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柚皮素对支气管上皮细胞中Smad介导的TGF-β1通路的影响
目的:观察柚皮素对支气管上皮细胞中Smad介导的转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)通路的影响,并研究其可能的机制.方法:培养HBE细胞,分为对照组、TGF-β1组和柚皮素干预组.柚皮素干预组分别与25、50和l00μmol/L的柚皮素共孵育2h后,与TGF-β1组一起加入TGF-β1.2h后用real-time PCR方法检测各组细胞纤溶酶原激活物抑制剂1 (PAI-1) mRNA表达.另外在加入TGF-β1后30 min时,提取对照组、TGF-β1组和柚皮素高剂量组细胞总蛋白,用Western blot方法检测Smad2水平及磷酸化的Smad2水平,同时用免疫荧光法检测Smad2的核转位.结果:TGF-β1组的PAI-1mRNA水平较对照组明显增高,随着给予柚皮素剂量的增大,PAI-1 mRNA水平明显降低.TGF-β1组经TGF-β1刺激30 min后,磷酸化的Smad2明显增加,经柚皮素干预后则随着柚皮素剂量的增加,Smad2磷酸化明显受抑制.各组的总Smad2水平无明显变化.免疫荧光实验显示TGF-β1组的细胞核内Smad2明显增多,而柚皮素干预组(100 μmol/L)的细胞核内Smad2含量明显减少.结论:柚皮素可能通过抑制Smad2磷酸化及减少核内Smad2含量来影响TGF-β1在支气管上皮细胞中的生物功能.
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NS-398通过转化生长因子-β/Smad信号通路对肾小球系膜细胞环氧化酶-2表达的影响
目的:探讨COX-2抑制剂NS-398对转化生长因子-β(TGF-β)影响肾小球系膜细胞表达环氧化酶-2(COX-2)及Smad2 mRNA表达的作用.方法:传代培养系膜细胞后取第4代系膜细胞进行分组实验,用RT-PCR方法测定各组COX-2 mRNA及Smad2 mRNA的表达,观察不同浓度TGF-β在4、12、24 h对COX-2 mRNA及Smad2 mRNA表达的影响,及NS-398对其的抑制作用.结果:不同浓度TGF-β作用不同时间后,系膜细胞COX-2 mRNA和Smad2 mRNA表达均增加,呈浓度和时间依赖性.与TGF-β组相比,加入COX-2抑制剂NS-398后,COX-2 mRNA和Smad2 mRNA表达均减少.结论:TGF-β刺激肾小球系膜细胞COX-2表达的信号通路之一是Smad信号通路.而COX-2抑制剂NS-398对COX-2表达的抑制机制之一是通过此信号通路.
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Smad2和Smad3在TGF-β1信号转导中的作用
Smads通路是TGF-β1信号转导中重要的通路,Smad2/Smad3是TGF-β1信号下传的第一个信号分子,在TGF-β1生物学效应的发挥中起重要作用.虽然Smad2和Smad3的同源性高达92%,但是它们的功能不完全相同,本文从Smad2和Smad3的结构、功能以及相关蛋白等多个方面探讨Smad2和Smad3在TGF-β1信号转导中的不同作用.
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胃癌组织中Smad2表达及p42ErK1/p44ErK2的活性水平
目的:探讨Smad2和p42ErK1/p44ErK2在胃癌发生、发展中的作用.方法:采用免疫组化S-P法检测48例胃癌组织和48例正常胃黏膜组织中Smad2表达及p42ErK1/p44ErK2活性水平. 结果:胃癌中Smad2 的阳性率68.8 %(33/48)显著低于正常胃黏膜组织97.9%(47/48)(P<0.01),并与胃癌的病理分期和分化有关(P<0.05);胃癌中p42ErK1/p44ErK的阳性率81.3%(39/48)显著高于正常胃黏膜组织10.4%(5/48)(P<0.01),与胃癌的分期、分化及淋巴结转移无关(P>0.05). 结论:Smad2低表达可能参与了胃癌的形成过程,p42ErK1/p44ErK2活性水平增高可能是胃癌形成过程中多因素激活的结果.
关键词： 胃肿瘤 Smad2 p42ErK1/p44ErK2 -
淫羊藿苷通过降低醛固酮水平减轻自发性高血压大鼠肾间质纤维化
目的：观察淫羊藿苷( icariin,ICA)对自发性高血压大鼠肾间质纤维化的干预作用,并探讨其机制。方法14只13周龄的♂自发性高血压大鼠(SHR),随机分为模型组(n=7)和ICA组(n=7),同源正常的京都大鼠(WKY)作为对照组(n=7)。所有大鼠适应性饲养1周后,ICA组给予ICA 40 mg·kg-1,ig,bid,至26周龄,模型组和对照组给予等量生理盐水。通过HE和Masson染色观察肾脏病理学变化；双抗体夹心法测定大鼠血浆醛固酮和Ⅲ型胶原含量；real time RT-PCR 法检测肾脏组织中转化生长因子-β1( transfor-ming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2、结缔组织生长因子( connective tissue growth factor, CTGF )、纤维连接蛋白( fi-bronectin,FN) mRNA的表达。结果与正常对照组比较,模型组肾脏结构较紊乱,肾小球系膜基质增多,肾小管间质纤维化明显；血浆醛固酮和Ⅲ型胶原含量增高( P <0．01)；TGF-β1、Smad2、CTGF、FN mRNA的表达明显上调( P<0．01或P<0．05)。与模型组比较,ICA组肾脏结构有所改善,纤维化减轻；血浆醛固酮和Ⅲ型胶原含量降低( P<0．01或P<0．05)；TGF-β1、Smad2、CTGF、FN mRNA的表达明显下调(P<0．01或P<0．05)。结论 ICA能改善自发性高血压大鼠肾间质纤维化,其机制可能与降低血浆醛固酮水平及下调TGF-β1和 Smad2的表达有关。
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淫羊藿苷抑制TGF-β1/Smad2信号通路改善压力超负荷所致的大鼠心肌纤维化
目的 观察淫羊藿苷(icariin,Ica)对大鼠压力超负荷所诱导的心肌纤维化的干预作用,并研究其作用机制是否与Ica影响左心的转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2的表达有关.方法 SD大鼠(n=5)随机分为假手术组、心肌纤维化模型组、Ica低、高剂量干预模型组.用腹主动脉缩窄术致压力超负荷心肌纤维化模型,Ica低、高剂量组造模后次日给予Ica 40、80 mg·kg-1(ig,qd),持续50 d.期间观察大鼠的一般情况,d 51检测左心指数;用Masson染色法观察心肌间质纤维化情况,用PCR和免疫组化法分别检测心肌TGF-β1、Smad2的mRNA和蛋白表达变化.结果 压力超负荷组大鼠左室心肌纤维化程度明显,并伴左心指数增高,左室TGF-β1、Smad2 mRNA和蛋白表达均明显上升.而Ica能明显改善上述病理改变,降低TGF-β1、Smad2 mRNA和蛋白的表达.结论 Ica具有抗压力超负荷所致大鼠心肌纤维化的作用,其机制至少部分与其抑制TGF-β1/Smad2信号通路有关.
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MAPK抑制因子对HSC中Smad2/3磷酸化及Smad4核转位的影响
目的 探究3种丝裂原活化蛋白激酶( MAPK)抑制因子对转化生长因子-β( TGF-β)活化的大鼠肝星状细胞( HSC)中Smad2/3磷酸化及Smad4 核转位的影响. 方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位肝灌流法分离正常大鼠HSC并传代培养,分别用细胞外信号调节激酶( ERK)、c-Jun氨基末端激酶( JNK )、p38 抑制因子( PD98059、SP600125、SB203580 )与HSC共同培养,再加入TGF-β1活化细胞,采用免疫沉淀和 Western blot 法检测 pSmad2C、pSmad2L、pS-mad3L蛋白表达;采用细胞免疫荧光法检测Smad4 蛋白表达及细胞内定位情况. 结果 Western blot显示静息状态下HSC几乎不表达 pSmad2C 而低表达 pSmad2L、pSmad3L, TGF-β1刺激后显著上调上述磷酸化蛋白表达, p38 抑制因子(1、3 μmol/L)、ERK 抑制因子(1 μmol/L)对 Smad2C、Smad2L、Smad3L 磷酸化无显著影响;p38 抑制因子( 10μmol/L)降低了 pSmad3L 蛋白表达;ERK 抑制因子( 3、10μmol/L)降低了pSmad2C蛋白表达;JNK抑制因子(1、3、10μmol/L)减少了 pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L 蛋白表达.TGF-β1刺激可明显诱导Smad4核转位,而3种MAPK抑制因子不同程度地抑制TGF-β1 诱导的Smad4 转位入核. 结论 在 HSC 细胞中 TGF-β1 可能通过活化 JNK 通路促进Smad2/3磷酸化,活化ERK、JNK、p38 通路促进Smad4 核转位.
关键词： 大鼠肝星状细胞 丝裂原活化蛋白激酶抑制剂 Smad2 smad3 Smad4 -
经气管注射骨髓间充质干细胞治疗早期血管炎性作用所致肺动脉高压的实验研究
目的 探讨气管注射骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗肺动脉高压(PAH)的作用机制,观察MSCs治疗PAH对肺血管结构的影响.方法 将SD大鼠分为空白对照组(Con组)、PAH组、MSCs气管注射治疗组(TMSCs组),MSCs静脉注射治疗组(VMSCs组).VMSCs、TMSCs、PAH组大鼠皮下注射野百合碱(MCT)造PAH动物模型,Con组皮下注射生理盐水.VMSCs组及TMSCs组大鼠于MCT注射7 d后分别经股静脉、气管注射MSCs悬液,Con组及PAH组注射等量的低糖DMEM培养基.MCT注射10、21 d时,检测荧光在TMSCs组及VMSCs组肺组织的分布.MCT注射21 d,检测肺血流动力学指标及Smad2、磷酸化Smad2 (p-Smad2)的表达情况,取肺组织做病理切片观察肺血管结构的变化.结果 MCT 注射21 d时,肺动脉收缩压(SPAP)、肺动脉平均压(MPAP)在VMSCs、TMSCs组较PAH组明显下降(P<0.05),但高于Con组(P<0.05);VMSCs、TMSCs组血管壁厚度较PAH组明显变薄(P<0.05);PAH、TMSCs、VMSCs 组Smad2的水平无明显差别,略高于Con组;PAH组p-Smad2水平高于TMSCs、VMSCs和Con组;上述指标在VMSCs和TMSCs组间差异无统计学意义.结论 MSCs治疗可以降低肺动脉压力,减轻肺血管的重构作用,这可能与MSCs降低Smad2蛋白及其活性形式p-Smad2蛋白的表达有关,气管注射MSCs可能是治疗PAH的有效途径.
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养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠肾脏Smad2、Smad3、Smad7表达的影响
目的 观察养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)肾脏smad2、smad3、smad7表达的影响,探讨养肝益水颗粒保护肾脏的机制.方法 将40只12周雄性SHR大鼠随机分为模型组、贝拉普利组(每日1.8 mg/kg)、养肝益水颗粒低剂量组(每日5.4 g/kg)、养肝益水颗粒高剂量组(每日27 g/kg),每组10只;并设Wistar-Kyoto (WKY)大鼠10只作正常对照组;模型组和正常对照组给予等容积生理盐水灌胃,每天1次,共6周.采用免疫组织化学法检测各组大鼠肾脏smad2、smad3、smad7的表达水平.结果 与正常组相比,模型组肾脏Smad2、Smad3的表达明显上调(P＜0.01),Smad7的表达明显下调(P＜0.01);各治疗组与模型组相比,肾脏Smad2、Smad3的表达明显下调(P＜0.01),Smad7的表达明显上调(P＜0.01),且养肝益水颗粒低剂量组与贝拉普利组相比疗效相近(P＞0.05),养肝益水颗粒高剂量组疗效优于养肝益水颗粒低剂量组与贝拉普利组(P＜0.05,或P＜0.01).结论 养肝益水颗粒可能是通过下调肾脏Smad2、Smad3和上调肾脏Smad7的表达以阻断转化生长因子及其受体(transforming growth factor-transforming growth factor receptor,TGF-β-TβR)-Smads信号转导通路而抗高血压肾脏纤维化.
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Smad2及P38MAPK在泡球蚴病灶旁肝脏组织中的表达及意义
目的 观察在泡球蚴肝脏组织中Smad2和P38MAPK的表达,并分析二者在肝纤维化进程中的作用及其相互关系.方法 将20例经手术治疗的肝泡状棘球蚴病肝组织匹配后分为邻近病变的组织(即病灶旁)与正常肝组织,利用免疫组织化学的方式检测Smad2及P38MAPK的表达情况.HE和Masson染色,光镜下观察病理改变与肝纤维化程度.结果 泡球蚴肝脏病灶旁组织比正常肝组织纤维化程度高;Smad2和P38MAPK在病灶旁组织均比正常肝组织的表达明显较高;Smad2和P38MAPK无论在正常肝组织,病灶肝组织,还是整个肝组织中,其表达水平均与纤维化程度正相关;随着纤维化程度的加重,Smad2和P38MAPK的表达水平也都相应增加;病灶旁组织中Smad2和P38MAPK的表达成正相关.结论 泡球蚴肝脏病灶旁组织比正常肝组织纤维化程度明显严重;Smad2和P38MAPK均参与促进泡球蚴致肝纤维化的机制;在病灶旁组织中,P38MAPK参与调控对Smad2的正向调节.
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基底细胞癌和鳞状细胞癌皮损中Smad2、Smad3和Smad4 mRNA表达下调
目的:检测转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号转导途径中Smad2、Smad3和Smad4 mRNA在基底细胞癌(BCC)和鳞状细胞癌(SCC)中的表达水平.方法: 应用反转录-实时定量聚合酶链式反应(PCR)方法分别检测BCC、SCC与正常对照皮肤中Smad2、Smad3和Smad4 mRNA的表达情况.结果:BCC和SCC皮损中Smad2、Smad3和Smad4 mRNA的表达水平均显著低于正常人对照皮肤.结论: 皮肤BCC和SCC中Smad2、Smad3和Smad4表达下调可直接或间接导致TGF-β抑制上皮细胞异常增殖和转化的作用受阻,从而有助于上述表皮肿瘤的形成和发展.
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寻常型银屑病皮损中Smad2、Smad3 mRNA的表达降低
目的:检测寻常型银屑病皮损中Smad2和Smad3的mRNA表达水平.方法: 采用反转录-实时定量聚合酶链式反应技术对寻常型银屑病皮损与正常对照皮肤中Smad2和Smad3 mRNA的表达水平进行分析.结果: 与正常对照皮肤相比,寻常型银屑病皮损Smad2和Smad3 mRNA的表达水平均显著降低.结论: 寻常型银屑病皮损中Smad2和Smad3表达下调,可能通过干扰TGF-β信号向下游转导,有助于寻常型银屑病皮损角质形成细胞过度增殖状态的形成.
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全反式维甲酸对TGF-β诱导肾小球系膜细胞CTGF及信号通路的影响
目的 探讨全反式维甲酸(atRA)在转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路中诱导系膜细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)的作用.方法 培养第4代大鼠肾小球系膜细胞分组:对照组;TGF-β(5、10 ng/ml)组;TGF-β+Staurosporine组;药物组:atRA(10-3、10-6、10-9 mol/L)预处理24 h后,再加TGF-β(10 ng/ml)共培养.分别提取4、12、24 h细胞总蛋白,用Western blot法测CTGF蛋白和Smad2蛋白的表达.结果 在外源性TGF-β刺激下,CTGF、Smad2蛋白的表达明显增加(P<0.05).与TGF-β组比较,药物组CTGF、Smad2蛋白表达明显减少(P<0.05),呈时间和浓度依赖性;各组不同时间段内Smad2蛋白和CTGF蛋白表达呈正相关(P<0.05).结论 TGF-β可刺激大鼠肾小球系膜细胞CTGF和Smad2蛋白的表达,atRA可以抑制其表达,且此作用可能与Smad2信号通路有关.
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中药抗肾间质纤维化不同靶点研究概述
中医药抗肾间质纤维化多侧重在抑制肾间质成纤维细胞的活化及诱导肾间质成纤维细胞凋亡;抑制肾小管上皮细胞的转分化(EMT),同时抑制肾小管上皮细胞的过度凋亡、坏死;抑制致纤维化的因子(如TGF-B、Ang Ⅱ、结缔组织生长因子等、内皮素)的表达这几方面,而对缓减病因、促进拮抗纤维化的因子(如Ang Ⅱ的2型受体、前列腺素)的表达;抑制ECM的生成;促进EcM的降解,包括通过提高胶原降解酶(MMPs)活性、抑制胶原降解酶抑制物(PAIs和TIMPs)的活性等水平的研究较少.
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孕鼠叶酸缺乏对新生大鼠肺泡Ⅱ型细胞超微结构及转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响
目的 探讨孕鼠叶酸缺乏对新生大鼠肺泡Ⅱ型细胞超微结构及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路的影响.方法 成熟雌性Sprague-Dawley大鼠36只,随机分为实验组和对照组(各18只),分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料.2周后与雄性大鼠交配.取新生大鼠肺组织标本,采用透射电子显微镜观察新生大鼠肺泡Ⅱ型细胞超微结构,采用实时荧光定量PCR法检测新生大鼠肺组织中TGF-β1 、Smad2和Smad3的mRNA表达水平.结果 1.叶酸缺乏组新生大鼠肺泡Ⅱ型细胞胞质内含较多絮状物,板层小体和细胞器难见.对照组肺泡Ⅱ型细胞胞质内的板层小体发达,且板层小体染色深,结构清晰、致密,胞质内可见发达的线粒体等细胞器.2.叶酸缺乏组新生大鼠肺组织TGF-β1及Smad3 mRNA表达低于对照组,差异均有统计学意义(Pa＜0.05),叶酸缺乏组新生大鼠肺组织Smad2 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 叶酸缺乏可影响子代肺泡Ⅱ型细胞结构改变,并可能通过影响TGF-β1/Smads信号通路延缓或阻碍肺组织发育.
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食管鳞状细胞癌组织中 MAWD、MAWBP 和 Smad2蛋白的表达
目的：探讨MAWD、MAWBP和Smad2蛋白在食管鳞状细胞癌（ ESCC）组织中的表达及临床意义。方法：收集86例ESCC组织标本及其癌旁正常组织标本，免疫组化法测定MAWD、MAWBP及Smad2蛋白的表达。结果：MAWD、MAWBP在ESCC组织中的表达明显低于癌旁正常组织， Smad2的阳性表达率高于癌旁正常组织（ P＜0．05）；MAWD与MAWBP在ESCC组织中的表达呈正关联（rP ＝0．045，P＜0．001），且均与Smad2蛋白表达负关联（rP ＝－0．285、－0．211，P＜0．05）。 MAWD阳性表达率与ESCC 组织的TNM 分期和分化程度有关（P＜0．05）， Smad2阳性表达率与分化程度有关（P＜0．05）。结论：MAWD可能参与了ESCC的发生发展，可能成为ESCC预后判断的有效指标和治疗靶点。
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维甲酸诱导腭裂发生的过程中对TGF-β/Smad信号途径的抑制作用
目的 探讨维甲酸在诱导腭裂发生过程中对Smad2磷酸化的影响,并分析其可能的致畸机制.方法 建立维甲酸诱导的腭裂模型,利用HE染色观察维甲酸诱导腭裂发生的过程;应用免疫组化检测E12 d、E13 d、E14.5 d、E15 d、E15.5 d、E16 d(Ed:Embryonic day)对照组和实验组胎鼠模型腭突中嵴上皮内P-Smad2蛋白的表达.结果 在腭突融合过程中,内源性的Smad2通过磷酸化能够被激活.与对照组相比,维甲酸可抑制腭突中嵴上皮中Smad2的磷酸化表达.结论 维甲酸诱导腭裂的发生,与中嵴上皮细胞中Smad2磷酸化的抑制密切相关.
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益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾系膜细胞表达Smad2及泛素mRNA的影响
目的 观察益气化瘀清热方及其拆方各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,MsC)表达Smad2及泛素mRNA的影响.方法 采用RT-PCR法检测各类含药血清对MsC表达Smad2及泛素mRNA的影响.结果 各组合药血清均能抑制体外培养的MsC表达Samd2及泛素mRNA,与对照组比较均有明显差异(P＜0.01),其中复方组作用强,优于TW组(P＜0.01);清热组和化瘀组优于益气组(P＜0.01),但二者比较无明显差异(P＞0.05).结论 益气化瘀清热方及其拆方、TW含药血清均能抑制体外培养的大鼠MsC表达Samd2及泛素mRNA,复方组较强,化瘀组、TW组次之,益气组较弱.
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黄芩素对大鼠肝纤维化保护作用的实验研究
目的 从氧化应激的角度探讨黄芩素对大鼠肝纤维化保护的分子机制.方法 建立肝纤维化大鼠模型,随机分为正常组,模型组,秋水仙碱对照组,黄芩素高、中、低剂量干预组,8周后ELISA法检测MDA、SOD含量;免疫组化法检测TGF-β1、Smad2和Smad7的蛋白表达.结果 黄芩素高、中剂量组能显著降低肝纤维化大鼠的MDA、TGF-β1、Smad2含量,升高SOD与Smad7的含量.结论 黄芩素可通过TGF-β1/smads途径抑制氧化应激对肝细胞的损害,起到抗肝纤维化的作用.
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转化生长因子-β1通过诱导上皮-间充质转化促进乳腺癌细胞侵袭转移的研究
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)通过诱导乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)影响细胞侵袭迁移能力及相关分子机制.方法 5μg/L TGF-β1作用于人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,诱导细胞发生EMT后,应用脂质体2000瞬时转染小干扰RNA(siRNA)沉默Smad2的表达,观察乳腺癌细胞的形态学变化,并通过Western blot检测Smad2静默前后细胞角蛋白、E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白、Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)的表达变化;通过Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力的改变.结果 TGF-β1作用72h后,乳腺癌细胞株MDA-MB-435S部分细胞由多角形转变为成纤维样细胞形态,间充质细胞标志物α-SMA、波形蛋白表达分别上调了3.86倍和1.17倍(P＜0.01);上皮细胞标志物细胞角蛋白、E-钙黏素蛋白表达分别下降了63％和70％ (P ＜0.01),p-Smad2表达明显上调1.2倍(P＜0.01);侵袭的细胞数(79.20 ±7.35)明显多于空白组(48.93±5.43),差异有统计学意义(P＜0.05).沉默Smad2的表达后细胞角蛋白表达升高了44％(P＜0.01),波形蛋白表达下降了59％ (P ＜0.01),干扰组细胞侵袭数目(54.34 ±6.09)显著低于对照组(75.09 ±4.98),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 体外TGF-β1能够诱导乳腺癌细胞EMT,增强乳腺癌细胞侵袭转移能力;Smad2信号转导通路在乳腺癌细胞EMT中起重要作用.
