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解毒活血通络中药复方含药血清对人脐静脉内皮细胞LOX-1、TNF-α、ICAM-1表达的影响
目的:研究解毒活血通络中药复方防治动脉粥样硬化的作用机制及其效应靶点.方法:选取新西兰大耳白兔18只,随机分为3组,分别以生理盐水和解毒活血通络中药复方、阿托伐他汀连续灌胃7d,心脏采血,分离血清;体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖( LPS)刺激后,用含药血清干预,收集细胞,用Real-time PCR方法和Western Blot方法分别检测凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1) mRNA和蛋白表达、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1) mRNA表达.结果:与空白对照组比较,用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起LOX-1 mRNA和蛋白、TNF-α、ICAM-1 mRNA的高表达(P＜0.01),与模型组比较,用中药含药血清干预,显著抑制LOX-1mRNA和蛋白、TNF-α、ICAM-1 mRNA的高表达(P＜0.01,P＜0.05).结论:解毒活血通络中药复方对LPS刺激后的人脐静脉内皮细胞具有保护作用,其机制与解毒活血通络中药复方对LOX-1、TNF-α和ICAM-1表达有抑制作用,减少单核细胞与血管内皮细胞黏附有关.
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脂联素减轻高糖诱导的人血管内皮细胞系损伤
目的 观察脂联素(APN)对高糖诱导血管内皮细胞系损伤的保护作用及NF-κB与LOX-1蛋白表达在其中的作用.方法 30 mmol/LD-葡萄糖作用于HUVEC-12(人脐静脉内皮细胞系),不同浓度的脂联素(10、20和40 μg/mL)作用48 h及20μg/mL脂联素作用不同时间(12、24、48和72 h)后,倒置相差显微镜观察内皮细胞形态,Western blot检测核转录因子NF-κB和LOX-1蛋白表达,间接免疫荧光法检测NF-κB核转位情况.结果 脂联素作用于D-葡萄糖诱导的HUVEC-12,内皮细胞形态改善,折光性增强,胞内颗粒物减少,细胞排列相对规整;同时,LOX-1蛋白表达下调(P＜0.05),NF-κB活性降低(P＜0.05),并呈现时间和浓度依赖性(n=3,P＜0.05).结论 脂联素可能通过NF-κB信号通路引起LOX-1蛋白表达下调,从而发挥其对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用.
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丹参多酚盐对动脉内膜增生的影响及其机制研究
目的：观察丹参多酚盐对大鼠颈动脉内膜损伤后血管增生的影响，并探讨其机制。方法将18只SD大鼠随机分为假手术组、手术组、丹参多酚盐组，每组6只，颈动脉内膜损伤术后14 d分别检测各组大鼠血清中白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β）水平，并取颈动脉切片作病理形态学观察内膜增生情况，测量血管新生内膜厚度（IT）、中膜厚度（MT）并计算IT/MT值，RT-PCR和Western Blot分别测定各组管壁 LOX-1mRNA和蛋白的表达变化。结果大鼠颈动脉内膜损伤后14 d可见血管内膜增生，管腔狭窄；与假手术组比较，手术组管壁LOX-1mRNA和蛋白的表达升高，差异具有统计学意义（P均＜0.05），血清中促炎因子IL-6、TNF-α水平上升，抗炎因子IL-10、TGF-β水平下降，差异具有统计学意义（P均＜0.05）；与手术组比较，丹参多酚盐组内膜增生显著减低，血清IL-6、TNF-α水平下降，IL-10、TGF-β水平升高，差异具有统计学意义（P均＜0.05），管壁LOX-1 mRNA和蛋白表达水平明显降低，差异具有统计学意义（P均＜0.05）；丹参多酚盐组与假手术组比较，大鼠颈动脉IT、MT和IT/MT，血清中IL-6、IL-10、TNF-α和TGF-β水平，管壁LOX-1mRNA和蛋白表达水平，差异不具有统计学意义（P均＞0.05）。结论丹参多酚盐能有效抑制大鼠颈动脉内膜损伤后内膜的增生，抑制炎症反应，其机制可能与下调增生内膜LOX-1表达有关。
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西红花酸对动脉粥样硬化大鼠血脂及LOX-1表达的影响
目的 研究西红花酸对动脉粥样硬化大鼠血脂及LOX-1表达的影响.方法 健康SD雄性大鼠,随机分为4组:空白对照组、模型组、西红花酸高剂量组、西红花酸低剂量组.高脂饲料建立大鼠实验性动脉粥样硬化模型,测定大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白.同时取主动脉做病理切片检查.RT-PCR、Western blotting技术检测主动脉LOX-1的基因与蛋白表达水平,观察西红花酸对其血管平滑肌细胞LOX-1表达的影响.结果高、低剂量的西红花酸能显著降低动脉粥样硬化大鼠血清TC、TG和LDL-C含量;明显降低主动脉LOX-1的表达.结论 西红花酸可明显下调动脉粥样硬化大鼠LOX-1的表达.
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高尿酸血症介导ox-LDL与LOX-1系统与冠心病发病的相关性研究分析
目的 探究高尿酸血症介导ox-LDL与LOX-1系统与冠心病发病的相关性.方法 研究时间为2015年1月至2016年1月,选择10周龄SD小鼠90只,称重编号后随机分为三组:对照组(n=30),冠心病组(n=30),冠心病合并高尿酸血症组(n=30).冠心病组给予高脂肪饮食,冠心病合并高尿酸血症组给予高脂肪饮食及尿酸酶抑制剂(氧嗪酸钾)灌胃,同步予以对照组生理盐水.对三组小鼠的白细胞介素1(IL-1)、IL-6、IL-10、Lp(a)、ox-Lp(a)、β2-GPI-Lp(a)水平;ox-LDL水平、LOX-1蛋白以及mRNA水平的差异进行分析对比.结果 冠心病合并高尿酸血症组小鼠在炎性介质及细胞因子,脂代谢,ox-LDL水平、LOX-1蛋白以及mRNA水平方面明显高于对照组及冠心病小鼠(P<0.05).结论 在冠心病的发展过程中,多伴随有ox-LDL与LOX-1表达升高,高尿酸血症介导的ox-LDL与LOX-1可能参与了冠心病的发病过程.
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血脉脂康胶囊对高血脂症兔OX-LDL水平及LOX-1表达的影响
目的 探讨血脉脂康胶囊对高血脂症兔氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)水平及植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-(LOX-1)表达的影响.方法 :应用胆固醇、高脂灌胃法制作兔高血脂症模型,实验设正常组、模型组、对照组(辛伐他汀)和中药组(血脉脂康胶囊).在实验的0周、5周和10周(实验结束)时分别检测各组动物的OX-LDL水平,并在实验结束时应用RT-PCR法检测LOX-1 mRNA的表达.结果 实验第5、10周时中药组OX-LDL水平明显低于模型组;实验结束时中药组LOX-1基因表达亦明显低于模型组.结论 血脉脂康胶囊可降低高血脂症动物的OX-LDL水平和LOX-1的表达,从而达到治疗AS的目的.
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益肾降浊冲剂对5/6肾切除大鼠残肾脂质蓄积和小管间质损伤的影响
目的:观察益肾降浊冲剂对5/6肾切除大鼠残肾小管间质损伤的保护作用并探讨其机制.方法:SD雄性大鼠,随机分为假手术组、模型组、他汀组、益肾降浊冲剂组(n=8).5/6肾切除建立慢性肾衰竭(CRF)大鼠模型,建模后2周始给药.用药8周后,检测血脂、肾功能变化,PAS染色、油红O染色、免疫组化、TUNEL染色分别观察残肾小管间质损伤评分、脂质蓄积、血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的表达、肾小管上皮细胞凋亡数的变化.结果:与假手术组比较,模型组大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)明显升高(P<0.01),残肾小管间质病理损伤明显加重、脂滴、LOX-1的表达、肾小管上皮细胞凋亡数均明显增高(P<0.01);益肾降浊冲剂干预后,与模型组比较,上述指标均明显降低(P<0.01).结论:益肾降浊冲剂能减轻CRF肾小管间质的损伤,其机制与纠正脂代谢紊乱、减轻肾内脂质蓄积、下调LOX-1的表达、减轻细胞凋亡有关.
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氧化低密度脂蛋白对大鼠肾脏系膜细胞增殖及LOX-1、TNF-α表达的影响
目的：应用MTT酶标分析法,检测在不同浓度、不同时长氧化低密度脂蛋白( ox-LDL)干预下的大鼠肾小球系膜细胞( RMC)的增殖情况以及不同浓度ox-LDL干预下LOX-1和TNF-α的表达,探讨其相互关系。方法：体外培养RMC,使用不同浓度ox-LDL在不同时间对RMC干预,经MTT法检测,并进行分组分析。用浓度为5μg/ml和50μg/ml的ox-LDL干预RMC 24 h,使用RT-PCR法和Western blot法检测LOX-1和TNF-α的mRNA和蛋白表达量,并进行分析比较。结果：Ox-LDL干预RMC 在时间点为24 h的结果显示,在1~30μg/ml范围内呈生长促进效应,浓度大于30μg/ml后呈生长抑制效应；干预48 h组对细胞效应趋势基本与作用24 h后一致,但生长抑制效应从30μg/ml开始；而72 h组,ox-LDL在各个浓度均显示出生长抑制效应。5μg/ml及50μg/ml浓度ox-LDL干预RMC后,均可使LOX-1和TNF-α的mRNA和蛋白表达升高,且50μg/ml较5μg/ml效果明显,结果差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：Ox-LDL对RMC增殖影响具有浓度及时间依赖性。较低及较高浓度ox-LDL均能导致RMC中LOX-1和TNF-α的表达增高,且浓度较高时效果更明显。其机制可能为ox-LDL导致LOX-1表达增多,引起炎症因子的产生和趋化,发生细胞损伤,提示脂质代谢紊乱在肾脏疾病中的重要作用。
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LOX-1对ox-LDL诱导的小鼠巨噬细胞MMP-9表达的影响
目的 观察LOX-1对ox-LDL诱导的小鼠巨噬细胞MMP-9表达的影响.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,构建LOX-1小干扰RNA(LOX-1-siRNA),并用LOX-1-siRNA 0.5μg、1μg、1.5μg与脂质体转染剂(μl)比例为1:1,1:2,1:3转染RAW264.7细胞48 h,经荧光显微镜观察不同转染条件下的转染效率,并分别使用反转录-多聚酶反应(RT-PCR)和Western blot的方法检测各组LOX-1的mRNA和蛋白表达水平并选取佳转染比例.随机将RAW264.7细胞分成4组:对照组、ox-LDL组、ox-LDL+LOX-1-siRNA组和pGenesil组;分别使用反转录-多聚酶反应(RT-PCR)和Western blot的方法检测各组MMP-9的mRNA和蛋白表达水平.结果 ①LOX-1-siRNA1及LOX-1-siRNA2分别转染RAW264.7细胞48 h,LOX-1-siRNA2抑制作用强于LOX-1-siRNA1.②用LOX-1-siRNA与脂质体转染剂不同比例转染RAW264.7细胞48 h后,当LOX-1-siRNA量为1.0μg、Lipofectamine2000的量为2μl时转染效率高,与其余任一组相比差异有统计学意义(P<0.05).③与对照组比较,ox-LDL组MMP9 mRNA表达水平明显升高;ox-LDL+LOX-1-siRNA组与ox-LDL组比较MMP-9 mRNA表达明显减弱;pGenesil组MMP-9 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义.④与对照组相比,ox-LDL组MMP9蛋白表达明显增加;ox-LDL+LOX-1-siRNA组与ox-LDL组比较MMP-9蛋白表达明显减弱;pGenesil组MMP-9蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义.结论 ox-LDL可促进小鼠巨噬细胞MMP9的表达;抑制小鼠巨噬细胞LOX-1的表达后,ox-LDL促进MMP9的表达相应减弱.由此可见ox-LDL可通过LOX-1受体促进MMP-9表达.
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搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞LOX-1mRNA表达的影响
目的:观察搜风祛痰中药对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞LOX-1 mRNA表达的影响.方法:制备兔活心汤含药血清.采用酶消化法培养HUVECs 2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞LOX-1 mRNA,随机分成5组:正常对照组,AngⅡ组,低浓度药物血清+AngⅡ组中浓度药物血清+AngⅡ组高浓度药物血清+AngⅡ组.结果:活心汤可抑制AngⅡ所致的内皮细胞损伤,减少LOX-1 mRNA的表达.结论:活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,可以保护血管内皮功能.
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LOX-1基因多态性与腔隙性脑梗死的相关性研究
目的 探讨LOX-1基因G501C位点多态性与腔隙性脑梗死发病的相关性.方法 用PCR-LDR方法检测167例腔隙性脑梗死患者和386例健康对照者LOX-1基因G501C位点基因型.结果 腔隙性脑梗死组的CC+GC基因型、GC基因型频率明显高于对照组(P=0.02,P＜0.01).病例组G501C位点的GC基因型频率,在校正传统危险因素后仍明显高于对照组,且差异有统计学意义(OR=1.762,95％ CI=1.175-2.644,P＜0.01).结论 LOX-1基因G501C位点多态性与腔隙性脑梗死的发病密切相关,可能是腔隙性脑梗死发病的危险因素.
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血府逐瘀汤含药血清对Toll样受体4信号转导通路及下游炎症因子的影响
目的:研究血府逐瘀汤含药血清对血管内皮细胞Toll样受体4信号转导通路及下游LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1等炎症因子表达的影响,探讨血府逐瘀汤抗动脉粥样硬化的机制. 方法:采用药物血清学方法制备血府逐瘀汤含药血清以备细胞实验使用. 体外培养血管内皮细胞,随机分为对照组、模型组、阿托伐他汀组、血府逐瘀汤组,用LPS刺激2 h后,分别加入阿托伐他汀和血府逐瘀汤含药血清干预24 h. 用荧光定量PCR方法测定TLR4、MYD88、TRAF-6、NF-κB、LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的基因表达;用Western blot 方法测定TLR4、NF-κB、LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1蛋白表达.结果:用LPS刺激血管内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB、LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的表达升高,与对照组比较,差异有统计学意义( P<0.01 );用药物血清干预以后血府逐瘀汤组显著抑制各项指标的表达,与模型组比较,差异有统计学意义( P<0.05 ). 结论:血府逐瘀汤可抑制TLR4/NF-κB信号转导通路及下游LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1等炎症因子的表达,这可能是其防治动脉粥样硬化作用的机制之一.
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体外研究人LOX-1受体功能的细胞模型建立
目的 研究LOX-1受体在早期动脉粥样硬化中的作用,建立体外LOX-1高表达细胞模型,用于探讨LOX-1与Ox-LDL的相互作用及参与泡沫细胞形成的机制.方法 根据人类cDNA文库设计引物,采用巢式PCR技术用人单核细胞转化的巨噬细胞中扩增出LOX-1完整编码区,克隆至pEGFP-C1重组真核表达载体,经测序证实后,用脂质体转染法转染至293T细胞,采用RT-PCR鉴定外源基因的表达,倒置荧光显微镜检测质粒转染效率和融合蛋白的细胞膜上定位情况,流式细胞技术检测EGFP-LOX-1融合蛋白表达情况以及其对Ox-LDL的结合能力.结果 pEGFP-LOX-1重建质粒经测序证实克隆的LOX-1序列完整,插入方向正确,转染后实验组LOX-1 mRNA大量表达,融合蛋白正确定位在细胞膜表面,并显示结合配体Dil-Ox-LDL的功能提高到6.3倍.表明所克隆的LOX-1受体具有特异性结合Ox-LDL的功能,从而建立了高表达LOX-1受体的细胞.结论 成功克隆人类LOX-1基因,使其在293T细胞中高度表达并获得了相应的功能,为进一步研究LOX-1提供有利工具.
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牙龈卟啉单胞菌脂多糖对THP －1源性巨噬细胞CD36和LOX －1表达的影响
目的：该文以THP －1源性巨噬细胞为研究对象，研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P． g － LPS）对巨噬细胞内胆固醇代谢关键分子CD36、LOX －1表达的影响。方法以160 nmol ／ L 佛波酯（PMA）诱导THP －1单核细胞48 h，使其分化为巨噬细胞。建立P． g － LPS 与THP －1源性巨噬细胞共孵育的体外模型，在负荷50μg ／ mL 低密度脂蛋白（LDL）的条件下，分别用浓度为0．1、1．0、10．0μg ／ mL P． g － LPS 与巨噬细胞共孵育48 h；1μg ／ mL P． g － LPS 与巨噬细胞共孵育24、48和72 h。采用实时荧光定量PCR 和Western blot 方法探讨巨噬细胞胆固醇代谢关键分子CD36和LOX －1表达变化。结果与空白对照组相比，随着P． g － LPS 浓度的增加和1μg ／ mL P． g － LPS 孵育时间的延长，巨噬细胞内CD36 mRNA 和蛋白表达均逐渐下降；LOX－1mRNA 和蛋白表达无明显变化。结论 P． g － LPS 可促进巨噬细胞CD36的表达，对LOX －1表达无影响，从而可能对巨噬细胞脂质代谢产生影响。
关键词： 牙龈卟啉单胞菌 脂多糖 THP-1 单核细胞 CD36 LOX-1 -
LOX-1在氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡中的作用和卡托普利的干预作用
目的 探讨ox-LDL受体LOX-1在ox-LDL诱导单核/巨噬细胞凋亡中的角色和卡托普利的干预作用.方法 应用流式细胞术检测细胞凋亡,采用免疫组织化学技术和Western Blot测定Caspase3、8、9的表达.结果 ox-LDL可诱导U937细胞的凋亡峰出现(12.773±1.413),应用卡托普利和LOX-1的阻断剂角叉菜胶、PIA后凋亡峰明显减少,其百分比分别为(1.02±0.166)(4.94±0.47)(2.62±0.656),同时U937细胞在用ox-LDL培养后代表线粒体通路的Caspase9,3和代表死亡受体通路caspases8,3表达都增加,应用卡托普利和LOX-1的阻断剂角叉菜胶、PIA后caspas3、8、9的表达均减少.结论 ox-LDL是通过与其受体LOX-1结合发挥损伤作用的.卡托普利可以抑制ox-LDL对U937细胞凋亡的诱导作用,从而对单核巨噬细胞起到保护作用.
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银杏内酯B对内皮细胞的保护作用及分子机制研究
目的 探讨银杏内酯B对氧化型低密度脂蛋白刺激脐静脉内皮细胞保护作用的分子机制.方法分别用银杏内酯B 0.2、0.4、0.6 g·L-1预孵育内皮细胞1 h,再加入ox-LDL(0.1 g·L-1)刺激细胞.用Western blot 检测Lectin-like oxidized LDL receptor-1 (LOX-1)、PI3K、Nrf2、SIRT1表达及Akt磷酸化.结果 1.ox-LDL刺激内皮细胞LOX-1表达增加,银杏内酯B以剂量依赖方式抑制了LOX-1表达.2.银杏内酯B有效地抑制了ox-LDL刺激的Akt磷酸化,但对PI3K的表达无影响.3.ox-LDL刺激内皮细胞SIRT1表达降低,银杏内酯B有意义地增加了细胞SIRT1表达.4.ox-LDL刺激细胞抗氧化应激蛋白Nrf2表达明显增加,银杏内酯B下调了Nrf2的表达.结论 银杏内酯B对内皮细胞保护作用与抑制LOX-1表达、Akt磷酸化,启动细胞内源性保护机制相关.
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LOX-1研究进展
LOX-1是一种Ⅱ型膜蛋白,按结构分类,它属于C型选择素家族.它可以结合、中和、降解ox-LDL,还具有介导血小板与内皮细胞的相互作用等功能.LOX-1的表达不是结构性的,在血管紧张素Ⅱ、剪切力、肿瘤坏死因子α、肿瘤生长因子β、内皮素-1作用下,其表达上调.对血浆中可溶性LOX-1的检测有助于评价AS及心血管疾病的进展.
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缬沙坦对血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1基因在肾皮质中表达的影响
目的 通过研究血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)在肾皮质中的表达,明确LOX-1与肾损伤以及血管病变的关系.方法 将48只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、实验组和治疗组.对照组用生理盐水(NS)10 mL·kg-1·d-1灌胃,实验组用腺嘌呤300 mg·kg-1·d-1灌胃,治疗组用腺嘌呤300 mg·kg-1·d-1和缬沙坦10 mg·kg-1·d-1联合灌胃.21 d后取血和尿检查,明确造模成功.治疗组继续用缬沙坦10 mg·kg-1·d-1灌胃,8周后颈内静脉插管监测血压(BP),断头取血检测血清中的肌酐(Crea)、低密度脂蛋白(LDL)、脂蛋白a(Lp(a))、超敏C反应蛋白(hs-CRP),同时取肾皮质,行实时荧光检测LOX-1的表达.结果 用腺嘌呤灌胃造模示成功,LOX-1在慢性肾衰竭大鼠肾皮质中表达明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).缬沙坦治疗后LOX-1在慢性肾衰竭大鼠肾皮质中表达明显下降,与实验组比较差异有统计学意义(P<0.05),与对照组比较无统计学意义(P>0.05).BP、Crea、LDL、Lp(a)、hs-CRP在慢性肾衰竭大鼠中明显升高,与对照组和治疗组比较差异有统计学意义(P<0.05).缬沙坦治疗后BP、Crea、LDL、Lp(a)、hs-CRP下降,与对照组比Crea、LDL、hs-CRP无统计学意义(P>0.05),BP、Lp(a)有统计学意义(P<0.05).LOX-1在肾皮质中的表达上调与BP、Crea、LDL、Lp(a)、hs-CRP有相关性(r分别为0.816、0.698、0.829、0.724、0.740).结论 慢性肾衰竭大鼠肾皮质中LOX-1的表达是明显上调的,缬沙坦能明显抑制LOX-1在肾皮质中的表达.LOX-1在肾皮质中的表达上调与BP、Crea、LDL、Lp(a)、hs-CRP呈正相关,提示LOX-1参与了慢性肾衰竭的发生和发展.
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Let-7 d靶向LOX-1逆转ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡观察
目的:研究Let-7d对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡以及凝集素样氧化低密度脂蛋白清除受体1(LOX-1)表达的影响.方法:用50 mg/L的ox-LDL处理HUVECs 24 h和48 h,分别采用Western blot和RT-qPCR法检测LOX-1和Let-7d表达的变化.TargetScan和双荧光素酶报告基因实验预测LOX-1与Let-7d之间的靶向调控关系.将miRNA模拟物对照(NC)和Let-7d单独或联合50 mg/L的ox-LDL处理HUVECs 48 h,分别记为NC组、Let-7d组、NC+ox-LDL组和Let-7d+ox-LDL组,采用Western blot和RT-qPCR法检测各组中LOX-1、Caspase 3、Bax和Bcl-2蛋白表达及LOX-1 mRNA表达,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果:用50 mg/L的ox-LDL处理HUVECs 0 h、24 h和48 h后,各组HUVECs中LOX-1蛋白表达增加,Let-7d表达降低(P<0.05).TargetScan和双荧光素酶报告基因实验表明LOX-1可能是Let-7d的靶基因.NC组、Let-7d组、NC+ox-LDL组和Let-7d+ox-LDL组HUVECs中LOX-1的表达、细胞凋亡率及Caspase 3、Bax、Bcl-2蛋白表达比较,差异均有统计学意义(P<0.001).ox-LDL可诱导HUVECs中LOX-1、细胞凋亡率和促凋亡蛋白Caspase 3、Bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低;Let-7d能够显著抑制ox-LDL对HUVECs中LOX-1表达、细胞凋亡率及促凋亡蛋白Caspase 3、Bax表达的诱导作用和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的抑制作用(P<0.05).结论:Let-7d能够逆转ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与Let-7d靶向抑制LOX-1表达有关.
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益气活血复方含药血清对人脐静脉内皮细胞Toll样受体4及LOX-1表达的影响
目的 研究益气活血复方含药血清对脂多糖( Lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cells,HUVECs) Toll样受体4(Toll - like receptor 4,TLR4)及血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin -like oxidized low - density lipoprotein receptor -1,LOX -1)表达的影响,从mRNA和蛋白水平探讨益气活血复方防治动脉粥样硬化( Atherosclerosis,AS)的机制.方法 选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只.以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7d.末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清；体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预,24 h后收集细胞,用荧光定量PCR方法和Western blotting法分别测定TLR4和LOX -1 mRNA和蛋白的表达.结果 用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4和LOX -1 mRNA和蛋白的高表达(与空白对照组比较P＜0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4及LOX -1 mRNA和蛋白的高表达(与模型组比较P＜0.01).结论 益气活血复方可阻断TLR4及LOX -1高表达,有抑制TLR4和LOX -1的作用,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一.
