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蟾灰胶囊质量标准的初步研究
目的 建立蟾灰胶囊的质量控制方法.方法 采用HPLC,以Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,0.5％磷酸二氢钾溶液-乙腈(50:50)(用磷酸调pH值3.2)为流动相,体积流量1 mL/min,检测波长296 nm,柱温40℃,对制剂中脂蟾毒配基和华蟾酥毒基进行定量分析；TLC法对制剂中的蟾皮、人参进行鉴别.结果 脂蟾酥毒配基在0.0032～0.32 mg/mL、华蟾酥毒基在0.0032 ～0.32 mg/mL线性关系良好,平均回收率98.98％和99.08％；供试品薄层色谱中,在与对照品色谱相应位置步,显相同颜色的斑点.结论 该方法操作简便可靠,重现性好,能较好控制该制剂的质量.
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HPLC测定得力生注射液中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量
得力生注射液由人参、黄芪、斑蝥、蟾酥4味中药制成,是我国复方静脉用中药二类新药,具有益气扶正,消癥散结.用于中晚期原发性肝癌气虚瘀滞证,症见右肋腹积块,疼痛不移,腹胀食少,倦怠乏力等.方中蟾毒内酯具有抗肿瘤作用[1],为了更好地控制产品质量,保证药物疗效,采用HPLC法对其中毒性药材蟾酥中含有的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基进行含量测定.
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HPLC测定心力丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量
心力丸具有温阳益气,活血化瘀的作用,用于心阳不振、气滞血瘀所致的胸痹心痛、胸闷气短、心悸怔忡、冠心病、心绞痛等,疗效确切.原标准(WS3-B-3150-98)方中含有蟾酥,为剧毒药,原标准只有鉴别,尚未设含量测定,本文采用HPLC法测定了蟾酥的华蟾酥毒基和脂蟾毒配基,方法简便可行,可以准确控制心力丸的质量.
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喉痛解毒丸质量标准的研究
目的:建立喉痛解毒丸的质量标准.方法:用薄层色谱法鉴别喉痛解毒丸中的冰片、蟾酥、山豆根;用古蔡氏法对其中的雄黄中含有的三氧化二砷进行了限量检测;用高效液相色谱法对蟾酥中的华蟾酥毒基和脂蟾毒配基进行了定量分析.结果:鉴别方法专属性强;华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的线性范围分别为56～336 μg,/mL及29～174 μg/mL;平均加样回收率分别为100.2%和99.3%,RSD分别为1.16%和1.10%,精密度和重现性均良好.结论:本法操作简便、快速、准确,可用来控制样品的质量.
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通窍益心丸质量标准修订研究
目的:建立通窍益心丸(蟾酥、冰片、体外培植牛黄、人参、三七等)的质量标准.方法:采用显微鉴别处方中的珍珠;采用TLC分别对处方中的人参、三七等进行定性鉴别;采用HPLC法测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量.结果:在TLC图谱中可检出人参、三七等药材的特征斑点;华蟾酥毒基在0.030 57μg～0.917 1μg之间线性关系良好,r=0.999 9,精密度试验RSD=0.4%(n=5),平均回收率为99.55%,(RSD=1.0%,n=6);脂蟾毒配基在0.030 51 μg～0.915 3 μg之间线性关系良好,r=0.999 6,精密度试验RSD=0.2%(n=5),平均回收率为98.34%(RSD=1.0%,n=6).结论:所采用的方法准确、可靠,可行性及重复性良好,能有效控制该制剂的质量.
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HPLC测定心可宁胶囊中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量
目的:建立心可宁胶囊(蟾酥等)中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定方法.方法:采用HPLC法进行含量测定.色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相:甲醇-水(50:40),流速:0.8 mL/min,检测波长:296nm;柱温:室温.结果:线性范围:华蟾酥毒基3.5μg～0.28μg,脂蟾毒配基3.75μg～0.30μg.平均回收率:华蟾酥毒基为99.86%,RSD为1.8%(n=5),脂蟾毒配基为99.84%,RSD为1.2%(n=5).结论:该方法简便、灵敏、准确、专属强,能够控制产品质量.
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蟾酥通痹软膏的质量标准研究
目的:建立蟾酥通痹软膏(蟾酥、冰片、防己等)的质量标准.方法:采用TLC法对处方中的防己等进行定性鉴别;用HPLC法测定了华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量.结果:在TLC图谱中可检出防己等药材的特征斑点;华蟾酥毒基在1.15μg～5.75 μg之间线性关系良好,r=0.999 7,精密度实验RSD为1.05%,平均回收率为97.95%,(RSD=1.63%,n=5);脂蟾毒配基在1.05 μg～5.25 μg之间线性关系良好,r=0.999 6,精密度实验RSD为1.02%,平均回收率为97.45%,(RSD=0.61%,n=5).结论:所采用方法准确、可靠,可行性及重复性良好,能有效控制该制剂的质量.
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华蟾素注射液中蟾毒内酯类成分含量检测
目的:用高效液相色谱法分离测定华蟾素注射液中蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基等成分含量.方法:醋酸乙酯分离提取华蟾素中脂溶性成分,利用高效液相色谱仪定量检测,以Econosphere-C18柱为分析柱,乙腈-水(50:50)为流动相,检测波长299nm.结果:该测定方法准确,分离效果好,灵敏度高.根据实验结果计算华蟾素注射液中各蟾毒内酯类成分含量分别为蟾毒灵0.333μg·mL-1,华蟾酥毒基0.159μg·mL-1,脂蟾毒配基0.110μg·mL-1.结论:华蟾素注射液中蟾毒灵浓度从理论上讲已达到有效作用浓度,可能是华蟾素注射液抗肿瘤有效成分之一.
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HPLC法测定麝香保心丸中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量
目的:建立测定麝香保心丸含量的方法.方法:用高效液相色谱法测定.色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱,流动相:乙腈与0.5%磷酸二氢钾溶液梯度洗脱法,流速(1.0mL·min-1),检测波长296nm.柱温:35℃.结果:线性范围:华毒0.148μg～0.746μg,酯毒0.116μg～0.580μg.回收率:华毒为100.90%,RSD=1.004%,n=5;酯毒为100.64%,RSD=1.006%,n=5.结论:本法简便、灵敏、准确、专属性强,可用于麝香保心丸的质量控制.
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HPLC法测定蟾酥中4种蟾毒内酯
目的 建立同时测定蟾酥药材中蟾蜍他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的方法.方法 10批蟾酥药材采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱；乙腈-0.04％三氟乙酸为流动相梯度洗脱；体积流量为1.0 mL/min;柱温为35℃；检测波长为296 nm.结果 蟾蜍他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基分别在0.05～2.61 μg (R2 =1),0.10 ～ 4.96 μg(R2=1),0.10 ～ 5.03 μg(R2=1),0.10 ～ 5.18 μg(R2=1)范围内线性关系良好；平均加样回收率分别为97.62％,97.34％,97.23％,97.34％,RSD值均＜2.0％.结论 此方法简便、准确.10批不同来源的蟾酥样品测定结果表明,药材中蟾蜍他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基含有量相对稳定,脂蟾毒配基含有量则波动较大.
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HPLC法测定六神丸中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量
目的 采用HPLC法对六神丸中蟾酥的主要成分华蟾酥毒基和酯蟾毒配基进行含量测定.方法 样品经甲醇回流提取,采用HPLC法测定.色谱柱为Hypersil C18(250mm×4.6mm,5 μm);流动相为乙腈-水(43∶57,V/V);流速1.0 mL·min-1;检测波长296 nm;温度25 ℃.结果 华蟾酥毒基为0.052 5～1.050 μg(r=0.999)、酯蟾毒配基为0.052～1.040 μg(r=0.999)时呈良好的线性关系.华蟾酥毒基平均加样回收率为100.18%,RSD=1.85(n=6);酯蟾毒配基平均加样回收率为100.40%,RSD=1.14(n=6).结论 此方法简单、快速、准确,可用于六神丸中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量测定.
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三种蟾毒单体对SMMC-7721和BEL-7402人肝癌细胞生长的抑制作用
目的:探讨蟾蜍中主要蟾毒内酯类成分蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基的抗肝癌作用及机制.方法:以SMMC-7721、BEL-7402人肝癌细胞为靶细胞,以丝裂霉素为阳性对照药物,应用四甲基偶氮唑盐比色法、锥虫蓝染色和DNA染色分析法观察这3种蟾毒单体对肝癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用.结果:蟾毒灵和华蟾酥毒基对上述肝癌细胞具有明显生长抑制作用,华蟾酥毒基较蟾毒灵作用略弱,但两者达到相同生长抑制效果所需浓度均低于丝裂霉素,酯蟾毒配基只有在较高浓度下才显示对肝癌细胞的生长抑制作用;不同浓度蟾毒灵、华蟾酥毒基对人肝癌细胞细胞膜具有破坏作用;可使人肝癌细胞阻止于G2/M期,使处于S期的细胞比例降低,并有明显诱导肝癌细胞凋亡作用.结论:蟾毒灵、华蟾酥毒基对上述人肝癌细胞具有明显生长抑制作用,具有对肝癌细胞膜的直接破坏作用和诱导凋亡作用;酯蟾毒配基抗肿瘤作用较弱.
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不同提取方法对蟾酥有效成分的影响
目的:考察无水乙醇、80%乙醇、甲醇等溶剂和回流提取法、超声提取法对蟾酥中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基成分的提取差异.方法:采用高效液相色谱法对不同溶剂提取得的蟾酥样品进行测定.结果:不同溶剂和提取方法对蟾酥有效成分提取存在明显影响,影响大小为:加热回流>超声,80%乙醇>甲醇>无水乙醇>氯仿>二氯甲烷>乙酸乙脂.结论:提取工艺对蟾酥有效成分存在影响,以80%乙醇对蟾酥药材进行加热回流提取效率高.
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干蟾皮药材质量标准研究
本文旨在完善干蟾皮药材的质量标准.采用显微鉴别法、薄层色谱法鉴别干蟾皮;按《中国药典》规定方法检测干蟾皮的水分和醇溶性浸出物;用高效液相色谱(HPLC)法测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量.初步建立了干蟾皮显微鉴别法、薄层色谱方法及HPLC含量测定方法;制定了水分、醇溶性浸出物的限度.本研究为干蟾皮药材质量标准的提高提供参考.
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HPLC同时测定通窍益心丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量
目的 建立测定通窍益心丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量的反相高效液相色谱法.方法 采用Elite SinoChrom ODS2色谱柱,以0.5%磷酸二氢钾溶液(pH 3.2)-乙腈(52:48)为流动相,流速:1.0 mL·min-1,检测波长:296 nm.结果 华蟾酥毒基回收率99.77%,RSD=0.49%;脂蟾毒配基回收率99.39%,RSD=0.60%.结论 本法简便准确,专属性强,可用于控制该制剂质量.
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华蟾酥毒基药理作用及剂型研究进展
华蟾酥毒基(Cinobufagin)是蟾酥中的一种单体,具有多种生物学效应,目前对其功效研究颇多,剂型研究也较多,现对华蟾酥毒基药理作用及制剂研究状况进行简要总结,为制备高效实用的临床药物提供有益线索.
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华蟾酥毒基通过FAK/PI3K/Akt通路抑制食管癌Kyse-520细胞迁移和侵袭
目的 探讨华蟾酥毒基抑制食管癌Kyse-520细胞迁移和侵袭的相关机制.方法 CCK-8法检测Kyse-520细胞经不同浓度华蟾酥毒基作用12、24、48 h后的增殖活性;划痕愈合实验和Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭过程;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析Kyse-520细胞中FAK、Akt、PTEN、VEGF-A、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测FAK、p-FAK(Tyr397)、Akt、p-Akt(Ser473)、PTEN、VEGF-A、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平.结果 CCK-8结果显示,华蟾酥毒基可以抑制Kyse-520细胞增殖,呈现时间和浓度依赖性,划痕实验和Transwell小室实验结果表明,华蟾酥毒基可以抑制食管癌细胞迁移和侵袭;RT-qPCR和West-ern blot结果显示,华蟾酥毒基对FAK、Akt mRNA及总蛋白无明显影响,但可以下调p-FAK、p-Akt、VEGF-A、MMP-2、MMP-9表达,上调PTEN的表达.结论 华蟾酥毒基通过诱导PTEN表达,下调FAK/PI3K/Akt信号通路,抑制食管癌Kyse-520细胞的迁移和侵袭.
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华蟾素胶囊释放度测定方法的研究
目的 建立测定华蟾素胶囊释放度的方法.方法 采用高效液相色谱法,测定华蟾素胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的溶出量,色谱柱为Ultimate AQ-C18,以乙腈-0.5％磷酸盐缓冲液(50:50)(用磷酸调节pH值为3.2)为流动相,流速为0.5mL·min-1;检测波长为296nm;进样量10μL;柱温为40℃;考察不同的溶出介质、转速下华蟾素胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的溶出情况.结果 建立了以磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)100mL为溶出介质,转速为100r·min-1的溶出方法.结论 所建立的方法简便,准确,结果可靠,该方法可以用于该制剂的质量控制.
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不同采收情况与干蟾皮中酯类成分含量对比研究
目的 对不同采收情况与干蟾皮中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量对比研究,为其药材质量评价与资源合理利用提供参考.方法 建立高效液相色谱(HPLC)法对不同采收情况的干蟾皮中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基进行测定.色谱柱:迪马C18(5μm,4.6×250mm);流动相:乙腈-0.5％磷酸二氢钾(50:50)(用磷酸调节pH值3.2);流速:1.0mL·min-1,柱温:30℃,检测波长:296nm.结果 测定的9批干蟾皮中,不同采收情况的干蟾皮含量的差异较大.测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的色谱分离良好,浓度和峰面积呈良好的线性关系,线性范围分别为1.02～50.88μg·mL-1,r=0.9999(n=6);0.97～48.54μg·mL-1,r=0.9999(n=6).平均加样回收率分别为99.97％(n=9,RSD=2.87％)、97.74％(n=9,RSD=2.03％).结论 干蟾皮合理的采收方法是取耳后腺未刮去浆的中华大蟾蜍剥取外皮,除净肌肉纤维,立即贴于板上或撑开,晾干.
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干蟾皮药材中华蟾酥毒基的测定
目的 建立干蟾皮中华蟾酥毒基的含量测定方法.方法色谱法:采用Waters Xbridge C18反相色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:0.5%磷酸二氢钠溶液∶乙腈(52:48)加磷酸调pH至3.2;检测波长为294nm.结果 华蟾酥毒基在进样量2.5～15μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为97.3%,n=6,RSD为3.0%.5批干蟾皮药材的含量分别为0.012、0.009、0.013、0.011、0.007mg·g-1.结论 本方法建立的色谱条件科学、快速、稳定,可作为干蟾皮药材内在质量的控制方法.
