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从梅兰芳护嗓说石斛
石斛为兰科多年生草本植物金钗石斛或其同种植物的茎,主产于四川、贵州、云南、湖北、广西、台湾等省,一些地区还有栽培.全年均可采收,以夏季采者品质佳.采后须去须根,冼净,晾干,然后放至铁锅内,均匀炒至柔软,趁热搓去薄膜状叶鞘,干燥后切段入药.若鲜用临时剪下,搓去膜质叶鞘,洗净剪段用.处方有金(钗)石斛、川石斛、霍山石斛(铁皮石斛)、耳坏石斛(枫斗)、鲜石斛等多种用名.
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霍山石斛对甲状腺素致肾阴虚小鼠抗疲劳作用研究
目的 研究霍山石斛对甲状腺素诱导的肾阴虚小鼠抗疲劳作用及机制.方法 84只健康昆明雄性小鼠适应性喂养一周后随机分为空白组,模型组,铁皮石斛组(3 g/kg),霍山石斛A (0. 33 g/kg)、B(1 g/kg)、C(2 g/kg)、D(3 g/kg)四个剂量组,给药14天,除正常组外,其余各组小鼠每天下午给予甲状腺素溶液160 mg/kg,建立小鼠肾阴虚模型,观察霍山石斛对肾阴虚小鼠血清三碘甲状腺原氨酸(thiiodothronine,T3)、甲状腺素(thyroxine,T4)、乳酸(blood lactic acid,BLA)、游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、甘油三酯( triglyceride,TG)等的影响.结果 与模型组相比,铁皮石斛和霍山石斛各剂量组能明显缓解小鼠的阴虚状态,霍山石斛A、B剂量组小鼠的体重明显升高(P<0. 05,P<0. 01);铁皮石斛和霍山石斛各剂量组能明显提高小鼠力竭游泳时间(P<0. 01),降低小鼠血清FFA、TG(P<0. 05,P<0. 01),增加肝糖原和肌糖原含量(P<0. 05, P<0. 01),铁皮石斛和霍山石斛B、C、D剂量组能降低血清T3、T4、BLA水平(P<0. 05,P<0. 01),霍山石斛 A 剂量组小鼠的 T4 降低(P<0. 01);霍山石斛 A、B、C 剂量组小鼠的 BUN 明显降低(P<0. 05,P<0. 01).结论 霍山石斛能增强肾阴虚小鼠的运动能力,其作用机制可能与降低代谢速率,延长供能时间有关.
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霍山石斛对肾阴虚小鼠血清IL-2、IL-6及抗氧化作用的实验研究
目的:研究霍山石斛对肾阴虚小鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、IL-6及抗氧化作用的影响.方法:96只昆明雄性小鼠适应性喂养7 d后随机分为正常组,模型组,铁皮石斛组,六味地黄丸组,霍山石斛(0.33、1、2、3 g/kg)4个剂量组,给药14 d.除正常组外,其余各组小鼠每天下午给予甲状腺素溶液160 mg/kg,建立小鼠肾阴虚模型,观察霍山石斛对肾阴虚小鼠体质量、胸腺和脾脏指数,血清IL-2、IL-6含量及肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平的影响.结果:霍山石斛各给药组均能明显缓解小鼠的阴虚状态,增加体质量(P<0.01,P<0.05),1、2、3 g/kg剂量组霍山石斛能提高阴虚小鼠胸腺指数和脾脏指数(P<0.01),降低血清IL-6(P<0.05,P<0.01),升高IL-2(P<0.01),升高阴虚小鼠肝组织SOD、GSH-Px、CAT水平(P<0.01),降低肝组织MDA水平(P<0.05,P<0.01),且与铁皮石斛比较,其升高SOD、CAT和降低MDA作用明显增强(P<0.01,P<0.05).结论:霍山石斛具有增强阴虚状态下机体免疫调节作用和增强抗氧化能力的作用,其免疫调节作用与铁皮石斛相当,抗氧化性优于铁皮石斛.
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药用霍山石斛原球茎的液体悬浮培养
目的:考察霍山石斛原球茎在液体培养中增殖、水溶性多糖与总生物碱积累的特征.方法:在霍山石斛试管苗茎段原球茎诱导与继代培养的基础上,进行原球茎的液体悬浮培养,分析原球茎生长动态,用比色法测定水溶性多糖与总生物碱的含量.结果:霍山石斛茎段在NAA或NAA与KT组合的MS培养基上可诱导出原球茎,MS基本培养基适合原球茎继代培养增殖;原球茎在液体悬浮培养中大比生长速率0.044 * d-1,倍增时间15.8 d,适生长周期为4周,水溶性多糖和总生物碱含量分别是3.75%和0.0261%.结论:霍山石斛原球茎液体培养生长良好,具有目的化学成分的合成能力,为发酵培养开发霍山石斛资源提供可能.
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霍山石斛F1代生长、有效成分和生理特性的研究
目的:比较研究霍山石斛的F1代与其亲本的生长量、有效成分和生理特性等差别,探讨霍山石斛杂交利用的可能性,筛选保持较高有效成分且产量高的新资源.方法:测定霍山石斛F1代与其亲本的生长量和有效成分,光合特性、内源激素含量和同工酶谱.结果:F1代的光合面积大、叶绿素含量高、chla/b比值低,净光合速度高,生长量高于亲本米斛,接近亲本铜皮石斛,产量略高于2亲本;同时保持较高有效成分,有效成分高于亲本铜皮石斛,接近亲本米斛.F1代结合了2亲本的优点.结论:霍山石斛F1代的生理特性和产量、品质得到极大改善,可以通过种间杂交的方法对霍山石斛进行种质改良.
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霍山石斛杂交种与其亲本生长生理指标及药效成分含量的比较
目的:对霍山石斛杂交种与其亲本进行生长、生理指标及主要药效成分含量的比较,为霍山石斛种质资源改良提供理论依据.方法:叶绿素含量用无水乙醇法,光合速率用CI-310便携式光合作用测定系统测定;多糖含量用浓硫酸-苯酚比色法,总生物碱含量用溴甲酚绿酸性染料比色法测定.结果:杂交种生长量积累表现为近铜皮石斛的特性,较霍山石斛有极大优势;一年生杂交种叶绿素含量及光合速率均极显著高于其亲本;杂交种二年茎与三年茎多糖含量和总生物碱含量均与霍山石斛接近.结论:杂交种在生长和药效成分积累方面结合了2个亲本之间的优势,具有很大的开发利用前景.
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霍山石斛不同生长阶段遗传稳定性的RAPD分析
目的:研究霍山石斛同一蒴果组培不同生长阶段遗传稳定性.方法:利用从20个随机引物筛选的3个稳定性较好的10碱基引物对已继代7-8次的H23种群进行RAPD检测.结果:发现不同阶段内遗传相似系数较大,在85.409 3%～98.360 6%,其中在原球茎、萌芽期和一叶期存在的变异比两叶期、开花期要显著,但程度都极其微弱.结论:来自同一蒴果的变异非常小,建立霍山石斛稳定的无性快繁系是切实可行的.
关键词： 随机扩增多态性DNA 霍山石斛 生长阶段 遗传稳定性 -
霍山石斛对小鼠肝脏细胞色素P450酶表达和活性的影响
该文旨在研究口服霍山石斛对小鼠肝脏细胞色素P450酶表达和活性的影响,为评价霍山石斛与临床药物联用时的药物一药物的相互作用提供参考.将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、霍山石斛低剂量组(含生药1.25 g·kg-1)、霍山石斛高剂量组(含生药7.5 g·kg-1)和苯巴比妥阳性对照组(0.08 g·kg-1)连续给药2周.提取小鼠肝脏微粒体,采用Western blot(蛋白质印迹)法检测P450酶主要亚型蛋白表达情况.针对蛋白表达发生变化的P450亚型使用探针药物法对其酶活性进行检测.结果显示,口服霍山石斛对小鼠肝脏CYP1A1,CYP1A2,CYP2B蛋白表达有一定程度的诱导作用.进一步的体外酶活实验结果表明,口服霍山石斛组小鼠CYP1A1,CYP2B对应的探针药物乙氧基异吩噁唑、安非他酮代谢与空白组相比没有显著的差异;口服霍山石斛组小鼠中CYP1A2亚型酶对应的探针药物非那西丁代谢速率Vmax与空白组相比显著升高约20％,清除率CLint也显著升高约32％.因此,口服霍山石斛可能加快对CYP1 A2酶催化的药物代谢,但口服霍山石斛对小鼠肝脏中大多数的P450酶的活性没有影响,理论上对绝大多数临床药物不存在与P450酶系相关的药物-药物相互作用.
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霍山石斛的名实混乱与原植物
霍山石斛,具有益精强阴、生津止渴、养胃清热之功效,长于润喉清音.名医张山雷[1]认为:"老人虚人,而不宜太寒者,则霍山石斛佳".霍山石斛近代一直处于濒危状态,市场上的药材有名无实,引起了长期的名实混乱.近年来,一些学者对霍山石斛进行了相关研究[2-5].作者对霍山石斛的原植物进行研究,澄清名实混乱,以进一步保护和发展珍稀濒危药用植物,可持续利用地道药材.
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霍山石斛微卫星标记的筛选及遗传多样性分析
目的:利用磁珠富集法构建霍山石斛的微卫星文库,用筛选出的微卫星引物对安徽霍山居群的24株野生霍山石斛进行遗传多样性分析.方法:根据链亲和素磁珠和生物素特异结合的特性,用3'端生物素标记的探针与两端连接已知序列人工接头的霍山石斛基因组DNA酶切片段杂交,杂交复合物结合到包被有链亲和素的磁珠上,洗脱并收集吸附在磁珠上的含有微卫星的片段.经过克隆和测序,再根据微卫星两侧的保守序列设计引物,后利用从中筛选出的微卫星引物对霍山石斛居群进行遗传学分析.结果:本实验共筛选得到12对多态性位点丰富、带型清晰、重复性好的引物,并检测到65个等位基因,每个位点的等位基因数从2到8个不等,平均预期杂合度(HE)和平均观察杂合度(HO)分别为0.638,0.500.12个多态性位点的哈温平衡检测结果显示有2个位点显著偏离哈温平衡(P＜0.05),可能是由于存在无效等位基因.连锁不平衡检测结果表明有3对位点显著连锁不平衡(P＜0.05)；结论:这些微卫星标记可以用于霍山石斛的居群遗传学分析.
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霍山石斛糖蛋白的分离纯化和毒活性研究
霍山石斛是名贵中药材,其多糖的抗肿瘤活性是中药资源领域的研究热点,该研究旨在探究霍山石斛多糖抗肿瘤活性的物质基础.实验以霍山石斛为原料,通过低盐溶液浸提和硫酸铵分级沉淀得到不同的霍山石斛蛋白组分,经SDS-PAGE电泳染色确定糖蛋白组分,再经DEAE离子柱和Sephadex凝胶柱进一步分离纯化糖蛋白组分,同时采用MTT比色法检测不同产物对人肝癌细胞HepG2的毒活性;结果获得3种相对分子质量为22.5,19.8,15.6 kDa的糖蛋白组分RG1,RG2,RG3,测得三者复合物对HepG2的IC5o为534.23 mg·L-1,而组分RG1,RG2的IC5o分别为432.96,413.91 mg·L-1,组分RG3对HepG2无毒活性.总之,实验结果提示霍山石斛多糖抗肿瘤活性的物质基础之一是相对分子质量为22.5,19.8 kDa的2种糖蛋白组分,且具有协同效用.
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中国石斛类药材的原植物名实考
该文简述了中国石斛类药材原植物的名实考证结果,并重点阐述了细茎类石斛植物的分类处理结果.梵净山石斛Dendrobium fanjingshanense、曲茎石斛D.flexicaule、河南石斛D.henanense、霍山石斛D.huoshanense、广东石斛D.kwangtungense、细茎石斛D.moniliforme、铁皮石斛D.officinale、琉球石斛D.okinawense、滇桂石斛D.scoriarum、始兴石斛D.shixingense、大花石斛D.wilsonii等11种石斛属植物得到确认,建议铁皮石斛使用名称Dendrobium officinale.
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中药资源持续发展的研究核心与关键——分子生药学与中药资源生态学
中药资源是中医药的物质基础,其充足与否关系到中医药事业能否可持续发展.目前,中药材价格节节攀升,2010年全国市场537种中药材中有84%涨价.近20年来,由于中药资源在食品、饮料、保健品、其他卫生产品和出口贸易中的扩展利用,导致甘草、羌活、肉苁蓉、三叶半夏,紫草等100多种中药资源蕴藏量普遍下降;一些名贵的药材如铁皮石斛、霍山石斛、冬虫夏草等已很难见到野生资源.
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曲茎石斛及其近似种鉴别的形态和DNA分子证据
目的探讨曲茎石斛(南阳居群)与同属近似种:细茎石斛(南阳居群)、霍山石斛(霍山居群)、铁皮石斛(天台居群)药材鉴别的形态及DNA分子证据.方法对曲茎石斛(南阳居群)及其近似种的药材进行了外部形态和rDNA ITS序列比较.结果曲茎石斛及其近似种药材的外部形态虽无明显区别,但在rDNA ITS序列上却存在着显著而稳定的差异.曲茎石斛(南阳居群)与铁皮石斛(天台居群)的rDNA ITS序列的差异小,绝对遗传距离为7;但与细茎石斛(南阳居群)及霍山石斛(霍山居群)rDNA ITS区的差异较大,绝对遗传距离分别为40和42.在rDNA ITS区域中,作者共挑选了7个碱基位点用作鉴别曲茎石斛( 南阳居群)及其近似种的DNA证据.结论根据药材的形态特征及rDNA ITS区碱基序列差异,可准确鉴别曲茎石斛及其近似种药材.
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多重位点特异性PCR鉴别霍山石斛、铁皮石斛与齿瓣石斛药材
为建立同时鉴别霍山石斛、铁皮石斛及齿瓣石斛的多重位点特异性PCR法,解决上述石斛属药材真伪掺杂的难题.通过比对石斛药材ITS及trnL-trnF序列,设计引物,建立多重PCR鉴别法,并对不同来源的霍山石斛、铁皮石斛及齿瓣石斛样品进行特异性扩增,根据特异性条带大小进行鉴别.结果在退火温度为61℃、循环数为35时,齿瓣石斛、铁皮石斛和霍山石斛分别可扩出584、397和211 bp的特异性条带.本文所建立的方法对齿瓣石斛和霍山石斛的低检测限为1.2 ng,铁皮石斛低于0.24 ng,其对铁皮石斛、齿瓣石斛和霍山石斛的混伪检出限分别为1％、1％和5％.表明多重位点特异性PCR法能特异性鉴别霍山石斛、铁皮石斛及齿瓣石斛.
关键词： 霍山石斛 铁皮石斛 齿瓣石斛 多重位点特异性PCR 掺伪鉴别 -
霍山石斛的分子特异性鉴别
目的 基于ITS序列上变异位点设计特异性引物对霍山石斛及其常见混伪品(铁皮石斛和河南石斛)进行有效鉴别.方法 利用大简约法(MP)和贝叶斯法(BI)构建霍山石斛及常见混伪品的系统发育树,并基于ITS序列上变异位点以霍山石斛为正品设计特异性PCR引物SH-CP9s/SH-CP9a、SH-CP25s/SH-CP25a、SH-CP29s/SH-CP29a,优选扩增条件,用于霍山石斛及其混伪品鉴别.结果 在系统发育树中霍山石斛聚类为一个单系.通过对PCR反应的退火温度、DNA模板用量进行优化,并对不同型号的PCR仪和Taq酶进行考察,分别获得霍山石斛的特异性PCR反应程序.在PCR产物中,正品出现目的条带,而混淆品不出现条带.结论 ITS序列能够作为霍山石斛的DNA鉴别条形码,且设计的特异性引物能够有效地区别霍山石斛与其混伪品.
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霍山石斛对肾阴虚小鼠抗疲劳及能量代谢的影响
目的 研究霍山石斛对肾阴虚小鼠抗疲劳及能量代谢的影响.方法 采用灌服甲状腺素建立小鼠肾阴虚模型,观察霍山石斛对肾阴虚小鼠阴虚状态的影响.检测各组小鼠温度趋向性和负重游泳时间的变化,酶联免疫吸附法测定小鼠血清三碘甲状腺原氨酸(T3),甲状腺素(T4).放射免疫分析法检测血清乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK),环磷酸腺苷(cAMP),环磷酸鸟苷(cGMP),计算cAMP/cGMP比值.比色法检测肝组织Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的含量.结果 与正常组相比,模型组小鼠热区停留比例和负重游泳时间明显下降(P<0.01),T3、T4、cAMP和cAMP/cGMP的含量明显升高(P<0.01、P<0.001),LDH显著降低(P<0.05);CK、Na+-K+-ATP酶和Ca2+Mg2+-ATP酶显著增高(P<0.001).与模型组相比,霍山石斛A、B、C、D 4个剂量组和铁皮石斛组、六味地黄丸组小鼠的热区停留比例和负重游泳时间明显增高(P<0.01、P<0.05、P<0.001),cAMP/cGMP明显降低(P<0.05、P<0.01),Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶明显降低(P<0.01、P<0.001),霍山石斛B、C、D剂量组和铁皮石斛组、六味地黄丸组T3、T4显著降低(P<0.05、P<001、P<0.001),霍山石斛B、C剂量组和铁皮石斛组、六味地黄丸组的LDH显著增高,CK显著降低(P<0.01、P<0.05、P<0.001).结论 霍山石斛具有滋阴清热的作用,能降低甲状腺素诱导的肾阴虚小鼠的代谢酶活性和甲状腺素水平,调节能量代谢速率,提高阴虚小鼠的负重游泳时间,具有抗疲劳作用,其机制与调节能量代谢酶作用相关,进一步验证了霍山石斛药性偏寒.
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霍山石斛组方治疗冠心病的临床研发与应用
目的：研究霍山石斛组方（国家专利）在治疗冠心病心绞痛患者中的安全性及临床疗效。方法将60例患者随机分为2组，治疗组和对照组各30例，治疗组在常规治疗基础上给予霍山石斛组方口服治疗，与口服消心痛的对照组比较疗效的情况。结果治疗组在心痛程度、持续时间、发作次数以及动态心电图 ST-T 改变上优于对照组，具有显著差异。仅有少数出现腹泻等不舒。结论霍山石斛组方治疗冠心病心绞痛疗效好，更安全，值得推广。
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不同生长年限霍山石斛高效液相指纹图谱研究
目的 建立霍山石斛Dendrobium huoshanense的HPLC指纹图谱,同时测定不同生长年限霍山石斛中丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素含量,为霍山石斛药材质量的评价提供依据.方法 采用Agilent C18 (250 mm×4.6 mm,5μtm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长240 nm,柱温30℃;将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1),对不同年限的霍山石斛样品进行相似度分析;峰面积导入SPSS软件进行聚类分析,从树状图上判断聚类效果.结果 本方法建立的指纹图谱共有13个共有峰,指认了其中4个共有峰,分别为丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素;不同年限的栽培霍山石斛相似度结果小于0.900,不同年限的仿野生霍山石斛相似度结果大于0.900.结论 HPLC指纹图谱结合化学计量学方法能够评价和鉴别不同年限的霍山石斛,为霍山石斛药材的采收、开发、评价等提供参考.
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霍山石斛及相似种的位点特异性PCR鉴别
目的设计出霍山石斛的位点特异性鉴别引物,仅通过PCR就能对霍山石斛的真伪进行准确鉴别.方法利用石斛属植物基因库中rDNA ITS序列数据库进行同源性比较,在与霍山石斛差异较大的区段设计1对特异性引物,然后对19份石斛属植物DNA模板进行PCR扩增,阳性者即为霍山石斛正品.结果发现在退火温度为60℃时,该引物能把霍山石斛的模板从19份石斛属植物中扩增出来,而其他的石斛属植物均为阴性.结论运用位点特异性鉴别引物成功地对霍山石斛进行PCR鉴别,该鉴别反应重现性好,能在霍山石斛鉴别时发挥重要的作用,与形态学、DNA测序等鉴别方法相比,该方法具有高效、准确、简便、省时等优点.
