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北京市宫颈癌筛查妇女中高危型HPV感染状况及在宫颈癌前病变中的分布
目的 了解北京市宫颈癌筛查妇女中感染高危型HPV感染状况及在宫颈癌前病变中的分布.方法 2014年1月至2015年3月,以前往北京市宫颈癌筛查机构接受宫颈癌免费筛查的35~64岁妇女为研究对象,采用分层整群随机抽样法,从中抽取31091名妇女,接受妇科检查、高危HPV分型检测,其中HPV16/18型以外的其他高危型阳性者接受宫颈细胞学检测;HPV16/18型阳性者、宫颈细胞学检测不明意义的非典型鳞状细胞(ASCUS)及以上者,妇科宫颈检查发现可疑异常者转诊阴道镜检查,阴道镜检查结果可疑或异常者进行组织病理学检查.分析不同特征研究对象高危型HPV感染情况、宫颈癌及癌前病变检出率.结果 31091名研究对象的年龄分布为35~64岁,35~49岁年龄组人数占44.3%(13780名),50~64岁年龄组人数占55.7%(17311名);农村妇女占66.1%(20536名).高危型HPV总感染率为7.4%(2305例),其他高危型感染率为5.7%(1758例),混合感染检出率为1.5%(477例).45~49、50~54岁者的感染率较高,为7.8%(463例)、7.9%(1044例)(χ2=14.07,P=0.015).城市妇女高危型HPV感染率为6.2%(507例),农村妇女为7.9%(1798例)(χ2=25.75,P<0.001).HPV16型感染者占17.0%(391例),HPV18型占6.9%(161例),HPV52型、HPV51型、HPV58型感染者分别占8.6%(20例)、5.2%(12例)、7.7%(18例).宫颈癌及癌前病变检出率为395.6/10万(123例).在高级别病变中,HPV16和18型感染占60.5%(72例).50~54岁者HPV16型感染率及高级别病变检出构成比均较高,分别为(1.5%,107例)(χ2=11.54,P=0.042).结论 北京市35~64岁妇女常见高危型HPV感染型别依次为HPV16、18、52、51和58型.HPV16和18型在高级别病变中的感染率较高.50~54岁者HPV16型感染率及高级别病变检出率较高.
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2014-2016年深圳市子宫颈癌筛查中HPV阳性者HPV高危亚型分布及相关因素
目的 分析深圳市参与子宫颈癌筛查的HPV阳性者感染高危亚型HPV状况及相关因素.方法 通过深圳市妇幼保健管理系统子宫颈癌防治信息平台选取2014—2016年参加子宫颈癌筛查且HPV检测阳性者为研究对象,共10624例,收集其基本信息和HPV基因亚型检测结果,根据致病性不同分为:高危型共15种,包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68;低危型共6种,包括HPV 6、11、42、43、44和81.采用多因素非条件logistic回归模型分析发生高危型HPV感染的相关因素.结果 本研究中HPV检测阳性者均接受HPV基因亚型检测,年龄为(38.08±9.38)岁,其中高危型感染为9979例,占93.9%;2014—2016年HPV高危型感染比例分别为91.5%(2769例)、93.8%(2785例)和95.6%(4425例)(P趋势<0.001).与25岁及以下者相比,26~30、31~35、36~40、41~45、≥50岁年龄组发生高危型HPV感染的OR(95%CI)值分别为1.67(1.20~2.31)、1.49(1.09~2.03)、1.71(1.23~2.37)、1.65(1.19~2.31)和1.84(1.26~2.67);与已婚者相比,未婚者发生高危型HPV感染的OR(95% CI)值为0.71(0.50~1.00);与2014年相比,2015和2016年感染高危型HPV的OR (95%CI)值分别为1.43(1.17~1.74)和2.03(1.68~2.46).常见的5种HPV感染亚型均为高危型,依次是HPV52(25.1%,2670例)、HPV16(19.2%,2041例)、HPV58(13.3%,1413例)、HPV18(9.9%, 1048例)和HPV51(9.3%,993例).结论 年龄、婚姻状况、筛查年份是深圳市女性高危型HPV感染的相关因素.除HPV16和18型感染外,HPV52、58、51型感染也应受到重视.
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中药狼毒对人乳头瘤病毒-18感染的HeLa细胞增殖及凋亡的影响
目的：探讨中药狼毒对人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)-18感染的HeLa细胞增殖及凋亡的影响。方法配制狼毒乙醇浸出液。运用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖，并运用 Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡。结果以10、20μg/ml的狼毒乙醇浸出液处理HPV-18感染的HeLa细胞12 h后，细胞增殖抑制率增高[分别为(16.36±5.06)%、(18.59±5.99)%]，与对照组比较差异有统计学意义(P均＜0.01)。以0.625、1.25、2.5、5、10、20μg/ml的狼毒乙醇浸出液处理HPV-18感染的HeLa细胞72 h后，细胞增殖抑制率均增高[分别为(13.82±3.66)%、(30.24±6.58)%、(43.29±4.29)%、(53.32±1.41)%、(54.24±1.97)%、(50.68±1.74)%],与对照组比较差异有统计学意义(P均＜0.01)。Hoechst 33258染色显示，以10μg/ml的狼毒乙醇浸出液处理HPV-18感染的HeLa细胞24 h后，可见凋亡的细胞。结论中药狼毒可抑制HPV-18感染的HeLa细胞增殖，并诱导其凋亡。
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鼻腔鼻窦非角化性鳞状细胞癌的临床病理学特征
目的：探讨鼻腔鼻窦非角化性鳞状细胞癌的临床病理学特征、免疫表型特点及诊断与鉴别诊断。方法收集441例鼻腔鼻窦鳞状细胞癌，选取其中26例非角化性鳞状细胞癌患者的临床及病理检查资料，观察其组织形态学特点，采用免疫组织化学EnVision法对20例行广谱细胞角蛋白（ CKpan）、波形蛋白、CK5／6、CK7、CK8／18、p16、p53、Ki-67等多种标志物染色；以导流杂交等方法检测人乳头状瘤病毒（HPV），以原位杂交方法检测EB病毒编码小mRNA1／2（EBER），以RNAscope方法检测其肿瘤组织内HPV mRNA。结果患者年龄22～79岁，平均年龄51.2岁，男16例，女10例，男女比为8∶5，3例患者有内翻性乳头状瘤的病史。镜下肿瘤组织主要呈乳头状和内翻浸润性生长，似尿路上皮乳头状癌形态；浸润生长部分形成大小不一的实性细胞巢，肿瘤细胞核大圆形，核仁明显，2例可见部分肿瘤细胞呈梭形，1例可见与鼻腔鼻窦被覆纤毛柱状上皮有移行。免疫组织化学染色结果示CKpan及p63（20／20）均为弥漫强阳性；CK5／6在17例为弥漫强阳性，3例为部分阳性；CK8／18在16例弥漫强阳性，3例灶状阳性，1例阴性；CK7在7例弥漫强阳性，13例阴性；波形蛋白在2例部分阳性，18例阴性；p16在1例弥漫强阳性，19例阴性；p53在19例阳性；Ki-67有11例阳性表达超过50％，其他神经内分泌标志物及黑色素瘤标志物为阴性。导流杂交方法检测到1例HPV （6、11、16、18）为阳性，进一步行HPV原位杂交检测，其HPV16／18及6／11阳性，用RNAscope技术检测，结果显示肿瘤组织中HPV18 mRNA阳性。20例EBER原位杂交均呈阴性。本组病例多为5年之内病例，预后有待于进一步随访观察。结论鼻腔鼻窦非角化性鳞状细胞癌是一种罕见的、具有明显形态学特征的上皮性恶性肿瘤，以发生部位、组织学特点为主要诊断依据，免疫组织化学染色标志物可辅助诊断及鉴别诊断；肿瘤可能起源于鼻腔鼻窦被覆纤毛柱状上皮，与HPV及EB病毒感染相关性不明显。
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环介导等温扩增技术快速检测HPV18方法的建立
目的 应用环介导等温扩增技术(LAMP)对人乳头瘤病毒18(HPV18)进行基因检测,建立一种快速、可视的HPV18核酸检测方法.方法 针对HPV18病毒特异性E6区设计LAMP检测引物,通过调整反应物浓度建立LAMP反应体系,用羟基萘酚蓝(HNB)染料对产物进行可视化判定.通过检测其他不同基因型别的病毒评估引物特异性,检测倍比稀释的临床标本确定其灵敏度,通过LAMP法检测临床标本验证其与PCR法的一致性.结果 利用LAMP方法检测到HPV18病毒E6引物的特异性好,恒温65℃条件下反应60 min即可较好完成检测.LAMP特异性好,灵敏度高,灵敏度为2.5×103拷贝/ml.LAMP可视化结果判定与PCR凝胶电泳结果相当,二者有较好的一致性(P＞0.05).结论 建立了HPV18病毒的LAMP快速、可视化检测方法,该法操作简便快捷,具有很好的开发应用前景.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对人宫颈癌细胞生长抑制作用及作用途径的探讨
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人乳头瘤病毒(HPV)呈阳性表达的宫颈癌CaSki细胞与HeLa细胞的生长抑制作用及其作用途径.方法 在CaSki细胞与HeLa细胞的培养液中添加EGCG后,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测两种宫颈癌细胞的生长曲线;4',6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)荧光标记法观察细胞凋亡的形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测病毒致癌基因E6(HPV E6)、雌激素受体α(Era)、雌激素受体B(Erβ)、芳香化酶等蛋白的表达水平.结果 MTT法显示,培养液内添加EGCG能明显抑制CaSki细胞与HeLa细胞的生长,并且呈浓度和时间依赖性;DAPI荧光标记法显示,25 μmol/L EGCG作用CaSki细胞和50μmol/L EGCG作用HeLa细胞24 h后均呈典型的细胞凋亡形态学改变;Western blot法显示,25μmol/L EGCG作用CaSki细胞和50μmoL/LEGCG作用HeLa细胞12、24、48 h后,HPV E6、Erα、芳香化酶的蛋白表达量逐渐减低,ERB的蛋白表达量增加,与对照组相比有统计学差异(P<0.05).结论 EGCG在体外能有效抑制人宫颈癌CaSki细胞与HeLa细胞的生长与增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调HPV E6、Erα、芳香化酶蛋白的表达量、上调Erβ的蛋白表达量有关.
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单纯HPV16/18阳性行阴道镜检查有可疑病变患者的子宫颈组织病理检查结果分析
目的 分析单纯HPV16型和(或)18型(HPV16/18)阳性行阴道镜检查并有可疑病变患者的子宫颈组织病理检查结果,探讨HPV16/18阳性患者直接行阴道镜检查在子宫颈病变早期诊断中的意义.方法 收集2014年1月至2016年1月在首都医科大学附属北京朝阳医院妇产科阴道镜门诊就诊的年龄为21~65岁、HPV16/18阳性、细胞学检查结果为阴性或未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)、阴道镜检查有可疑病变的患者,收集其子宫颈组织的病理检查结果进行回顾性分析.共有337例患者纳入本研究,其中细胞学检查结果为阴性者214例,为ASCUS者123例.结果(1)337例患者中,子宫颈组织的病理检查结果为子宫颈炎症63例(18.7%)、子宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ89例(26.4%)、CINⅡ~Ⅲ及子宫颈原位腺癌(AIS)182例(54.0%)、早期(指Ⅰa1期)子宫颈癌3例(0.9%).其中CINⅡ及以上子宫颈病变(包括CINⅡ~Ⅲ、AIS、早期子宫颈癌)所占比例,细胞学检查结果为ASCUS的患者(71.5%,88/123)明显高于细胞学检查结果为阴性的患者(45.3%,97/214;χ2=24.876,P<0.01);HPV16型阳性患者(64.4%,150/233)明显高于HPV18型阳性患者(30.3%,27/89;χ2=31.388,P<0.01);不同年龄段[20~29岁为69.3%(52/75)、30~39岁为55.1%(75/136)、40~49岁为44.8%(30/67)、≥50岁为47.5%(28/59)]患者间比较,差异也有统计学意义(χ2=16.512,P=0.032).(2)在细胞学检查结果为阴性的患者中,HPV16型阳性患者的CINⅡ及以上病变所占比例高于HPV18型阳性患者[分别为54.8%(80/146)、26.0%(20/27);χ2=16.930,P<0.01];在细胞学检查结果为ASCUS的患者中,HPV16型阳性患者的CINⅡ及以上病变所占比例也明显高于HPV18型阳性患者[分别为76.5%(78/102)、55.6%(15/27);χ2=4.642,P=0.031].(3)与炎症和CINⅠ患者比较,CINⅡ及以上子宫颈病变患者的HPV16型阳性率高、HPV18型阳性率低、ASCUS的发生率高、年龄小、产次少,两组间上述指标分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);进一步采用二分类变量logistic回归法进行多因素分析显示,HPV16型阳性、细胞学检查结果为ASCUS是预测CINⅡ及以上病变发生的独立危险因素(P<0.01).结论 在HPV16/18阳性患者中,CINⅡ及以上子宫颈病变所占比例高,其中HPV16型阳性比HPV18 型阳性患者更易发生 CINⅡ及以上子宫颈病变.HPV16/18 阳性患者直接行阴道镜检查并对有可疑病变者行子宫颈组织病理检查有助于早期发现子宫颈病变.
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趋化因子受体7与人乳头瘤病毒在宫颈癌及其癌前病变的相关性研究
目的 探讨趋化因子受体(CXCR)7与人乳头瘤病毒(HPV)-16、-18在宫颈癌及其癌前病变中的相关性.方法 选择2011年3月至2013年3月在珠海市人民医院进行手术治疗时切除组织经病理学检查确诊为宫颈癌的59例患者(纳入宫颈癌组),确诊为宫颈上皮内瘤变(CIN)的86例患者(纳入CIN组),以及因其他疾病切除正常子宫颈的20例患者(纳入对照组)为研究对象.采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法检测3组患者宫颈组织的CXCR7表达水平及其阳性率.采用实时定量PCR方法检测3组患者宫颈组织中HPV-16、-18 DNA表达量.采用Western blotting方法检测3组患者宫颈组织中CXCR7和基质细胞衍生因子(SDF)-1蛋白表达量,并进行CXCR7表达量和HPV-16、-18 DNA表达量的相关性分析.3组患者的年龄等基本临床资料比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结果 ①宫颈癌组及CIN组患者宫颈组织中,CXCR7阳性率均显著高于对照组,并且差异有统计学意义(x2=37.77,P＜0.001;x2 =6.68,P=0.010).②HPV-16 DNA在CIN Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和宫颈癌组织中的表达量,分别为对照组宫颈组织的(1.50±0.05)倍、(2.87±0.09)倍、(3.17±0.12)倍与(6.41±0.20)倍;在CINⅢ和宫颈癌组织中,HPV-16DNA表达量显著高于对照组,并且差异有统计学意义(t=2.15,P=0.042;t=3.11,P=0.003).HPV-18 DNA在CIN Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和宫颈癌组织中的表达量,分别是对照组宫颈组织中的(1.56±0.07)倍、(2.45±0.11)倍、(3.89±0.16)倍与(6.12±0.17)倍;在CINⅢ和宫颈癌组织中,HPV-18DNA表达量显著高于对照组,并且差异有统计学意义(t=2.21,P=0.024;t=3.03,P=0.004).③Western blotting检测结果表明,SDF-1和CXCR7随着宫颈组织病变程度的加深,其表达量随之上升,并且CXCR7表达量与HPV-16、-18 DNA表达量均呈正相关关系(r=0.74、0.78,P＜0.001).结论 CXCR7可能促进高危型HPV引起宫颈癌的进程.
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新疆不同民族头颈部鳞状细胞癌组织中人乳头瘤病毒的感染情况及病毒载量分析
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染已被证明是宫颈癌的一个重要病因[1].近年来,越来越多的研究表明,HPV高危型(16/18亚型)感染与头颈部鳞状细胞癌密切相关[2-4].因种族、文化、社会经济及地域差异,头颈部肿瘤的发病率存在很大差异.白种人患者感染HPV的概率是黑种人的10倍[5].由于HPV的感染存在着较明显的种族差异,我们利用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptasepolymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测新疆维吾尔族、哈萨克族、汉族头颈部鳞状细胞癌中HPV感染情况,探讨新疆不同民族间头颈部鳞状细胞癌中HPV感染差异.
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cobas4800高危型人乳头瘤病毒检测技术在子宫颈癌前病变筛查和细胞学转诊中的应用
目的 评价cobas 4800高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测技术用于细胞学转诊和子宫颈癌前病变筛查的可行性和可靠性.方法 670例研究对象来自于参加子宫颈癌筛查或医院门诊健康检查的妇女,均经病理和细胞学诊断.采用cobas 4800 HPV检测技术和第2代杂交捕获法(HC-2)平行检测子宫颈脱落细胞标本,比较两种方法的一致性；采用HPV PCR检测(HybriBio)和基因测序分型,比较检测HPV16和HPV18的一致性.以病理诊断结果作为金标准,评估cobas 4800 HPV检测技术和HC-2筛查子宫颈上皮内瘤变(CIN)2级阳性的灵敏度和特异度.结果 cobas 4800 HPV检测技术与HC-2总符合率为89.40％(Kappa=0.778),阳性符合率为86.42％,阴性符合率为91.36％；cobas 4800 HPV检测技术与HybriBio筛查HPV16总符合率为88.89％(Kappa=0.777),筛查HPV18的符合率为94.94％(Kappa=0.753),阳性符合率分别为98.91％和100.00％,阴性符合率分别为78.41％和94.44％；以基因测序和HybriBio结果为标准调整,调整后的HPV高危型阳性符合率为100％,阴性符合率为94.42％；HPV16和HPV18阳性符合率均为100％,阴性符合率分别为82.35％和94.44％.cobas 4800 HPV检测技术筛查CIN2的灵敏度和特异度分别为91.07％和70.97％,而HC-2分别为93.75％和71.33％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 cobas 4800 HPV检测技术能够有效的检测HPV16、HPV18和其他高危型HPV病毒,有较高的筛查灵敏度和特异度.
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人类子宫颈癌基因、p16及人乳头瘤病毒16/18在子宫颈癌中表达的意义
目的 研究人类子宫颈癌基因(HCCR)、p16在子宫颈上皮内瘤变(CIN)及子宫颈癌中的表达,探讨其与人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染的相关性及其临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测28例慢性子宫颈炎,62例CIN I～Ⅱ级、49例CIN Ⅲ级及52例子宫颈癌组织中p16、HCCR蛋白的表达,并采用原位杂交法检测其HPV16/18的表达.结果 HCCR在慢性子宫颈炎、CIN I～Ⅱ级、CINⅢ级和子宫颈癌组的阳性表达率分别为3.57%(1/28)、35.48%(22/62)、61.22%(30/49)和88.46%(46/52),各组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05).p16蛋白的阳性表达率从慢性子宫颈炎、CIN I～Ⅱ级、CINⅢ级到子宫颈癌组逐渐增加,分别为7.14%(2/28)、33.87%(21/62)、65.30%(32/49)和92.31%(48/52),各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);HPV16/18在慢性子宫颈炎、CIN I～Ⅱ级、CIN Ⅲ级和子宫颈癌组的阳性率分别为10.71%(3/28)、40.32%(25/62)、69.39%(34/49)和84.62%(44/52),除子宫颈癌与CIN Ⅲ级比较差异无统计学意义外(P=0.115),其余组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.01).p16、HCCR的表达与HPV16/18感染呈正相关(P<0.01).结论 HPV感染可能通过影响p16及HCCR蛋白的过表达与子宫颈癌及其癌前病变的发生、发展密切相关,三者联合检测对子宫颈癌及癌前病变的筛查和预防具有重要意义.
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人乳头瘤病毒16/18E6蛋白检测在子宫颈癌筛查中的应用
目的评价检测人乳头瘤病毒(HPV)16/18 E6蛋白诊断子宫颈癌前病变及子宫颈癌的准确性和有效性.方法选取2014年5月至2015年1月在山西省肿瘤医院妇科就诊的有性生活史的女性439例,其中子宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ及以上(CINⅡ、CINⅢ及子宫颈癌)患者299例(病例组),其余患者为对照组(140例),所有研究对象均接受了液基薄层细胞检测(TCT)、HPV DNA、HPV 16/18 E6蛋白检测和阴道镜检查.结果病例组TCT、HPV DNA、HPV 16/18 E6蛋白检测的阳性率分别为97.0%(290/299)、94.3%(282/299)、66.9%(200/299),对照组分别为44.3%(62/140)、21.4%(30/140)、2.9%(4/140),两组差异均有统计学意义(均P<0.05);HPV DNA与HPV 16/18 E6蛋白检测对诊断的灵敏度分别为94.3%、66.9%,特异度分别为78.6%和97.1%;一致率为71.9%(κ=0.21).病例组中,TCT与HPV DNA联合检测灵敏度为98.9%,特异度为82.8%,准确度为81.7%;TCT与HPV 16/18 E6蛋白联合检测灵敏度为97.9%,特异度为97.1%,准确度为95.0%.结论HPV 16/18 E6蛋白检测可提高子宫颈癌筛查的特异度,可作为HPV DNA检测无法开展或开展困难的欠发达地区的初筛方法,或作为HPV DNA阳性患者分流的方法,以更合理地分配有限的卫生资源.
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子宫颈鳞状细胞癌人类乳头状瘤病毒16/18、p16及Her-2的表达及其临床意义
目的 研究子宫颈鳞状细胞癌癌变过程中高危型人类乳头状瘤病毒(HPV)、p16及Her-2的表达及临床意义.方法 利用组织芯片技术结合显色原位杂交、免疫组织化学和荧光原位杂交(FISH)技术检测60例子宫颈鳞状细胞癌、61例子宫颈上皮内瘤变(CIN)以及21例正常子宫颈组织中HPV16/18、p16及Her-2的表达及Her-2基因扩增的情况.结果 在正常子宫颈组、CINⅠ～Ⅱ组、CINⅢ组、子宫颈鳞状细胞癌组中,HPV16/18和p16的阳性率均逐渐升高,分别为0(0/21)、9.68％(3/31)、46.67％(14/30)、71.67％(43/60);0 (0/21)、19.35％(6/31)、93.33％(28/30)、96.67％(58/60),HPV16/18除正常组子宫颈组与CIN Ⅰ～Ⅱ组间、p16除CINⅢ组与子宫颈鳞状细胞癌组间的差异无统计学意义(P＞0.05),其余各组阳性率差异均有统计学意义(P＜ 0.05)；Her-2表达的阳性率在CINⅢ组与子宫颈鳞状细胞癌组分别为13.33％(4/30)和31.67％(19/60),Her-2基因扩增率分别为3.33％(1/30)和21.67％(13/60),正常子宫颈组与CIN Ⅰ～Ⅱ组Her-2阳性率和Her-2基因扩增率均为0,子宫颈鳞状细胞癌组与CIN组、正常子宫颈组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).Her-2蛋白表达及Her-2基因扩增与子宫颈鳞状细胞癌的分化程度、分期及淋巴结转移呈正相关(P＜0.05).结论 HPV感染是子宫颈鳞状细胞癌发生的触发因素之一；p16蛋白的表达与Her-2基因的扩增可能参与调控了子宫颈鳞状细胞癌的发生、发展过程,其高表达预示子宫颈鳞状细胞癌的不良预后.
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子宫颈癌患者可溶性尿激酶受体、鳞状细胞癌抗原、人乳头瘤病毒16、人乳头瘤病毒18联合检测的意义
目的 探讨可溶性尿激酶受体(suPAR)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、人乳头瘤病毒(HPV) 16、HPV18联合检测在子宫颈癌患者病情监测及预后评估中的意义.方法 选择206例子宫颈癌患者及60名健康对照者血液和子宫颈分泌物标本,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆suPAR及SCC-Ag水平,用荧光定量反转录聚合酶链反应法检测子宫颈分泌物HPV16、HPV18的表达,并分析三者的相关性.结果 子宫颈浸润癌患者血浆suPAR、SCC-Ag水平均比健康对照组升高[(1.072 5±0.305 2)ng/ml比(0.501 7 ±0.179 3)ng/ml、(0.980 6±0.162 7)μg/ml比(0.261 4±0.006 3)μg/ml],差异有统计学意义(均P＜ 0.05);子宫颈浸润癌患者及原位癌患者分泌物HPV16、HPV18阳性表达率分别为53.89％(90/167)和46.15％(18/39),比健康对照组(6.67％,4/60)升高,差异有统计学意义(P＜0.05).子宫颈浸润癌患者血浆suPAR水平与SCC-Ag水平呈正相关(r=0.564,P＜0.05),子宫颈浸润癌患者子宫颈分泌物HPV16、HPV18表达阳性组和阴性组的血浆suPAR水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 子宫颈浸润癌患者血浆suPAR水平与SCC-Ag水平存在正相关关系,尚不能认为子宫颈浸润癌患者血浆suPAR水平与感染HPV16、HPV18有关.
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人乳头瘤病毒3种早期癌蛋白致癌作用的研究进展
高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染是导致宫颈癌的重要原因.E5,E6,E7是HR-HPV编码的3种早期癌蛋白,对宫颈上皮细胞有刺激生长和转化功能.近期研究发现,E5在癌症发生的早期阶段通过干预生长因子受体,干扰细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖激酶(CDKs),促进病毒癌基因的转化等过程发挥致癌作用.E6干预P53,使其对细胞生长负调节功能丧失,失去对细胞周期的正常调控,引起细胞无限增生并向恶性转化.E7干预视网膜母细胞瘤(Rb)蛋白,解除其抑制细胞增殖功能,发挥致癌作用.综述这3种早期癌蛋白致癌机制的研究进展.
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HPV单一感染与多重感染对宫颈病变影响的比较
目的:探讨单一高危HPV亚型与多重高危HPV亚型感染对官颈病变的影响.方法:选取2010年1月-12月在天津医科大学总医院妇科门诊就诊的有性生活史并出现临床症状的患者137例,比较患者细胞学、病理学结果出现的概率；比较单一高危HPV亚型与多重高危HPV亚型感染对宫颈病变影响的差别.结果:①在全部感染病例中,以20～49岁者居多,并且随着年龄的增长,感染率呈现下降趋势.②感染病例中,高危型别以HPV16感染率高.③在宫颈高级别病变中,以HPV16感染率高.(④单一高危与多重高危HPV感染相比较,宫颈细胞学和病理学结果差异无统计学意义.⑤高低危混合HPV感染中低级别病变概率高于单纯高危HPV感染,而高级别病变则相反.结论:①与单一高危HPV亚型相比,多重高危HPV亚型感染对宫颈病变严重程度的影响不明显.②与单纯高危HPV亚型感染相比,高低危HPV亚型混合感染更多表现为低级别宫颈病变.
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靶向人乳头瘤病毒18E6的短发夹结构RNA慢病毒载体的构建
目的:构建含有靶向人乳头瘤病毒18型E6癌基因(HPV18E6)的短发夹结构RNA(shRNA)的慢病毒载体.方法:根据HPV18E6癌基因的相关信息,设计并合成shRNA干扰序列,连人pGCSIL-GFP质粒,构建并鉴定含有shRNA的重组质粒pGC-shRNA;将重组质粒pGC-shRNA和病毒包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,进行病毒包装,收集病毒液并进行浓缩、纯化；所得病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度,并验证其对宫颈癌HeLa细胞HPV18E6癌基因的干扰效果.结果:HPVISE6的shRNA干扰序列与人类基因组没有同源性,此插入序列转录后得到的RNA二级结构能形成发夹状结构；重组质粒pGC-shRNA经PCR鉴定及DNA测序结果显示该重组质粒构建成功；成功对病毒进行包装、浓缩及纯化后,所得病毒滴度为3×108TU/mL,并能很好地抑制HPV18E6癌基因的表达.结论:成功构建了HPV 18E6-RNAi-LV慢病毒载体,为后续RNA干扰研究的开展提供了工具.
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JY佐剂对人乳头瘤病毒18型L1蛋白病毒样颗粒黏膜免疫效果的影响
目的 探讨JY佐剂对人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV) 18型L1蛋白病毒样颗粒(Virus-likeparticle,VLP)黏膜免疫效果的影响,并观察鼻腔反复免疫后与HPV58、11和6型的免疫交叉反应.方法 用含或不含JY佐剂的HPV18 L1 VLP分别经肌肉和鼻腔免疫BALB/c小鼠,并设PBS对照组,于第0、3、6周各免疫1次,免疫后第2、5、8周采血,ELISA法检测血清IgG抗体滴度;于第8周分离脾淋巴细胞并收集呼吸道灌洗液,采用IFNγELISPOT试剂盒检测细胞免疫效果,ELISA法检测黏膜免疫效果;鼻腔免疫各组取5只小鼠,继续免疫10次,每次间隔3周,收集第14、20、26、32和38周的血清,ELISA法检测HPV18 L1蛋白与HPV58、11和6型的免疫交叉反应.结果 免疫3次后,不含或含有佐剂的HPV18 L1蛋白经肌肉免疫后的血清IgG抗体滴度(均为104.6)高于经鼻腔免疫后的血清IgG抗体滴度(分别为101.9和102.8).含有佐剂的HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫后呼吸道灌洗液中sIgA抗体浓度(30.06 μg/ml)明显高于不含佐剂的HPV18 L1蛋白鼻腔免疫组(23.47 μg/ml)(P＜0.01),但肌肉免疫组未检测到sIgA抗体.含有佐剂的HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫诱导的细胞斑点数明显高于不含佐剂的HPV18 L1蛋白鼻腔免疫组(P＜0.01),不含佐剂与含佐剂的HPV18 L1蛋白肌肉免疫组诱导的细胞斑点数差异无统计学意义(P＞0.05).HPV18 L1免疫小鼠后的血清与HPV58、11和6型之间均有交叉反应,在第32周血清特异性IgG抗体滴度高.结论 HPV18 L1 VLP经肌肉免疫后,其血清抗体水平高于鼻腔免疫组,但该蛋白鼻腔免疫后细胞免疫反应和黏膜sIgA抗体水平均高于肌肉免疫组;JY佐剂能增强HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫后的小鼠细胞反应及黏膜sIgA抗体应答,但肌肉免疫组佐剂作用不明显;HPV18 L1蛋白反复鼻腔免疫后,可拓宽抗原保护谱.
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人乳头瘤病毒18型L1蛋白在毕赤酵母中的表达及其病毒样颗粒的免疫原性
目的 在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒18型(Human papilomavirus 18,HPV18)L1蛋白,纯化病毒样颗粒(Viruslike particles,VLPs),并检测其免疫原性.方法 将含HPV18 L1基因的酵母表达质粒pHPV18 L1电转化毕赤酵母X-33,甲醇诱导表达,重组HPV18 L1蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析后,经离子交换层析、分子筛层析纯化,采用SEC-HPLC分析纯度；动态光散射和透射电镜分析粒径分布和结构；并通过小鼠半数有效剂量(ED50)和大鼠抗体滴度测定分析其免疫原性.结果 HPV18 L1蛋白在毕赤酵母中获得了有效表达,相对分子质量约为55 000,可与小鼠抗HPV18 L1单抗特异性结合；经纯化的HPV18 L1 VLPs纯度为99％,且颗粒大小均一,直径约50 nm；经吸附铝佐剂后,免疫小鼠的ED50为0.006 68μg；并可诱导大鼠产生较高的抗体滴度.结论 HPV18 L1可在毕赤酵母中高效表达并自动形成VLPs,该VLPs经纯化、吸附铝佐剂后具有良好的免疫原性,为工业化生产HPV18 L1疫苗奠定了基础.
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鞭毛蛋白FliC突变体/HPV 18 L2N融合蛋白的表达与纯化
目的:人乳头瘤病毒(HPV)的持续性感染导致女性宫颈癌的发生.HPV的次要衣壳蛋白L2可以诱发交叉中和多种型别HPV的中和抗体,但是单独免疫L2诱发的抗体滴度较低.鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC是一种有效的佐剂.删除FliC超变区域的突变体可与外源抗原融合表达并且显著增强外源抗原特异性抗体的产生.本研究旨在构建鞭毛蛋白FliC超变区删除突变体与HPV 18 L2N(aa.13-154)的融合基因,通过大肠杆菌原核表达系统表达FliC突变体与HPV 18 L2N的融合蛋白并纯化,为研究鞭毛蛋白的佐剂活性及新型HPV 18L2疫苗奠定基础.方法:以鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白编码基因fliC为模板,通过重叠PCR法构建删除fliC D3区域(fliC△D3)、D3+CD2a区域(fliC△D3CD2a)、D3+D2区域(fliC△D2D3)的突变体,同时将HPV 18 L2N基因插入置换突变体的超变区删除区域.含有重组基因的表达载体在大肠杆菌中诱导表达,经SDS-PAGE及Westem blot鉴定分析.表达的融合蛋白经Ni-Sepharose亲和层析纯化及Q-Sepharose离子交换层析去除内毒素.纯化后的融合蛋白经Native-PAGE鉴定分析,通过鲎试剂凝胶法测量蛋白溶液中的内毒素含量.结果:构建了pET22b-fliC△D3/18 L2N、pET22b-fliC△D3CD2a/18L2N、pET22b-fliC△D2D3/18 L2N重组载体.重组载体在大肠杆菌以包涵体形式高效表达,且主要以单体形式存在.结论:通过原核表达及层析法纯化,成功获得了无热源、高纯度的鞭毛蛋白FliC突变体与HPV 18 L2N的融合蛋白,为增强HPVL2免疫原性提供了一种新的途径,为进一步研制HPV 18 L2疫苗奠定了基础.
