢松柏醇乙酸酯(11),对羟基桂皮酸乙酯(12),对羟基桂皮酸(13),对羟基苯丙酸(14),对羟基苯甲酸(15),原儿茶酸(16),erigesideⅡ(17),枸橼苦素(18),二氢丁香苷(19),leonuriside A(20),腺苷(21),β-谷甾醇(22),胡萝卜苷(23),(+)-丁香脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(24),蔗糖(25).结论 化合物1～21,24 ～ 25均为首次从齿瓣石斛中分离得到,其中,化合物1为首次从石斛属植物中分得,化合物5、7、11、12、18为首次从兰科植物中分得.
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齿瓣石斛研究进展
为推进齿瓣石斛产业发展,对齿瓣石斛的化学成分、药理作用以及繁殖技术作了全面综述,为产业发展提供参考.
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齿瓣石斛对大鼠的亚慢性毒性
目的 观察齿瓣石斛对大鼠的亚慢性毒性.方法 80只大鼠随机分为阴性对照组及齿瓣石斛低、中、高剂量组(4.5、9.0、18.0 g/kg),每组20只,连续给药90 d.其间观察大鼠一般情况(饮水、进食、毛色、行为、粪便、尿液),记录体质量和进食量,计算食物利用率;实验中期(第7周)和末期检测血常规(血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类)、血液生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、胆固醇、甘油三酯、血糖、尿素氮、肌酐);实验末期取主要脏器计算脏体比,进行组织病理学检查.结果 齿瓣石斛对大鼠一般情况、体质量、进食量、食物利用率、血常规、血液生化指标、脏体比无明显影响,主要脏器色泽、大小、形态结构无明显异常,显微镜下未发现明显组织病理学变化.结论 齿瓣石斛在90 d内对大鼠无明显亚慢性毒性,安全剂量为18.0 g/kg.
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齿瓣石斛提取物的急性毒性和遗传毒性
目的 探讨齿瓣石斛的急性毒性和遗传毒性.方法 20只ICR小鼠灌胃3次,每次间隔4h,观察7d,考察对小鼠的急性毒性;选用TA97a、TA98、TA1o0、TA1024株组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌在加和不加S9两种条件下设齿瓣石斛5个剂量组(32、160、800、4 000、20 000 μg/皿)行Ames试验;按齿瓣石斛5.0、10.0、20.0 g/kg进行小鼠精子畸形试验和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验考察遗传毒性.结果 齿瓣石斛对小鼠经口大耐受量大于45.0 g/kg;Ames试验显示,在加和不加S9时各剂量组回变菌落数与溶剂对照组相似;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和精子畸形试验结果均为阴性.结论 在本实验条件下,齿瓣石斛属无毒级物质,未见遗传毒性.
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超临界二氧化碳萃取齿瓣石斛
目的 采用超临界二氧化碳萃取(SFE)法萃取齿瓣石斛.方法 使用正己烷、异丙醇、乙酸乙酯、乙醇作为夹带剂.SFE萃取分两阶段和一阶段萃取,前者使用纯C02萃取,再添加夹带剂萃取;后者直接泵入夹带剂与CO2共同萃取,以比较两法的萃取效率.结果 乙酸乙酯作为夹带剂更有利于齿瓣石斛中低极性化合物的溶出.直接泵入乙酸乙酯与CO2共萃的方式更有利于齿瓣石斛中各成分的溶出.结论 本实验萃取方式为未来齿瓣石斛的进一步研究提供良好的基础.
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铁皮石斛、杯鞘石斛、齿瓣石斛的指纹图谱研究
兰科植物石斛为常用中药,其药用历史十分悠久,历代本草均有收载.传统医学认为其具有滋阴清热、益胃生津、润肺止咳、益肾明目的功效,历来石斛类药材十分复杂,而且常常混淆严重,给石斛品种鉴定带来一定困难.《中国药典》(2010版)收载了4种石斛,即铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)、金钗石斛(Dendrobium nobil Lindl.)、鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxum Lindl.)和流苏石斛 (Dendrobium fimbriaum Hook.).
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不同种类石斛多糖成分对小鼠脾脏免疫功能的影响
目的:研究不同种属石斛多糖对小鼠免疫功能的调节作用.方法:培养小鼠脾淋巴细胞,观察不同浓度铁皮石斛、齿瓣石斛、兜唇石斛、晶帽石斛中多糖成分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;研究口服给药不同剂量石斛多糖,对小鼠碳粒廓清能力、脾脏指数的影响.结果:齿瓣石斛多糖可以刺激脾淋巴细胞的增殖,增加小鼠碳粒廓清能力和脾脏指数,与铁皮石斛具有类似的作用,而其他种类石斛中的多糖成分的增强免疫活性较差.结论:齿瓣石斛多糖具有增强脾脏免疫的作用.
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铁皮石解及齿瓣石解的生药学鉴别
本文简要介绍了铁皮石解及齿瓣石斛的植物形态、药材性状、显微特征、化学成分及药理作用等,以期减少铁皮石斛沉用现象,确保临床用药安全有效.
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齿瓣石斛不同营养器官多糖的含量测定
目的 探讨齿瓣石斛不同营养器官的多糖含量.方法 采用硫酸-苯酚法对齿瓣石斛根、嫩条、叶、老条多糖含量进行测定.结果 嫩条中的多糖含量明显高于其它部位,其含量的顺序分别为嫩条＞叶＞根＞老条.结论 齿瓣石斛采收嫩条部位比较合理,老条可用于分株繁殖和压条繁殖.
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西双版纳地区铁皮石斛及齿瓣石斛品质的初步研究
目的 对比铁皮石斛与其常用替代品在品质方面的差异.方法 采用苯酚-硫酸法与重量法,研究对比了西双版纳地区不同来源铁皮石斛及齿瓣石斛多糖含量及折干率的差异.结果 铁皮石斛的多糖含量及折干率分别为20.29%,20.16%,齿瓣石斛为16.93%,18.92%.结论 不同栽培类型的铁皮石斛存在品质差异;齿瓣石斛的野生苗品质优于组培苗.
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齿瓣石斛新研究进展
石斛是我国传统名贵中药材.近年来,云南各地学者通过调查、研究和挖掘,发现齿瓣石斛(紫皮)野生资源及栽培量较大,有很大发展空间.综述近20年齿瓣石斛的组织快繁、化学成分和药理作用等方面的研究进展,旨在为齿瓣石斛的深入研究及其在医药和食品工业方面的开发应用提供参考.
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柱前衍生化HPLC法测定齿瓣石斛中总氨基酸的含量
目的:建立测定齿瓣石斛中总氨基酸含量的方法.方法:以2,4-二硝基氟苯为衍生试剂,与齿瓣石斛中氨基酸柱前衍生,采用高效液相色谱法测定其含量.色谱柱为SymmetryC18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为0.05 mol·L-1醋酸钠-醋酸缓冲液(pH 6.4)-1％N,N-二甲基甲酰胺,流动相B为乙腈-水(1∶1,V/V),梯度洗脱,检测波长为360 nm,柱温为30 ℃,进样量为20μL.结果:13种氨基酸的线性相关系数均＞0.9990,平均加样回收率范围在99.34％～101.93％之间,RSD在0.54％～1.91％之间(n=6).结论:本方法快速、简便、结果准确,可为齿瓣石斛的深入研究奠定基础.
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正交试验提取齿瓣石斛多糖工艺优化研究
目的 优化齿瓣石斛多糖提取工艺.方法 采用正交设计,考察提取温度、提取时间、提取次数和料液比等4个影响因素.结果 佳提取工艺条件为:温度100℃、料液比1∶25、提取时间1h、提取次数2次.结论 该提取工艺稳定可行,多糖提取率高.
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齿瓣石斛多糖提取工艺研究
目的：通过正交实验对齿瓣石斛多糖的提取工艺进行优化研究。方法：采用苯酚－硫酸法考察提取容积、提取时间、提取次数、提取温度等因素时多糖提取的影响，通过正交试验找出佳提取工艺。结果：多糖提取的佳条件，提取温度95℃、提取时间1 h、提取次数2次、料液比1∶25。结论：该工艺简单合理，多糖提取率高。
