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复肾颗粒对肾间质纤维化大鼠肾脏的保护作用
目的:观察复肾颗粒在肾间质纤维化过程中对转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响及其可能的肾脏保护作用机制.方法:采用单侧输尿管结扎(UUO)致肾间质纤维化大鼠模型,将60只大鼠随机分为6组:假手术组(N)、模型组(M,UUO组)、福辛普利组[F0,10 mg·kg-1·d-1]、复肾颗粒1组(F1,7.5 g·kg-1·d-1)、复肾颗粒2组(F2,15 g·kg-1·d-1)、复肾颗粒3组(F3,30 g·kg-1·d-1).14 d后处死大鼠,取结扎侧肾组织采用HE及Masson染色观察病理变化,RT-PCR和Western-bloting检测肾组织TAK1和α-SMA的表达.结果:模型组大鼠肾纤维化程度及肾组织TAK1和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达较假手术组显著升高(P＜0.01),复肾颗粒各组及福辛普利组较模型组显著降低,尤以复肾颗粒2组为甚(P＜0.01,P＜0.05).结论:复肾颗粒可能通过降低TAK1和α-SMA的含量而起到减轻肾间质纤维化病程进展的作用,推测其抑制TAK1和α-SMA表达上调的作用可能是其抗肾小管间质纤维化的机制之一.
关键词： 复肾颗粒 单侧输尿管结扎 肾间质纤维化 转化生长因子β激活激酶 -
福辛普利抑制LPS诱导的人肾小管上皮HK-2细胞TAK1表达
目的 探讨福辛普利(FOS)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖及对转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响.方法 体外培养正常HK-2细胞,分为3组:对照组(Ctrl)、LPS诱导组(10μg/L)、FOS干预组(LPS 10 μg/L+FOS 1×106 mol/L).细胞培养12、24和48 h,以甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附(ELISA)法观察细胞上清纤维黏连蛋白(FN)变化,Western blot法检测TAK1、FN蛋白表达,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的含量.结果 LPS诱导组较对照组细胞的增殖水平(在48 h分别为0.462±0.013及0.363±0.014)、胞质中FN的含量均显著增高,且自12 h开始TAK1蛋白(在48 h分别为1.627±0.101及0.547±0.010)及mRNA表达水平上调(P＜0.01,P＜0.05),FOS干预组细胞增殖(在48 h为0.396 ±0.011)、FN的含量及TAK1的表达(在48 h蛋白表达为1.308±0.097)较同时间点LPS组(在48 h蛋白表达为1.627 ±0.101)显著下调(P＜0.01).结论 FOS可能通过抑制HK-2的增生与活化,减轻细胞外基质FN的沉积,起到延缓肾间质纤维化的作用.
关键词： 福辛普利 人肾小管上皮细胞 转化生长因子β激活激酶 肾间质纤维化 -
RNA干扰TAK1表达以增强三氧化二砷抑制Kasumi-1细胞增殖的作用及其机制研究
目的:探讨沉默转化生长因子β激活激酶(TAK1)基因表达对三氧化二砷(As2O,)抑制人t(8;21)急性髓系白血病细胞株Kasumi-1增殖的影响及其可能机制.方法:实验分为4组:对照组,TAK1特异siRNA转染Kasu-mi-1细胞组,As2 O3作用组及两者联合处理的Kasumi-1细胞组.采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测TAK1、p-JNK及凋亡相关蛋白的表达.结果:在0.5-20 μmol/L范围内,As2O3作用于Kasumi-1细胞24h能够浓度依赖性地抑制Kasumi-1细胞增殖,24 h的IC50值为(3.79±0.36)μmol/L;在0.5-10 μmol/L范围内,As2O3作用于Kasumi-1细胞48 h能够浓度依赖性地抑制Kasumi-1细胞增殖;之后As2O3对Kasumi-1细胞的增殖抑制作用进入平台期,48 h的IC50值为(2.38±0.17)μmol/L.TAK1siRNA转染组和As2O3 3.5 μmol/L作用24 h组,Kasumi-1细胞的增殖抑制率分别为(10.86±1.64)％和(49.80±2.19)％,凋亡率分别为(8.47±0.75)％和(24.78±2.14)％,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);两者联合作用于Kasumi-1细胞的增殖抑制率为(65.63±0.83)％,凋亡率为(68.97±2.94)％,与对照组和各单独组比较,差异均有统计学意义(P＜0.001).TAK1 siRNA转染和As2 O3作用Kasumi-1细胞24 h能不同程度下调TAK1、p-JNK、c-Fos、c-Jun、BCL-2的表达,上调BAX和活化型(cleaved) Caspase-3、9的表达,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),两者联合后该作用进一步加强(P＜0.05).结论:利用RNA干扰技术沉默TAK1表达能够增强As2O3抑制Kasumi-1细胞增殖的作用,其原因可能是通过TAK1下游的JNK信号传导通路,以及线粒体途径诱导细胞凋亡实现的.
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复肾颗粒对人肾小管上皮细胞TAK1表达的影响
目的:探讨复肾颗粒(生黄芪、丹参、川芎、大黄和鳖甲)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响.方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为对照组、TGF-β1诱导组(5ng/mL)、干预1组(TGF-β1 5ng/mL+复.肾颗粒100 μg/mL)、干预2组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒500 μg/mL)、干预3组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒1 mg/mL).培养12、24、48h以MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清IV型胶原蛋白(Col IV)含量,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的相对含量,Western-bloting法检测TAK1蛋白表达.结果:TGF-β1组细胞的增殖及Col IV含量、TAK1蛋白及mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),复肾颗粒含药血清干预后细胞增殖和Col IV的含量、TAK1表达显著低于TGF-β1组(P<0.05,P<0.01).结论:在体外试验中,复肾颗粒含药血清对TGF-β1诱导HK-2细胞增殖过程中TAK1蛋白及mRNA的表达有下调作用,其可能是通过激活肾小管上皮细胞某些抑制因子抑制TAK1转录和表达.
关键词： 复肾颗粒 人肾小管上皮细胞 细胞增殖 肾纤维化 转化生长因子β激活激酶 -
抑制脊髓转化生长因子β激活激酶影响大鼠鞘内吗啡耐受的信号机制
目的 探讨转化生长因子β激活激酶(TAK1)选择性抑制剂5Z-7-oxozeaenol缓解慢性吗啡耐受的信号机制.方法 健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体重220～250 g,采用Yaksh法行鞘内置管.将40只置管成功的大鼠随机分入5组,每组8只.对照组大鼠鞘内注射0.9％氯化钠溶液10 μL.吗啡组大鼠鞘内注射吗啡15 μg.抑制剂+0.9％氯化钠溶液组大鼠鞘内注射5Z-7-oxozeaenol 1 μg,30 min后鞘内注射0.9％氯化钠溶液10μL.20％二甲基亚砜(DMSO)+吗啡组鞘内给予20％DMSO 10 μL,30 min后鞘内注射吗啡15 μg.抑制剂+吗啡组大鼠鞘内注射5Z-7-oxozeaenol 1 μg,30 min后鞘内注射吗啡15 μg.每天给药1次,连续给药7d.每天给药结束30 min后行缩爪实验检测大鼠缩爪痛阈值,计算大镇痛效应百分比(MPEP).连续给药7d后,大鼠断头取脊髓腰膨大.采用免疫印迹法测定脊髓内c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达,以及磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)水平.结果 吗啡组和20％ DMSO+吗啡组大鼠给药第1～5天的MPEP均显著高于对照组(P值分别＜0.001、0.05),抑制剂+吗啡组大鼠给药第1～7天的MPEP均显著高于对照组(P值均＜0.001),抑制剂+吗啡组大鼠给药第3～7天的MPEP均显著高于吗啡组(P值分别＜0.01、0.001).吗啡组和20％ DMSO+吗啡组的p-JNK表达水平均显著高于对照组(P值均＜0.01),抑制剂+吗啡组的p-JNK表达水平显著低于吗啡组(P＜0.001).吗啡组和20％DMSO+吗啡组的p-p38 MAPK表达水平均显著高于对照组(P值均＜0.001),抑制剂+吗啡组的p-p38MAPK表达水平显著低于吗啡组(P＜0.001).结论 5Z-7-oxozeaenol与吗啡合用可有效缓解吗啡耐受,抑制慢性吗啡处理所致脊髓内p-JNK和p-p38 MAPK表达水平的升高.5Z-7-oxozeaenol通过下调TAK1/JNK和TAK1/p38 MAPK活化水平缓解吗啡耐受.
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中药抗肾间质纤维化不同靶点研究概述
中医药抗肾间质纤维化多侧重在抑制肾间质成纤维细胞的活化及诱导肾间质成纤维细胞凋亡;抑制肾小管上皮细胞的转分化(EMT),同时抑制肾小管上皮细胞的过度凋亡、坏死;抑制致纤维化的因子(如TGF-B、Ang Ⅱ、结缔组织生长因子等、内皮素)的表达这几方面,而对缓减病因、促进拮抗纤维化的因子(如Ang Ⅱ的2型受体、前列腺素)的表达;抑制ECM的生成;促进EcM的降解,包括通过提高胶原降解酶(MMPs)活性、抑制胶原降解酶抑制物(PAIs和TIMPs)的活性等水平的研究较少.
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福辛普利对肾间质纤维化大鼠转化生长因子β激活激酶表达的下调作用
目的 观察福辛普利对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏转化生长因子β激活激酶(TGF-activated kinase 1,TAK1)表达的影响,及其对肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的保护作用.方法 采用单侧输尿管结扎术致RIF大鼠模型.72只大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、UUO模型组及福辛普利治疗组,每组24只.治疗组于术后2 d给予福辛普利10 mg/(kg*d)灌胃,假手术组与模型组每天给予等量生理盐水灌胃.各组分别于术后7、14、21 d处死8只大鼠,采用HE及Masson染色观察梗阻侧肾脏病理变化,原位杂交、RT-PCR及Western blot检测肾组织TAK1的表达.结果 模型组大鼠梗阻侧肾脏肾小管间质损伤指数明显高于同期假手术组(P<0.05),福辛普利干预后肾小管间质损伤指数明显降低(P<0.05);TAK1 mRNA和蛋白表达情况:模型组各时间段TAK1表达升高,且随着病理损害的进展呈现下降趋势,但表达量仍显著高于同期假手术组(P<0.05),经福辛普利干预后表达显著下降(P<0.05).结论 福辛普利可能通过下调TAK1表达,从而减轻UUO术后肾组织间质纤维化的病程进展.
关键词： 输尿管梗阻 肾间质纤维化 转化生长因子β激活激酶 福辛普利 -
TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol对大鼠脑外伤海马CA1区的神经保护作用研究
目的 探讨转化生长因子β激活激酶(TAK1)选择性抑制剂5Z-7-oxozeaenol在创伤性颅脑损伤中对伤侧海马的保护作用及可能机制；方法 72只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:假手术组,外伤+二甲基亚砜组,外伤+ 5Z-7-oxozeaenol组,按照改良的Feeney法制作大鼠颅脑外伤模型,外伤后10 min通过左侧侧脑室给药,24 h后取标本,Western blot检测TAK1和磷酸化TAK1的表达,并用凝胶迁移实验检测其下游核因子κB和活化蛋白-1的活性,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测海马CA1区神经元的凋亡情况,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色检测星形胶质细胞的表达；结果 与溶剂组相比,治疗组伤侧海马TAK1和磷酸化TAK1的表达量、核因子κB和活化蛋白-1的DNA结合活性显著降低,同时海马CA1区TUNEL和GFAP阳性细胞明显减少(P＜0.05).结论 5Z-7-oxozeaenol通过抑制TAK1信号通路降低海马组织中NF-κB和AP-1的活性起到抗凋亡作用.
