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HCMV潜伏相关UL138基因重组腺病毒的构建及其对THP-1单核细胞功能的影响
目的：构建含人巨细胞病毒( HCMV)潜伏相关 UL138基因的重组腺病毒,探讨UL138基因对THP-1单核细胞功能的影响。方法构建携带UL138基因的重组腺病毒,利用TCID50法确定重组腺病毒滴度。重组腺病毒以不同MOI比值感染THP-1细胞,通过绿色荧光蛋白表达确定感染THP-1细胞佳MOI值；定量PCR分析UL138表达对THP-1细胞前炎症细胞因子表达变化,通过定量PCR芯片分析趋化因子及受体的表达变化。结果成功构建了携带UL138基因的重组腺病毒,TCID50法测定病毒的滴度达1×1011 PFU/ml。利用重组腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达检测THP-1细胞的感染率,结果显示,重组腺病毒以MOI=1∶100感染THP-1细胞,感染率为60%, RT-PCR和Western blot证实了THP-1细胞能够表达UL138,且随着时间的延长,蛋白表达量逐渐增多。定量PCR检测发现,THP-1细胞 UL138过表达后,可明显抑制IL-18、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等前炎性细胞因子的表达。定量PCR芯片分析显示,UL138表达明显改变THP-1单核细胞内趋化因子及受体的表达,除外 CCL17、CCL21、CCL22、XCL2等趋化因子以及 CCR2、CXCR1、CXCR2、 CXCR4及CX3CR1等趋化因子受体在不同时间点上调表达外, CXCL1、CXCL3、CXCL9、CXCL10、CXCL11等大部分趋化因子及受体的表达均显著减少。结论成功构建了可感染THP-1单核细胞的UL138基因重组腺病毒；THP-1单核细胞过表达UL138可明显影响其功能。
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牙龈卟啉单胞菌脂多糖对THP －1源性巨噬细胞CD36和LOX －1表达的影响
目的：该文以THP －1源性巨噬细胞为研究对象，研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P． g － LPS）对巨噬细胞内胆固醇代谢关键分子CD36、LOX －1表达的影响。方法以160 nmol ／ L 佛波酯（PMA）诱导THP －1单核细胞48 h，使其分化为巨噬细胞。建立P． g － LPS 与THP －1源性巨噬细胞共孵育的体外模型，在负荷50μg ／ mL 低密度脂蛋白（LDL）的条件下，分别用浓度为0．1、1．0、10．0μg ／ mL P． g － LPS 与巨噬细胞共孵育48 h；1μg ／ mL P． g － LPS 与巨噬细胞共孵育24、48和72 h。采用实时荧光定量PCR 和Western blot 方法探讨巨噬细胞胆固醇代谢关键分子CD36和LOX －1表达变化。结果与空白对照组相比，随着P． g － LPS 浓度的增加和1μg ／ mL P． g － LPS 孵育时间的延长，巨噬细胞内CD36 mRNA 和蛋白表达均逐渐下降；LOX－1mRNA 和蛋白表达无明显变化。结论 P． g － LPS 可促进巨噬细胞CD36的表达，对LOX －1表达无影响，从而可能对巨噬细胞脂质代谢产生影响。
关键词： 牙龈卟啉单胞菌 脂多糖 THP-1 单核细胞 CD36 LOX-1
