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HPLC-ELSD测定地黄不同炮制品中单糖含量
目的:建立HPLC-ELSD测定地黄不同炮制品中单糖含量方法,研究不同炮制方法对熟地黄单糖含量的影响.方法:采用高效液相色谱法,以蒸发光散射检测器进行检测,Prevail carbohydrate ES色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(75∶25),流速0.8 mL· min-1,柱温30℃,ELSD条件漂移管温度65℃,空气流速2.5 L·min-1,增益1.结果:D-葡萄糖平均回收率为98.24％,RSD 2.18％；D-果糖平均回收率为98.37％,RSD 2.11％；生地、炆制地黄、清蒸地黄、酒炖地黄中单糖含量分别为1.62％,(27.22±2.74)％,(9.63±2.05)％,(16.97±2.62)％.结论:该方法操作简便,可靠稳定,结果准确；地黄炮制品中单糖含量远远高于生地黄,炆制地黄中单糖含量高于其他两种炮制方法,为阐明其炮制机理提供实验依据.
关键词： 高效液相色谱-蒸发光散射检测法 熟地黄 炆制法 D-葡萄糖 D-果糖 -
商品天冬等级与其活性物质含量的相关性分析
目的:测定不同等级天冬药材中醇溶性浸出物和活性物质总皂苷、总多糖的含量,分析天冬商品等级与醇溶性浸出物、活性物质含量之间的相关性,考察商品天冬等级划分方法的合理性.方法:根据2015年版《中国药典》测定不同商品等级天冬药材醇溶性浸出物含量;采用紫外-可见分光光度法测定37份不同等级天冬中总皂苷含量,检测波长408 nm;采用苯酚-硫酸法测定总多糖含量,检测波长490 nm;运用相关分析和线性回归分析天冬药材醇溶性浸出物、总皂苷及总多糖含量与商品等级间的相关性.结果:不同等级天冬药材醇溶性浸出物和总皂苷含量有显著性差异(P＜0.05),一等品与三等品比较天冬总多糖含量具显著性差异(P＜0.05),其余各等级间总多糖含量差异无显著性.在相关性分析中,天冬商品等级与醇溶性浸出物、总皂苷含量呈极显著正相关关系(P＜0.01),与总多糖含量呈显著正相关关系(P＜0.05).结论:商品天冬以药材中部直径为主要标准的分级方法能体现天冬醇溶性浸出物和内在活性物质总皂苷含量,传统等级划分方法仍具有合理性;天冬药材建议以测定总皂苷含量为主,醇溶性浸出物和总多糖含量作为辅助质量评价指标.
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脂联素减轻高糖诱导的人血管内皮细胞系损伤
目的 观察脂联素(APN)对高糖诱导血管内皮细胞系损伤的保护作用及NF-κB与LOX-1蛋白表达在其中的作用.方法 30 mmol/LD-葡萄糖作用于HUVEC-12(人脐静脉内皮细胞系),不同浓度的脂联素(10、20和40 μg/mL)作用48 h及20μg/mL脂联素作用不同时间(12、24、48和72 h)后,倒置相差显微镜观察内皮细胞形态,Western blot检测核转录因子NF-κB和LOX-1蛋白表达,间接免疫荧光法检测NF-κB核转位情况.结果 脂联素作用于D-葡萄糖诱导的HUVEC-12,内皮细胞形态改善,折光性增强,胞内颗粒物减少,细胞排列相对规整;同时,LOX-1蛋白表达下调(P＜0.05),NF-κB活性降低(P＜0.05),并呈现时间和浓度依赖性(n=3,P＜0.05).结论 脂联素可能通过NF-κB信号通路引起LOX-1蛋白表达下调,从而发挥其对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用.
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麦芽炒制过程中炒制温度和时间对糖类成分的影响
目的 建立麦芽中D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖、D-麦芽糖4种糖类成分高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)检测方法,探索麦芽炒制过程中还原糖和非还原糖的动态变化规律,为阐明麦芽消食作用机制提供科学依据.方法 收集不同炒制温度、不同炒制时间的麦芽,采用HPLC-ELSD方法测定生麦芽、炒麦芽样品中D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖、D-麦芽糖4种糖类成分的量,采用聚类分析(HCA)法、偏小二乘判别分析(PLS-DA)法分析炒制过程中各成分的动态变化规律.结果 麦芽中D-果糖、D-葡萄糖、D-麦芽糖3种还原糖的量随温度增加整体表现为下降趋势,而非还原糖蔗糖表现为先升高后降低的趋势;HCA可将不同温度下炒制的麦芽分为3类,PLS-DA表明炒制温度主要影响蔗糖的量,而对还原糖D-果糖、D-葡萄糖、D-麦芽糖影响较小且程度相当;随着炒制时间的延长,4种糖的量均呈降低趋势,16 min后基本不再变化.HCA可将不同炒制时间的麦芽分为4类;标准化A420值随炒制时间的增加而增加,在16min基本达到峰值.结论 麦芽在炒制过程中还原糖、非还原糖与氨基酸等成分直接或间接发生美拉德(Maillard)反应而导致其量的下降,其产物可能与麦芽消食作用有关.
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HPLC-ELSD法同时测定生白术中的D-果糖、D-葡萄糖和蔗糖
目的 建立HPLC-ELSD法同时测定生白术中D-果糖、D-葡萄糖和蔗糖的含有量,并对不同产地(浙江、安徽和湖北省)及批次药材中的这3种成分进行分析.方法 生白术提取物的分析采用Waters XBridgeTM Amide色谱柱(4.6mm×250mm,3.5 μm);流动相为乙腈-水(80:20);体积流量1.0 mL/min;柱温40 ℃.质谱测定采用电喷雾离子源(ESI)的飞行时间质谱(TOF/MS);负离子模式;质量扫描范围m/z 50～ 800.结果 D-果糖在7.943～18.53 μg、D-葡萄糖在0.583 5 ～1.362μg、蔗糖在1.415 ～3.302 μg范围内均呈良好的线性关系(r＞0.998),其平均回收率分别为101.4％、100.1％、102.0％,RSD分别为1.3％、1.8％、1.3％(n=9).在10批生白术药材中,D-果糖含有量为9.946～45.83 mg/g、D-葡萄糖为1.198～7.743 mg/g、蔗糖为5.231 ～ 15.76 mg/g.结论 不同产地及批次生白术中的含有量依次为D-果糖＞蔗糖＞D-葡萄糖,并且差异较明显.
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高糖致内皮细胞粘附分子基因的过度表达以及槟榔碱的调节作用
目的:观察D-葡萄糖(D-glucose)对培养的牛主动脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、细胞间粘附分子-1(intercellular adhesive molecule-1,ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesive molecule1-1,VCAM-1)mRNA表达水平的影响,并观察槟榔碱、PPVP、DMHPPP、辛伐他汀的干预作用,探讨它们在糖尿病血管并发症中的作用机制.方法:通过逆转录-聚合酶链式反应技术,以β2-微球蛋白为内参照检测内皮细胞与不同浓度D-葡萄糖作用不同时间后,以及用槟榔碱、PPVP、DMHPPP、辛伐他汀预孵育20 h后再给予D-葡萄糖时内皮细胞MCP-1、ICAM-1、VCAM-1mRNA 表达水平的变化.结果:浓度为10、25和50 mmol·L-1的D-葡萄糖孵育牛主动脉内皮细胞16 h,以及浓度为25 mmol·L-1的D-葡萄糖分别孵育8、16、24 h均可使MCP-1、ICAM-1及VCAM-1 mRNA表达显著上调,且上调作用有浓度与时间依赖性.10-5 mmol·L-1槟榔碱、PPVP、DMHPPP和辛伐他汀与牛主动脉内皮细胞孵育20 h,再给予终浓度为25 mmol·L-1 的D-葡萄糖孵育16 h后,与模型组相比,槟榔碱可显著抑制由D-葡萄糖诱导的牛主动脉内皮细胞三个炎性基因MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达上调;PPVP可显著抑制MCP-1和ICAM-1 mRNA表达上调;DMHPPP和辛伐他汀可显著抑制MCP-1 mRNA表达上调.结论:高浓度D-葡萄糖可诱导牛主动脉内皮细胞MCP-1,ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达水平增加,槟榔碱、PPVP、DMHPPP和辛伐他汀对过量表达的三种炎性因子的抑制作用不同.
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盐酸埃他卡林对高糖致内皮细胞粘附分子基因过度表达的调节作用
目的 观察盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride,Ipt)对D-葡萄糖(D-glucose)诱导的牛主动脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、细胞间粘附分子-1(intercellular adhesive molecule-1,ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesive molecule1-1,VCAM-1)mRNA过度表达的调节作用.方法 以β2-微球蛋白为内参,应用逆转录-聚合酶链式反应技术检测空白对照组、高浓度D-葡萄糖模型组和Ipt组内皮细胞MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达水平的变化.结果 0.01～10μmol·L-1的Ipt分别与内皮细胞孵育20 h,再给予浓度为25 mmol·L-1的D-葡萄糖孵育16 h后,与空白对照组相比,高糖模型组MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达升高;与高糖模型组相比,1～10μmol·L-1Ipt可抑制MCP-1、ICAM-1 mRNA表达上调,而对VCAM-1 mRNA表达上调无明显影响.结论 高浓度D-葡萄糖可诱导牛主动脉内皮细胞MCP-1、ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达水平增加,Ipt对高糖诱发的内皮细胞损伤具有保护作用.
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D-葡萄糖对血管内皮细胞形态及其LOX-1蛋白表达的影响
目的：观察D-葡萄糖对血管内皮细胞形态及其血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（ LOX-1）表达的影响。方法取15、30、60 mmol／L D-葡萄糖（观察组）及等体积培养液（对照组）作用于人脐静脉内皮细胞（ HUVEC-12），采用倒置相差显微镜观察血管内皮细胞形态，Western blot 法检测细胞LOX-1蛋白相对表达。结果对照组细胞生长状态良好，多呈多角形或扁平形。细胞之间连接紧密，折光性强。观察组细胞排列较为紊乱，细胞核模糊，细胞间隙明显增大，折光性变弱，细胞内颗粒状物增多；其中以30 mmol／L D-葡萄糖作用48 h的细胞形态变化明显。对照组与加入15、30、60 mmol／L D-葡萄糖的观察组作用48 h后，细胞LOX-1蛋白相对表达量分别为1．0、1．5±0．1、2．0±0．2、1．8±0．2；两两比较，P均＜0．05。观察组加入30 mmol／L D-葡萄糖分别作用0、12、24、48、72 h后LOX-1蛋白相对表达量分别为1．0、1．1±0．1、1．4±0．2、2．0±0．2、1．5±0．1；两两比较，P均＜0．05。结论 D-葡萄糖可导致血管内皮细胞损伤，同时上调细胞LOX-1蛋白表达。
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用测定比旋光度的物理学方法来分析D-葡萄糖的变旋光现象
本文用物理学方法,借助于线性回归理论,通过比旋光度的测定来分析D-葡萄糖的变旋光现象,进而阐述温度和氨试剂等因素对D-葡萄糖溶液变旋现象的稳定平衡作用.
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以D-葡萄糖为载体的布洛芬脑靶向前体药物的设计与合成
目的 设计并合成以葡萄糖转运体为靶细胞的脑靶向前体药物.方法 将非甾体抗炎药布洛芬通过不同的桥链(1,6-己二醇和1,12-十二二醇)与D-葡萄糖通过共价键连接起来.结果 成功合成了两个以D-葡萄糖为载体的脑靶向前体药物.结论 目标化合物已经1HNMR、MS确证.
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念珠菌生成D-葡萄糖与D-甘露糖含量比值的分析
目的 分析念珠菌酵母相全细胞水解生成的D-葡萄糖与D-甘露糖含量比值.方法 采用双波长薄层扫描法,测定65株8种医学上重要的念珠菌标准株及酿酒酵母标准菌株8株的酵母相全细胞完全酸水解产物中D-葡萄糖与D-甘露糖含量比值.同时测定了46株念珠菌临床分离株,并与标准株进行了比较.结果 经Tukey法统计处理,可将9种菌分成5个同质性亚群.经t检验比较,酿酒酵母和8种念珠菌的结果差异均有显著性;而念珠菌临床分离株与标准株结果差异均无显著性.结论 该比值结果能在属水平区分念珠菌和酿酒酵母,并可将8种念珠菌分为4个同质性亚群;且经临床分离株验证,重复性较好.
