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HPLC法测定心可宁胶囊中蟾酥的含量
目的:采用HPLC法测定心可宁胶囊中蟾酥的含量.方法:色谱柱为Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈- 0.5%磷酸二氢钾溶液(55∶45)(用磷酸调pH值为3.2),流量1.0 mL·min-1,检测波长296 nm.结果:华蟾酥毒基在5～100 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=1.000 0),平均回收率为99.0%,RSD为1.8%;酯蟾毒配基在4.99～99.8 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=1.000 0),平均回收率为98.2%,RSD为1.4%.结论:本法简便、快速、准确,可用于产品的质量控制.
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心灵丸质量标准修订研究
目的:建立心灵丸(蟾酥、人工麝香、冰片、体外培植牛黄、熊胆、人参、三七等)的质量标准.方法:采用显微鉴别处方中的珍珠;采用GC及TLC分别对处方中的人工麝香、冰片等进行定性鉴别;采用HPLC法测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量.结果:在GC图谱中可检测到与麝香酮对照品相同保留时间的色谱峰;在TLC图谱中可检出人参、三七等药材的特征斑点;华蟾酥毒基在0.0398～0.4776μg之间线性关系良好,r=0.9998,精密度试验RSD=0.3%(n=6),平均回收率为100.18%,(RSD=0.5%,n=6);脂蟾毒配基在0.0419～0.5026μg之间线性关系良好,r=0.9998,精密度试验RSD=0.6%(n=6),平均回收率为97.00%,(RSD=0.9%,n=6).结论:所采用的方法准确、可靠,可行性及重复性良好,能有效控制该制剂的质量.
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HPLC法测定益心丸中的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量
目的:建立测定益心丸中的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量的高效液相色谱分析方法.方法:采用HPLC法,Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.5%磷酸二氢钾-乙腈(50:50)(用磷酸调节pH值为3.2)为流动相;流速为1.0 mL·min-1,检测波长为296 nm.结果:华蟾酥毒基、脂蟾毒配基在进样量分别为0.127～5.096μg和0.124～4.960 μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为102.81%和98.83%,RSD分别为0.98%和0.42%.结论:本方法简便、准确、快速,可作为该制剂的质控方法.
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心可宁胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的HPLC法含量测定
目的:建立HPLC法测定心可宁胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量测定方法,以更好的控制其质量.方法:采用Thermo C18色谱柱,以0.5％磷酸二氢钾溶液-乙腈(50:50)为流动相,用磷酸调pH至3.2,检测波长为296 nm.结果:华蟾酥毒基在30.72 ～71.68 μg· mL-1范围内呈良好的线性关系(r=1.0000),酯蟾毒配基在30.78 ～71.82 μg· mL-1范围内呈良好的线性关系(r =0.9999),华蟾酥毒基和酯蟾毒配基平均回收率分别为99.76％和99.88％,RSD分别为1.29％和0.62％;测定3批样品,华蟾酥毒基和酯蟾毒配基总量分别为0.053、0.053、0.054 mg·粒-1,RSD为1.09％.结论:本方法准确、有效,可以作为该类产品的质控检测方法.
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RP-HPLC测定蕲龙胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量
目的 建立蕲龙胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法,Phenomenex luna C18 (250 mm× 4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(50:50),流速0.8 mL/min,检测波长296nm.结果 方法学考察结果表明,本研究建立的分析方法有较好的重现性和稳定性.华蟾酥毒基平均加样回收率为98.5％(RSD-0.55％,n=6)；酯蟾毒配基平均加样回收率为101.0％(RSD=0.67％,n=6).结论 本方法定量准确、重复性好,可用该制剂的质量控制.
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国产蟾酥药材质量综合评价研究
目的 综合考察国产蟾酥药材质量.方法 用HPLC测定14批蟾酥药材中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、蟾毒灵等7种指标成分含童,并考察样品中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、蟾毒灵等7种指标成分TLC鉴别和水分、总灰分、酸不溶灰分、醇浸出物等药材常规理化实验项目.结果 各样品中均可检测出7种指标成分的色谱峰,蟾酥药材指标成分含量和常规理化实验项目测定结果表明,不同产地蟾酥药材间品质差异较大.结论 本实验为蟾酥药材综合质量评价体系的建立提供理论和实验依据.
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HPLC法测定安替可胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量
高效液相色谱法测定安替可胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量,色谱柱采用Kromasil C18;流动相为0.5 %磷酸二氢钾溶液-乙腈(60:40) (用磷酸调节pH值为3.2);流速为0.8mL·min-1,检测波长为296nm;两种成份总平均回收率为96.5%,RSD=0.8%;华蟾酥毒基与酯蟾毒配基的浓度分别在0.05～0.45 mg·mL-1范围内,质量浓度与峰面积具有良好的线性关系.本法稳定、准确,重现性好.
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HPLC法同时检查华蟾素片中蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基限量和测定蟾蜍噻咛的含量
目的 采用HPLC法对华蟾素片中有毒成分蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基进行限量检查；并利用HPLC法测定其有效成分蟾蜍噻咛的含量.方法 限量检查:色谱柱为Agela C18柱,流动相为乙腈-0.5％磷酸二氢钾溶液(50∶50)(用磷酸调节pH为3.2),检测波长为296nm.含量测定:色谱柱为Kromasil C18柱,流动相为乙腈-水(10∶90),检测波长为226nm.结果 在与蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基对照品色谱峰相同的保留时间处,5批样品出现的色谱峰面积之和小于对照品峰面积之和.蟾蜍噻咛在0.1045～1.0448μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9998;平均回收率为98.9％,RSD=1.6％；每片含量不得少于0.15mg.结论 方法快速、准确、重复性好,可用于华蟾素片质量标准的控制.
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华蟾酥毒基抑制人前列腺癌PC3细胞体外增殖研究
目的 探讨华蟾酥毒基对人前列腺癌PC3细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能存在的作用机制.方法 细胞分为不加药对照组,5、50、100、500 nmol/L华蟾酥毒基组,共5组.各组作用于PC3细胞24、48 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测华蟾酥毒基对人前列腺癌PC3细胞增殖的影响.不同浓度华蟾酥毒基作用于PC3细胞48 h后,光学显微镜观察PC3细胞形态变化;克隆形成实验检测华蟾酥毒基对前列腺癌PC3细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测华蟾酥毒基作用48 h后各组PC3细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测华蟾酥毒基对髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白表达的影响.结果 24 h后华蟾酥毒基可在体外抑制PC3细胞增殖(P<0.01),48 h后华蟾酥毒基对PC3细胞增殖抑制作用更为明显(P<0.05),华蟾酥毒基对PC3细胞增殖能力有较好的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性.细胞克隆形成实验发现,0.5 nmol/L华蟾酥毒基即可抑制细胞克隆形成(P<0.05),并且此种抑制作用与药物浓度呈正相关(P<0.05).流式细胞术结果显示,0.5 nmol/L以上华蟾酥毒基均可诱导PC3细胞凋亡,随浓度增加凋亡率显著增加(P<0.01),50 nmol/L华蟾酥毒基干预48 h后,PC3细胞凋亡率为39.667％;同时光学显微镜下细胞增殖抑制明显,并呈凋亡形态改变.蛋白质印迹法结果显示,不同浓度华蟾酥毒基均可下调抗凋亡蛋白MCL-1蛋白表达(P<0.01),以50 nmol/L华蟾酥毒基作用于PC3细胞48 h下调MCL-1蛋白表达更为显著(P<0.01).结论 华蟾酥毒基可抑制前列腺癌PC3细胞的体外增殖,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与抗凋亡蛋白MCL-1表达下调有关.
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华蟾酥毒基抗肿瘤作用研究进展
文章综述了华蟾酥毒基在抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤血管生成、增强机体免疫力等方面的作用,指出其具有良好的临床抗肿瘤应用前景.
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冻干蟾皮凝胶剂质量标准及初步药效学研究
目的 建立冻干蟾皮凝胶剂质量标准和初步药效学研究.方法 采用薄层色谱(TLC)法对制剂中的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基进行定性鉴别,高效液相色谱(HPLC)法测定华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量,色谱柱kromasilC18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-水(B)(48∶52);流速:1 mL/min;检测波长:296 nm;柱温:30℃;进样量:10μL.采用S180腹水型实体瘤小鼠进行初步抑瘤药效学研究.结果 硅胶G薄层板上,在与对照品色谱对应的位置上,显示相同颜色的荧光斑点,且斑点大小适中,分离度良好.华蟾酥毒基和酯蟾毒配基分别在0.056～4.48 μg/mL,0.256～10.24 μg/mL范围内,峰面积与浓度存在良好的线性关系(r=0.9987、0.9996).加样回收率(n=6)为100.27％、101.68％,相对标准偏差为1.56％、1.67％.初步药效学结果显示冻干蟾皮凝胶剂不同剂量组均有显著抗肿瘤作用,且高剂量组效果佳,抑瘤率为48.03％.结论 建立了冻干蟾皮凝胶剂质量标准,初步药效学表明冻干蟾皮凝胶剂具有显著抗肿瘤作用.
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HPLC法同时测定救心丸中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量
目的:建立救心丸中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量测定方法.方法:色谱柱:C18(250 mmx4.6mm,5μm);柱温:40℃;流动相:乙腈-0.5%磷酸二氢钾(pH=3.2)(50:50);流速:1.0 ml/min;检测波长:296 nm.结果:华蟾酥毒基在0.498～2.490μg范围内线性关系良好;脂蟾毒配基在0.570～2.850μg范围内线性关系良好.结论:本方法简便、准确,重复性好,可作为救心丸的质量控制方法.
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反相HPLC法同时测定牛黄消炎丸中华蟾酥毒基、酯蟾酥配基的含量
目的:建立用反相HPLC法同时测定牛黄消炎丸中华蟾酥毒基、酯蟾毒配基含量的方法.方法:采用反相HPLC法测定华蟾酥毒基、酯蟾毒配基的含量,色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(25mm×5μm,麦科菲);乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液(40:60)(用磷酸调pH值至3.2)为流动相,检测波长为296nm,柱温为40oC.结果:华蟾酥毒基进样量在0.2578μg～1.5468μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,回归方程Y=768131x-16329,平均回收率为97.67%(n=6):酯蟾毒配基进样量在0.2482μg～1.4892μg范围内,与峰面积里良好的线性关系,r=0.9999,回归方程Y=727051x-18342,平均回收率为100.07%(n=6).结论:定量方法操作简便、结果可靠,可用于牛黄消炎丸中蟾酥的质量控制.
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蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基大鼠体内药动学研究
目的 建立检测大鼠血浆中3种蟾蜍甾烯类化合物蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的HPLC法,并用于蟾酥在大鼠体内的药动学研究.方法 分别于大鼠尾iv给予蟾酥提取物0.8 mg/kg后2、5、10、15、20、30、45、60、90 min,眼眶取血,采用乙腈沉淀蛋白与液液萃取相结合方法进行血浆样品预处理,以HPLC法测定大鼠血浆中蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的质量浓度,以Kinetica软件拟合药动学参数.结果 蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基均得到很好的分离,重现性、精密度、线性关系良好,达到体内分析要求；经非房室模型拟合,得到蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基在大鼠体内主要药动学参数；iv给药30 min时,血药浓度均降至Cmax的1/5以下.结论 建立的蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基血药浓度测定方法操作简单、结果准确可靠；蟾蜍甾烯类成分在大鼠体内代谢较为迅速,所得数据可为蟾酥提取物的药动学研究提供参考.
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血栓心脉宁片UPLC-PDA指纹图谱研究
目的 建立血栓心脉宁片(XXT)的UPLC-PDA指纹图谱,考察不同批次XXT质量的一致性,为XXT质量稳定性提供可靠的科学依据.方法 样品经甲醇提取,采用Waters Acquity UPLC HSS T3(50 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,190～400 um波长扫描,体积流量0.5 mL/min,进样量3μL,柱温40℃;对30批XXT样品进行方法学考察、相似度计算和聚类分析;单味药材进行共有峰归属,并通过对照品对共有峰的化学成分进行指认.结果 建立了XXT UPLC-PDA指纹图谱,280 nm波长下标定28个共有峰,其中1、10、12～16、18、21～28号峰来自丹参,2～4、6、8、9、17号峰来自川芎,3、7、9、11、16号峰来自毛冬青、5号峰来自槐花,19、20号峰来自蟾酥,经对照品比对指认出4号峰为阿魏酸、5号峰为芦丁、13号峰为丹酚酸B、19号峰为酯蟾毒配基、20号峰为华蟾酥毒基、28号峰为丹参酮ⅡA;通过聚类分析30批XXT可分为2类,经中药色谱指纹图谱评价软件(2012版)计算得30批XXT相似度均大于0.960.结论 建立的XXT UPLC-PDA指纹图谱具有良好的精密度、稳定性和重复性,方法简便可靠,可为进一步完善XXT的质量评价提供参考依据.
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HPLC-MS法同时测定六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物
目的 建立HPLC-MS法同时测定六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物(和蟾蜍他灵、沙蟾毒精、远华蟾毒精、去乙酰华蟾毒它灵、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基)的方法.方法 采用ODS-2(250 mm× 4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.15％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温40℃,检测波长296 nm.HPLC-MS联用的色谱条件与HPLC分离基本条件一致,流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液.通过电喷雾离子源,正离子模式扫描,对六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物进行分析鉴别.结果 9种蟾蜍二烯内酯类化合物均得到良好分离,线性关系良好(r≥0.999 6).加样回收率均在92％～105％,RSD＜5％.应用建立的HPLC-MS方法测定了10批六神丸中9种蟾蜍二烯内酯类化合物的量,分别为和蟾蜍他灵0.40～0.88 mg/g,沙蟾毒精0.32～0.83 mg/g,远华蟾毒精0.61～2.11 mg/g,去乙酰华蟾毒它灵0.15～0.32 mg/g,蟾毒它灵0.84～1.85 mg/g,华蟾毒它灵25.76～62.14 mg/g,蟾毒灵0.96～2.06 mg/g,华蟾酥毒基2.30～4.75 mg/g,脂蟾毒配基1.20～2.61 mg/g.结论 所建立的定量测定方法简便、快速、准确可靠,专属性强,可用于六神丸的质量控制.
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蟾酥干燥炮制前后化学成分和药效学变化考察
目的 考察蟾酥Bufonis venenum鲜浆干燥炮制加工(日晒干燥、50℃真空干燥、50℃鼓风干燥、80℃鼓风干燥、冷冻干燥)前后化学成分及药效变化.方法 HPLC法和TLC法研究蟾酥不同干燥方式炮制前后化学成分的变化,MTT法测试不同炮制干燥品抑制5种不同肿瘤细胞株增殖的效果.结果 5种不同加工炮制方法所得蟾酥,性状有较大差异;化学成分的种类及含量没有明显差异;华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量之和都符合《中国药典》2015年版标准,大于6％;50℃和80℃鼓风干燥所得蟾酥具有比其他干燥方法更强的肿瘤细胞抑制效果.结论 日晒及50℃鼓风干燥法所得蟾酥符合《中国药典》要求的外观性状.真空干燥和冷冻干燥虽然颜色不符合《中国药典》的规定,但主要有效成分并未发生较大变化.
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HPLC法测定仙蟾胶囊中士的宁、脂蟾毒配基和华蟾酥毒基
目的 建立仙蟾胶囊中士的宁、脂蟾毒配基与华蟾酥毒基的高效液相色谱法测定.方法 士的宁:采用Intersil-ODS3色谱柱;流动相:乙腈-0.01 mol/L十二烷基磺酸钠-0.01 mol/L磷酸二氢钾(40∶30∶30,冰醋酸调节pH值4.0);检测波长:254 nm;体积流量:1.2 mL/min;柱温:室温;脂蟾毒配基与华蟾酥毒基:采用Hypersil C18色谱柱;流动相:0.5%醋酸铵-乙腈(50∶50,氨水调节pH值7.0);检测波长:296 nm;体积流量:0.6 mL/min;柱温:40℃.结果 士的宁、脂蟾毒配基、华蟾酥毒基分别在4.2～41.6、10.8～108.0、9.4～94.0 μg/mL与峰面积的线性关系良好.加样回收率分别为101.8%、97.6%、98.4%,RSD均小于2%.结论 本方法操作简便,灵敏度高,结果准确,重现性好,为仙蟾胶囊的质量控制提供了较全面的定量分析方法.
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RP -HPLC法同时测定蟾麝救心滴丸中蟾酥华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量
目的 建立采用RP-HPLC法同时测定蟾麝救心滴丸中蟾酥华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量的方法. 方法 采用反相HPLC法测定华蟾酥毒基、酯蟾毒配基的含量,C18色谱柱;流动相:乙腈-水,梯度洗脱(0→25 min,56∶ 44;26→44 min,0∶ 100;45→50 min,56∶ 44,V/V),流速:1.0 ml/min,检测波长为296 nm,柱温为35 ℃. 结果 华蟾酥毒基在0.211 8-2.118 μg范围内呈现良好的线性关系(r=0.999 7),平均回收率为99.49%,RSD值为1.2%(n=6);酯蟾毒配基在0.201 2-2.012 μg范围内,呈现良好的线性关系(r=0.999 6),平均回收率为99.97%,RSD值为1.7%(n=6). 结论 RP-HPLC法简便可行、准确、重现性好,可作为蟾麝救心滴丸中蟾酥华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量测定方法.
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蟾饲五谷虫中华蟾酥毒基的含量测定
目的 建立反相高效液相色谱法测定蟾饲五谷虫中华蟾酥毒基的含量.方法 采用Ecosil C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm),以乙腈-5 g·L-1磷酸二氢钾溶液(体积比38:62)(用磷酸调节pH值为3.2)为流动相,检测波长为296 nm,柱温为40℃,流速为1.0 mL· min-1.结果 华蟾酥毒基的线性范围为6.0 ～30.0 mg·L-1(r =0.998 7,n=5),平均回收率为100.0％( RSD=1.54％,n=6).结论 该方法操作简便、结果准确,可用于蟾饲五谷虫的质量控制.
