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原花青素对微波诱导视网膜神经节细胞凋亡的拮抗作用
目的:探讨不同剂量的原花青素(procyanidin,PC)对微波致视网膜神经节细胞(retinal ganglioncells,RGCs)损伤的拮抗作用.方法:体外培养RGCs,将细胞随机分为6组,即不同PC剂量(0μg/L、2 μg/L、20μg/L和4μg/L)4个实验组及维生素c 40 μg/L组和对照组,分别给予频率为2 450 MHz、功率密度为30 mw/cm2的微波连续辐照1 h,对照组不给予辐照.光镜下观察辐照前后细胞形态学的改变,台盼蓝染色检测细胞存活率,应用流式细胞仪和DNA末端标记法(TdT-mediated-dUTP nick end labeling,TUNEL)定量检测细胞早期凋亡.结果:微波辐照后,细胞即有聚集现象,部分细胞突起消失.辐照后0 h,20μg/L和40 μg/L PC组较O μg/L PC组的细胞凋亡率有所降低(P<0.05);辐照后6 h和12 h,3个PC剂量组较0μg/L PC组的细胞凋亡率都有降低(P<0.05);辐照后18 h,只有40μg/L PC组较0μg/L PC组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01).结论:微波可诱导RGCs细胞凋亡,PC对此损伤具有一定的拮抗作用.
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原花青素对大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤的治疗作用
目的:观察原花青素(GSP)对急性坏死性胰腺炎(ANP)的治疗作用及其可能机制.方法:采用5%牛磺胆酸钠胰管逆行注射制备ANP动物模型.SD雄性大鼠48只,采用随机分配原则分4组:假手术组给予NS 3 mL/kg;ANP模型组;GSP组给予腹腔注射GSP 50 mg/kg;GSP+ANP组于造模型后给予腹腔注射GSP50 mg/kg.采用酶联免疫法(ELISA)检测血液及肺组织TNF-α、IL-1β及ICAM-1含量.Western boltting法检测GSP对MAPKs信号通路的影响以及用电泳迁移率实验(EMSA)检测肺组织NF-κB的DNA结合活性.结果:GSP能够减轻ANP大鼠胰腺和肺组织损伤.ANP大鼠血清及肺组织中TNF-α、IL-1 β及ICAM-1的水平、肺组织MPO水平均明显高于对照组(P＜0.05)、ANP大鼠ERKs、p38和JNKs MAPKs的磷酸化水平及NF-κB的DNA结合活性显著高于对照组.GSP+ANP组上述指标明显轻于ANP组.结论:GSP可能通过抑制肺MAPKs及NF-κB通路的激活,抑制炎症因子的表达而减轻ANP所致的肺损伤;对ANP组大鼠胰腺损伤有显著的减轻作用.
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原花青素处理去细胞牛心包细胞的相容性研究
目的 考察原花青素处理去细胞牛心包的细胞相容性.方法 采用L229细胞经原花青素处理去细胞牛心包浸提液培养后,噻唑蓝试验(MTT)法测定其相对增值率;将L929细胞与原花青素处理去细胞牛心包直接接触培养,逐日观察细胞生长状态;将L929细胞种植于原花青素处理的去细胞牛心包表面,扫描电镜观察其生长情况.结果 原花青素处理去细胞牛心包性质稳定,细胞毒性程度为0～1级.L929细胞与心包材料直接接触培养生长良好,形态学无明显改变.结论 原花青素处理去细胞牛心包细胞相容性好.
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葡萄多酚泡腾颗粒质量控制及稳定性考察
目的 建立葡萄多酚泡腾颗粒的质量控制方法,考察其稳定性.方法 采用紫外分光光度法测定颗粒剂中原花青素含量,以性状、粒度、泡腾时间、原花青素含量为评价指标,对葡萄多酚泡腾颗粒进行加速试验和长期试验.结果 葡萄多酚泡腾颗粒中原花青素平均含量为0.79％;样品经加速试验和长期试验,各项指标均符合2010版《中华人民共和国药典》中颗粒剂检查项的相关规定.结论 葡萄多酚泡腾颗粒质量可控,且稳定性好.
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正交试验优化怀枝果皮原花青素提取工艺
目的 研究从怀枝果皮中提取原花青素的佳条件.方法 以怀枝果皮作为提取原花青素的原料进行提取条件的单因素试验,研究的因素包括超声功率、提取时间、乙醇比例、提取温度、料液比例、pH值,然后以此为依据进行L27(35)正交试验得出佳提取条件.结果 研究表明从怀枝果皮提取原花青素的佳条件是以pH值6.0的70％乙醇溶液为提取溶剂,温度为50℃、料液比例为1:15,超声功率为400 W提取40 min,并重复提取2次.各因素对原花青素提取效果的影响大小依次为:超声功率＞提取时间＞提取温度＞乙醇比例＞料液比例.结论 优化后的提取条件能有效提高从怀枝果皮中提取原花青素的效率.
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原花青素上调let-7a抑制胰腺癌AsPC-1细胞生长及迁移
目的 探讨原花青素是否通过上调let-7a表达而抑制胰腺癌细胞生长及迁移.方法 体外培养人胰腺癌AsPC-1细胞,原花青素处理细胞后,分别用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染及Transwell迁移等实验检测细胞增殖率、细胞凋亡率及细胞迁移能力的改变;利用miRNA实时逆转录PCR检测细胞内let-7a表达变化.AsPC-1细胞转染let-7a mimics后,MTT法、Transwell迁移实验分别检测细胞增殖率及细胞迁移能力的改变.结果 与对照组相比,原花青素处理AsPC-1细胞后,细胞增殖率、细胞迁移能力随着原花青素浓度升高而下降,而细胞凋亡率随着药物浓度升高而逐渐升高.与对照组相比,原花青素处理细胞后, let-7a的表达升高.通过脂质体转染let-7a mimics后,细胞的增殖率及迁移能力均低于对照组,且let-7a mimics与原花青素共同作用后,细胞增殖及迁移明显低于let-7a mimics和原花青素单独作用组.结论 原花青素具有抑制胰腺癌细胞生长、迁移,及诱导细胞凋亡的作用.原花青素可能是通过上调let-7a表达,从而抑制胰腺癌细胞的生长及迁移.
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原花青素对前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究原花青素对人雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外培养的LNCaP细胞株与100、200、300 μg/ml的原花青素共孵育,分别在24、48和72 h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况.结果 原花青素可引起LNCaP细胞形态较明显改变.不同浓度(100、200、300 μg/ml)原花青素对LNCaP细胞作用的细胞增殖抑制率分别为27.1%、72.1%和86.4%.流式细胞术检测表明原花青素可诱导LNCaP细胞凋亡,300μg/ml原花青素处理72 h引起36.5%的凋亡率.这3种作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强.结论 原花青素可在体外抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,并促进其凋亡.
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原花青素影响Aβ25-35诱导PC12细胞周期变化与细胞凋亡的可能机制
目的 探讨原花青素(Proanthoeyanidins,PAC)对β-淀粉样肽(25-35)[β amyloid peptide-(25-35),Aβ25-35]诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期异常与凋亡保护作用的可能机制.方法 种人培养瓶或板的PC12细胞贴壁后用常用血清饥饿培养使细胞同步于G0期,30 mg/L的PAC预处理血清饥饿培养的PC12细胞,加入终浓度为25μmol/LAβ25-35处理0～20 h,通过RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测细胞周期蛋白依赖性激酶4(Cyclin-dependentkinase-4,CDK4)、磷酸化的视网膜纤维母细胞瘤蛋白(phosphorylated Retinoblastoma protein,pRb)、腺病毒E2启动子结合因子1(Adenovirus E2 factor-1,E2F1)、B细胞淋巴瘤/白血病关联X蛋白(B-cell lymphoma/leukemia-2 As,sodated X protein,bax)基因表达的变化.结果 与Aβ25-35诱导组比较,CDK4、E2F1、bax mRNA表达和CDK4、pRb、Bax蛋白表达降低.结论 PAC可能通过下凋CDK4、pRb、E2F1的表达,从而降低bax的活化,对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期异常与凋亡起保护作用的.
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原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞NF-κB DNA结合活性的抑制作用
目的:观察原花青素对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞核转录因子-κB(nuclear factor Kappa B, NF-κB)结合活性的影响.方法:LPS诱导RAW264.7细胞,加入不同质量体积浓度原花青素孵育1 h,提取核蛋白,电泳迁移率变动分析检测NF-κB与DNA的结合活性.结果:LPS诱导小鼠巨噬细胞肿瘤细胞株RAW264.7后,其NF-κB的核结合活性明显增高.0.8、4和20 mg/L的原花青素可明显降低LPS诱导下RAW264.7细胞的NF-κB活化.结论:原花青素对NF-κB活化的抑制作用可能是其抗炎的作用机理之一.
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原花青素对结肠癌HT-29细胞凋亡及Survivin、Caspase-3和Stat3基因mRNA的影响
目的 探讨原花青素(procyanidin,PA)对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响,并初步探讨其分子生物学作用机制.方法 采用流式细胞仪AnnexinV-PI双标记法检测HT-29细胞的凋亡情况;采用荧光定量PCR方法检测Survivin、Caspase-3和Stat3基因mRNA的表达水平.结果 不同浓度PA处理HT-29细胞48 h后,对照组与各浓度组细胞凋亡率分别为(16.98±0.09)％、(21.06±0.06)％、(38.86±0.12)％、(52.86±0.17)％和(66.36±0.18)％,各浓度组分别与对照组相比较,差异有统计学意义(P＜0.01);经不同浓度PA干预HT-29细胞48 h后,各浓度组Survivin、Caspase-3和Stat3的mRNA表达水平均明显下调,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结 论PA体外可呈时间-浓度依赖性诱导结肠癌细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin、Caspase-3和Stat3的mRNA表达水平有关.
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原花青素对H2 O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用
目的 观察原花青素对H2 O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用,并初步探讨其保护机制.方法 MTT法筛选合适的原花青素作用浓度,用H2 O2(400μmol/L)建立SH-SY5Y细胞氧化损伤模型,分别用质量浓度为6.25、12.5、25μg/mL原花青素预处理各组细胞,倒置显微镜观察SH-SY5Y细胞形态学的变化;MTT法检测细胞存活率;Western-blot检测各组细胞HSPA1L蛋白表达水平的变化.结果 与模型组比较,各浓度原花青素组的细胞形态明显改善,细胞存活率明显升高,呈浓度依赖性;与模型组比较,12.5、25μg/mL原花青素组HSPA1L表达水平逐渐降低,其中25μg/mL组HSPA1L表达水平显著下降(P<0.01).结论 原花青素可缓解H2 O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤,其机制可能与调节H2 O2诱导的HSPA1L蛋白表达有关.
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原花青素对CIA大鼠足爪组织中NF-κB/p65蛋白和血清中某些促炎性细胞因子表达的影响
目的 研究原花青素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(CIA)大鼠足爪组织中核转录因子NF-κB/p65蛋白表达的抑制作用和血清中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α等水平的影响.方法 建立Ⅱ型胶原诱导的CIA大鼠模型,免疫组化法检测足爪组织中NF-κB/p65蛋白的表达,ELISA法检测CIA大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量.结果 原花青素能剂量依赖性地下调NF-κB/p65蛋白的表达,降低CIA大鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平.结论 原花青素对CIA大鼠炎症的抑制作用可能与其下调NF-κB/p65蛋白表达、降低促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的水平有关.
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增加原花青素稳定性的制剂学方法研究进展
综述近几年国内外对提高原花青素稳定性的制剂学方法的研究进展,为此类天然高效的抗氧化剂的开发利用提供理论支持.
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葡萄籽原花青素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及自噬性死亡
目的:探讨原花青素对肝癌HepG2细胞的抑制作用及其可能的作用机制.方法:改良MTT法(WST-8法)及克隆形成抑制实验观察原花青素对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,激光共聚焦显微镜观察和Western blotting检测细胞自噬发生.结果:原花青素作用HepG2细胞后,不同质量浓度的原花青素对肝癌细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量一效应关系(P＜0.01),原花青素作用于人肝癌HepG2细胞48 h的IC50为1.304×10-1g/L;与对照组相比随着原花青素作用于HepG2细胞的浓度增加,细胞克隆逐渐减少;随着原花青素浓度的增加,人肝癌HepG2细胞出现明显G1期阻滞,且高浓度原花青素组出现明显的亚二倍体峰,当原花青质量素浓度达到1.6×10-1g/L时,亚二倍体百分率为81%;不同质量浓度原花青素作用后,出现明显的凋亡细胞及坏死细胞、自噬性死亡和非特异性死亡细胞群;经原花青素处理转染GFP-LC3质粒的HepG2细胞胞浆内;LC3呈现明显的点状聚集;细胞自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的蛋白表达水平随着原花青素浓度增加逐渐增多.结论:原花青素通过诱导细胞凋亡及自噬性死亡的方式抑制人肝癌细胞的生长.
关键词： 原花青素 人肝癌HepG2细胞 凋亡 自噬 -
槟榔的化学成分
应用硅胶柱、ODS 柱、Sephadex LH-20柱等色谱方法对槟榔种子的体积分数95％乙醇提取物石油醚及乙酸乙酯萃取部位进行分离纯化，根据理化性质与波谱数据鉴定化合物的结构，分别为：表儿茶素（1），原花青素B1（2），原花青素B2（3），原花青素B7（4），epicatechin-（4β→8）-epicatechin -（4β→8）-catechin （5），epicatechin-（4β→6）-epicatechin-（4β→8）-catechin （6），金色酰胺醇酯（7），aurantiamide （8），neoechinulin A （9），echinulin （10）。其中，化合物6～10为首次从该植物中分离得到。对分离得到的聚合鞣质类化合物1～6进行了初步的体外抗病毒活性测试。
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原花青素对鼠脑缺血再灌注损伤核转录因子表达和脑梗死体积的影响
目的:探讨原花青素(PC)对脑缺血再灌注损伤大鼠核转录因子-κB p65(NF-κB p65 )和脑梗死体积的影响.方法:将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、PC低剂量治疗组和PC高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.各组于缺血90min再灌注24h用免疫组化法观察大鼠额顶部皮质NF-κB p65蛋白表达,并进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色观察脑梗死体积.结果:①假手术组及缺血再灌注组的未缺血侧大脑半球可见少量NF-κB p65表达于胞质, 缺血再灌注组NF-κB p65表达发生核移位,于胞核表达增加;与缺血再灌注组比较,PC高、低剂量治疗组能减少NF-κB p65的核表达(P<0.05);高、低剂量组之间差异亦具有统计学意义(P<0.05).②PC高、低剂量治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异具有显著性(P<0.05).结论:PC对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与通过抑制NF-κB p65活化有关.
关键词： 缺血再灌注 核转录因子-κB p65 原花青素 -
葡萄籽原花青素提取物对小鼠MDA、SOD和GSH-Px的影响
目的 探讨葡萄籽原花青素提取物(Grape seed procyanidim extract,简称GSPE)对老龄小鼠丙二醛(Malondiadehycle,MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响.方法 将40只雌性昆明种老龄小鼠按血液MDA水平随机分为对照组、葡萄籽原花青素提取物低、中、高(0.083g/kg·bw、0.167g/kg·bw、0.500g/kg·bw)剂量组,分别给予30d后,按试剂盒说明测定MDA含量、SOD和GSH-Px活力.结果 与老龄对照组比较,高剂量组能显著降低血中MDA含量(P＜0.05)和显著提高血清SOD活力(P＜0.05),各剂量组对血清GSH-Px活力无明显影响(P＞0.05).结论 葡萄籽原花青素提取物具有降低血液MDA含量,提高血清SOD活力作用.
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原花青素抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的机制
目的:观察原花青素对脂多糖诱导RAW264.7细胞PGE2生成的影响及其作用机制.方法:放射免疫法(RIA)检测原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的影响;LPS诱导RAW264.7细胞9h,再加不同浓度原花青素作用30 min,放射免疫(RIA)法检测原花青素对COx-2酶活性的影响;半定量逆转录一聚合酶联反应(RT-PCR)法检测原花青素对COx-2 mRNA表达的影响;提取核蛋白,蛋白免疫印迹(western blot)法检测原花青素对NF-KB/p65蛋白表达的影响;电泳迁移率变动分析(EMSA)法检测原花青素对NF-κB与DNA结合活性的影响.结果:0.8,4和20 mg.L-1原花青素抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成;0.8,4和20 mg·L-1原花青素不影响LPS诱导RAW264.7细胞COx-2酶活性;0.8,4和20 mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞COx-2 mRNA表达;4,20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB/p65蛋白表达;0.8,4和20 mg·L-1的原花青素可明显降低LPS诱导下RAW264.7细胞的NF-κB活化.结论:原花青素显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成的作用与原花青素抑制COx-2 mRNA表达有关,此作用可能是通过抑制NF-κB/p65蛋白表达和抑制NF-κB的DNA结合活性来实现.
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原花青素对过氧化氢损伤内皮细胞SOD、GSH-PX活性的影响
目的 观察原花青素对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,将细胞分为6组,即空白对照组、H2O2损伤组、H2O2+VitC组、H2O2+原花青素5、25、50μmol/L组.将750μmol/L H202作用于加入Vit C及不同浓度原花青素预培养24h的内皮细胞,继续培养18h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测原花青素对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的保护作用；用流式细胞仪分析-AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡；定量检测各实验组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力.结果 内皮细胞H2O2损伤后吸光度(OD)低于空白对照组,原花青素预处理后OD值增加且呈剂量依赖性；H2O2损伤可引起细胞SOD及GSH-PX活性明显降低,原花青素能维持SOD、GSH-PX活性,且呈剂量依赖性,各指标差异有显著性,并且呈剂量依赖性抑制H2O2诱导的内皮细胞的凋亡.结论 原花青素能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤及凋亡,其作用可能与维持SOD、GSH-PX活性有关.
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原花青素对脑缺血再灌注损伤大鼠炎症反应及自由基含量的影响
目的 观察原花青素(PC)对缺血再灌注损伤大鼠保护作用及其对中性粒细胞浸润、自由基含量和脑组织含水量的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、PC低剂量治疗组及PC高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.用生化法观察缺血90min再灌注24h大鼠额顶部皮质髓过氧化物酶(MPO)活性、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量及脑含水量变化,并进行TTC染色检测脑梗死体积.结果 PC治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异显著;与缺血再灌注组比较,PC治疗组MPO活性、MDA含量显著降低,SOD活性增加,脑组织含水量降低;高、低剂量组之间差异亦显著.结论 PC对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与减轻缺血再灌注损伤炎症反应,减轻氧化性损伤有关.
