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红景天苷通过激活PI3K/AKT/NRF2通路减轻MCAO大鼠的神经细胞凋亡
目的:研究红景天苷(Sal)通过激活PI3K/AKT/NRF2通路减轻大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠的神经细胞凋亡的作用及其机制.方法:健康成年雄性SD大鼠120只,采用线栓法建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,术后立即腹腔注射红景天苷(50mg/kg),分别连续给药ld、2d和7d,采用Longa评分法对大鼠神经功能损伤评分,Western blot法检测大鼠缺血侧脑组织Bcl-xl、Bax、HO-1蛋白及NRF2核蛋白的表达.同时,采用侧脑室注射PI3K抑制剂(LY294002) 30min后造模,红景天苷给药ld,检测AKT、p-AKT、Bcl-xl、Bax、HO-1蛋白NRF2核蛋白的表达.结果:与MCAO组比较,红景天苷分别给药1、2、7d后,MCAO+Sal组能够下调Bax,上调Bel-xl蛋白的表达(P＜0.05),促进NRF2的核转录水平,提高HO-1蛋白的表达(P＜0.01,p＜0.05);经侧脑室注射LY294002后再腹腔注射,红景天苷对AKT、p-AKT、Bcl-xl、Bax、HO-1蛋白及NRF2核蛋白的表达没有显著作用.结论:红景天苷能够改善MCAO大鼠的神经功能损伤,抑制神经细胞凋亡,主要是通过激活PI3K/AKT信号通路,促进AKT的磷酸化,激活NRF2的核转录,促进HO-1的蛋白表达,进而抑制神经细胞凋亡,改善神经功能.
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新型小分子药物在治疗慢性淋巴细胞白血病中的研究进展
慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)是西方国家常见的成人白血病,以CD5+CD19+ CD23+的B淋巴细胞在外周血、骨髓和淋巴结中的聚集为特征.在过去的20年里,CLL的治疗发生了一个戏剧性的变化,患者治疗后完全缓解率(complete responses,CR)由初的＜5％提高到了现在的40％-50％.这一进步归因于联合化学免疫疗法对慢性淋巴细胞白血病患者骨干的治疗,尤其近5年来一些新型药物的爆发式出现,给复发/难治患者和细胞遗传学异常患者的治疗提供了十分有效的方案.本文主要针对已被批准或已用于临床治疗CLL的新型小分子药物新研究进展作一综述,讨论的主要药物包括布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂(ibrutinib),PI3K抑制剂(idelalisib),Syk抑制剂,BCL-2抑制剂等.
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依维莫司与PI3K抑制剂联合他莫昔芬对ER阳性乳腺癌细胞系作用的观察
目的:探讨他莫昔芬(TAM)联合mTORC抑制剂依维莫司(EVE)和PI3K抑制剂LY294002(LY)阻断负反馈激活,分析对ER(+)乳腺癌细胞系增殖、凋亡和周期的影响.方法:乳腺癌细胞系MCF-7和BT474分为对照组、TAM、TAM+ EVE、TAM+ LY和TAM+EVE+LY 5组,分别检测肿瘤细胞的增殖、凋亡与周期以及信号通路的改变情况.结果:MCF-7和BT474接受药物处理以后,EVE明显抑制肿瘤细胞的增殖,A450分别为0.23和0.32,特别是在三药联合组,抑制细胞增殖更加显著,A450分别为0.16和0.20,P＜0.05.细胞凋亡的研究显示,EVE可促进肿瘤细胞凋亡,三药联合以后,乳腺癌细胞MCF-7和BT474的凋亡率分别为30.1％和54.2％.细胞周期的研究显示,G1期比例升高,三药联合后MCF-7和BT474 G1期比率分别为86.02％和84.91％.EVE可有效阻断mTOR信号通路的活化,但通过负反馈作用可导致磷酸化AKT 473位点的激活,而联合PI3K抑制剂后,这种负反馈作用被阻断.结论:内分泌治疗药物TAM联合mTOR抑制剂EVE和PI3K抑制剂可抑制ER(+)乳腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞生长,达到更好的治疗效果.
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抑制PI3K通路增强CAHB对Jurkat细胞的凋亡作用
目的 探讨CAHB单独使用及与LY294002联合应用对Jurkat细胞体外作用的影响.方法 分别用不同剂量的CAHB(0、5、10、20、40mmoL/L)诱导Jurkat细胞,用MTS法检测Jurkat细胞的增殖抑制效应,流式细胞术分析Jurkat细胞凋亡情况;取40mmol/L浓度的CAHB加入PI3K抑制剂LY294002,流式细胞术分析Jurkat细胞凋亡情况.结果 CAHB对Jurkat细胞生长有显著的抑制作用,并能显著诱导Jurkat细胞发生凋亡,其作用呈明显剂量、时间依赖性.PI3K抑制剂LY294002能显著增强CAHB对Jurkat细胞的凋亡作用.结论 CAHB能抑制Jurkat细胞增殖,并诱导其凋亡.抑制PI3K通路能增强CAHB对Jurkat细胞的凋亡作用.
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Ad-PTEN 联合PI3K 抑制剂对人乳腺癌裸鼠移植瘤的治疗研究
目的 本研究的目的 是观察表达PTEN 的重组腺病毒(Ad-PTEN)联合PI3K 抑制剂LY294002 对人乳腺癌细胞株MCF-7 裸鼠移植瘤的抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 建立MCF-7 裸鼠移植瘤动物模型:24 只MCF-7 细胞株移植成功的裸鼠分为四组,即空病毒载体对照组、DMSO 对照组、LY294002 用药组、Ad-PTEN 与LY294002 联合用药组.定期测量裸鼠的体重和肿瘤直径;应用Real-time PCR 检测肿瘤细胞中PTEN、PI3K、AKT、NF-KB、CyclingD1、Bcl-2 的表达水平.结果 相对于对照组和P I3K 抑制剂单独用药组,联合用药组对肿瘤生长的抑制作用显著增强(P <0.05),且联合用药组肿瘤组织中P I3K、A K T、N F -KB、CyclingD1、Bcl-2 的表达下降(P<0.05),而PTEN 的表达升高(P<0.05).结论 Ad-PTEN 与PI3K 抑制剂的联合用药可以增强对人乳腺癌细胞株MCF-7 裸鼠移植瘤的生长抑制作用.
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PI3K抑制剂pictilisib的合成工艺改进
目的改进pictilisib的合成工艺.方法以3-氨基-2-噻吩甲酸甲酯为起始原料,经环合、氯代、取代、甲酰化,制得2-氯-4-(吗啉-4-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛,再经还原、氯代、缩合制得关键中间体2-氯-6-[(4-甲磺酰哌嗪-1-基)甲基]4-(吗啉-4-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶,该中间体与2-(四氢-2H-吡喃-2-基)4.(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼环戊烷-2-基)-2H-吲唑经Suzuki偶联、脱保护成盐、碱化得到目标化合物.结果与结论目标化合物结构经1H-NMR、13C-NMR、IR及MS谱确证,总收率为34.2％(以3-氨基-2-噻吩甲酸甲酯计).与文献报道的工艺相比,该路线操作简单、条件温和、收率较高,适用于工业化生产.
关键词： 抗肿瘤 PI3K抑制剂 pictilisib 合成工艺 -
磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂XL765的合成
目的 改进磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂XL765的合成工艺..方法:以邻苯二胺、草酸为起始原料经过环合、氯代、氯磺化、磺酰化、取代、还原以及酰胺化制得XL765.结果与结论经过6步反应合成目标化合物XL765,化学结构经1H-NMR及MS确证.对其中多步反应条件进行了工艺考察及优化,总收率为31.5％(以邻苯二胺计),高于文献报道收率(25.5％).
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Ad-PTEN增强LY294002对人胶质瘤细胞系U251的生长抑制作用
目的 在体外实验中,利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)和PI3K的小分子抑制剂LY294002联合抑制PI3K/AKT信号通路,观察两者联合对人胶质瘤细胞系U251生长有无正向协同作用及探讨产生这种作用的机制.方法 U251细胞按处理方式不同分为4组:DMSO对照组、空载病毒对照组、LY294002组和联合组(LY294002+Ad-PTEN组).在U251细胞系中导入LY294002并转染Ad-PTEN病毒后,提取总蛋白,用Western blotting检测PTEN表达状态及PI3K、AKT表达情况;用MTT法检测Ad-PTEN和LY294002对U251生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期、Annexin V法检测细胞凋亡,观察导入LY294002和转染Ad-PTEN后U251增殖能力的改变;用划痕实验、Transwell实验观察LY294002及Ad-PTEN对U251迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测PI3K/AKT信号通路下游相关蛋白表达水平变化.结果 Western blotting显示:与DMSO组和空载病毒组相比,LY294002组PI3K、AKT蛋白表达水平明显降低,联合组(LY294002+Ad-PTEN)的PTEN蛋白明显上调,而PI3K、AKT蛋白下降水平比LY294002组更为显著.联合组与LY294002组、空载病毒组、DMSO组相比细胞周期阻滞在G0/G1期;联合组凋亡率比其他三组明显增加;自培养第2天起,联合组细胞增殖速率呈下降趋势.联合组侵袭和迁移细胞的相对数少于LY294002组、空载病毒组和DMSO组.Western blotting结果证明位于PI3K/AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF-κB、FAK蛋白表达水平显著下调.结论 小分子抑制剂LY294002能够有效抑制U251中PI3K、AKT蛋白的表达,联合转染Ad-PTEN后不仅能提高PTEN蛋白的表达水平,对PI3K、AKT的抑制更为显著.在体外实验中,联合Ad-PTEN和LY294002能够有效地通过阻滞细胞周期、减少细胞凋亡来抑制U251的增殖能力,并能够抑制细胞的侵袭和迁移能力,两者联合使用具有正向协同作用.联合Ad-PTEN和LY294002对U251的生长与侵袭的抑制作用与PI3K/AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF-κB、FAK蛋白表达水平下调有关.联合腺病毒转染技术和小分子抑制剂调控PI3K/AKT信号通路是治疗胶质瘤的新途径.
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PI3K抑制剂与非小细胞性肺癌
磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路是人体中的重要信号通路,通过逐级磷酸化下游蛋白发挥作用.非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中存在该信号通路的异常活化.活化的信号通路可以改变NSCLC细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学特性从而影响其对治疗药物的反应及预后.针对该通路抑制剂的研究很多,部分抑制剂已进入临床研究阶段.PI3K抑制剂包括广谱PI3K抑制剂、亚型特异性的PI3K抑制剂和PI3 K/mTOR双重抑制剂.PI3K抑制剂单药有效率较低,但与化疗药物或其他靶向药物联用取得了不错的临床效果,目前往往将P IK3 CA突变以及抑癌基因PTEN的缺失作为预测疗效的指标,但准确性欠佳,进一步筛选疗效预测指标是目前面临的重要问题.
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PI3K抑制剂抗肿瘤临床研究进展
磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)是一种胞内磷脂酰肌醇激酶,在介导细胞生长、发育、分裂、分化和凋亡等过程中发挥重要作用,因此PI3K抑制剂的开发已成为当前抗癌新药研究的热点之一.目前已有多个PI3K抑制剂进入临床研究阶段或已上市,其单用或与其他药物联用的疗效和安全性有待进一步临床验证.综述PI3K抑制剂作为抗肿瘤药物的临床研究进展,为其进一步研究与应用提供参考.
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PI3K抑制剂与其他药物联用克服耐药性的研究进展
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)是细胞内重要的信号传导分子,在细胞存活、增殖和分化过程中发挥着关键的调节作用.PI3K抑制剂在肿瘤治疗方面的研究取得了重大的进展,然而,PI3K抑制剂耐药性的出现,影响了其在临床上的长期疗效.为了克服PI3K抑制剂的耐药性,临床上发展了多种合理的药物组合方法来提高疗效,克服耐药性.本文就PI3K抑制剂与其他药物联用以克服耐药性的研究进展进行了综述.
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PI3K抑制剂抗肿瘤研究进展
磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)是一种胞内磷脂酰肌醇激酶,属于细胞内重要的信号转导分子,参与调节细胞的增殖、凋亡与分化等生理过程.研究[1]发现,PI3K依赖性信号通路在肿瘤发生中的主要特征和关键作用.PI3K介导的信号转导通路控制着众多在肿瘤发生发展中至关重要的细胞生物学过程,通路中的主要组件或上游调控因子的遗传学和表观遗传学的突变导致PI3K依赖性信号通路(以PI3K-Akt-mTOR通路为主)过度表达,造成肿瘤细胞的发生和持续发展.在过去的几十年中,以PI3K-Akt-mTOR通路为靶点的治疗已经取得很大进步,使得人们认识到PI3K抑制剂在肿瘤的治疗中发挥的重要作用.然而,仍有一些问题有待阐述,如对于特定的肿瘤该选择什么样的抑制剂,PI3K-mTOR双重靶向抑制剂、pan PI3K抑制剂还是isoform选择性抑制剂.哪种标志物能预测使用PI3K抑制剂会受益的患者人群,同时如何尽量减少不良反应的发生,以及PI3K抑制剂耐药的机制及如何克服.现对PI3K抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展作一综述.
关键词： PI3K PI3K-Akt-mTOR通路 肿瘤 PI3K抑制剂 -
新型分子靶向抗癌药物-PI3K抑制剂
分子靶向抗癌药物是指作用于肿瘤细胞的特定分子靶点,抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等恶性生物行为,从而产生抗肿瘤作用的药物.PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)为一种由调节亚单位p85或p101和催化亚单位p110组成的脂激酶,通过激活下游的AKT等促进细胞生存、增殖和迁移等.由于PI3K在癌症发生中所起的关键作用,开发以PI3K为靶标的抑制剂引起制药界的高度重视.自2006年第一个新型PI3K抑制剂NVP-BEZ235开始临床试验以来,迄今已有近20个化合物进入临床试验阶段.本文首先简介PI3K的功能和分类,然后就PI3K抑制剂的研究进展以及与其它抗癌药物的联合用药做一综述.
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Ad-PTEN对乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制作用的影响及机制
目的 探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)和LY294002对乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制作用的影响及机制.方法 在MCF-7中导入Ad-PTEN和PI3K抑制剂LY294002.Western blotting法检测PTEN/PI3K/AKT及其下游相关蛋白表达,MTT法检测MCF-7细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V法检测细胞凋亡率.结果 与DMSO组、空载病毒和LY294002组相比,联合组(LY294002+Ad-PTEN)PTEN 蛋白明显上调,而PI3K/AKT及下游蛋白水平显著下降;联合组细胞阻滞于G0/G1期;细胞凋亡率增加明显;自培养第2天起,联合组细胞生存率呈下降趋势.结论 Ad-PTEN联合LY294002通过阻滞细胞周期、促进细胞凋亡抑制MCF-7的增殖能力,两者具有正向协同作用;其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路下游蛋白有关.
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PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞E2F-1、cyclinE蛋白表达的影响
目的 探讨PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖及E2F-1、细胞周期素E(cyclinE)蛋白表达的影响.方法 人LECs常规培养,分为实验组和对照组,实验组加入PI3K抑制剂LY294002(25 μmol/L),对照组加入同体积DMSO,两组分别培养36 h后, MTT比色法测定细胞增殖状况, Western blot法检测细胞中E2F-1及cyclinE蛋白表达.结果 实验组细胞增殖受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),人LECs中E2F-1及cyclinE蛋白表达降低(P＜0.05).结论 PI3K抑制剂LY294002可抑制人LECs的增殖,可能与下调E2F-1及cyclinE蛋白的表达水平相关.
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LY294002联合AD-PTEN对脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响及机制探讨
目的 观察PI3K抑制剂LY294002联合含PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)对人脑胶质瘤TJ899细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其机制.方法 向TJ889分别加入LY294002(LY294002组)、Ad-PTEN+ LY294002(联合组)、Ad-vector病毒(空载组)、DMSO(DMSO组)培养48 h.分别采用MTT法、流式细胞术、划痕实验和Transwell小室观察TJ899增殖活性和侵袭能力的变化;Western Blot检测TJ899的PTEN/PI3K/AKT信号转导通路中相关蛋白.结果 与DMSO组、空载组和LY294002组相比,联合组细胞存活速率下降,细胞周期阻滞在G0/G1期,S期减少,细胞凋亡率增加,侵袭和迁移的细胞数减少,PTEN蛋白表达增加,而磷酸化蛋白激酶B、细胞增殖抗原、细胞周期素D1、Bcl-2、基质金属蛋白酶-2、黏着斑激酶蛋白表达显著下降,P均＜0.05.结论 LY294002联合Ad-PTEN可明显抑制TJ899的增殖活性和侵袭能力,该作用与抑制PI3K/AKT信号通路有关.
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益气活血方联合PI3K抑制剂Wortmannin对血小板聚集率的影响
目的:观察益气活血方联合PI3K抑制剂Wortmannin对大鼠体外血小板聚集率的影响.方法:高剂量、中剂量、低剂量益气活血方(0.2 g·L-1、0.1g·L-1、0.05g·L.1)体外干预血小板,用比浊法检测二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱导的血小板聚集水平,用钙离子探针fura-2/AM观察血小板胞内Ca2+变化,用qPCR和Western blot法分别检测钙池调控Ca2+流入通道(store-operated calcium channel,SOCC)成分Orai1和基质交感分子1(stromal interaction moleculel,STIM1) mRNA及蛋白表达水平.结果:与对照组比较,益气活血方中剂量组(0.1 g· L-1)和高剂量组(0.2g·L-1)血小板聚集率显著降低(P＜0.05),益气活血方高剂量组(0.2 g·L-1)血小板胞质内Ca2+浓度显著降低(P＜0.05).益气活血方高剂量组(0.2 g·L-) SOCC通路上STIM1、Orai1的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.01);联合应用PI3K抑制剂Wortmannin能显著抑制血小板聚集率(P＜0.01),抑制作用明显好于单独应用中药或西药.结论:益气活血方联合应用PI3K抑制剂Wortmannin能显著抑制血小板聚集率,其作用与抑制STIM1/Orai1活性有关.
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三阴型乳腺癌靶向治疗研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,具有高度异质性.三阴型乳腺癌(TNBC)为其中的亚型,有其独特的临床特征,复发模式与其他乳腺癌亚型不同,预后较差,并伴有BRCA1基因突变.目前的研究已经阐明,TNBC的分子异质性导致了其独特的生物学特点及对化学治疗敏感性的差异,而分子生物学研究也为TNBC的靶向治疗提供了理论基础.国际上虽无针对性的治疗指南,但TNBC有望通过分子靶向治疗取得更好的预后.本文对目前TNBC的靶向治疗进展加以综述.
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PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂对体外培养血管瘤内皮细胞的影响
目的 以PI3 K/Akt/mTOR信号转导通路为靶点,观察PI3K抑制剂LY294002和mTOR抑制剂RAD001对体外培养血管瘤内皮细胞增殖与凋亡的影响,并检测PI3K/Akt/mTOR信号轴中效应分子以探讨血管瘤消长的分子机制.方法 采用组织块结合酶消化法培养血管瘤内皮细胞、传代培养,并用第Ⅷ凝血因子相关抗原对其鉴定.待细胞处于对数生长期,使用无血清培养孵育48h行同步化处理后,分别加入RAD001、LY294002及RAD001+ LY294002作为干预组,加入完全内皮细胞培养基作为空白对照组.以上4组继续孵育24h后收集细胞,采用蛋白免疫印迹方法检测各组细胞p-Akt、p-mTOR、p-ERK及p-eIF4E蛋白的表达,流式细胞仪检测各组细胞的周期分布及凋亡率,分析p-Akt、p-mTOR、p-ERK及p-eIF4E蛋白的表达水平与血管瘤内皮细胞周期及凋亡变化的相关性.结果 1.RAD001、LY294002及RAD001+ LY294002干预24 h后,内皮细胞凋亡率分别为(13.80±1.73)％、(15.03±1.05)％、(36.06±2.67)％,较对照组(3.90±0.20)％有明显升高,差异具有统计学意义(t=-9.82,-18.03,-20.82,P＜0.01),且RAD001+LY294002组凋亡率显著高于对照组、LY294002组、RAD001组(t=-20.82,-12.12,-12.7,P＜0.01);G0/G1期细胞比例分别为(74.29±1.59)％、(74.57±0.59)％、(82.28±3.01)％,较对照组(67.15±1.49)％有明显升高,差异具有统计学意义(t=-5.67,-8.02,-7.79,P＜0.01),且RAD001 +LY294002组高于对照组、LY294002组、RAD001组(t=-7.79,-4.35,-4.06,P＜0.05).2.蛋白免疫印迹检测显示,RAD001干预后,p-Akt、p-ERK、p-eIF4E蛋白表达分别为(0.75±0.04)、(0.54±0.08)、(1.50±0.34),较对照组(0.43±0.08)、(0.27±0.04)、(0.84±0.17)增加,差异具有统计学意义(t=-6.13,-5.49,-3.03,P＜0.05);p-mTOR(0.40±0.04)比对照组(0.77±0.07)明显降低,差异具有统计学意义(t=7.91,P＜0.01).LY294002干预后,p-Akt、p-ERK、p-eIF4E、p-mTOR蛋白表达分别为(0.31±0.08)、(0.26±0.04)、(0.78±0.18)、(0.42±0.05),与对照组比较,蛋白表达有一定下降趋势,但差异无统计学意义(t=2.01、0.23、0.41、6.75,P＞0.05);RAD001+ LY294002干预后,p-Akt、p-ERK、p-eIF4E、p-mTOR蛋白表达分别为(0.32±0.09)、(0.23±0.04)、(0.50±0.13)、(0.27±0.03),与对照组比较,p-eIF4E、p-mTOR蛋白表达下降,差异有统计学意义(t=2.77、10.97,P＜0.05),p-Akt、p-ERK蛋白表达差异无统计学意义(t=1.70、1.10,P＞0.05),与LY294002组,p-mTOR蛋白表达下降,差异有统计学意义(t=4.42,P＜0.05),p-Akt、p-ERK、p-eIF4E蛋白表达无统计学意义(t=-0.15、0.92、2.16,P＞0.05),与RAD001组比较,均有明显降低,差异具有统计学意义(t=7.37、6.47、4.75、4.87,P＜0.01).结论 mTOR抑制剂RAD001可引起p-Akt、p-ERK及p-eIF4E的负反馈激活;RAD001+ LY294002对体外培养血管瘤内皮细胞的干预效果优于单独使用RAD001或LY294002,且可避免RAD001引起的负反馈激活.
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PI3K抑制剂LY294002对鼠前脂肪细胞分化和C/EBPα及PPARγ表达的影响
目的 研究磷脂酰肌醇激酶(PI3 K)抑制剂LY294002对小鼠前脂肪细胞分化和CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响,探讨胰岛素受体底物(IRSs)/PI3K信号通路在前酯肪细胞分化中的作用.方法 小鼠3T3-L1细胞分为实验组和对照组,实验组加入LY294002(25 μmol/L),对照组加入同体积DMSO.应用0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、10(-6)mol/L地塞米松和5 μg/mL胰岛素诱导两组前脂肪细胞分化,在培养的0d、2d、4d、8d分别收集细胞,实时PCR法及Western blot法检测细胞中C/EBPα和PPARγ表达水平.培养8 d油红O染色,观察细胞分化情况.结果 小鼠3T3-L1细胞基础状态下两组C/EBPα及PPARγ表达差异无统计学意义(P>0.05);诱导分化时实验组C/EBPα及PPARγ表达低于对照组(分别P<0.05,P<0.01).油红O染色示实验组细胞无明显脂滴.结论 PI3 K抑制剂LY294002能抑制小鼠前脂肪细胞分化及C/EBPα和PPARγ的表达,提示IRSs/PI3K信号通路可通过调节PPARγ和C/EBPα的表达在3T3-L1前脂肪细胞的分化中发挥重要作用.
