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龟鹿二仙胶治疗骨关节炎的研究概况
骨关节炎是常见病、多发病,同时是难治性疾病.中医将本病病机归纳为“肝肾亏虚为本,气滞、血瘀、痰湿凝聚为标”,通过运用“补肝肾、强筋骨、活血、祛瘀、止痛”等中药来治疗骨关节炎,龟鹿二仙胶切中本病肝肾亏虚之本,已经在临床实践中取得肯定的疗效.文章将对龟鹿二仙胶治疗骨关节炎的实验研究情况作出概述,以便为中医治疗骨关节炎临床用药提供借鉴和思路.
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益胃饮对小鼠移植性前胃癌术后复发转移及MMP-9、BCL-2、VEGF的影响
目的:研究益胃饮治疗胃癌的可能作用机制,为临床应用益胃饮治疗胃癌提供理论依据.方法:①动物试验:通过建立小鼠肺转移瘤模型,研究益胃饮灌胃给药对615小鼠肺转移瘤形成与生长的影响；②免疫组化试验:通过对小鼠肿瘤标本免疫组织化学染色分析,研究益胃饮对肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、细胞黏附分子变异体6( CD44v6)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(BCL-2)表达的影响；③酶联免疫吸附试验:通过对小鼠血清酶联免疫吸附试验检测,研究益胃饮灌胃给药对荷瘤小鼠血清VEGF、MMP-9表达水平的影响.结果:益胃饮可抑制小鼠肺转移瘤的形成与转移,并抑制肿瘤组织表达VEGF、MMP-9和BCL-2,下调荷瘤小鼠血清VEGF、MMP-9表达水平.结论:益胃饮具有抑制胃癌细胞复发及肺转移作用,其分子机制可能是益胃饮抑制了MMP-9、BCL-2及VEGF的表达.
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再灌注期不同时间电针对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织中Bcl-2、Beclin1表达的影响
目的:比较再灌注期不同时间电针心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌组织中自噬相关蛋白Beclin1及其抑制凋亡因子Bcl-2的表达量,探讨电针保护缺血再灌注损伤心肌的自噬相关机制.方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、即时电针干预组(RA组)、0.5 h电针干预组(RB组)、1h电针干预组(RC组)和2h电针干预组(RD组),每组12只.除假手术组外,其余各组大鼠均采用结扎冠状动脉左前降支30 min后松开进行再灌注制备MIRI模型.假手术组不结扎,仅开胸用线穿过冠状动脉左前降支;模型组仅造模,不予其他处理;不同时间电针干预组选取双侧“内关”穴,分别于再灌注即时、0.5 h、1h、2h开始电针,各20 min.采用EvansBlue-TTC双染法观察各组大鼠心肌梗死面积,ELISA法检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,Westemblot法检测心肌组织Bcl-2、Beclin1蛋白表达.结果:与模型组相比,RB、RC、RD组心肌梗死面积百分比均减少(均P＜ 0.05),其中RB组较RC、RD组更为显著(均P＜ 0.05);与假手术组比较,模型组再灌注期的CK-MB含量与Beclin1表达均有显著升高,Bcl-2表达明显降低(均P＜ 0.01);与模型组相比,RA、RB、RC、RD组再灌注期的CK-MB含量与Beclin1表达均下降(P＜ 0.05,P＜ 0.01),Bcl-2的表达均有升高(均P＜ 0.01);与RA组比较,RB、RC组的CK-MB出现下降(均P＜ 0.05),Bcl-2上升(均P＜ 0.01),而与RD组比较差异无统计学意义(P＞ 0.05),其中RB组较RC组Bcl-2蛋白表达显著(P＜ 0.05);各电针组Beclin1比较,仅RB组较RA组出现下降(P＜ 0.05),其余各组间差异均无统计学意义(均P＞ 0.05).结论:再灌注期不同时间电针均可减少MIRI大鼠心肌梗死面积,其中以再灌注0.5 h进行电针干预效果为显著;该心肌保护效应可能是通过提高Bcl-2表达、降低Beclin1表达以抑制再灌注期的过度自噬而实现的.
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红花黄色素对人肝癌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响
目的:探讨红花黄色素(safflor yellow,SY)对MHCC-97H细胞凋亡及相关蛋白表达的影响.方法:选用MHCC-97H细胞体外培养至对敷生长期,加入不同浓度SY(0、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5 mg/L)进行体外培养,并设顺铂阳性对照组(终浓度0.5 μg/ml),分别干预24 h、48 h及72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察SY对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪观察细胞周期及凋亡率的变化,Western-blotting检测Bax、Bel-2蛋白表达情况.结果:MTT显示SY对人肝癌细胞MHCC-97H增殖有一定的抑制作用,与SY浓度及作用时间有相关性;流式细胞术显示,细胞凋亡率随SY浓度增加有上升趋势,细胞周期无明显变化:Western-blotting显示,随着SY浓度的增加,Bax表达增加,Bcl-2表达减少,而Bcl-2/bax比值下降.结论:SY对MHCC-97H细胞的生长有一定的抑制作用,但对细胞周期无明显阻滞作用,其可诱导该细胞凋亡,下调Bcl-2/Bax比值,可能为其促凋亡机制之一.
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栝楼薤白半夏汤预处理保护缺血再灌注大鼠心肌PI3K/Akt通路机制
目的:研究栝楼薤白半夏汤预处理对缺血再灌注大鼠心肌组织的保护作用及其机制是否与PI3K/Akt信号通路相关.方法:40只SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、预处理组、栝楼组.模型组及栝楼组大鼠行结扎冠状动脉左前降支30 min、再灌注2h的方法造模,并设预处理组为对照.预处理组造模方法为短暂缺血5 min、再灌注5 min,反复3次后行缺血30min、再灌注120 min.栝楼组给予中药汤剂栝楼薤白半夏汤灌胃,其余各组灌胃同体积的生理盐水.生化自动仪检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、cTnT(肌钙蛋白T)含量;采用免疫组化法检测心肌凋亡相关蛋白bax、bcl-2表达情况,采用免疫印迹法检测心肌组织的Akt、p-Akt表达.结果:栝楼组和预处理组血清CK-MB、LDH、cTnT含量及心肌组织的bax蛋白表达低于模型组,而bcl-2、p-Akt蛋白表达高于模型组.结论:栝楼薤白半夏汤预处理对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,通过激活PI3K/Akt信号通路,与调节凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白的表达有关.
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苦参碱体外诱导人结肠腺癌SW480细胞凋亡的实验研究
目的:观察苦参碱(MT)诱导人结肠腺癌细胞株SW480凋亡的作用并探讨其可能机制.方法:以不同浓度MT处理人结肠腺癌细胞株SW480,分别通过MTT法检测MT对SW480细胞的增殖抑制作用,光镜观察、Hochest 33258荧光染色观察MT对SW480细胞变化的影响,Annexin V -FITC法检测MT对SW480细胞凋亡的影响,荧光定量PCR法检测MT对SW480细胞中Caspase3、Bcl-2 mRNA表达的影响.结果:MT对体外培养的SW480细胞增殖具有明显的抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,48 h IC50=0.70mg· mL -1；光镜观察显示,凋亡细胞变圆,体积缩小,Hochest 33258荧光强染；经MT作用的SW480细胞,其Bcl-2表达低于正常组,Caspase3表达则显著高于正常组.结论:MT在体外能抑制SW480细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与诱导凋亡有关.
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宁神温胆汤对大鼠海马凋亡蛋白bax、bcl-2表达的影响
目的:探讨宁神温胆汤对精神分裂症模型大鼠海马神经细胞凋亡蛋白bax、bcl-2表达的影响.方法:随机将40只SD大鼠分为正常组、模型组、宁神温胆汤组、盐酸氯丙嗪组4组.各组分别给药,每天1次,共21d,后1d给药1h后,正常组腹腔注射生理盐水2mg· kg-1外,其他3组腹腔注射阿朴吗啡盐酸半水2mg· kg-1,观察15min后断头处死.结果:与模型组比较,宁神温胆汤组、氯丙嗪组bax降低,bcl-2升高,bcl-2/bax比值升高,差异具有统计学意义(P＜0.01～0.05).结论:宁神温胆汤能抑制海马区神经细胞的凋亡.
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注射砒霜大鼠的血清对白血病细胞凋亡及Bcl-2基因表达的影响
目的:探讨中药砒霜治疗白血病的作用机理.方法:运用血清药理学法孵育人白血病细胞株K562细胞,通过流式细胞术检测注射砒霜大鼠的血清对细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响.结果:注射砒霜大鼠的血清能使K562细胞G0-G1期细胞百分数减少,S期细胞百分数增加,Bcl-2表达减少,具有诱导k562细胞凋亡的作用.
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益气通络方对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达影响的血清药理学研究
目的：观察益气通络方含药血清对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达的作用。方法：采用流式细胞仪检测缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达强度。结果：1.缺氧24h、再给氧4h组心肌细胞bcl-2阳性表达比率增加，与正常对照组比较具有显著差异(P<0.01)；2.益气通络方低、中、高剂量含药血清组bcl-2阳性表达比率较单纯缺氧再给氧组增高，组间比较呈显著差异(P<0.01)。讨论：缺氧再给氧能诱导心肌细胞bcl-2基因表达，益气通络方含药血清可增强其表达，可能是益气通络方保护缺氧再给氧心肌细胞，发挥抗缺血再灌注损伤的重要机制之一。
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右归丸对肾阳虚大鼠卵巢细胞Caspase-3、 TNFα、Bcl-2、Bax表达的影响
目的:研究右归丸对大鼠卵巢卵泡细胞凋亡的影响与作用机理.方法:以雌性SD大鼠注射糖皮质激素造成肾阳虚模型,采用免疫组织化学方法观察了右归丸对肾阳虚大鼠卵巢的卵泡细胞TNF-α、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响.结果:在对大鼠卵巢卵泡细胞Bcl-2表达的影响上,右归丸低剂量组、金匮肾气丸组与模型组存在明显的差异(P＜0.05),右归丸低剂量组、金匮肾气丸组可通过上调bcl-2水平,发挥抑制凋亡的作用(P＜0.05),TNFα、Caspase-3、Bax也存在相应改变.结论:提示右归丸温阳补肾、填精补血的现代机理之一,可能与该药调节卵泡细胞凋亡途径上的Bcl-2、Caspase-3、Bax表达有关.同时中成药金匮肾气丸也具有相似的作用.
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参附强心丸对心肾综合征大鼠心肾Bcl-2/Bax抗凋亡作用机制研究
目的:基于大鼠心肾综合征(cardiorenal syndrome,CRS)模型,探讨参附强心丸对CRS大鼠心肾部位Bcl-2/Bax蛋白表达及抗凋亡的作用机制.方法:采用腹主动脉缩窄合并肾脏急性缺血再灌注致大鼠心肾综合征模型,大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、参附强心丸高、中、低剂量组、卡托普利对照组6组,给药4周后测定血液中脑钠肽、醛固酮、肌酐等,计算左肾、心室脏器指数,TUNEL法测定心、肾凋亡,免疫组化测定心、肾Bax、Bcl-2蛋白表达.结果:模型组大鼠血浆脑钠肽、醛固酮、肌酐、心室指数明显高于假手术组,肾素活性、左肾指数明显降低,组织凋亡明显.参附强心丸中剂量组脑钠肽、肌酐降低明显;高剂量组醛固酮明显降低,可明显改善心肌肥厚及左肾坏死萎缩状态,上调大鼠心肾组织Bcl-2表达,抑制Bax表达,降低心、肾细胞凋亡率.结论:参附强心丸高、中剂量组可以改善CRS大鼠肾功能、水钠潴留状态,通过上调Bcl-2表达,抑制Bax表达,降低心肾组织凋亡,起到对心肾的保护作用.
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青藤碱诱导人红白血病细胞株K562凋亡的实验研究
目的:通过青藤碱(Sinomeine,SlN)诱导K562细胞凋亡实验,研究SIN诱导K562细胞凋亡机制.方法:CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术(FMC)检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色细胞凋亡形态学改变,Real-time PCR检测bcl-2和bax基因表达,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达.结果:CCK-8和FCM结果显示,SIN可抑制K562细胞增殖并诱导其早期凋亡;Hoechst 33258染色结果显示,经SIN诱导48h后表现出细胞凋亡的典型变化;Real-time PCR结果显示,SIN组bax基因表达升高,bcl-2基因表达降低;Western blot结果显示,SIN组中Caspase-3、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低.结论:SIN可诱导K562病细胞凋亡从而抑制细胞增殖.
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补肾活血通淋方对良性前列腺增生症大鼠模型Bax、Bcl-2及Bax/Bcl-2的影响
目的:观察补肾活血通淋方对良性前列腺增生症大鼠模型Bax、Bcl-2及其比值的影响.方法:72只Wistar大鼠随机分为6组,即假手术组、模型组、保列治组、补肾活血通淋方低、中、高剂量组.除假手术组外,余组采用摘除大鼠双侧睾丸后连续注射丙酸睾丸酮30d的方法建立模型,在造模的同时给药组每天灌胃给药1次,连续30d.采用RT-PCR法测定Bax mRNA和Bcl-2mRNA的表达强度并计算其比值.结果:各治疗组Baxm RNA的相对表达量均高于模型组(P＜0.05),保列治组、补肾活血通淋方中、高剂量组BaxmRNA的相对表达量均高于补肾活血通淋方低剂量组(P＜0.05),补肾活血通淋方高剂量组Bax mRNA的相对表达量高于保列治组、补肾活血通淋方中剂量组(P＜0.05),各治疗组Bcl-2 mRNA的相对表达量均低于模型组(P＜0.05),补肾活血通淋方中、高剂量组BaxmRNA的相对表达量均低于补肾活血通淋方低剂量组和保列治组(P＜0.05).各治疗组Bax/Bcl-2均高于模型组(P＜0.05),保列治组、补肾活血通淋方中、高剂量组Bax/Bcl-2均高于补肾活血通淋方低剂量组(P＜0.05).补肾活血通淋方高剂量组Bax/Bcl-2高于补肾活血通淋方中剂量组和保列治组(P＜0.05).结论:补肾活血通淋方可以上调大鼠良性前列腺增生症模型Bax的表达,下调Bcl-2的表达,并能提高Bax/Bcl-2的比值,这可能是其治疗前列腺增生症的机制之一.
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青蒿琥酯治疗肝癌的机理初探
目的:研究青蒿琥酯抗肝癌的作用机理.方法:检测拓扑异构酶活性,甲基绿-派络宁染色检测凋亡细胞,免疫组化方法观察Bax、Bcl-2的表达.结果:经青蒿琥酯处理的SMMC-7721细胞拓扑异构酶活性增强,青蒿琥酯处理后,凋亡细胞明显增加,免疫组化显示,青蒿琥酯组肿瘤标本Bax蛋白阳性细胞数增多,Bcl-2蛋白阳性细胞数减少.结论:青蒿琥酯抗肝癌作用机理可能为上调Bax基因,下调Bcl-2基因,诱导癌细胞凋亡,同时影响拓扑异构酶活性.
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醒智散对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的改善作用及其机制
目的 观察醒智散对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的改善作用,并研究其可能的机制.方法 通过反复夹闭双侧颈总动脉同时腹腔注射硝普钠的方法制备血管性痴呆大鼠模型.然后将大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、醒智散小、中、大剂量组,每组20只.各组给予相应药物或溶媒,1次/d,连续7d.在第3d各组随机抽取10只大鼠进行脑内氧化损伤相关因子SOD、MDA以及凋亡抑制因子Bcl-2检测;第8d开始,给药同时用Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力;第14d学习记忆测试结束后,检测脑组织海马病理以及乙酰胆碱酯酶活性.结果 第3d:与假手术组比较,模型组大鼠脑内SOD、Bcl-2表达显著降低,MDA显著增加;与模型组比较,醒智散中、大剂量能提高脑内抗氧化因子SOD、抗凋亡因子Bcl-2的表达,降低氧化产物MDA的产生.第14d:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长,海马区存活海马神经元显著减少;与模型组比较,尼莫地平和醒智散中、大剂量能显著缩短血管性痴呆大鼠的逃避潜伏期,但没有显著影响乙酰胆碱酯酶的活性;尼莫地平和醒智散中、大剂量能显著降低海马神经元损伤,增加存活神经元数目.结论 醒智散对血管性痴呆大鼠学习记忆能力有改善作用,其机制可能与抗氧化、抗神经细胞凋亡有关.
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多烯紫杉醇对结肠癌HT-29细胞bcl-2和bax表达的影响
目的 观察多烯紫杉醇对结肠癌 HT-29 细胞株增殖和bcl-2 和bax 表达的影响.方法 采用体外常规培养结肠癌HT-29 细胞,以不同浓度多烯紫杉醇干预24h,观察细胞形态变化;MTT 法测定不同浓度药物对HT-29 细胞增殖的影响;RT-PCR 检测药物作用后的bax 和bcl-2 的表达.结果 多烯紫杉醇作用后,细胞数量明显减少,细胞变小,细胞增殖受到抑制,并呈现出量-效作用;bcl-2 的表达随药物浓度增加而减少,bax 的表达随药物浓度增加而增加.结论 多烯紫杉醇能明显抑制结肠癌HT-29 细胞的增殖,通过下调bcl-2 和上调bax 的表达来诱导细胞凋亡,起到抗HT-29 细胞的作用.
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温阳通脉方对大鼠心肌缺血再灌注RISK通路机制研究
目的：观察温阳通脉方对缺血再灌注大鼠心肌的保护作用及其可能机制。方法将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤组（IR组）、心肌缺血预适应组（IP组）、温阳通脉方组（WY组）。建立大鼠心肌缺血再灌注损伤（IR）模型及心肌缺血预适应（IP）模型。检测各组大鼠血清心肌坏死标记物肌钙蛋白T （cTnT）含量，免疫组化法检测心肌bax、bcl-2蛋白表达， western-blot检测akt、 p-akt表达。结果 WY组、 IP组血清cTnT含量低于IR组（P <0.05），高于假手术组（P<0.05）。 WY组、 IP组bax表达低于IR组（P<0.05）。 WY组和IP组bcl-2、 akt蛋白表达高于IR组（P<0.05）。 WY和IP组血清cT-nT含量及心肌bcl-2、 bax、 akt表达比较无统计学差异（P>0.05）。结论温阳通脉方预处理具有心肌保护作用，其保护机制可能与激活akt通路，上调bcl-2，抑制bax蛋白表达有关。
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葛根素对去卵巢大鼠海马CA1区神经元Caspase-3和Bcl-2表达的影响
目的：观察葛根素对去卵巢大鼠海马CA1区神经元Caspase-3和Bcl-2表达的影响,并探讨其作用机制。方法将SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组及葛根素高、中、低剂量组,除假手术组外,其余组均行去卵巢手术造模,各给药组给予相应药物腹腔注射,假手术组、模型组给予等生理盐水腹腔注射。采用免疫组化和RT-PCR法,观察去卵巢大鼠海马CA1区神经元Caspase-3和Bcl-2的表达。结果葛根素高剂量组大鼠海马CA1区Caspase-3表达明显减少(P＜0.05)；葛根素高、中剂量组大鼠海马CA1区Bcl-2表达明显增加(P＜0.05,P＜0.01),葛根素高剂量组大鼠海马CA1区Bcl-2 mRNA水平明显增加(P＜0.05)。结论葛根素能下调去卵巢大鼠海马CA1区神经元Caspase-3表达,上调Bcl-2表达,对神经元结构异变具有一定的保护作用。
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益气活血法对多发脑梗死性痴呆模型大鼠脑神经细胞凋亡调控基因的影响
目的观察益气活血法对多发脑梗死性痴呆模型大鼠脑神经细胞凋亡调控基因的影响.方法采用颈内动脉注射血栓的方法,复制多发脑梗死性痴呆大鼠模型,观察益气复智颗粒24.84、12.4、6.21 g/kg灌胃对实验动物脑组织bax和bcl-2基因蛋白表达及bax/bcl-2的影响.结果益气复智颗粒能抑制脑缺血后脑组织中bax基因蛋白的过度表达,并明显降低bax/bcl-2的比值.结论益气活血法及益气复智颗粒具有较好的调控脑缺血后基因蛋白表达的能力,可能是其抑制脑神经元凋亡的主要机理之一.
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辽东楤木叶总皂苷对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响
目的 探讨辽东楤木叶总皂苷(ETS)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响.方法 MTT法检测不同浓度(6.25、12.5、25、50、100、200 mg/kg)ETS培养的结肠癌HT-29细胞增殖率,Hoechst33258染色和激光共聚焦成像检测细胞凋亡,并观察凋亡细胞的形态学改变,免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 ETS可诱导HT-29细胞发生凋亡,且凋亡作用在一定范围内呈剂量依赖性;ETS可使HT-29细胞Bcl-2表达降低、Bax表达升高(P<0.05,P<0.01),且呈明显的量效关系.结论 ETS可诱导HT-29细胞凋亡,其凋亡机制可能与降低Bcl-2、升高Bax的表达相关.
