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温和灸对自然衰老模型大鼠肝组织Rb、P53、Bcl-2、PKC表达的影响
目的 研究温和灸对自然衰老大鼠肝组织Rb、P53、Bcl-2、PKC蛋白及其mRNA表达的影响.方法 24只SD大鼠随机分为正常组、自然衰老组、艾灸组.正常饲养20个月,待其自然进入衰老期以制备自然衰老大鼠模型,温和灸自然衰老大鼠双侧肾俞穴对其进行干预.应用原位杂交、免疫组化方法检测各组大鼠肝组织Rb、P53、Bcl-2、PKC mRNA及其蛋白表达.结果 与正常组比较,自然衰老组大鼠肝组织Rb、P53 mRNA及蛋白表达均显著增强(P<0.01,P<0.05),Bcl-2、PKC mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01,P<0.05);与自然衰老组大鼠比较,艾灸组大鼠肝组织Rb、P53 mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01,P<0.05),Bcl-2、PKC mRNA及蛋白表达均显著增强(P<0.01,P<0.05).结论 温和灸肾俞穴能降低自然衰老大鼠肝组织Rb、P53 mRNA及蛋白表达,增强Bcl-2、PKC mRNA及蛋白表达.
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艾灸对Alzheimer病模型大鼠行为学及海马区Bcl-2、Bax、Caspase-3影响的研究＊
目的：探讨艾灸治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)的作用机制。方法：40只15月龄健康雄性SD大鼠，随机分为正常组、模型组、艾灸组及假手术组。模型组及艾灸组大鼠采用双侧海马立体定向注射聚集态Aβ25-35制作AD模型，假手术组大鼠双侧海马区注射等量生理盐水。造模成功后，在艾灸组大鼠的“肾俞”、“足三里”与“百会”穴上方2-3cm处施予温和灸治疗。正常组大鼠不做任何处理。Morris水迷宫法测定其学习记忆能力，免疫组化法观察艾灸对AD大鼠海马区细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。结果：模型组大鼠5天逃避潜伏期，后3天逃避潜伏期均明显延长，跨越原平台位置的次数明显减少，大鼠海马区Bax、Caspase-3表达较正常组、假手术组明显升高，Bcl-2表达明显降低（P<0.01）。艾灸组大鼠5天逃避潜伏期和后3天逃避潜伏期均明显缩短，跨越原平台位置的次数明显增多，大鼠海马区Bax、Caspase-3表达较模型组显著下降，Bcl-2表达显著升高（P<0.01）。结论：艾灸治疗AD的作用机制，可能是通过减轻促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的释放,促进抗凋亡蛋白Bcl-2的产生，从而改善Aβ所致的大鼠学习记忆障碍。
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绞股蓝总皂甙对肝细胞瘤细胞凋亡的诱导作用
目的:探讨绞股蓝总皂甙(Gp)对人肝细胞瘤细胞(Huh-7)细胞凋亡的影响及作用机制.方法:采用流式细胞术检测Gp对人Huh-7细胞凋亡的影响,Western blot分析Gp作用Huh-7细胞后表达的Bcl-2,Bcl-XL,Bax和Bad蛋白水平.结果:20mg/ml Gp作用于细胞24h后,64%的Huh-7细胞发生凋亡,而人纤维细胞凋亡率为12%.Western blot结果显示Gp作用后Huh-7细胞中Bcl-2表达明显降低,而Bax表达显著上调.结论:Gp可诱导人Huh-7细胞凋亡,其作用机制是通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而发挥作用.
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养肝和血方对初老雌性大鼠卵巢Bcl-2和Bax表达的影响
目的 探讨养肝和血方对初老雌性大鼠卵巢Bcl-2和Bax表达的影响,并以此论证在围绝经前期从肝论治的思想.方法 通过阴道细胞学观察,选择10～11个月龄自然衰老雌性大鼠30只,随机分为模型对照组、六味地黄汤组、养肝和血方组,另选4个月龄的雌性大鼠10只为青年对照组.灌胃3周后,采用免疫印迹法(Western-blot法)检测各组大鼠卵巢细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 与模型对照组、六味地黄汤组比较,养肝和血方组卵巢细胞Bcl-2蛋白表达明显增高,Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2/Bax比值增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 养肝和血方有抑制初老雌性大鼠卵巢细胞凋亡作用,可能是养肝和血方延缓卵巢衰老的机制之一.
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瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌Biu-87细胞Bcl-2表达的影响
目的：研究瑞香狼毒水提取物（ S tellera chamaejasme L inn，SCLA）对人膀胱癌Biu-87细胞（ Biu-87 human bladder cancer cell，Biu-87）的细胞毒性作用及对B淋巴细胞瘤/白血病-2（ B-celllymphoma/leukemia-2，Bcl-2）蛋白表达的影响，进而讨论瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌细胞增殖的抑制机制。方法用瑞香狼毒水提取物作用于人膀胱癌Biu-87细胞，观察不同药物浓度，不同作用时间的细胞增殖情况。以WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（ WST-1 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit，WST-1）检测瑞香狼毒水提取物对膀胱癌细胞生长的抑制率；流式细胞术检测人膀胱癌Biu-87细胞凋亡情况；蛋白质印迹法（ Western blot，WB）测定不同浓度瑞香狼毒水提取物作用后的人膀胱癌Biu-87细胞中Bcl-2蛋白的表达情况。结果经瑞香狼毒水提取物作用后人膀胱癌Biu-87细胞的增殖受到抑制；该水提取物促进人膀胱癌Biu-87细胞凋亡；Bcl-2蛋白在人膀胱癌Biu-87细胞的表达随药物浓度的增加而减少。结论瑞香狼毒水提取物可抑制人膀胱癌Biu-87细胞增殖，通过减少Bcl-2的表达从而抑制该细胞株增殖，促进其凋亡。随着药物浓度的增加、作用时间的延长，对人膀胱癌Biu-87细胞的抑制作用更加明显。
关键词： 瑞香狼毒 人膀胱癌Biu-87细胞 Bcl-2 -
新加良附方联合5-Fu对裸鼠胃癌移植瘤Bax/Bcl-2表达的影响
目的 观察新加良附方联合5-Fu对人胃癌细胞(SGC-7901)裸鼠移植瘤生长抑制作用及对肿瘤组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响.方法 建立移植性人胃癌细胞(SGC-7901)裸鼠移植瘤模型,随机分为模型对照组、5-FU组及新加良附方高、中、低剂量组、联合给药组.连续给药10 d.计算肿瘤抑制率,检测Bax/Bcl-2蛋白表达.结果 联合给药组抑瘤率为70.07%,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与5-Fu组和新加良附高剂量比较,联合给药组抑瘤率明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);联合给药组上调肿瘤组织Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);与5-Fu组和新加良附高剂量组比较,联合给药组Bax蛋白表达升高明显(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达下降明显(P＜0.05).结论 联合给药组抑瘤率高于单独给药组,在下调Bcl-2、上调Bax表达方面优于单独给药组,显示两药协同作用的优势.
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电针内关对心肌缺血再灌注损伤大鼠腺苷及bcl-2基因表达的影响
目的:通过研究电针内关对心肌缺血再灌注损伤过程中内源性保护物质腺苷(Ado)及细胞凋亡调控基因bcl-2的影响,阐明电针内关抑制心肌缺血再灌注损伤的作用机理.方法:在大鼠冠状动脉左前降支根部穿线建立心肌缺血再灌注损伤模型,电针内关穴,检测血清中腺苷含量,分析凋亡细胞基因的表达.结果:内关穴组血清Ado含量高于模型组(P＜0.01);模型组bcl-2蛋白表达的阳性率较低,电针内关组阳性表达率明显增高,与模型组比较均有非常显著性意义(P＜0.01).结论:电针内关穴可促进内源性保护物质腺苷的释放,且可对凋亡的调控基因bcl-2的生成有促进作用,从而在一定程度上对心肌缺血再灌注损伤心肌起到保护作用.
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扶正抗癌方对Lewis肺癌荷瘤小鼠肺癌基因Bcl-2、抑癌基因Bax及血管内皮生长因子、表皮生长因子受体、金属蛋白酶表达的影响
目的:观察扶正抗癌方对小鼠Lewis肺癌抗转移机制的影响.方法:选取C57BL/6小鼠50只,雌雄各半,每只小鼠腋窝下接种肿瘤细胞0.2 mL造模,24 h后,完全随机分为对照组、顺铂组、扶正抗癌方低、中、高剂量组,每组10只.分别给药21 d后取出完整肿瘤组织称重计算抑瘤率,同时用实时荧光定量PCR检测Lewis肺癌组织Bcl-2和Bax mRNA的表达,免疫组化检测Lewis肺癌组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,用蛋白质印迹法(WB法)检测Lewis肺癌组织血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达.结果:与模型组小鼠比较,扶正抗癌方药可以呈剂量依赖性抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长,显著升高Lewis肺癌组织中Bax mRNA表达,降低Bcl-2 mRNA、MMP-9蛋白表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组在升高Lewis肺癌组织中Bax mRNA表达、降低Bcl-2 mRNA表达方面与顺铂组比较,差异有统计学意义(P<0.05).同时模型组Lewis肺癌组织中VEGF、EGFR表达显著升高,扶正抗癌方药可显著降低Lewis肺癌组织中VEGF、EGFR表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),与顺铂组比较,无统计学意义(P>0.05).结论:虽然扶正抗癌方总体上较顺铂作用偏弱,但依然能有效抑制肺癌细胞增殖,抑制肺癌细胞Bcl-2基因的表达,激活Bax的高表达,下调肺癌细胞中VEGF、EGFR、MMP的表达.
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"嗅三针"对阿尔茨海默病鼠海马Bcl-2和Bax表达的干预效应
目的:探讨"嗅三针"通过嗅觉通路对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元细胞凋亡的影响,以阐明其治疗AD的作用机制.方法:成年SD雄性大鼠40只,随机分为正常对照组、AD模型组、嗅神经切断嗅三针组、嗅三针组,每组10只.β-淀粉样蛋白(Aβ1-40肤段注射法制作AD大鼠模型,嗅神经切断术造大鼠嗅觉通路阻断模型."印堂"穴及两侧"迎香"穴交替电针刺激行"嗅三针"治疗,每次10min,每周治疗5次,共治疗6周.免疫组化法检测海马Bcl-2和Bax表达.结果:AD模型组较正常对照组Bcl-2阳性细胞减少(P<0.05),Bax阳性细胞表达增多(P<0.01);嗅三针组较AD模型组Bcl-2阳性细胞明显增多(P<0.01),Bax阳性细胞显著减少(P<0.01);嗅神经切断嗅三针组与AD模型组比较Bcl-2,Ba x阳性细胞变化不明显(P>0.05).结论:"嗅三针"能够调节海马Bcl-2和Bax的表达,其治疗效应的发挥依赖于嗅觉传导通路的完整性.
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头皮针对脑缺血再灌注大鼠缺血区脑组织bcl-2、caspase-3蛋白表达以及血液流变的影响
目的:探讨头皮针治疗缺血性脑卒中的作用机制.方法:48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组,每组16只.采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.针刺组取顶颞前斜线和顶颞后斜线,分别在造模后6、12、24 h治疗,每次电针20 min.运用免疫组化法观察再灌注24 h后各组大鼠缺血区脑组织bcl-2、caspase-3蛋白的表达,全自动血流变仪测定血液流变各项指标表达情况.结果:脑缺血再灌注后大鼠海马回bcl-2和caspase-3蛋白表达明显升高(均P＜0.05),全血黏度和红细胞聚集性明显升高(均P＜0.05);针刺组和模型组比较,大鼠缺血区脑组织bcl-2表达水平增高,caspase-3表达水平降低(均P＜0.05),针刺组大鼠全血黏度和红细胞聚集性明显低于模型组(均P＜0.05).结论:头皮针刺可以明显促进大鼠缺血区脑组织抑凋亡蛋白的表达,同时降低促凋亡蛋白的表达,改善血液流变性,这可能是针刺减轻脑缺血损伤的机制之一.
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穴位注射对脑缺血再灌注大鼠海马回Bcl-2、Bax蛋白表达以及血液流变学的影响
目的:探讨穴位注射对脑缺血的改善作用及其机制.方法:48只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、穴位注射组.采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.穴位注射组分别在造模后6、12、24 h在"百会""大椎"穴进行复方当归注射液穴位注射.运用免疫组化法观察再灌注24 h后各组大鼠脑组织缺血区海马回Bcl-2、Bax蛋白表达情况,用全自动血流变仪测定全血黏度、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数和红细胞变形指数.结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马回细胞Bcl-2和Bax表达增高(P<0.05),全血黏度、红细胞聚集指数和刚性指数增高(P<0.05),红细胞变形指数降低(P<0.05);与模型组比较,穴位注射组大鼠海马回细胞Bcl-2表达水平增高(P<0.05),Bax表达水平降低(P
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针刺对高血脂合并脑缺血大鼠海马区Bcl-2、Bax蛋白表达的影响
目的:探讨针刺对高血脂合并脑缺血损伤大鼠海马区Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗组,每组10只.采用经典高脂配方饲料喂养并结合化学刺激诱导血栓性闭塞大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血联合模型.高血脂模型造成后先电针"三阴交""丰隆",每日1次,治疗 10 d,然后再造脑缺血模型,同时针刺"百会""水沟",及电针"三阴交""丰隆",每日1次,共治疗 7 d.治疗结束后,应用免疫组化方法观察针刺前后大鼠海马区Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果:大鼠局灶性脑缺血后Bcl-2表达降低,Bax表达升高,Bcl-2/Bax比值下降(均P＜0.01);针刺后脑缺血大鼠Bcl-2表达增加(P＜0.05), Bax表达降低(P＜0.01), Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.01).结论:针刺能增强Bcl-2的表达,抑制Bax的表达,这可能是针刺减轻脑缺血损伤的机制之一.
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基于心脑相关理论探讨电针心经、心包经穴对大脑中动脉梗阻大鼠心、脑细胞凋亡的影响
目的:比较电针手厥阴心包经“内关”、手少阴心经“神门”、督脉“水沟”以及足少阴肾经“照海”对大脑中动脉梗阻(MCAO)大鼠的干预效应及对心脑细胞凋亡相关因子的影响,初步探讨电针心包经、心经与心脑的相关性.方法:SD大鼠随机分为内关组、神门组、水沟组、照海组、模型组及正常组,每组8只,采用颈外动脉插入线栓法建立MCAO大鼠模型,各穴位组分别在造模后每12 h电针治疗1次,共治疗5次.采用免疫组化染色法检测各组心肌及脑组织细胞凋亡百分比及Bax、Bcl-2表达的变化.结果:与正常组比较,模型组心、脑组织细胞凋亡百分比、促凋亡因子Bax的表达均增多(P＜0.01).与模型组比较,内关组、神门组心、脑细胞凋亡百分比均不同程度减少(P＜0.01,P＜0.05),水沟组脑细胞凋亡百分比减少(P＜0.05);内关组、神门组、水沟组脑组织Bax的表达减少(P＜0.05),Bcl-2的表达增高(P＜0.01,P＜0.05);内关组心肌Bax的表达减少(P＜0.05),内关组、神门组心肌Bcl-2表达增多(P＜0.01,P＜0.05).与照海组比较,内关组心、脑细胞凋亡指数、Bax表达均减少(P＜0.01,P＜0.05),神门组心肌细胞凋亡的指数减少(P＜0.05);内关组、水沟组脑组织Bcl-2表达高于照海组(P＜0.05),内关组、神门组心肌Bcl-2表达高于照海组(P＜0.01,P＜0.05).结论:脑缺血损伤继发心肌损害提示脑病及心,脑心二者之间具有密切的病理相关性.而针刺心包经、心经可较好地抑制脑心细胞凋亡.
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针刀、电针和圆利针对膝骨关节炎模型兔股直肌Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响
目的:从细胞凋亡角度探讨不同干预方法对制动致关节损伤的治疗机制.方法:6月龄新西兰兔随机分为正常组、模型组、针刀组、电针组和圆利针组,每组9只,用改良的Videman左后肢伸直位固定制动法建立兔膝关节损伤模型.电针组电针左侧“阳陵泉”-“阴陵泉”“内膝眼”-“外膝眼”,每次20 min,隔日1次,每周3次,共3周;针刀组从兔左侧内、外侧副韧带及髌韧带的中点前缘进针,刀口线与韧带方向平行,分别松解5次,每周1次,共3次;圆利针进针点与针刀组一致,分别松解5次,每周1次,共3次.分别于造模后4、8和12周各时间窗评定各组兔双侧膝关节被动活动范围.采用Western blot法检测各组兔患肢股直肌B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平.结果:造模后4周出现稳定的实验性膝骨关节炎兔模型.造模后4、8、12周时,与正常组比较,模型组兔患侧膝关节被动活动度明显降低(P＜0.01);治疗结束后,与模型组相比,针刀组、电针组和圆利针组兔患侧膝关节被动活动度显著提高(P＜0.01).各组患肢股直肌Bcl-2蛋白表达的变化差异无统计学意义(P＞0.05).模型组患肢股直肌Bax、Caspase-3蛋白表达较正常组明显升高(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值明显降低(P＜0.05);针刀组、圆利针组Bax、Caspase-3蛋白表达较模型组明显降低(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值明显升高(P＜0.05);电针组上述各指标的变化与模型组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:针刀、圆利针和电针干预膝骨关节炎兔均有治疗效果,针刀和圆利针可通过下调Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2/Bax比值抑制膝骨关节炎兔股直肌细胞凋亡,从而发挥治疗作用,这与电针治疗关节损伤的机制存在差异.
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巴戟天多糖含药血清对体外培养成骨细胞凋亡的保护作用观察
目的:通过体外培养成骨细胞(osteoblast,OB),观察巴戟天多糖对细胞凋亡的保护作用,探讨巴戟天促进成骨细胞活性的机制.方法:取巴戟天多糖和巴戟天水提液制备含药血清,用含药血清进行细胞培养.取24 h内新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,取2代培养的成骨细胞,分为对照组(培养过程中仅加入大鼠血清)、诱导凋亡组(对照组中加入全反式维甲酸)、巴戟天水提物组(诱导凋亡组中加入巴戟天水提物药物血清)、巴戟天多糖组(诱导凋亡组中加入巴戟天多糖药物血清),通过荧光显微镜观察,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2/Bax基因表达,对巴戟天多糖在细胞凋亡过程中的作用进行评价.结果:诱导凋亡组12 h诱导的OB出现凋亡,细胞核或细胞质内可见致密的黄绿染色,染色质形成明亮的凝聚块,24 h单个凋亡细胞与周围的细胞分离,细胞皱缩呈圆形或卵圆形,细胞变小,胞浆致密,细胞器相互靠近,染色质浓缩,形成不同形状和大小的块状.巴戟天水提物组、巴戟天多糖组凋亡率显著低于诱导凋亡组(P＜0.01),且巴戟天多糖组低于巴戟天水提物组(P＜0.05).凋亡细胞Bcl-2 mRNA表达水平:对照组＞巴戟天多糖组＞巴戟天水提物组＞诱导凋亡组.Bax mRNA表达水平:诱导凋亡组＞巴戟天水提物组＞对照组＞巴戟天多糖组(P＜0.01).Bcl-2/Bax:对照组＞巴戟天多糖组＞巴戟天水提物组＞诱导凋亡组(P＜0.01).结论:巴戟天在一定程度上可抑制全反式维甲酸诱导的成骨细胞凋亡,且巴戟天多糖的这种作用显著优于巴戟天水提物,说明巴戟天多糖是巴戟天抑制成骨细胞凋亡的主要成分之一.
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大剂量甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞Bcl-2表达及细胞凋亡的影响
目的:观察大剂量甲基强的松龙(MP)治疗对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后神经细胞凋亡及凋亡基因Bcl-2的影响.方法:选取48只雌性SD大鼠随机等分为2组,对照组与治疗组,按Nystrom法制备大鼠急性脊髓损伤模型.治疗组伤后30 min经腹膜腔注入MP 30 mg/kg,以后每小时腹膜腔注入MP 5.4 mg/kg,维持24 h;对照组应用生理盐水替代MP,处理方法同治疗组.两组分别于伤后4、8 h及1、3、7、14d灌注固定后取材.免疫组织化学检测损伤段脊髓内Bcl-2蛋白表达,TUNEL检测细胞凋亡,染色结果应用图像分析仪进行半定量分析.结果:大鼠ASCI后4 h即可见脊髓内TUNEL阳性细胞,8h表达达高峰,此后表达量逐渐下降,14d时仍可见少量阳性细胞.凋亡相关蛋白Bcl-2在伤后4 h即可见表达,伤后1 d达高峰,伤后14 d仍有表达.与对照组相比,治疗组伤后8 h、1 d和3 d时凋亡细胞数减少有统计学意义,伤后8 h和1 d Bcl-2蛋白表达增高有统计学意义.结论:大剂量甲基强的松龙治疗可抑制大鼠ASCI后神经细胞凋亡,并增加凋亡相关蛋白Bcl-2的表达.
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骨髓基质细胞在椎间盘退变中的应用
骨髓基质细胞具有很强的自我更新和多向分化潜能,在不同体外环境下,可诱导多胚层来源的细胞,如:骨细胞、软骨细胞、神经细胞等.椎间盘退变是脊柱退行性疾病及继发病变的基础,临床上十分多见,目前的治疗方法虽然很多,但均不是真正针对椎间盘退变的病理生理过程.骨髓基质细胞的细胞治疗和基因治疗作为椎间盘退变治疗的一种新方法,从根本上阻止和逆转椎间盘退变,必将成为治疗椎间盘退变的佳途径.
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丹蒌片对心肌梗死大鼠心肌Bcl-2,Caspase-3表达的影响
目的:观察丹蒌片对异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)所致急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)大鼠心肌梗死面积和心肌原癌基因Bcl-2 (B-cell lymphoma leulemia-2,Bcl-2)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartates pecific proteinase-3,Caspase-3)表达的影响.方法:雄性Wistar大鼠40只随机分为4组:空白组(生理盐水10 mL·kg-1)；模型组(生理盐水10 mL·kg -1)；丹蒌高剂量组(900mg·kg-1)；丹蒌低剂量组(450 mg·kg-1),各组10只,连续ig 14 d.14 d后除空白组以外,其他各组一次性sc Iso 15 mg·kg-1制备急性心肌梗死模型.造模后24h观测心肌病理形态学、梗死面积、心肌Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平.结果:与模型组比较,丹萎片900 mg·kg-1可明显减轻缺血心肌病理损害程度,缩小心肌梗死面积[2组依次为(2.185±0.637)％及(1.224±0.365)％,P＜0.01],上调缺血心肌Bcl-2积分吸光度(IA):(27.32±7.00及42.41±8.13,P ＜0.01)蛋白表达,下调心肌Caspase-3积分吸光度(IA):(38.40±6.33及26.26±6.79,P＜0.01)蛋白表达.结论:丹萎片通过上调心肌Bcl-2蛋白表达,下调Caspase-3蛋白表达,减轻心肌细胞凋亡,减少心肌梗死面积,保护心肌缺血损伤.
关键词： 丹蒌片 心肌梗死 心肌凋亡 Bcl-2 半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3 -
巴豆生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及Bax,Bcl-2蛋白表达的影响
目的:研究巴豆牛物碱(croton seed alkaloid,CA)对人肝癌SMMC-7721细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.方法:不同浓度CA分别处理SMMC-7721细胞24～48 h后,MTT法检测细胞的生长活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达.结果:10～200 mg·L-1 CA均能抑制SMMC-7721细胞增殖(P＜0.05),其抑制率与作用时间及浓度相关;CA作用SMMC-7721细胞24 h后,对照组凋亡率为(0.26±0.14)%,10,50,100,200 mg·L-1 CA组细胞凋亡率分别为(5.85±0.47)%,(17.70±1.23)%,(33.25±2.08)%,(49.52±1.85)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果提示经CA作用24 h后,随着药物浓度的增加,Bax的表达逐渐增加,而Bcl-2的表达逐渐减少.结论:CA能抑制SMMC-7721细胞的生长并促进其凋亡,其发生与Bcl-2蛋白的减少和Bax蛋白表达增多有关.
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地黄寡糖对血管性痴呆大鼠海马区神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响
目的:探讨中药提取物地黄寡糖(rehmannia glutinosa oligosaccharides,ROS)对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响.方法:选用SD成年大鼠,随机分为伪手术组、模型组和地黄寡糖高、低剂量组(9.0,45 g·kg-1·d-1).采用双侧颈总动脉缺血再灌注法制作血管性痴呆大鼠模型,采用行为学评分法评价大鼠的行为学障碍程度,HE染色法观察大鼠海马CA1区病理组织形态学变化,TUNEL法检测大鼠海马CA1区的神经元细胞凋亡情况,免疫组化法检测大鼠海马区凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-相关x蛋白(Bax)的表达含量的变化,并检测大鼠海马组织匀浆中神经毒性氨基酸谷氨酸及海马组织和血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量.结果:ROS能够显著改善缺血再灌注型血管性痴呆的大鼠的行为学障碍,降低其行为学评分(P＜0.01),减轻海马CA1区神经组织的病理性改变,降低神经元凋亡细胞比例(P＜0.01),并显著升高血管性痴呆大鼠海马CA1区神经元细胞中Bcl-2蛋白表达(P＜0.01)、降低Bax蛋白表达(P＜0.01),Bcl-2/Bax显著升高,从而抑制了该区域神经元细胞的凋亡.此外,ROS给药能够显著减少血管性痴呆大鼠血清及海马组织中MDA的积累(P＜0.01),提高SOD的活性(P＜0.01),降低海马组织中谷氨酸的水平(P＜0.01).结论:ROS能够显著减少脑缺血再灌注损伤所致的大鼠海马CA1区神经元凋亡,其作用机制可能是通过调控Bcl-2/Bax相关蛋白的表达来实现的.此外与ROS减少组织中谷氨酸的水平和MDA的含量,提高SOD活性等,也提示ROS对血管性痴呆有一定的治疗作用.
