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熄风通络法对帕金森病泛素-蛋白酶体通路的影响
目的:观察熄风通络法对帕金森病模型大鼠泛素-蛋白酶体通路的影响.方法:采用6-羟基多巴胺单侧双点注射法制备PD动物模型.将造模成功的大鼠随机分为熄风通络高、中、低剂量组,模型组,并设假手术组,然后给予对应药物灌胃治疗8周.采用阿扑吗啡诱导观察各组大鼠行为学表现;采用TUNEL方法检测黑质细胞凋亡;采用Western Blot方法检测脑组织中的泛素蛋白(UB)、泛素激活酶E1(UBE1)、Parkin蛋白、泛素羧基端水解酶-L1(UCH-L1)及α-突触核蛋白(α-Synuclein)表达.结果:造模术后的大鼠出现以健侧后肢为支点原地恒向健侧旋转的行为.与模型组比较,熄风通络高、中、低剂量组大鼠旋转圈数明显下降(P＜0.05);黑质区凋亡细胞明显减少(P＜0.05);脑组织中UB、UBE1、Parkin、UCH-L1含量明显增多(P＜0.05),α-Synuclein明显减少(P＜0.05).结论:采用熄风通络中药能够修复6-OHDA对神经元细胞损伤,调控UPP功能促进异常蛋白降解,减少黑质神经元凋亡,对多巴胺能神经元具有很好地保护作用.
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人非ATP酶依赖性调节颗粒13对人牙周膜细胞的调节作用
目的：探讨人非ATP酶依赖性调节颗粒13（hRpn13）通过泛素-蛋白酶体通路（UPP）途径对人牙周膜细胞（PDLC）的作用，从而揭示其对PDLC增殖、分化和功能的调节作用。方法通过转染敲除来改变PDLC中hRpn13的表达后，用MTT法观测细胞形态，4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）来检测细胞增殖情况，通过检测碱性磷酸酶（ALP）和Ⅰ型胶原纤维的分泌情况来检测细胞成骨分化情况，后通过检测NF鄄κB受体活化子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）、泛素化蛋白的改变来研究hRpn13对PDLC功能的调节作用及其可能机制。结果 hRpn13对成纤维细胞的增殖和ALP的活性，Ⅰ型胶原蛋白以及RANKL、OPG的表达起到了负性调节作用，同时hRpn13使泛素化蛋白聚集减少。结论 hRpn13可以通过影响UPP通路来调节成纤维细胞的增殖、分化和功能。
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蛋白酶体抑制剂的抗肿瘤作用及其临床应用
泛素-蛋白酶体通路介导细胞蛋白质的降解,在细胞周期、基因转录及表达、抗原提呈和炎症演进等方面发挥调控作用.蛋白质酶体抑制剂可抑制肿瘤细胞的生长和增殖,诱导凋亡,逆转肿瘤细胞的多药耐药性,增加其他化疗药物和放疗的敏感性,具有良好的抗肿瘤作用,是一个极有前景的抗肿瘤药物.现综述其作用机制、分类、抗肿瘤作用及临床应用进展.
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慢性肾衰竭与泛素-蛋白酶体通路
泛素-蛋白酶体通路是目前已知的重要的、有高度选择性的依赖ATP的蛋白质降解途径,它由泛素、多种酶、26S蛋白酶体等组成,细胞内约80%的细胞蛋白由该通路降解.慢性肾衰竭患者营养不良和瘦体重丢失与泛素-蛋白酶体通路的激活相关,此通路的激活加速了肌肉蛋白的降解,同时代谢性酸中毒、动脉粥样硬化、营养不良、炎症等慢性肾衰竭患者常见并发症激活此通路从而引起一系列病理反应.
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蛋白酶体抑制剂在肺癌治疗中的研究进展
泛素-蛋白酶体通路(UPP)是细胞内重要的蛋白质降解系统.研究表明UPP参与恶性肿瘤多种细胞生物学过程的调节,影响其发生、发展.蛋白酶体抑制剂通过阻断UPP,可抑制肿瘤细胞生长,成为肿瘤治疗的新方法.肺癌在人类癌症死亡原因中居于首位,蛋白酶体抑制剂对肺癌的疗效研究仍在进行,其作用机制复杂,与NF-κB的下调、细胞周期调控、PTEN/PI3K/Akt通路和P53的调节等有关.本文对蛋白酶体抑制剂在肺癌治疗的新进展进行综述.
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COPD大鼠骨骼肌泛素-蛋白酶体降解通路与IL-10相关性的研究
目的：研究 COPD 大鼠模型的骨骼肌泛素(Ub)-蛋白酶体降解途径中 E2-14K、MAFbx、Ub 蛋白表达,肿瘤坏死因子α(TNF-α)和炎症抑制因子 IL-10在大鼠血清和骨骼肌中含量变化,探讨 IL-10在 COPD 骨骼肌蛋白高分解过程中的作用及调控机制。方法成年雄性 SD 大鼠45只,其中分为模型组30只、对照组15只,采用反复熏香烟+气管内注入脂多糖法复制 COPD 大鼠动物模型。蛋白质印迹法分别检测大鼠膈肌、腓肠肌和肋间肌中 E2-14K、MAFbx、Ub 蛋白表达。用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清、膈肌、腓肠肌和肋间肌中 IL-10和 TNF-α的含量。结果模型组膈肌、肋间肌、腓肠肌中 E2-14K、MAFbx、Ub 蛋白的相对表达量显著增加。在模型组中,血清和骨骼肌肌内 TNF-α较对照组显著升高,IL-10表达均下降[血清(44.68±8.67)vs (75.96±10.59),膈肌(50.55±7.41)vs (80.06±9.22),肋间肌(47.47±8.98)vs (78.10±7.21),腓肠肌(48.60±10.88)vs (76.77±8.92),P <0.01]。血清、膈肌、肋间肌和腓肠肌中 IL-10和 TNF-α水平呈负相关(血清 r =-0.67,膈肌 r =-0.78,肋间肌 r =-0.80,腓肠肌 r =-0.77,P <0.05)。血清、膈肌、肋间肌和腓肠肌中 IL-10都与中性粒细胞百分比、E2-14K、MAFbx、Ub 蛋白相对表达量呈负相关(血清 r =-0.80、r =-0.73、r =-0.69、r =-0.81；膈肌 r =-0.83、r =-0.81、r =-0.75、r =-0.79；肋间肌 r =-0.81、r =-0.80、r =-0.74、r =-0.54；腓肠肌 r =-0.74、r =-0.69、r =-0.71、r =-0.62,P <0.05)。血清 IL-10与骨骼肌IL-10呈显著正相关(膈肌 r =0.83、肋间肌 r =0.80、腓肠肌 r =0.73,P <0.01)。结论 IL-10的下调在 COPD 炎症中起重要作用,可能参与骨骼肌 Ub-蛋白酶体降解途径降解机制的调控。
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宣肺化瘀方经激活泛素-蛋白酶体途径抗肺纤维化的相关机制研究
目的:基于泛素-蛋白酶体通路探讨宣肺化瘀方(XFHY)防治大鼠肺纤维化的作用机制.方法:将60只雄性SPF级Wistar大鼠随机分为6组,即阴性对照组、模型组、醋酸泼尼松组、XFHY高剂量组、XFHY中剂量组、XFHY低剂量组.除阴性对照组外,均经鼻滴入博莱霉素建立大鼠肺纤维化模型.XFHY高、中、低剂量组大鼠分别每日灌胃XFHY14.38 g/kg、7.19 g/kg、3.60 g/kg,醋酸泼尼松组大鼠每日剂量为0.167 mg/kg,模型组和阴性对照组给予等体积的0.9％NaCl溶液灌胃.各组均灌胃28 d.处死大鼠,通过肺组织HE染色和天狼猩红染色鉴定模型.采用碱性水解法测定肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量;采用PowerLab测定肺功能;应用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中TGF-β1含量;应用Western blot检测肺组织Ub、PSMC2、Smurf1、Smurf2蛋白表达.结果:HE染色和天狼猩红染色结果显示,肺纤维化模型组肺组织可见大量胶原纤维沉积,宣肺化瘀方各剂量组肺泡间隔胶原纤维表达明显减少.与阴性对照组比较,模型组HYP含量及BALF和肺组织中TGF-β1含量显著升高,而平均呼气峰流量(PEF)和每分钟通气量(MV)显著降低,Ub、PSMC2、Smurf1、Smurf2蛋白表达明显降低(P＜0.01,P＜0.05);与模型组比较,XFHY各剂量组胶原纤维表达和HYP含量均显著下降,其中XFHY高剂量组比XFHY低剂量组和中剂量组胶原纤维表达更少(P＜0.05),HYP含量更低(P＜0.01,P＜0.05);而XFHY各剂量组PEF和MV均有所升高,其中,XFHY高剂量组比XFHY低剂量组和中剂量组更高(P＜0.01,P＜0.05);XFHY高剂量组BALF和肺组织中TGF-β1含量显著降低,而Ub、PSMC2、Smurf1、Smurf2蛋白表达明显升高(P＜0.01).结论:宣肺化瘀方能有效防治肺纤维化,其机制可能是通过激活泛素～蛋白酶体通路、降低BALF和肺组织中TGF-β1的蛋白含量,从而减少胶原纤维形成.
关键词： 肺纤维化 泛素-蛋白酶体通路 宣肺化瘀方 Smad泛素调节因子 -
泛素蛋白酶体通路以及蛋白酶抑制剂对NF-κB信号通路作用的研究进展
1 蛋白酶体及泛素-蛋白酶体通路(UPP)蛋白酶体是指有蛋白降解作用的酶复合体,存在于所有真核细胞中,占细胞蛋白总量的近1%.大多数的蛋白酶体自由分布于胞核和细胞质中,而部分是与不同细胞成分固定结合,在个别被成为PML小体的亚核中浓缩存在.在细胞质中蛋白酶体亚群是与内质网(ER)表面、细胞骨架、中心体相伴随.
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泛素-蛋白酶体通路与药物研发
泛素-蛋白酶体通路控制着真核细胞内大多数蛋白质的降解，调控几乎所有的生命活动，包括细胞增殖、分化、凋亡、转录、DNA修复等。该通路异常会导致癌症、神经退行性疾病等多种人类疾病。目前上市的蛋白酶体抑制剂已成功用于治疗多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤等癌症，在研的多个靶向泛素-蛋白酶体通路不同组分的新型药物均显示出很有希望的体内治疗效果。本文将简要介绍与泛素-蛋白酶体通路相关药物研发的进展。
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蛋白酶体抑制剂MG132诱导人血管平滑肌细胞凋亡及其机制研究
目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132对人脐静脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3)表达的影响.方法:采用多个浓度(2.5、5、10 μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理人脐静脉VSMC 24 h和48 h;流式细胞术分析细胞凋亡率;RT-PCR检测泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome patlaway,UPP)相关基因泛素、泛素活化酶(E1)、泛素缀合酶(E_2)、泛素连接酶(E_3)、26S蛋白酶体和caspase 3基因转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达.结果:蛋白酶体抑制剂MG132处理48 h后细胞凋亡率增加;细胞内UPP相关的基因mRNA表达降低,而caspase-3 mRNA表达增高;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达水平升高.结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导人脐静脉VSMC凋亡,其作用呈量-效关系;MG132诱导VSMC凋亡与下调UPP相关基因和上调caspase 3基因及蛋白的表达有关.
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肝细胞癌相关因子与泛素-蛋白酶体通路关系的研究
肝细胞癌因为其治疗方法的局限性,成为世界上致死率高的恶性肿瘤疾病之一.泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasome padaway,UPP)是调节多种细胞生物学过程的重要机制,也是恶性肿瘤相关疾病调节异常的潜在靶点.本文就泛素-蛋白酶体通路与肝细胞癌发生相关因子[乙型肝炎病毒(HBV)、P27、NF-κB等]的关系加以综述,以寻找新的方法对肝细胞癌的发生发展加以干预.
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泛素-蛋白酶体通路在细胞生存和肿瘤发生中的作用
泛素-蛋白酶体通路在正常细胞和病变细胞的蛋白降解中起着十分重要的作用.在肿瘤的发生发展中,该通路与肿瘤细胞周期失控和自噬等方面有着紧密的内在联系.该文综述了近几年在肿瘤发生和发展中与泛素-蛋白酶体通路相关的新研究进展,通过对泛素-蛋白酶体通路某些异常蛋白的深入探讨,为肿瘤的药物治疗提供新的思路,为抗肿瘤新药研发提供更多的分子理论依据.
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阻断UPP对脑缺血大鼠p53转录活性和细胞凋亡的影响
线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,用clasto-lactacystin β-lactone阻断泛素-蛋白酶体通路(UPP),TUNEL检测脑组织凋亡细胞,共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)结合FITC标记p53和PI标记细胞核的荧光双标技术对p53进行定位和定量分析.结果 显示,脑缺血再灌注24 h 脑组织细胞核中出现代表p53的绿色荧光(表明p53激活),同时细胞凋亡增加;阻断UPP后,细胞核中代表p53的绿色荧光减少,主要堆积在细胞质(表明p53的转录活性减弱),同时细胞凋亡减少.认为脑缺血后阻断UPP产生的神经保护作用可能与抑制p53的转录活性、减少细胞凋亡有关.
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泛素-蛋白酶体通路的研究进展
泛素一蛋白酶体通路(UPP)是蛋白质的选择性降解中一项非常重要的机制,研究发现该通路介导的细胞蛋白降解是一个非常复杂而缜密的调控过程,是细胞调控的重要机制,通过降解细胞各通路的抑制因子和(或)激活因子发挥着上调或下调作用.
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长春新碱诱导肝癌细胞自噬性凋亡过程中泛素与bcl-2的变化
目的探讨长春新碱(VCR)诱导HepG2肝癌细胞自噬性凋亡过程中泛素表达的变化及阻断泛素-蛋白酶体通路对此凋亡和bcl-2表达的影响.方法应用VCR诱导HepG2细胞自噬性凋亡,采用流式细胞仪检测凋亡及泛素的表达;以RT-PCR检测bcl-2的表达.结果VCR处理后发生自噬性凋亡的HepG2细胞中泛素含量增加(P＜0.01).加用蛋白酶体特异抑制剂乳胞素后的乳胞素+VCR组凋亡率明显比单用VCR组高(P＜0.01),而bcl-2表达则比单用VCR组更低.结论泛素-蛋白酶体通路参与了VCR诱导的HepG2细胞自噬性凋亡及对bcl-2蛋白的调控.对蛋白酶体功能的抑制可以促进VCR诱导的HepG2细胞凋亡.
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泛素-蛋白酶体通路
泛素-蛋白酶体通路介导的细胞蛋白降解是一个复杂、缜密的调控过程,同时在细胞周期、基因转录及表达、抗原提呈和炎症演进等方面发挥调控作用,尤其是通过降解细胞各通路的抑制因子或/和激活因子发挥上调或下调作用; 而且泛素-蛋白酶体通路的异常与诸多疾病如恶性肿瘤、神经变性疾病、遗传性疾病、炎症、心肌病的致病机制有关.对于细胞应用该通路降解靶蛋白机制的阐明,将有助于研发这些疾患的治疗方法.
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芍药苷对α－突触核蛋白降解通路的影响
目的：探讨芍药苷对α－突触核蛋白的降解途径－自噬和泛素－蛋白酶体通路的影响。方法：PC12细胞用或不用 MPP＋（0．5 mmol／L）处理24 h，然后用芍药苷（50μmol／L）或雷帕霉素（0．2μg／mL）处理24 h，MTT法检测细胞增殖活性，Western印迹检测α－突触核蛋白、微管相关蛋白轻链3（LC3-Ⅱ）和E1的蛋白质表达水平，共聚焦显微镜观察α－突触核蛋白和LC3-Ⅱ在细胞内的荧光强度及共定位情况。结果：（1）与MPP＋组相比，雷帕霉素和芍药苷处理后细胞过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活力均显著下降（P ＜0．001），细胞形态恢复正常；（2）MPP＋处理导致 LC3－Ⅱ和E1表达水平升高，雷帕霉素处理后LC3－Ⅱ增高而E1水平下降，芍药苷处理既显著上调LC3－Ⅱ（自噬）也上调了 E1的表达（泛素－蛋白酶体途径）（P ＜0．001），促进了α－突触核蛋白的降解；（3）MPP＋增强细胞内α－突触核蛋白和LC3-Ⅱ的荧光强度，芍药苷处理后α－突触核蛋白的荧光强度下降。结论：本研究结果表明芍药苷同时显著上调自噬和泛素蛋白酶体途径，促进了α－突触核蛋白的降解，减少细胞损伤。
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地塞米松对COPD大鼠膈肌泛素-蛋白酶体通路调控机制的研究
目的:探讨地塞米松对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠膈肌泛素-蛋白酶体通路中E2-14K、MAFbx、MuRF-1蛋白表达的影响,分析其调控机制.方法:SD大鼠42只,随机分为对照组13只、模型组15只及干预组14只.采用气管内注入脂多糖加反复熏香烟法复制COPD大鼠动物模型.蛋白免疫印记方法测定大鼠膈肌内E2-14K、MAFbx、MuRF-1的表达.酶联免疫吸附法测定大鼠血清及膈肌中的TNF-α水平.分析TNF-α及与E2-14K、MAFbx、MuRF-1的相关性.结果:成功建立COPD大鼠模型;COPD大鼠膈肌中E2-14K、MAFbx、MuRF-1蛋白的表达均较对照组明显升高(P＜0.01),干预组膈肌中E2-14K、MAFbx、MuRF-1较模型组降低(P＜0.01);TNF-α水平与E2-14K、MAFbx、MuRF-1呈显著正相关(P＜0.01).结论:COPD大鼠膈肌中泛素-蛋白酶体通路的表达与TNF-α水平有关,地塞米松降低COPD大鼠膈肌泛素-蛋白酶体表达可能与下调TNF-α的抗炎作用有关.
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泛素蛋白酶体通路与动脉粥样硬化
泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)是广泛存在于真核细胞中的,依赖ATP的选择性蛋白质降解的主要途径.泛素的主要功能是标记细胞中需要降解的蛋白质,使其被26S蛋白酶体识别和降解.UPP主要通过介导细胞中蛋白的降解而发挥调节作用.该通路的异常与许多疾病诸如肿瘤、遗传性疾病、神经退行性疾病、心血管疾病等密切相关.本文主要综述了UPP在动脉粥样硬化的发生,发展和复合病变中的作用.
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慢性阻塞性肺疾病大鼠膈肌萎缩信号通路与白细胞介素17相关性的研究
目的 研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠膈肌萎缩信号通路—泛素-蛋白酶体通路中E2-14K、MAFbx和MuRF-1蛋白表达及核转录因子κB (NF-κB) p50表达情况,以及前炎症因子白细胞介素17(IL-17)在大鼠血清及膈肌中的表达,探讨膈肌萎缩的可能调控机制.方法 采用气管内滴入脂多糖+反复熏香烟法复制COPD大鼠动物模型.Western blot法测定大鼠膈肌内E2-14K、MAFbx、MuRF-1及NF-κB p50表达,ELISA法测定大鼠血清及膈肌中IL-17的表达.结果 Western blot结果显示COPD大鼠膈肌中E2-14K、MAFbx、MuRF-1及NF-κB p50蛋白的表达均较对照组明显升高(0.96±0.12比0.53±0.09,0.99±0.10比0.53±0.08,0.95±0.08比0.51±0.16,1.11±0.10比0.64±0.50,P均＜0.01).ELISA结果显示IL-17在血清及膈肌中的表达均升高(P均＜0.01).NF-κB p50与E2-14K、MAFbx、MuRF-1水平呈显著正相关(r值分别为0.82、0.92、0.86,P均＜0.01)；血清IL-17与中性粒细胞百分比、NF-κB p50、E2-14K、MAFbx、MuRF-1呈显著正相关(r值分别为0.94、0.90、0.85、0.84及0.79,P均＜0.01)；膈肌IL-17与中性粒细胞百分比、NF-κB p50、E2-14K、MAFbx、MuRF-1呈显著正相关(r值分别为0.88、0.90、0.72、0.86及0.80,P均＜0.01)；血清IL-17与膈肌IL-17呈显著正相关(r=0.84,P＜0.01).结论 COPD大鼠膈肌中泛素-蛋白酶体通路与NF-κB通路表达上调可能是导致膈肌萎缩的主要原因之一,IL-17可能参与了膈肌萎缩的调控.
关键词： 慢性阻塞性肺疾病 膈肌 泛素-蛋白酶体通路 核转录因子κBp50 白细胞介素17
