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针灸治疗帕金森病可能氧化应激作用机制的研究
目的 探讨针灸对治疗帕金森病(PD)可能的氧化应激作用机制.方法 在脑定位仪下,将6-羟基多巴注入左侧纹状体造模,连续2周针灸治疗,1/d.2周后,测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量.结果 与正常组比较,大鼠PD造模成功后,SOD活力升高(104.33±7.91 U/μg vs 112.85±3.33 U/μg,P<0.05),GSH-PX活力降低(709.65±29.86 U/μg-1·min-1 vs 686.94±21.94 U/μg-1·min-1,P<0.05),MDA含量升高(22.93±1.85 nmol/mg vs 28.74±0.79 nmol/mg,P<0.05).与模型组比较,针灸组、美多巴+针灸组均能提高SOD活力分别为130.14±5.08、124.55±12.40 U/μg,(P<0.01),提高GSH-PX活力分别为777.55±39.36、700.51±18.93 U/μg-1·min-1,(P<0.01,P<0.05),降低MDA含量分别为15.35±1.68、18.03±3.31 nmol/mg,(P<0.01),且针灸组作用显著.结论 在6-羟基多巴毁损纹状体模型中,针灸治疗显著提高SOD活力和GSH-PX活力,降低MDA含量,针灸可能参与PD氧化应激机制的调节.
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组胺合成酶抑制剂α-FMH对帕金森病大鼠旋转行为和脑内多巴胺及组胺能神经元的影响
目的探讨内源性组胺在PD发病中的作用.方法采用6-羟基多巴(6-OHDA)制备偏侧毁损的PD大鼠模型,连续7 d侧脑室给予组胺合成酶抑制剂α-FMH(12.5μg,25μg)以降低脑内组胺的含量.术后第7 d观察如下指标:阿朴吗啡诱导的旋转行为;免疫组织化学法检测黑质内多巴胺能神经元和下丘脑后部结节乳头核(TMN)内组胺能神经元的免疫反应活性;高效液相色谱法检测纹状体内多巴胺的含量.结果与模型组相比,α-FMH(25μg)明显降低了阿朴吗啡诱导的PD大鼠的旋转行为(4.09与6.18r/min相比,P＜0.05);延缓了毁损侧黑质内多巴胺神经元的缺失;轻微地增加了纹状体内多巴胺的含量.此外,与假手术组相比,模型组和α-FMH给药组大鼠TMN内组胺能神经元均无明显改变.结论内源性组胺介入了PD的发病机制,但并不伴有组胺能神经元的病理改变.
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6-羟基多巴脑内注射建立帕金森病大鼠模型的实验研究
目的 探讨6-羟基多巴脑内注射建立稳定的帕金森病大鼠模型的方法.方法 将6-羟基多巴立体定向注入大鼠右侧前脑内侧束和中脑被盖腹侧区,观察大鼠的行为变化和中脑黑质区的形态学变化.结果 注药后2周,动物经阿扑吗啡诱导即出现向健侧的旋转行为,注射效果稳定.在长达3个月的观察中,动物的旋转行为稳定,无明显的差异.形态学显示,毁损侧的黑质致密部和中脑被盖腰侧区的酪氨酸羟化酶阳性神经元的数量明显减少.结论 通过6-羟基多巴脑内注射的方法可以建立起稳定、有效的帕金森病大鼠模型.
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雌激素对PD模型大鼠黑质纹状体通路的保护作用及其机制探讨
目的 研究雌激素(Estrogen)对6-羟基多巴(6-OHDA)制备的去卵巢(OVX)帕金森病(PD)模型大鼠黑质纹状体通路的保护作用及其可能机制.方法 应用6-OHDA两点注射单侧损毁内侧前脑束(MFB)制备OVX PD模型大鼠,侧脑室给予17-β雌二醇(17-β estradiol,1μg/5μl),观察大鼠旋转行为、黑质酪氨酸羟化酶(TH)基因表达、黑质铁染色阳性细胞数量和纹状体内多巴胺(DA)及其代谢产物含量的变化.结果 雌激素用药组可明显减少阿朴吗啡诱导的PD模型大鼠单侧旋转行为(P＜0.01).在损毁侧黑质,雌激素用药组TH基因的表达较PD模型组明显增加(P＜0.01);纹状体DA及其代谢产物亦较PD模型组显著升高(P＜0.01).黑质铁染色阳性细胞数量较PD模型组明显减少(P＜0.01).结论 雌激素对PD模型大鼠黑质DA能神经元有明显的保护作用,其作用机制可能与降低铁负载有关.
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6-羟基多巴的细胞毒作用与谷氨酸转运的关系
目的探讨6-羟基多巴(6-OHDA)导致细胞毒性与谷氨酸(glutamate,Glu)递质水平和谷氨酸转运体的相关性.方法大鼠脑黑质内定位注射6-OHDA,制备帕金森病(Parkinson's disease,PD)动物模型;用在体微透析技术收集大鼠纹状体细胞外液;用高效液相色谱法测定PD大鼠纹状体和PC12细胞的细胞外液中Glu的水平;用流式细胞仪和酶标仪检测细胞凋亡率和细胞活性;通过测定L-[3H]-Glu的摄取能力确定谷氨酸转运体的功能.结果 6-OHDA诱导PC12细胞和大鼠损毁侧纹状体释放Glu增加,使PC12细胞凋亡和活性降低,而PC12细胞和突触体上的谷氨酸转运体功能显著下降.结论 6-OHDA引起的神经毒性与其增加Glu释放和降低谷氨酸转运体功能有关.
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6-羟基多巴模型大鼠salsolinol氮甲基转移酶活性检测
目的 应用6-羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)制作帕金森病(Parkinson''s disease,PD)大鼠模型,并对大鼠外周血淋巴细胞中salsolinol氮甲基转移酶(SNMT)的活性进行测定.方法 利用单侧双点注射6-OHDA损毁大鼠纹状体,构建PD模型并对模型进行行为学评价;从模型大鼠外周血淋巴细胞中提取SNMT粗酶液,建立酶反应产物N-methyl-salsolinol(NMSal)的高效液相色谱串联三重四极杆质谱检测方法,以NMSal的生成量表征SNMT的活性.结果 18只经过6-OHDA注射的大鼠共有7只经阿朴吗啡诱导后表现为恒定向未损毁侧旋转(>7 r/min),建模成功率为38.9%.建立了基于多反应监测技术的SNMT活性的高选择性、高灵敏度、高重复性的表征方法.该方法中NMSal的检出限和定量限分别达到49 pmol/L和98 pmol/L,日内和日间精密度均在6.0%以下.检测结果显示PD组大鼠外周血淋巴细胞中SNMT的活性与假手术组、正常组相比差异有显著性(P<0.01,n=5),而正常组和假手术组之间差异无显著性(P>0.05,n=5).结论 外周血淋巴细胞中SNMT活性可能反映出PD发病状况,有望成为诊断的指标之一.
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人参皂甙Rg1对去卵巢帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用
目的:探讨人参皂甙Rg1对6-羟基多巴(6-OHDA)制备的去卵巢(OVX)帕金森病(PD)模型大鼠黑质(SN)多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制.方法:应用6-OHDA制备的OVX PD模型大鼠,侧脑室给予Rg1或雌激素.免疫组织化学染色酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元和Bcl-2蛋白.Perls'铁染色检测SN铁含量.结果:①Rg1或雌激素可抑制阿朴吗啡诱导的PD大鼠旋转行为;②在损毁侧SN,Rg1或雌激素用药组TH阳性神经元数量较6-OHDA组显著增多;③6-OHDAA组损毁侧SN内铁含量较健侧明显升高,应用:Rg1或雌激素后,SN铁含量较模型组明显减少;④与6-IHDAA模型组相比,Rg1及雌激素均可增加损毁侧大鼠SN内Bcl-2蛋白表达.结论:人参皂甙Rgl具有类雌激素样作用,对OVX PD模型大鼠黑质DA能神经元有明显的保护作用,其作用机制可能与降低铁负载和抗凋亡有关.
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抑制糖原合成激酶3α可减轻6-羟基多巴引起的SH-SY5Y细胞损伤
目的：糖原合成激酶3α（Glycogen synthase kinase 3α，GSK3α）在神经元死亡的信号转导过程中起了相当重要的作用。本研究在于探讨GSK3α是否参与了6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）引起的SH-SY5Y细胞损伤。方法：本研究应用糖原合成酶激酶3α的特异抑制剂Compound 27抑制SH-SY5Y细胞中GSK3α的活性，以观察其对6-OHDA引起SH-SY5Y细胞损伤的影响。结果：Compound 27可减轻6-OHDA对SH-SY5Y细胞的损伤，并可下调细胞内Caspase 3和Caspase 9的表达。这说明了，阻断GSK3α可缓解6-OHDA对SH-SY5Y的损伤。结论：阻断GSK3α可部分缓解6-OHDA对SH-SY5Y细胞的损伤；GSK3α可能介导了6-OHDA对SH-SY5Y的损伤。
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外源性超氧化物歧化酶对大鼠中脑多巴胺能神经元凋亡的保护作用研究
目的明确 6-羟基多巴 ( 6-OHDA) 致多巴胺能神经元凋亡与氧化应激的关系 , 以及外源性超氧化物歧化酶 ( SOD) 对多巴胺能神经元凋亡的保护作用 . 方法大鼠随机分组 , 检测大鼠的行为学变化、中脑活性氧水平 , 并观察大鼠中脑黑质部位 TH阳性细胞和细胞凋亡的情况 . 结果 6-OHDA注入黑质区后 , 活性氧升高至 129.82± 16.79(u/mgprot);外源性 SOD有效降低活性氧水平 , 大鼠右侧中脑黑质区 TH阳性细胞数明显增多 , 而凋亡细胞有所减少 , 大鼠的旋转圈数也明显降低 . 结论氧化应激在 6-OHDA致大鼠中脑多巴胺能神经元凋亡的过程中 , 起一定的作用 ; 而外源性 SOD增强了对活性氧的灭活能力 , 减弱了 6-OHDA的神经毒作用 , 提高了多巴胺能神经元的存活 , 改善了大鼠的旋转行为 .
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脐血间充质干细胞移植治疗帕金森病的可行性
背景：研究证实干细胞在体内体外均可被诱导分化成多巴胺能神经元，这为干细胞移植治疗帕金森病提供了理论基础。
目的：探讨脑内移植脐血间充质干细胞治疗帕金森病模型大鼠的可行性及作用机制。
方法：SD大鼠脑内注射6-羟基多巴建立帕金森病模型，将22只造模成功大鼠随机分为脐血间充质干细胞移植组12只和对照组10只，脑内分别注射脐血间充质干细胞悬液和磷酸盐缓冲液。细胞移植后第1-8周，每周腹内注射阿朴吗啡观察大鼠旋转行为，并于第2，8周取大鼠纹状体和黑质部分行免疫组织化学染色。
结果与结论：①脐血间充质干细胞移植组大鼠转圈次数随着时间延长逐渐下降，而对照组大鼠转圈次数没有明显改变，且移植后3-8周两组旋转圈数差异有显著性意义(P<0.05)。②移植后2周时，脐血间充质干细胞移植组大鼠纹状体针道内及附近有酪氨酸羟化酶阳性细胞存在；对照组大鼠的纹状体针道处无外源性细胞存在。移植后8周时，脐血间充质干细胞移植组鼠纹状体针道内仍有细胞存活，并有酪氨酸羟化酶阳性细胞存在，对照组大鼠纹状体处无酪氨酸羟化酶阳性细胞表达。结果表明脐血间充质干细胞移植后可在脑内存活并且表达酪氨酸羟化酶蛋白，且能改善帕金森病模型大鼠的行为学异常。 -
帕金森病大鼠模型黑质白介素-6表达的实验研究
目的 探讨白介素-6(IL-6)和小胶质细胞在帕金森病发病机制中作用,阐述小胶质细胞激活后作用的合理模式.方法 采用立体定向术将神经毒素6-羟基多巴(6-OHDA)注入大鼠右侧纹状体制作偏侧帕金森病大鼠模型.造模2月后,计数黑质致密部神经元和小胶质细胞数目,观察黑质致密部病理形态学变化,并采用免疫组织化学方法观察黑质致密部IL-6表达水平的变化.结果 光镜下观察模型组右侧黑质致密部多巴胺能神经元几乎消失,小胶质细胞数目明显增多,与假手术组及正常对照组相比,差异有显著性(P<0.05).免疫组化染色显示模型组右侧黑质致密部可见明显的小胶质细胞核周的棕褐色阳性表达,而模型组左侧与假手术组及正常对照组右侧黑质均未见明显阳性着染区.结论 神经毒素6-OHDA可导致神经元释放小胶质细胞激活态物质,激活小胶质细胞释放IL-6介导细胞毒作用,促进神经元的慢性变性坏死.
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纹状体内注射6-羟基多巴制备帕金森病大鼠模型的实验研究
目的研究纹状体内双靶点注射6-羟基多巴(6-OHDA)制备帕金森病大鼠模型的方法.方法将220±10g雄性Wistar大鼠随机分为3组:模型制备组30只,假手术组10只,正常对照组10只.应用立体定向仪将6-OHDA分两点注入大鼠右侧纹状体,每点10μg/5μl.假手术组注射等量生理盐水.术后以阿朴吗啡检测旋转行为,平均每分钟逆时针旋转大于7转者为成功模型.术后2个月处死大鼠,行纹状体和黑质的HE染色和TH免疫组化染色,观察病理形态学变化.结果 30只模型制作鼠中,共有22只在阿朴吗啡多次注射后,恒定地转向左侧,每分大于7转,为成功模型.光镜下,HE及TH免疫组化染色可见模型组左侧黑质内有胞浆浓染、形状不一的DA能神经元存在,数量较多,呈带状斜行排列.右侧SNc区内DA能神经元几乎消失,残存细胞萎缩.左右侧黑质内DA能神经元数目有显著差异(P<0.05).结论纹状体内注射6-OHDA是一种有效的制备帕金森病模型的方法,模型制作成功率高.
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建立类似于绝经期妇女帕金森病大鼠模型的实验研究
目的 探讨利用6-羟基多巴(6-OHDA)制备模拟绝经期妇女帕金森病的大鼠模型.方法 应用6-OHDA制备OVX PD模型大鼠,应用免疫组织化学染色、高效液相色谱法等技术对大鼠黑质(SN)的酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目、纹状体多巴胺(DA)及其代谢物二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)含量进行考察并评价.结果 阿朴吗啡可诱导出明显的PD大鼠旋转行为;大鼠损伤侧黑质TH阳性神经元数量较健侧显著减少(P＜0.01),纹状体DA及其代谢物DOPAC和HVA含量也较健侧明显减少(P＜0.01).结论 本模型具有绝经期妇女帕金森病的基本的病理特点.
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帕金森病样大鼠模型的稳定性观察
6-OHDA损毁大鼠一侧中脑黑质细胞造成偏侧帕金森病(PD)样大鼠模型,用小动物旋转行为记录仪记录阿朴吗啡诱发大鼠的旋转行为;TH免疫细胞化学染色观察中脑黑质细胞的损毁状况.连续观察10个月其旋转行为无自发性恢复;PD样模型大鼠损毁侧中脑无TH阳性细胞存在.结果表明6-OHDA损毁大鼠一侧中脑黑质细胞可造成稳定、可靠的类似PD病人病理变化的偏侧动物模型.
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6-OHDA定向毁损双侧间脑A11核团对SD大鼠行为学的影响
目的 观察6-羟基多巴胺(6-OHDA)毁损双侧间脑A11核团对SD大鼠行为表现的影响,探讨此方法建立不安腿综合征(RLS)动物模型的可行性.方法 21只健康SD大鼠根据体重随机分成3组,分别为空白组3只,假手术组9只,毁损组9只,麻醉后对大鼠双侧间脑A11做定向注射,空白组不做处理,假手术组注射0.1％维生素c生理盐水,毁损组注射0.2％6-OHDA(含0.1％维生素c的生理盐水),1周后录制视频,观察大鼠行为表现,包括站立、爬笼、睡眠次数和时间.视频录制完成后,麻醉后处死取脑,用免疫组化法检测间脑A11核团酪氨酸羟化酶(TH)的表达,统计分析A11毁损率.结果 毁损组毁损率明显高于假手术组(P<0.05),大鼠站立、爬笼、睡眠次数和时间差异均无统计学意义(P>0.05).结论 6-OHDA定向毁损双侧间脑A11对SD大鼠行为表现无显著影响,是否能作为RLS动物模型还需要进一步实验.
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Ⅱ、Ⅲ组亲代型谷氨酸受体激动剂对6-羟基多巴诱导的PC12细胞毒性无保护作用
目的:阐明Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors, mGluRs)激动剂对6-羟基多巴(6-hydroxydopamine, 6-OHDA)诱导的PC12细胞毒性是否具有保护作用.方法:应用高效液相色谱仪联用荧光检测技术测定谷氨酸浓度,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定PC12细胞活性.结果:6-OHDA剂量依赖性地诱导PC12细胞释放谷氨酸、减低细胞活性,Ⅱ组mGluRs激动剂DCG-IV和Ⅲ组mGluRs激动剂L-AP4对6-OHDA诱导的PC12细胞释放谷氨酸和细胞活性的降低均无显著影响.结论:6-OHDA对多巴胺神经元的损伤作用与其诱导谷氨酸过度释放及其继发的兴奋性神经毒性有关,Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂对6-OHDA诱导的PC12细胞毒性无保护作用.
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帕金森病小鼠和大鼠模型黑质纹状体中胆绿素还原酶B的表达
目的 探讨胆绿素还原酶B(biliverdin-Ⅸβ reductase,BVRB)在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)帕金森小鼠模型和6-羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)帕金森大鼠模型黑质-纹状体内的表达.方法 通过高效液相色谱的方法检测纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量,通过免疫印迹的方法检测黑质纹状体内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达,以确认模型的成功建立.对黑质纹状体BVRB的表达进行免疫印迹分析.结果 与正常对照组相比,MPTP小鼠及6-OHDA大鼠模型纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量均明显下降(P<0.01),黑质纹状体内TH表达水平也明显下降(P<0.05),而黑质纹状体BVRB的表达水平在两种模型中均明显增高(P<0.05).结论 黑质纹状体BVRB的高表达可能与帕金森病的氧化应激机制相关.
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中药颤复宁血清对6-羟基多巴诱导的PC12 细胞凋亡的抑制作用
目的:探讨中药颤复宁血清对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)凋亡的抑制作用.方法:用血清药理学方法制备中药血清,加到经6-OHDA处理的PC12细胞培养液中,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,并用免疫组织化学染色方法和图像分析检测酪氨酸羟化酶(TH)含量及半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)阳性凋亡细胞数.结果:颤复宁中药血清能有效地提高PC12细胞的存活率,对6-OHDA诱导的凋亡有明显抑制作用.与6-OHDA损伤组比较,颤复宁血清组TH阳性细胞平均吸光度增高(P＜0.01),Caspase-3阳性细胞数明显降低(P＜0.01).结论:中药颤复宁血清对PC12细胞具有直接的神经营养作用,能提高细胞存活率,且对6-OHDA诱导的细胞凋亡具有抑制作用.
关键词： 6-羟基多巴 PC12细胞 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 帕金森病 -
一种帕金森病大鼠模型的建立及评价
目的 探讨应用6-羟基多巴胺(6-OHDA)毁损大鼠黑质致密部制作偏侧帕金森病(PD)模型的方法和应用价值.方法 采用立体定向微注射6-OHDA于大鼠黑质致密部,观察经阿朴吗啡诱导后大鼠的行为及黑质多巴胺能神经元形态学变化.结果 部分大鼠注射后即出现行动迟缓、少动、竖毛、躬身、尾部强直、肢体震颤、嗅探和易激惹等异常行为.术后4周时,共33只大鼠经阿朴吗啡诱导后在30min(P<0.01)的平均旋转圈数>7r/min,达到成功模型的标准,模型成功率为82.5%(33/40).免疫组化观察发现模型组大鼠注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧和对照组注射侧区明显减少(P<0.01).结论 利用6-OHDA毁损大鼠黑质致密部可以较快建立稳定的PD大鼠模型,方法简便实用,动物死亡率低,模型成功率高.
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中药颤复宁对多巴胺神经元的保护作用及其机理
目的:观察中药颤复宁血清对多巴胺神经元的生长状况和细胞内钙离子浓度的影响,并探讨其保护作用的机理.方法:用血清药理学方法制备中药颤复宁大鼠血清,加入到6-羟基多巴(6-OHDA)处理的多巴胺神经元培养液中,检测酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数及测量TH阳性神经元胞体面积和长突起的长度.用激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度.结果:6-OHDA损伤后,对照血清组多巴胺神经元数量减少,突起变短,细胞内钙离子浓度升高.而颤复宁血清组TH阳性细胞数量多,多巴胺神经元大突起长度长,细胞内钙离子浓度明显降低(P＜0.01).结论:中药颤复宁血清能提高多巴胺神经元的生长活性,平衡细胞内钙离子浓度,对6-OHDA体外毁损的多巴胺神经元具有直接的保护作用.
关键词： 颤复宁 6-羟基多巴 多巴胺神经元 钙离子 激光扫描共聚焦显微镜
