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泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及其LXRα和ABCA1表达的影响
目的 以大鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,经ox-LDL (50 mg/L)诱导后建立巨噬细胞泡沫化模型,观察泽泻汤对细胞LXRα和ABCA1表达的影响.方法 分别采用ox-LDL(50 mg/L)和Dil-ox-LDL(10 mg/L)处理大鼠腹腔巨噬细胞24h,同时20％泽泻汤血清干预后,油红O染色和荧光显微镜观察细胞内脂质沉积情况;蛋白免疫印迹检测细胞LXRα和ABCA1的表达情况.结果 ox-LDL(50 mg/L)和Dil-ox-LDL(10 mg/L)处理巨噬细胞成功建立巨噬细胞泡沫化模型;与空白组的巨噬细胞比较,模型组巨噬细胞内脂质沉积增加,泽泻汤血清干预组巨噬细胞内脂质沉积明显减少.空白组巨噬细胞和模型组巨噬细胞LXRα呈低水平表达,泽泻汤血清干预组细胞LXRα表达明显增加;与空白组比较,模型组巨噬细胞ABCA1表达明显增加,泽泻汤血清干预组巨噬细胞中ABCA1亦呈高表达,但较模型组略低.结论 ox-LDL(50 mg/L)和Dil-ox-LDL(10 mg/L)处理巨噬细胞可以成功建立巨噬细胞泡沫化模型;泽泻汤能改善巨噬细胞泡沫化过程的脂质沉积,可能通过上调LXRα表达来实现的.
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槟榔碱对泡沫细胞胆固醇流出和ABCA1表达的影响
目的 探讨槟榔碱对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的鼠源性巨噬细胞性泡沫细胞形成的影响及可能机制.方法 采用体外培养的鼠源性巨噬细胞株作为研究对象,加入ox-LDL (50 mg/L)诱导泡沫细胞,同时加入不同浓度的槟榔碱处理,油红0染色进行形态学观察,高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的水平,3H标记的胆固醇测定胆固醇流出率.采用实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1( ABCA1)的表达.结果 ox-LDL处理48 h后,与正常巨噬细胞相比,油红O染色阳性细胞显著增加,细胞体积明显增大,形态多呈圆形或不规则形；槟榔碱(10-6、10-5和10-4mol/L)组油红O染色阳性细胞数比泡沫细胞模型组显著减少,细胞体积明显缩小.与泡沫细胞模型组相比,槟榔碱(10-5和10-4mol/L)显著性降低细胞内TC、FC、CE水平及CE/TC,显著性增加细胞胆固醇流出率和ABCA1的表达.结论 槟榔碱抑制ox-LDL诱导的鼠源性巨噬细胞性泡沫细胞形成,上调泡沫细胞中ABCA1的表达.
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姜黄素对脂变肝细胞胆固醇流出及ABCA1表达的影响
目的 研究姜黄素对脂变肝细胞胆固醇的转运机制. 方法 取正常人肝L-02细胞作为研究对象.用10%(V/V)医用脂肪乳注射液和10%(V/V)胎牛血清的RPMI-1640完全培养基孵育24 h建立的脂肪变性肝细胞模型.实验分为为6个组,即正常肝细胞组、人肝L-02细胞脂肪变性模型组、姜黄素处理组(脂变细胞模型建立后,分别加入不等量姜黄素,使其终浓度分别为12.5、25、50、100 μmol/L).RT-PCR检测细胞ABCA1表达;高效液相色谱法定量检测细胞内外胆固醇含量. 结果 姜黄素呈浓度依赖性地减少细胞内脂变肝细胞内总胆固醇(TC)、胆固醇酯(CE)含量,增加培养基中游离胆固醇(FC)含量,同时增加ABCA1的表达. 结论 姜黄素能降低脂变人肝L-02细胞TC及CE含量,增加FC的外流;姜黄素增加脂变肝细胞胆固醇转运可能与ABCA1的上调有关.
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橘皮素对PC-12细胞Aβ水平的影响及机制研究
目的 观察橘皮素对PC-12细胞β淀粉样蛋白(Aβ)水平的影响并探讨其可能的机制.方法 不同浓度(0.1、1、10、100 μmol/L)的橘皮素,作用不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h)处理PC-12细胞后,采用ELISA检测细胞培养液Aβ40和Aβ42水平,Western blot检测PC-12细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白水平,RT-PCR检测PC-12细胞ABCA1 mRNA水平.ABCA1 SiRNA抑制ABCA1蛋白表达.结果 10 μmol/L及100 μmol/L橘皮素组Aβ40和Aβ42水平显著下降,ABCA1蛋白水平明显增加,而所有组ABCA1 mRNA水平没有改变.使用100μmol/L橘皮素处理PC-12细胞,处理后ABCA1 mRNA表达与对照组比较差异无显著性,24 h及48 h组ABCA1水平显著增加,Aβ40和Aβ42水平显著下降.使用ABCA1 SiRNA抑制PC-12细胞ABCA1蛋白表达后,ABCA1 siRNA处理组与对照组比较,Aβ40和Aβ42水平显著增加.结论 橘皮素可通过增加ABCA1蛋白来降低PC-12细胞Aβ40和Aβ42水平.
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miR-19 b对巨噬细胞ABCA1表达的影响
目的：观察miR-19b对巨噬细胞 ABCA1表达的影响。方法在 THP-1源性巨噬细胞中转染miR-19b模拟物(mimic )和抑制物(inhibitor),荧光定量PCR检测ABCA1 mRNA,Western blot检测ABCA1蛋白水平。结果转染miR-19b mimic后,巨噬细胞ABCA1 mRNA及蛋白水平均显著下调；转染miR-19b inhibitor后ABCA1蛋白则明显上调,但ABCA1 mRNA无变化。结论 miR-19b下调巨噬细胞ABCA1的表达。
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新型干细胞iPSCs-MSCs对泡沫细胞胆固醇含量的影响及调节机制研究
目的 探讨新型干细胞iPSCs-MSCs对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇含量的影响及可能的调控机制.方法 运用泡沫细胞模型,采用transwell的方式将iPSCs-MSCs与THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞共培养后,使用试剂盒测定细胞内胆固醇的含量,收集细胞培养液用ELISA法检测TNF-α、IL-6的浓度,Western blot和实时荧光定量PCR检测细胞内ATP结合盒转运子A1(ABCA1)的表达.结果 与iPSCs-MSCs共培养后泡沫细胞内胆固醇的含量减少,培养基中TNF-α、IL-6浓度显著降低,ABCA1 mRNA和蛋白水平表达增加(P＜0.05),Notch 1 mRNA和蛋白水平表达下降(P＜0.05).结论 iPSCs-MSCs可以下调巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇的含量,该过程可能与上调ABCA1表达及抑制Notch信号通路而减少炎症因子释放有关,提示iPSCs-MSCs有预防和治疗动脉粥样硬化的前景.
关键词： iPSCs-MSCs 泡沫细胞 炎症因子 ABCA1 Notch1 -
ABCA1敲低对小鼠巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症反应的双向调节作用
目的 检测ABCA1敲低对巨噬细胞中Pam3CSK4引起的炎症应答的影响.方法 构建小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的ABCA1敲低的稳定细胞系,以TLR2配体Pam3CSK4刺激该细胞系建立炎症反应细胞模型,在该细胞模型上检测相关促炎和抗炎细胞因子转录水平的表达变化.结果 ABCA1敲低的RAW264.7稳定细胞株在Pam3CSK4刺激后,IL-1β,TNF-α和IL-6表达发生显著上调(P<0.01),而转录抑制因子cAMP依赖性转录因子3(ATF3)也发生显著上调(P<0.01);与此同时,ATF蛋白家族中其它因子ATF1,ATF2,ATF4和ATF5转录水平没有发生显著变化.结论 在巨噬细胞RAW264.7中,ABCA1敲低显著上调Pam3CSK4引起的促炎因子IL-1β,TNF-α和IL-6的表达的同时,也显著上调了具有抗炎效应的ATF3的表达,其对炎症反应的影响可能并非是单向的促炎作用,而是发生双向的调节,而ABCA1参与上调ATF3表达的机制可能也与其ATF蛋白家族其他成员的上游调节机制不同.
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巨噬细胞中ABCA1对炎症因子的调节及其意义
目的 研究在8-溴-环磷酸腺苷(8-Br-cAMP)刺激下,巨噬细胞中三磷酸腺苷结合盒转运子(ABCA1)对细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞化学趋向蛋白-1(MCP-1)及白介素-1β(IL-1β)的调节作用,在细胞水平证实ABCA1在动脉粥样硬化发生中的作用机制.方法 用氟波酯(PMA)刺激THP-1细胞使之转变为巨噬细胞,8-Br-cAMP(0.5mmol/L)刺激3、6、12、24 h后,以荧光定量RT-PCR和Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCA1、ICAM-1、MCP-1及IL-1βmRNA和蛋白质表达量;用反义寡核苷酸(100nmol/L)抑制ABCA1的表达,观察Ox-LDL刺激下上述指标的改变.结果 予8-Br-cAMP刺激6、12 h后,巨噬细胞ABCA1、ICAM-1、MCP-1 mRNA和蛋白质水平及IL-1β蛋白质水平均增高;反义寡核苷酸转染巨噬细胞,8-Br-cAMP刺激后3、6 h,ABCA1、ICAM-1、MCP-1 mRNA的表达降低,刺激后12、24 h,ABCA1、ICAM-1、MCP-1及IL-1β蛋白质的表达水平降低.结论 在8-Br-cAMP刺激下,巨噬细胞ABCA1可增加炎症因子表达,参与动脉粥样硬化的发生.
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冠心病患者ABCA1基因全部编码区SNP的检测及意义
目的检测112例冠心病患者ABCA1基因全部编码区的单核苷酸多态性(SNP).方法通过聚合酶链反应-单链构象多态性分析结合银染后胶回收、DNA测序和限制性内切酶酶切分析方法检测112例明确冠心病诊断患者的AB-CA1基因全部编码区50个外显子的SNP.结果我国冠心病病人群中存在着国内外均已报道的R219K和M883I两个位点SNP的改变,并在外显子7中发现了国内外均未见报道的A1092G新碱基位点的改变,并导致氨基酸改变为M233V,通过108例正常人限制性内切酶酶切分析方法证实其为SNP.结论我国冠心病病人群中不仅存在着已报道的R219K、M883I位点SNP,并首次发现存在新的M233V位点SNP.新SNP位点M233V型ABCA1基因可能增加冠心病的危险性,其功能学研究需进一步流行病学调查证实.
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血管平滑肌细胞中ABCA1对炎症因子的调节及其意义
目的:观察在8-Br-cAMP作用下,ABCA1对血管平滑肌细胞中细胞问黏附分子-1(ICAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)mRNA和蛋白质及IL-1β蛋白质表达的影响,在细胞水平证实ABCA1对动脉粥样硬化(AS)的影响.方法:复苏培养人主动脉平滑肌细胞CC2571,8-Br-cAMP(0.5 mmol/L)刺激3、6、12、24h后,荧光定量RT-PCR、Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCA1、ICAM-1、MCP-1及IL-1β mRNA和蛋白质表达量;用ABCA1的反义寡核苷酸(100 nmol/L)抑制ABCA1的表达,观察8-Br-cAMP刺激下上述指标的改变.结果:予8-Br-cAMP刺激后,主动脉平滑肌细胞CC2571中ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白及IL-1β蛋白质表达均增高,给予反义寡核苷酸转染后8-Br-cAMP刺激3、6 h上述指标的mRNA表达降低,12、24 h蛋白质表达降低.结论:在主动脉平滑肌细胞,ABCA1可增加8-Br-cAMP诱导的炎症因子表达,参与AS的发生.
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ABCA1介导胆固醇转运的机制及其信号传导通路研究进展
胆固醇的逆向转运(reverse cholesterol transport,RCT)被认为是对抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的一个主要机制之一[1].在外周组织细胞当中,血管中膜平滑肌细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞的胆固醇外流是RCT第一步中有意义的事件.
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ABCA1转录水平上脂质调节的研究进展
ABCA1是ATP结合盒转运子(ABC) 基因超家族中的一个亚型,在胆固醇逆转运和HDL生成的起始步骤中起着极重要的作用,现从转录水平总结氧化固醇和肝孤儿受体(LXR)、合成的LXR激活剂、类视黄醇和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)配体等多种物质对ABCA1在动脉粥样硬化和其他代谢综合征方面对脂质的影响,为如何调节ABCA1提供新的视点,并为进一步认识ABCA1的功能和调控提供线索.
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ATP结合框转运子A1的结构、功能及调控的研究进展
ATP结合框转运子A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)基因突变所引起的Tangier病(Tangier dis-ease,TD)是一种严重的高密度脂蛋白(HDL)缺陷综合征,伴随巨噬细胞内胆固醇沉积,明显增加患心血管疾病的风险.临床及动物实验表明,ABCA1可以促进胆固醇和磷脂向乏脂或无脂的HDL前体载脂蛋白AⅠ(apoAⅠ)转移,启动HDL的生成,是血浆HDL水平和冠心病易感性的重要决定因素.许多过程可调节组织中ABCA1的表达和分布.ABCA1在胆固醇代谢,清除组织内过多胆固醇,预防动脉粥样硬化等方面起着重要作用.本文就ABCA1的结构、功能、基因表达的调控与动脉粥样硬化的关系作一简述.
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慢性肾功能不全通过下调ABCA1表达影响巨噬细胞内胆固醇含量
目的 探讨慢性肾功能不全患者巨噬细胞内胆固醇含量的变化及ATP结合盒受体A1(ATP binding cassette transporter-A1,ABCA1)的表达情况.方法 选取2010年8月至2012年3月重庆医科大学第一附属医院住院的慢性肾功能不全(chronic renal failure,CRF)患者30例和健康对照组20例.分离外周血单核细胞诱导贴壁巨噬化,油红O染色鉴定,应用酶法测定巨噬细胞内胆固醇含量,应用real-time PCR与Western blot方法测定细胞ABCA1的mRNA及蛋白表达.结果 慢性肾功能不全患者巨噬细胞内胆固醇含量明显高于健康对照组(P＜0.01),ABCA1在慢性肾功能不全患者巨噬细胞中的mRNA与蛋白表达显著低于健康对照组(P＜0.01).结论 慢性肾功能不全患者巨噬细胞的胆固醇含量明显增加,胆固醇含量增加与慢性肾功能不全患者ABCA1的表达下调有关.
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三七总皂苷对泡沫细胞内ABCA1和LXRα mRNA表达的影响
目的 观察三七总皂苷(Panat notoginseng saponins,PNS)对泡沫细胞ABCA1和LXRα mRNA表达及脂质沉积的影响.方法 提取SD大鼠腹腔巨噬细胞纯化后,与高、中、低剂量PNS(80、40、20μg/ml)及氧化低密度脂蛋白共孵育48 h.油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值.采用RT-PCR法检测泡沫细胞ABCA1和LXRα mRNA表达情况.结果 模型组细胞中TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.05);与模型组相比,PNS高、中剂量组细胞内TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低(P<0.05).PNS高、中剂量组中ABCA1及LXRα mRNA的表达均显著高于模型组(P<0.01).结论 PNS可以上调ABCA1和LXRα mRNA表达并减少巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质沉积.
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制首乌提取物对兔动脉粥样硬化模型中ABCA1表达的影响
目的:探讨制首乌提取物对兔动脉粥样硬化模型中ABCA1表达的影响.方法:雄性新西兰大白兔36只,随机分为正常组、模型组、制首乌提取物15mg/kg组、制首乌提取物7.5mg/kg组、制首乌提取物3.75mg/kg组和血脂康400mg/kg组6个组,使用免疫损伤法和高脂高胆固醇饲料喂养新西兰大白兔12周,建立兔动脉粥样硬化模型.给药4周后,耳缘静脉采血检测血清TG、TC、LDL和HDL水平.处死动物,取主动脉弓下约2cm处胸主动脉进行HE染色后于光镜下观察,并采用RT-PCR法测定胸主动脉中ABCA1 mRNA的表达.结果:病理学切片检查显示,制首乌提取物能够延缓动脉粥样硬化病变进程.RT-PCR结果显示,与模型组相比各剂量的制首乌提取物能不同程度上调胸主动脉中ABCA1 mRNA的表达.结论:制首乌提取物具有降血脂及抗动脉粥样硬化作用,该抗动脉粥样硬化作用机制可能与其对ABCA1的上调有关.
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苯扎贝特对THP1巨噬细胞PPARγ及ABCA1表达的影响
目的 探讨苯扎贝特对THP1巨噬细胞PPARγ及ABCA1表达的影响.方法 THP1细胞经PMA诱导24h后,添加不同浓度苯扎贝特(0、1、10、50μmol/L)继续作用24h,RT-PCR法测定PPARγ、ABCA1 mRNA表达.结果 PMA刺激THP1细胞表达PPARγ及ABCA1;苯扎贝特剂量依赖性上调THP-1巨噬细胞PPARγ及ABCA1的表达(P＜0.05),50μmol/L浓度时二者表达高,且PPARγ与ABCA1的mRNA表达呈正相关(r=0.628,P=0.002).结论 苯扎贝特上调THP1细胞中PPARγ和ABCA1的表达.
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化合物5242331体外抗动脉粥样硬化的活性研究
目的 发现新型抗动脉粥样硬化药物的先导化合物,并进行体外抗动脉粥样硬化活性研究.方法 应用ABCA1和CLA-1表达上调剂筛选模型,对2000个化合物进行筛选,获得能上调ABCA1和CLA-1表达的化合物；利用RT-PCR和Westernblot方法研究化合物对目的蛋白的作用；利用巨噬细胞泡沫化实验测定化合物的体外抗动脉粥样硬化作用.结果 5242331在ABCA1和CLA-1上调剂模型上的EC50值分别为1.66和3.00μmol/L；进一步研究发现,5242331不仅能上调肝细胞HepG2中CLA-1的mRNA以及蛋白水平,还能上调巨噬细胞RAW264.7中ABCA1和SR-BI的mRNA以及蛋白水平；5242331能明显减少泡沫化巨噬细胞RAW264.7胞内脂滴量.结论 化合物5242331具有较好上调ABCA1和CLA-1活性和较好的体外抗动脉粥样硬化效果,属首次报道.
关键词： 动脉粥样硬化(AS) ABCA1 CLA-1 SR-BI -
姜黄素对糖尿病脑病大鼠海马PPARγ-ABCA1胆固醇转运体的影响
目的 观察姜黄素对糖尿病脑病大鼠学习记忆的影响,并探讨姜黄素对海马组织中PPARγ-ABCA1胆固醇转运体的影响.方法 采用STZ诱导法,构建糖尿病脑病大鼠,分为正常组、姜黄素对照组、糖尿病脑病组和糖尿病脑病姜黄素组.STZ腹腔注射诱导建立糖尿病脑病大鼠,糖尿病脑病姜黄素组和姜黄素对照组予以姜黄素60 mg·kg-1.d-1灌胃,持续12周,余大鼠用等量的羧甲基纤维素钠灌胃,连续12周.通过Morris水迷宫,检测各组大鼠的认知功能变化;采用Western blot检测各组大鼠海马部位的PPAR-γ、LXRα、ABCA1的蛋白表达.结果 Morris实验显示:与糖尿病脑病组相比,姜黄素可以明显改善糖尿病脑病出现的认知功能障碍(P<0.05).糖尿病脑病组PPAR-γ、LXRα、ABCA1的蛋白水平明显低于正常组和姜黄素对照组(P<0.01),而糖尿病姜黄素组海马中PPAR-γ、LXRα、ABCA1的蛋白水平均高于糖尿病脑病组(P<0.01).结论 姜黄素可以改善糖尿病脑病引起的认知功能障碍,而该过程可能依赖海马PPARγ-LXRα-ABCA1胆固醇跨膜转运体的激活.
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通心络对颈动脉粥样硬化性斑块ABCA1表达的影响
目的:探讨通心络对兔模型颈动脉粥样硬化性斑块的三磷酸腺苷结合盒运转体A1(ABCA1)、视黄酸X受体(RXRα)信使核糖核酸(mRNA)表达的影响及机制.方法:32只新西兰大白兔分为4组,其中空白对照组8只(A组),余24只兔于右侧颈动脉放置改良的硅橡胶圈,加1%高胆固醇喂养的方法建立粥样硬化性颈动脉狭窄动物模型.颈动脉狭窄模型而无药物干预的对照组8只(B组);辛伐他丁治疗组8只,给予辛伐他丁5 mg/kg,每天1次(C组);通心络治疗组8只,给予通心络1g/kg,每日1次(D组).药物干预前后分别检测兔模型静脉血的血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL)水平,两种药物干预2周后处死动物取右侧颈动脉狭窄段及对侧相应段血管,以Western Blot法测定其ABCA1、RXRα蛋白质表达量.结果:给予通心络和辛伐他丁干预兔模型组(C组和D组)ABCA1、RXRα蛋白质表达水平均增高,血脂水平下降.结论:通心络可使模型兔颈动脉粥样硬化斑块的ABCA1 mRNA、RXRα mRNA表达水平和其蛋白质表达水平上调,可能有益于抗动脉粥样硬化斑块形成作用.
