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干细胞研究进展及其医学应用
阐述了干细胞的概念分类,当前的研究进展及人类胚胎干细胞在体外培养成功的技术突破,分析介绍了干细胞在修补细胞、器官移植、治疗疾病等方面的应用前景和良好的社会效益与经济效益,也提出了有待研究解决的若干问题.
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中医药干细胞研究及治疗与伦理学问题策略优化
为配合医院机构开展中医药干细胞研究,广东省中医院伦理委员会做了大量的理论技术准备工作,率先成立了全国首家中医药干细胞研究伦理委员会,并顺利地开展了中医药干细胞研究的伦理审查工作,为全国乃至全世界的中医药干细胞研究伦理审查起到示范性的作用.文章围绕上述核心问题从中医药干细胞研究及治疗的理论基础、特色及作用、过程管理与控制的既存问题、伦理学问题策略优化等部分展开论述,并就知情同意、风险控制、隐私保护等方面进行相关探讨,以期为当前中医药干细胞研究及治疗规范与伦理审查实践提供参考.
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生物医学前沿中的伦理问题
本文在讨论科学技术与伦理学关系、生命伦理学基本原则以及道德与伦理学之间的异同后,探讨了人的克隆和干细胞研究、基因治疗、生殖遗传学、异种移植、生物医学和临床研究中的伦理问题.
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脂肪干细胞向腱细胞分化促进腹正中切口愈合的实验研究
目的 探讨脂肪干细胞(ASCs)向腱细胞分化在腹正中切口愈合中的作用.方法 体外分离培养大鼠ASCs,利用骨形态发生蛋白-12(BMP-12)诱导其向腱细胞分化.20只大鼠随机分为两组,建立腹正中切口愈合模型,实验组将分化的ASCs涂抹至白线切口两缘,对照组未实施ASCs干预.1个月后利用生物力学测试及Masson染色评价切口愈合效果.结果 成功分离大鼠ASCs,BMP-12诱导其向腱细胞分化,体外证实其特异性标志物Scx表达增加,Ⅰ型胶原纤维(Collagen Ⅰ)表达明显增多.实验组切口愈合后所能承受的大拉力为(4.2±0.4)N,显著高于对照组(3.63±0.46)N,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);Masson染色提示实验组胶原纤维生成增多、致密,排列秩序显著改善.结论 ASCs向腱细胞分化可增加Collagen Ⅰ的生成,促进腹正中切口的愈合.
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神经胶质瘤干细胞向内皮细胞分化的差异基因表达谱的分析
目的 检测并分析胶质瘤干细胞(GSCs)低氧诱导分化为内皮细胞过程的差异基因表达谱的关键通路和基因,为恶性胶质瘤的治疗寻找新的靶基因.方法 从U87胶质瘤细胞株中提取GSCs细胞并进行免疫荧光鉴定;将GSCs在水凝胶上低氧诱导分化,并对分化后的内皮细胞进行免疫荧光鉴定;收集并提取细胞总RNA,用基因芯片检测分化前、后的细胞差异表达基因,进而分析差异基因的显著靶向性功能和差异基因参与的信号转导通路,从而筛选出关键调控信号通路和基因.结果 提取的GSCs表达CD133、Nestin、SOX2等干细胞标志物;低氧诱导5d后细胞表达CD31、CD34两种内皮细胞标志物;差异基因表达谱存在481个上调基因及245个下调基因(差异倍数＞2),筛选出转化生长因子β(TGF-β)信号通路、脂肪酸合酶(FASN)、脯氨酰-4-羟化酶亚基α1(P4HA1)等多个有意义的通路和基因(均P ＜0.01).结论 U87细胞中提取的GSCs可经体外低氧诱导分化为内皮细胞,TGF-β信号通路、FASN及P4HA1可能成为胶质母细胞瘤具有前景的治疗靶点.
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磷酸二氢钾对根尖牙乳头干细胞成牙及成骨向分化能力的影响
目的 探讨磷酸二氢钾(KH2 PO4)对根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)成牙与成骨向分化能力的影响,以期为组织工程牙再生、骨再生及临床运用KH2PO4提供实验依据.方法 通过酶消化法分离培养人SCAP,将SCAP分别培养于常规培养液α-低基础培养基及含1.8 mmol/L KH2PO4的α-低基础培养基常规培养液中,分为空白对照组和实验组(KH2PO4刺激组).通过碱性磷酸酶(alkaline phosphotase,ALP)活性检测、茜素红染色实验及实时定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测SCAP体外成牙及成骨向分化的能力.结果 ALP活性检测结果显示,3d时实验组ALP活性[(0.370 ±0.013) Sigma单位·min-1 ·mg-1]显著高于空白对照组[(0.2845±0.0084) Sigma单位·min-1·mg-1],差异有统计学意义(P＜0.01)；培养5、7d后茜素红染色结果显示实验组形成了明显的矿化结节,实验组5、7d时钙离子浓度[分别为(0.539 ±0.007)、(1.617 ±0.042) μg/g]均显著高于空白对照组[(0.138 ±0.037) μg/g],P＜0.01.RT-PCR及蛋白质印迹法检测结果显示:实验组SCAP培养3、7d后ALP、核心结合蛋白因子2、成骨相关转录因子、骨钙蛋白及牙本质涎磷蛋白的基因及蛋白表达均显著高于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05).结论 1.8 mmol/L KH2P04可以明显促进人SCAP体外成牙及成骨能力.
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转化医学及其在牙周干细胞研究中的应用
转化医学是近年来的热门研究领域,尽管目前的转化研究多集中于致死性疾病的防治,然而其对口腔医学的发展也将发挥重要作用[1-3].口腔疾病中,牙周疾病是人类口腔健康的"头号杀手",有文献报道,牙周疾病可能与糖尿病、心血管疾病等全身疾病相关,一直是巨大的社会公共卫生问题.很多学者已经意识到,在牙周病防治方面引入和普及转化理念、立足临床核心问题、整合有限资源、采取多学科交叉的战略已迫在眉睫[4-5].
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干细胞移植治疗放射性肠炎的研究进展
放射性肠炎(radiation enteritis,RE)是经放射治疗引起的肠道放射性损伤,可累及肠道各节段,导致肠道消化、吸收及分泌功能障碍,严重时可危及患者生命,是当今临床治疗的难题.目前,放射性肠损伤机制仍不明确,尚缺乏有效的预防和治疗方法.干细胞移植是一种新兴的治疗策略,已成为RE治疗领域的研究热点.鉴于此,本文主要对干细胞移植治疗RE的研究现状及其损伤修复机制作一综述.
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肝癌干细胞的细胞分子标志物和信号通路的研究进展
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上第7种常见肿瘤,在我国位列肿瘤的第2位,仅次于肺癌,尤其在亚洲和非洲等受肝炎病毒影响严重的地区死亡率很高[1]。 HCC 的常规治疗方法有多种：如外科手术治疗、肝动脉插管栓塞化疗(TACE)、射频消融(RFA)和化疗药物治疗等,但各种方法都有其治疗的局限性[2]。目前,肝癌靶向治疗正在不断地取得进展,分离和鉴定特异性肝癌干细胞(liver cancer stem cells, LCSCs)的表面分子标志物,对探索肝癌的发病机制以及开展靶向治疗至关重要。由于 LCSCs 的特异性标记物还未被发现,只能根据 LCSCs 的干细胞所具有特异性的表面标志物来筛选其非特异性表面标志物。近来发现肝癌内部的一些信号转导通路的异常激活或抑制与肝癌的发生有着密切的联系。本文就肝癌相关的分子标志物和信号转导通路的研究进展作一综述。
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人与非人动物"嵌合体"研究的伦理学分析与思考
人与非人动物嵌合体的研究,作为人类提高自身健康素质的技术工具,以科学技术的形式改变着人们的生活方式和思维方式,寻找遗传性或者难治性疾病的致病基因和治疗新途径,追求个人和社会整体的良好生存状态,有着巨大的医疗价值,符合"行善"的伦理原则,应该允许限制性的开展.考虑到可能引发的伦理和高技术风险,履行审慎的准入制度.进行规范的伦理管理和严格的法规、行政管理是非常必要的.
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小鼠毛囊发育中细胞增殖区及干细胞巢的形成演化
目的 根据不同发育时期小鼠触须毛囊形态结构以及毛囊干细胞增殖区定位,初步分析毛囊隆突部干细胞巢的形成与意义.方法 采用干细胞增殖标记物5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)体内局部注射法,标记不同生长发育阶段的SPF级健康昆明远交系小鼠触须毛囊,24 h后获取完整触须毛囊,OCT包埋,冰冻切片,HE染色.对EdU标记的切片行免疫荧光染色,检测毛囊细胞增殖活跃区域,并采用抗干细胞转录因子Sox2抗体对毛囊进行免疫荧光染色.结果 毛囊在发育过程中形态发生变化,成熟毛囊可以明显看出毛囊隆突部位.自出生后第1天至第15天,小鼠毛囊细胞增殖活跃区从初的真皮乳头渐渐转移至毛囊球部内外根鞘部位,同时沿内外根鞘向上迁移,在毛囊中上部形成毛囊隆突,并且Sox2在隆突部细胞中大量表达.结论 小鼠毛囊隆突部干细胞巢的祖细胞来源于毛囊真皮乳头,毛囊隆突形成后细胞大量表达Sox2,并进入静息状态.
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中药调控骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展
骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）在一定的诱导条件下能够分化为成骨细胞、软骨细胞等成熟细胞。关于 BMSCs 定向分化的研究一直是干细胞研究领域的热点和难点。BMSCs 成骨分化与中医“肾藏精，主骨生髓”理论具有相通性，应用中药诱导干细胞分化具有良好的前景。本文从理论基础、具体的调控作用以及可能的作用机制3个方面，对近年来中药调控 BMSCs 成骨分化的研究进展进行了综述。
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SV40T抗原基因介导尿源性干细胞永生化
目的 建立猿肾病毒40大T抗原(SV40Tag)永生化尿源性干细胞,为组织工程学及再生医学提供稳定的细胞来源.方法 利用脂质体(Lipofectamine2000)介导将含SV40Tag基因质粒pMPH-FRT-SV40T及转座酶质粒(transposase)共转染至临床分离的尿源性干细胞中.潮霉素(Hy-gromycin)筛选后阳性细胞克隆并连续传代,观察细胞形态学以及增殖情况,RT-PCR,免疫荧光等检测转染细胞的生物学特性,细胞裸鼠皮下注射检测其安全性.结果 筛选获得的阳性克隆扩大培养,即永生化尿源性干细胞(imrnorterlized urine derived stem cell,iUSC),增殖能力强,能连续传代培养.RT-PCR证实iUSC表达SV40Tag基因,而用翻转重组酶(Flippers recombination enzyme Flp)处理iUSC可敲除RFT-SV40Tag基因而逆转永生化.应用免疫荧光细胞化学技术检测该细胞株表达干细胞表面标志物CD73,CD44,CD90 (Thy-1),CD29 (Integrin),CD105 (Endoglin),CD166 (ALCAM),BMPR Ⅱ,SSEA4,CD117,CD133;BMP9可诱导其分化为成骨细胞,脂肪细胞,具备干细胞多向分化能力;转染细胞2×106个/点接种裸鼠,连续观察4周无肿瘤形成.结论 脂质体转染技术成功构建SV40Tag永生化尿源性干细胞,该细胞株仍具有干细胞增殖及多向分化潜能,为组织工程学及再生医学的体外研究和发展应用提供了安全稳定的细胞来源.
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干细胞临床应用战略
干细胞堪称医学史上为重要的一项技术.其中两项突破,即Wilmut等人完成的动物克隆实验[1]和Thomson[2]等人培养出的人类胚胎干细胞,使得干细胞成为一个热门的研究领域.科学家们认为,21世纪是干细胞的世纪,随着干细胞研究和技术的发展,人类的健康长寿绝不是梦想.
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科学家道德与干细胞研究
干细胞的研究带来了许多技术、法律、社会和伦理的问题.科学家需严格遵循科学道德原 则,确立以造福人类的研究目的,具备强烈的社会责任感;把握道德价值高于经济价值的原则,才能使干细胞的研究朝着健康有序的方向发展.
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关于干细胞研究及其临床应用伦理管治的回顾与展望
讨论了干细胞科学技术发展的社会环境,干细胞研究与中国文化,保护病人和受试者权利和利益的意识,管理空白和新的挑战,后论证必须制订专门有关干细胞研究及其临床应用的条例,以期在发展干细胞研究科学技术的同时,切实保护病人、受试者和公众的权利和利益.
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医学研究登记备案信息系统设计与应用
基于《干细胞临床研究管理办法(试行)》的要求,全国获准从事干细胞研究的机构均在医学研究登记备案信息系统上进行机构登记注册,全国各级医院所进行的临床研究,均应进行注册并公告.详细介绍医学研究登记备案信息系统的架构及功能,并与国际上相似功能的注册登记系统进行比较.
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组织修复与再生的新挑战:实现多种组织在损伤部位的同步修复与再生
Great achievements in the study of tissue repair and regeneration have been made, and many of these successes have been shown to be beneficial to the patients in recent years.However, perfect tissue repair and regeneration of damaged tissues and organs remain to be great challenges in the management of trauma and diseases.Based on the progress in developmental biology in animals and advances in stem cell biology, it is possible to attain the aim of perfect repair and regeneration by means of somatic cell reprogramming and different inducing techniques.
