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黄白止痢颗粒质量标准
目的:建立黄白止痢颗粒的质量标准.方法:采用薄层色谱法对黄白止痢颗粒中黄连、大黄炭、白头翁进行定性鉴别,并采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量.Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相乙腈-0.3％磷酸水溶液(32∶68),检测波长348 nm,柱温25℃,流速1.0 mL· min-1,进样量10 μL.结果:在薄层鉴别中黄连、大黄炭、白头翁有良好的鉴别特征有效成分盐酸小檗碱含量在0.008 8～0.11 g·L-1具有良好的线性关系(r =0.999 1),平均加样回收率为98.58％,RSD 1.05％.结论:使用薄层色谱法对黄连、大黄炭、白头翁进行定性鉴别,操作简便、重复性好,且阴性对照无干扰;盐酸小檗碱的含量测定方法简便、快速、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为黄白止痢颗粒的质量控制方法.
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RP-HPLC法测定清热解毒浸膏白头翁皂苷B4的含量
目的:建立清热解毒浸膏中白头翁皂苷B4的含量测定方法.方法:采用RP-HPLC法,色谱柱:Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μn),以乙腈-0.1%磷酸(28:72)为流动相,流速:1.0 mL·min-1,检测波长:205 nm,柱温:30℃.结果:白头翁皂苷B4在0.294～1.47 μg范围内呈良好线性关系,相关系数为0.999 9,平均回收率为99.6%,RSD为1.37%.结论:该方法简便、准确、重复性好,可作为清热解毒浸膏质量控制指标之一.
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白头翁皂苷B4在正常大鼠和溃疡性结肠炎大鼠体内组织分布情况的比较
目的:建立大鼠体内白头翁皂苷B4的UPLC-ESI-MS/MS,比较白头翁皂苷B4在正常大鼠和溃疡性结肠炎大鼠肝、脾、肾、心、肺组织中的分布情况,为研究白头翁汤治疗溃疡性结肠炎的作用过程和机制提供参考.方法:雄性SD大鼠等分为正常组和模型组,均按5 g·kg-1灌胃给药白头翁汤冻干粉,分别于15,45,120,360 min用5％水合氯醛麻醉正常大鼠和模型大鼠,取肝、脾、肾、心、肺组织,采用UPLC-ESI-MS/MS分析,以0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,ACQUITY BEH C18色谱柱(2.1 mm×50mm,1.7 μm),柱温35℃,流速0.4 mL·min-1.结果:白头翁皂苷B4在大鼠体内存在广泛分布与代谢.在正常大鼠的肝、脾、肾、心、肺组织中,白头翁皂苷B4均在120 min时达到大质量浓度.与正常组比较,在模型组大鼠肝、心组织中白头翁皂苷B4质量浓度各时间点均明显升高(P＜0.05);在脾和肾组织中,分别于45 min和120 min时明显升高(P＜0.05);在肺组织中,于120 min时显著增加(P＜0.05).结论:溃疡性结肠炎大鼠对白头翁皂苷B4的吸收和生物利用度均优于正常组,溃疡性结肠炎的病理状态可导致白头翁汤中白头翁皂苷B4的吸收增强.
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HT-ED联合UPLC-MS/MS技术分析白头翁皂苷B4的大鼠血浆蛋白结合率
目的:建立血浆中白头翁皂苷B4的分析方法,测定白头翁皂苷B4大鼠血浆蛋白结合率.方法:采用96通道高通量平衡透析系统(HTD 96b)进行透析,利用UPLC-MS/MS测定透析内外液中白头翁皂苷B4的浓度,研究白头翁皂苷B4在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率,使用Waters XTerra MS C18色谱柱(2.1 mm×50mm,5μm),流动相0.1％甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.7 mL·min-1,柱温40℃,进样量5μL.结果:白头翁皂苷B4在5～2000 ng·L-1线性关系良好,其精密度RSD及准确度均＜8.0％,重复性RSD＜ 9.0％,稳定性的RSD均＜15％;提取回收率和基质效应均在80％～115％.白头翁皂苷B4在低、中、高(6,12,24 mg·L-1)3个质量浓度下大鼠血浆蛋白结合率分别为(95.32 ±0.37)％,(94.32±0.63)％,(88.64±0.37)％.结论:白头翁皂苷B4与大鼠血浆具有较强的蛋白结合率,且结合率不具有质量浓度依赖性.
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不同来源白头翁药材的皂苷含量比较
目的 以白头翁皂苷B.作为指标,考察不同来源白头翁的质量,为白头翁的加工和选用提供参考.方法 采用高效液相色谱法,对购自毫州中药材大市场白头翁药材与饮片5个样品和滁州野生白头翁进行含量测定.结果 在0.312 5～10 μg范围内线性关系良好,回归方程Y=276 350X-12 180,R2=0.999 6.结论 不同来源的白头翁药材皂苷B4含量差异较大.
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薄层扫描法测定肠泰合剂中白头翁皂苷B4的含量
肠泰合剂是由白头翁、马齿苋等5味中药组成,具有迅速消除结肠及直肠充血、水肿,适用于慢性溃疡性结肠炎,直肠炎等疾病.本品目前无含量测定方法.本文拟对其进行定量测定.因方中白头翁为君药,本文运用薄层扫描法对肠泰合剂中的白头翁皂苷B4的含量进行测试,所得结果满意.
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复方白头翁汤结肠靶向片中白头翁皂苷B4兔体内药动学研究
目的 考察复方白头翁汤结肠靶向片(白头翁、关黄柏、黄连、秦皮)和非结肠靶向片药物代谢动力学的区别.方法 6只家兔随机分成复方白头翁汤结肠靶向组(结肠靶向)和复方白头翁汤组(非结肠靶向).采用HPLC测定兔血浆中白头翁皂苷B4,并用DAS 2.1.1版药代动力学分析软件计算主要药动学参数.结果 复方白头翁汤结肠靶向组中白头翁皂苷B4的血药浓度出现时间晚于复方白头翁汤组,其达峰时间延迟了6h,大血药浓度仅为复方白头翁汤组的17.59％.结论 复方白头翁汤结肠靶向片与非结肠靶向片相比,具有结肠靶向的优势.
关键词： 复方白头翁汤结肠靶向片 白头翁皂苷B4 药物动力学 家兔 -
白头翁药材中白头翁皂苷B4的测定
目的 建立测定白头翁药材中白头翁皂苷B4的方法.方法 比较回流法和药典超声提取法对白头翁药材中的白头翁皂苷B4的提取效果,筛选白头翁的佳回流提取工艺.结果 白头翁的佳提取工艺为90％甲醇8倍量,回流提取3次,1.0 h/次.在选定色谱条件下,白头翁皂苷B4在15.31～459.36μg/mL范围内线性关系良好,平均回收率为99.46％,RSD为0.98％(n=6).结论 该方法简便易行,可用于白头翁药材中白头翁皂苷B4的测定.
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白头翁皂苷B4体外抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导其凋亡
目的 筛查中药白头翁抗肝癌有效成分,探索其抗癌机制.方法 分离白头翁皂苷成分,以人肝癌细胞HepG2为作用靶细胞,MTT法测定其对细胞增殖的抑制,流式细胞术检测细胞周期阻滞,DNA片断化方法检测细胞凋亡情况,检测半胱氨酸蛋白酶3酶活性,从信号通路的角度探寻其诱导凋亡的机制.结果 白头翁药材含量较高的成分白头翁皂苷B4对HepG2具有显著的抑制作用,大抑制率达到71.5％；通过细胞周期分布分析,发现多有83.2％的细胞被阻滞在G,期；用流式细胞仪研究其凋亡情况发现,在40 mg/mL药物浓度作用下,细胞凋亡与孵育时间呈现依赖关系,随着时间从0到48 h,初期凋亡比例从接近于零高增长到14.3％,并且发生了DNA片段化；进一步研究发现,白头翁皂苷B4处理后的HepG2细胞半胱氨酸蛋白酶3活性显著升高.结论 白头翁皂苷B4调控肝癌细胞周期,阻滞G2/M期更替,诱导细胞凋亡,是肝癌治疗的潜在候选分子,奠定了白头翁药材用于肝癌治疗的理论基础.
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白头翁配方颗粒的质量标准研究
目的:建立白头翁配方颗粒的质量标准.方法:运用薄层色谱法,以白头翁对照药材和白头翁皂苷B4对照品为对照,建立白头翁配方颗粒的薄层鉴别方法.采用高效液相色谱法建立白头翁配方颗粒中白头翁皂苷B4的含量测定方法.色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18 (250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水(26:74),流速:1mL/分,检测波长:201nm,柱温:30℃.结果:薄层鉴别斑点清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点.高效液相色谱法测定白头翁皂苷B4进样量在0.676-6.76μg的范围内时与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为100.40%,RSD为0.78%(n=6).结论:该方法操作简便,结果准确,重现性好,可用于白头翁配方颗粒的质量控制方法.
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基于正交设计和指纹图谱法的白诃颗粒水提工艺研究
目的 优选白诃颗粒水提工艺,为该制剂的工业化生产提供参考.方法 以白头翁皂苷B4提取量和干膏得率为综合评价指标,采用正交试验设计优化水提工艺参数,并建立指纹图谱印证白诃颗粒佳水提工艺的合理性.结果 水提制备工艺影响因素大小依次是:煎煮次数＞加水量＞煎煮时间,佳制备工艺条件为处方药材加8倍量水,提取3次,每次1h.结论 优选得到的工艺稳定可行,重复性好,可用于工业化生产.
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河南白头翁生物学特性的初步研究
目的:对河南地区野生白头翁生物学特性进行研究,为合理采收野生白头翁药材以及开发利用白头翁资源提供科学依据.方法:实地考察植物生长习性；高效液相包谱法测定野生白头翁中白头翁皂苷B4质量分数、2010年药典项下方法测定水分、灰分、酸不溶性灰分、醇浸物含量及其培养皿法测定种子千粒质量、发芽率、发芽势.结果:描述了白头翁的生物学特性,了解其生长发育规律及白头翁皂苷B4动态积累变化规律；种子发芽率、发芽势较低.结论:本实验为确定野生白头翁的适宜采收期以及保护开发利用野生白头翁资源提供了科学依据.
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反相高效液相色谱法测定白头翁药材中白头翁皂苷B4的含量
目的 建立白头翁药材中白头翁皂苷B4的含量测定方法 .方法 采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,色谱柱:Kromasil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.1%磷酸(28∶72)为流动相,流速:1.0 ml·min~(-1),检测波长:205 nm,柱温:30℃.结果 白头翁皂苷B4在29.4～147 mg·L~(-1)内呈良好线性关系,相关系数为0.999 9,平均回收率为99.7%,RSD为1.14%.结论 该方法 简便、准确、重复性好,可用于白头翁药材的质量控制.
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产地加工对白头翁皂苷B4含量的影响
目的:考察白头翁药材佳产地加工方法.方法:2006年8月lO日于凤阳县雷达山采集白头翁后,选用晒干、烘干(50℃)、105℃杀青后烘干、沸水杀青后烘干、放置2 d后烘干等5种干燥处理方法.采用高效液相色谱法测定不同加工方法的白头翁中皂苷的含量.结果:105℃杀青后50℃干燥的药材白头翁皂苷含量高.结论:该研究对白头翁药材产地加工方法的选用提供了科学依据.
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HPLC法测定肠腹宁颗粒中白头翁皂苷B4的含量
目的:建立测定肠腹宁颗粒中白头翁皂苷B4含量的方法.方法:色谱柱为HypersilC18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％磷酸(30:70),流速为1.0 mL·min 1,柱温为室温,检测波长为205 nm,进样量为10μL.结果:白头翁皂苷B4的质量浓度在3.125～50.000 μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 8);平均加样回收率为99.45％,RSD=2.83％(n=6).结论:该方法专属性强、灵敏度高、重复性好,可用于肠腹宁颗粒的质量控制.
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HPLC法同时测定白蒲黄片中5种成分的含量
目的:建立同时测定白蒲黄片中白头翁皂苷B4、咖啡酸、黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Agela Technologies Venusil XBP C18(L),流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为203 nm(白头翁皂苷B4)和323 nm(咖啡酸、黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱),柱温为30℃,进样量为10μL.结果:白头翁皂苷B4、咖啡酸、黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱检测进样量线性范围分别为0.08141~8.141μg(r=0.9998)、0.01871~1.871μg(r=0.9994)、0.03733~3.733μg(r=0.9992)、0.02885~2.885μg(r=0.9996)、0.02758~2.758μg(r=0.9997);定量限分别为0.009、0.006、0.008、0.011、0.013 ng,检测限分别为0.030、0.020、0.025、0.034、0.036 ng;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率分别为97.39%~102.34%(RSD=1.81%,n=6)、96.77%~98.92%(RSD=0.85%,n=6)、97.38%~103.72%(RSD=2.46%,n=6)、96.73%~102.01%(RSD=2.22%,n=6)、96.47%~101.07%(RSD=1.61%,n=6).结论:该方法操作简便、结果准确、重复性好,可用于白蒲黄片中白头翁皂苷B4、咖啡酸、黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的同时测定.
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正交试验优选白头翁汤提取工艺
目的:优选白头翁汤提取工艺.方法:以乙醇浓度、乙醇用量、提取次数和提取时间为考察因素,以浸膏得率和白头翁皂苷B4、秦皮甲素、秦皮乙素、小檗碱的含量为指标,采用L9(34)正交设计优选佳提取工艺.结果:佳提取工艺为8倍量60%乙醇,提取3次,每次1.5 h.结论:优选的提取工艺稳定、可行.
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白头翁皂苷B4对肝癌细胞Huh-7及其荷瘤裸鼠肿瘤的抑制作用及机制研究
目的:研究白头翁皂苷B4(AB4)对肝癌细胞Huh-7及其荷瘤裸鼠肿瘤的抑制作用及机制.方法:将Huh-7细胞分为AB4给药组、阴性对照组(等体积培养液)、阳性对照组(5-氟尿嘧啶50μmol/L),运用MTT法检测0、3、6、12、25、50、100、200、400、800、1600μmol/L AB4作用Huh-7细胞12、24、36、48 h的增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);克隆形成试验评估50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的克隆细胞数;膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)染色检测50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的细胞凋亡率;Western blot法检测50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h后B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、活化胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved PARP)等凋亡蛋白的表达.将荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(5-氟尿嘧啶50 mg/kg)和AB4低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg),每组3只,每天腹腔注射相应药物1次,连续19 d,观察裸鼠肿瘤生长情况,计算抑瘤率;苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞形态变化.结果:AB4对Huh-7细胞的增殖抑制率随给药浓度的增加而增加,但50μmol/L后增加不明显,随作用时间的延长而增加,但作用24 h后增加不明显,AB4的IC50为(56.76±1.756)μmol/L.与阴性对照组比较,50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的克隆细胞数明显减少、Bcl-2蛋白表达明显减弱(P<0.05),细胞凋亡率和Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达均明显增加(P<0.05或P<0.01),且与阳性对照组差异无统计学意义.与阴性对照组比较,AB4低、中、高剂量组和阳性对照组荷瘤裸鼠的瘤体积明显减小(P<0.05),肿瘤细胞轮廓逐渐模糊,出现核固缩、核质不清晰、核碎裂现象,其抑瘤率分别为25.93％、39.15％、46.26％、42.83％.结论:AB4对Huh-7细胞及其荷瘤裸鼠均有抑制作用,其机制可能与上调Bax/Bcl-2比例、活化Caspase-3、裂解PARP、诱导细胞发生凋亡有关.
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复方白头翁结肠片的质量标准研究
目的:建立复方白头翁结肠片的质量标准.方法:用薄层色谱法对片剂中的主要有效成分白头翁、黄连和黄柏进行了定性鉴别;采用高效液相色谱法测定了片剂中白头翁皂苷B4含量.结果:TLC可检出白头翁、黄连和黄柏的特征斑点;HPLC测定的白头翁皂苷B4含量在1.04～10.4μg范围内线性良好,其回归方程为Y=234014X+68118,r=0.9999.平均加样回收率为97.47%,RSD为1.82%.结论:本方法简便、准确、专属性强,可有效地控制复方白头翁汤结肠片的质量.
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健脾止泻颗粒的质量标准研究
目的:建立健脾止泻颗粒的质量标准.方法:采用TLC鉴别诃子、延胡索;采用HPLC测定白头翁皂苷B4的含量.结果:该制剂中的诃子、延胡索均可用TLC法检出;含量测定的色谱条件为C18为填充剂,乙腈-0.1%磷酸(25:75)为流动相;流速1.0 mL/min,柱温30 ℃,检测波长203 nm;在0.16 μg～4.0 μg范围内,白头翁皂苷B4峰面积与进样量有良好的线性关系,回归方程为A= 845.06X+2.3783(R=1.0000),平均回收率为99.53%,RSD为2.82%.结论:本实验方法操作简便,结果准确,重现性好,可用于控制健脾止泻颗粒的质量.
