首页 > 文献资料
-
沙苑子总黄酮对白血病细胞Ⅲ-60的增殖抑制作用及对p53表达的影响
目的:观察沙苑子总黄酮(FAC)对人急性早幼粒白血病细胞株HL-60的增殖抑制作用、诱导凋亡作用以及对p53蛋白表达的影响.方法:用SRB法检测不同浓度FAC作用于HL-60不同时间后的增殖抑制作用;选择作用较强的浓度处理HL-60细胞,在不同时间点收集细胞,用流式细胞术和Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;免疫荧光法检测HL-60细胞p53蛋白含量.结果:FAC对HL-60有明显的增殖抑制作用,在浓度为0.25 mg/ml作用24h、36h、48h后以及0.125 mg/ml与0.063mg/ml作用36h、48h后对HL-60都有明显的抑制作用.在0.63mg/ml、0.125mg/ml、0.25mg/ml浓度FAC作用36h后,其细胞凋亡率分别为38.3%、49.6%、57.9%,FAC诱导细胞凋亡具有剂量-效应关系和时间-效应关系.经Hoechst染色可见细胞染色质固缩,细胞膜完整等凋亡改变.免疫荧光检测HL-60细胞p53蛋白表达增高.结论:FAC具有抑制HL-60增殖作用,其作用在一定范围内呈剂量-效应关系以及时间-效应关系,其作用机制可能是通过提高p53蛋白表达诱导HL-60细胞凋亡.
-
姜黄挥发油抗肿瘤作用机制研究
目的:探讨姜黄挥发油抗肿瘤作用.方法:运用体外培养细胞MTT法观察姜黄挥发油对肿瘤细胞的抑制作用及对BALB/C小鼠脾细胞增殖的影响.结果:姜黄挥发油能抑制人急性早幼粒白血病细胞株HL-60和肝胚细胞癌HepG2细胞株的增殖,并能促进BALB/C小鼠脾细胞的增殖.结论:姜黄挥发油对肿瘤有明显抑制作用,且能增强免疫功能.
-
Caspases在ω-3脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL-60细胞凋亡中的作用
目的探讨ω-3脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL-60细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶(Caspases)之间的关系.方法已证实转染带有脂肪酸受体反应元件的跨膜型TNFα表达载体(pPPRE-tmTNFα)后,HL-60细胞可在ω-3脂肪酸诱导下高效表达跨膜型TNFα.运用MTT比色法、DNA梯形带检测、RT-PCR和免疫印迹技术分析ω-3脂肪酸对转染细胞增殖能力和凋亡的影响,以及细胞Caspase-1、3、8和9基因的表达变化,检测Caspase-8活性以及Caspases特异性抑制剂对肿瘤细胞凋亡效应的拮抗作用.结果HL-60细胞经ω-3脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,可检测到DNA梯形带形成,Caspase-1、3、8和9基因表达增加,Caspase-8活性增高,上述变化在转染细胞中更为显著,Caspases抑制剂可以部分拮抗ω-3脂肪酸联合跨膜型TNFα对HL-60诱导凋亡和抑制增殖的作用.结论ω-3脂肪酸可以联合跨膜型TNFα更有效的诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,而上调Caspases的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用.
-
视黄酸依赖Fas/RARα融合基因转染HL-60细胞启动的凋亡效应研究
目的检测视黄酸依赖Fas/RARα表达载体转染HL-60细胞启动的凋亡效应.方法成功构建视黄酸依赖Fas/RARα表达载体,用脂质体转染HL-60白血病细胞,经四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiaol-2-yl)- 2,5- diphenyl tetrazolium bromide, MTT]、流式细胞、DNA梯形带和透射电镜等方法观测视黄酸处理后细胞凋亡效应的发生.结果以一定剂量的视黄酸处理HL-60后,细胞增殖受抑,呈凋亡性变.结论视黄酸及其依赖的融合基因表达可协同诱导HL-60细胞发生凋亡效应.
-
TGF-β1诱导HL-60细胞株凋亡作用的研究
为探讨转化生长因了β1(TGF-β1)在体外诱导早幼粒细胞白血病细胞株(HL-60)凋亡的作用及其相关的细胞和分子机制,本实验以TGF-β1在体外对HL-60细胞株作用,通过电镜、TUNEL法、流式细胞仪、免疫细胞化学等实验方法,观察TGF-β1对HL-60细胞株凋亡的诱导作用,以及相关基因的表达变化.实验发现TGF-β1可显著诱导HL-60细胞凋亡,TGF-β1下调HL-60细胞bcl-2、c-myc基因的表达可能是其诱导凋亡的分子机制之一.
-
姜黄素对人急性髓性白血病细胞的作用及机理的初步探讨
目的探讨姜黄素对急性髓性白血病细胞(HL-60)增殖和细胞周期的调控及细胞凋亡的影响.方法采用MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对HL-60的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期分布;透射电镜观察细胞的超微结构变化.结果姜黄素可抑制HL-60细胞的生长,其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系;中效浓度(IC50)为24.8 μmol/L时,流式细胞仪分析证实姜黄素能使HL-60细胞聚积在S期、G2/M期;电镜观察发现姜黄素可使HL-60细胞超微结构发生改变.结论姜黄素可干扰HL-60细胞的周期分布,具有抗细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用.
-
米托蒽醌对HL-60细胞生长的影响
目的探索米托蒽醌(MTN)对HL-60细胞生长的影响.方法取对数生长期HL-60细胞,不同浓度MTN作用不同时间后,利用MTT法观察MTN对HL-60细胞的抑制效应,透射电镜、DNA电泳观察MTN作用HL-60细胞后其形态学及DNA的变化.结果 (1)毫微克级的MTN对HL-60细胞有明显的抑制效应,且此效应具有时间、剂量依赖关系.(2)MTN作用后的HL-60细胞透射电镜观察胞膜完整、出现核碎裂、凋亡小体等形态学特征.DNA电泳出现200bp左右的梯形条带.结论 MTN对HL-60细胞有明显的抑制作用.小剂量的MTN对HL-60细胞以诱导细胞凋亡为主,大剂量的MTN对HL-60细胞以细胞毒作用为主.
-
苯的代谢产物氢醌改变细胞氧化还原状态诱导TNF-α表达
目的:研究苯的代谢产物氢醌(HQ)对HL-60细胞TNF-α产生和细胞活性的影响,并探讨这种影响是否通过氧化还原调节来实现.方法:HL-60细胞用不同浓度HQ刺激24 h后,收集细胞及培养液上清,检测细胞内活性氧、氧化型/还原型谷胱甘肽含量,CCK8检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,ELISA法检测TNF-α含量.结果:5 μmol/L HQ即可诱导GSH水平增高,抑制HL-60细胞增殖,但对GSH/GSSG比例,TNF-α表达及细胞凋亡无显著影响.50、 100 μmol/L HQ可破坏细胞内氧化还原状态,GSH/GSSG比例下降,TNF-α表达增高,显著抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸能拮抗HQ诱导的TNF-α表达、增殖抑制及细胞凋亡.结论:HQ可通过改变HL-60细胞内氧化还原状态诱导TNF-α表达,导致细胞凋亡.
-
Embelin 通过上调死亡受体DR4/DR5mRNA表达增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性
目的:探讨Embelin增加HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的敏感性及可能的作用机制.方法:TRAIL 1、5、10、50及100 ng/ml分别处理HL-60细胞6、12、24及48h,MTT法绘制细胞生长曲线;TRAIL 10 ng/ml±亚细胞毒浓度的Embelin处理HL-60细胞6、12、24及48h,Annexin V/PI复染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测24h时Caspase-3、8及9的表达;亚细胞毒浓度的Embelin处理HL-60细胞6、12、24及48h,实时荧光定量PCR检测DR4及DR5 mRNA 的表达.结果:TRAIL对HL-60 细胞具有增殖抑制作用.亚细胞毒浓度的Embelin联合10 ng/ml TRAIL作用于HL-60细胞时细胞凋亡率较单独应用TRAIL时增加,相应的Caspase-3、8及9的表达也随之增加.结论:亚细胞毒浓度的Embelin可以增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与上调DR4及DR5 mRNA表达并进而启动凋亡途径有关.
-
突变型IκBα对HL-60细胞凋亡和分化的影响
目的:探讨缺失突变型IκBα对HL-60细胞凋亡和分化的影响.方法:通过脂质体技术,将pCLX-IκBα△N重组载体质粒DNA转移到HL-60细胞并于转染48小时和72小时后,分别分析AnnexinV和PI以及CD11b的表达.结果:转染后,Annexin V+/PI细胞数增加.其中,转染72小时后的AnnexinV+/PI-细胞数高于转染后48小时的AnnexinV+/PI‘细胞数.然而,无论是转染后48小时还是72小时,表达CD11b 的阳性细胞数与未转染细胞的CD11b阳性数几乎无差别.结论:短暂表达IκBα△ N cDNA能够诱导HL-60细胞发生凋亡,但似乎并不影响该细胞向粒系的分化.
-
As2O3诱导HL-60,K562及NB4细胞的凋亡
目的:研究三氧化二砷(As2O3)对慢性粒细胞K 562(CML),急性粒细胞白血病细胞株HL-60(AML M2)的作用并与细胞株NB4(APL M3) 作比较.方法:采用形态学和流式细胞术观察不同浓度As 2O3对HL-60,K562及NB4细胞的作用.结果:As2O 3不仅能诱导NB4的凋亡,提高其浓度至2.7 μM和8.1 μM,也能诱导K562,HL-60的凋亡 .As2O3不能诱导三种细胞分化.结论:As2O3对细胞诱导的凋亡是非选择性的且不能诱导分化.
-
雷公藤甲素体外逆转急性髓系白血病耐药性
目的 探讨小剂量雷公藤甲素(TPL)体外逆转急性髓系白血病(AML)耐药细胞的耐药性及其分子机制.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测多柔比星(ADM)对耐ADM的HL-60细胞株(HL-60/ADM)耐药情况及TPL对其增殖抑制作用；MTT法检测IC20浓度TPL联合不同浓度的ADM对HL-60/ADM的增殖抑制作用和两者之间的相互作用；Western blot检测IC20浓度TPL、ADM单药及两者联合作用HL-60/ADM细胞24 h后缺氧诱导因子1α(HIF-1 α)及CXC趋化因子受体4(CXCR4)蛋白表达水平的变化.结果 ADM对野生株HL-60细胞和ADM耐药细胞株24 h的IC50值分别为(0.28±0.35) μmol/L和(22.03±0.22)μmol/L,耐药细胞株的耐药倍数为78.68.TPL作用于HL-60/ADM细胞48 h IC50值为(43.06±1.06) nmol/L.对于HL-60/ADM细胞无明显增殖抑制作用的48 h IC20TPL可使ADM对HL-60/ADM的IC50值从(14.36±2.23) μmol/L降到(7.90±0.33) μmol/L,逆转耐药倍数为1.82倍,差异有统计学意义(P=0.008)；协同指数(CI)显示,在抑制率小于60％的情况下,ADM与TPL有协同作用.Western blot结果显示TPL或ADM单药对HIF-1α和CXCR4蛋白表达的下调作用均不明显,但TPL联合ADM可明显下调HIF-1 α和CXCR4蛋白的表达.结论 IC20TPL可逆转耐药AML细胞的耐药性,其分子机制与下调HIF-1 α通路有关.
-
硼替佐米联合三氧化二砷或高三尖杉酯碱体外诱导白血病细胞株HL-60凋亡及其机制
目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米单用及与三氧化二砷或高三尖杉酯碱联合作用对髓系白血病细胞株HL-60的凋亡诱导作用.方法 MTT法、Hoechst33342染色分别观察细胞增殖抑制及细胞凋亡情况,Western印迹检测bcl-2 、Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表达.结果 硼替佐米、三氧化二砷、高三尖杉酯碱单独作用时均对HL-60细胞有明显的增殖抑制作用及凋亡诱导作用；三氧化二砷或高三尖杉酯碱与硼替佐米联合对HL-60细胞的增殖抑制作用比3种药物单独作用增强(均P＜0.05)；形态学观察显示药物联合作用后凋亡诱导作用也比单药作用增强.Western印迹法检测显示15 μmol/L三氧化二砷单独作用细胞后,Caspase-9、Caspase-3、PARP均出现裂解片段,bcl-2蛋白表达水平下降；30 nmol/L高三尖杉酯碱单药作用后PARP出现裂解片段、bcl-2蛋白表达水平下降,但是Caspase-9、Caspase-3的表达与对照组比较无改变；联合用药后相关蛋白的改变与细胞凋亡相平行.结论 高三尖杉酯碱或三氧化二砷与硼替佐米联合后对细胞的凋亡诱导有相加作用.三氧化二砷与硼替佐米的凋亡诱导相加作用与二者能共同抑制Caspase信号途径及bcl-2蛋白的表达有关,高三尖杉酯碱和硼替佐米的相加作用与二者共同抑制bcl-2蛋白表达及促进PARP裂解活化有关.
-
马钱子碱对白血病细胞株HL-60的作用研究
目的 研究马钱子碱对人类白血病细胞株HL-60的增殖抑制作用及诱导凋亡作用.方法 分别用0、40、80、160、320、640 μg/ml的马钱子碱培养HL-60细胞,24、48、72 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的生长抑制率并计算IC50值；用AO/EB染色法荧光显微镜下观察细胞的形态学变化；用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡及凋亡率；用PI单染流式细胞术检测细胞周期分布.结果 马钱子碱可明显抑制HL-60细胞增殖,其作用呈剂量和时间依赖性,马钱子碱作用24、48、72 h后的IC50值分别为211.82、107、83μg/ml.320μg/ml马钱子碱作用48 h后观察到典型细胞凋亡形态,大部分细胞核染色质被EB染成桔红色并呈固缩状或圆珠状凋亡形态.流式细胞术检测显示各浓度组的细胞凋亡率分别为(2.1±1.1)％、(21.3±1.2)％、(38.6±1.3)％、(58.5±4.1)％、(75.3±0.87)％、(66.2±0.75)％,在0～ 320 μg/ml范围内随马钱子碱作用浓度的增加凋亡率逐渐升高,640 μg/ml浓度组细胞已无早期凋亡与活细胞.细胞周期检测显示明显的凋亡峰,与对照组相比G0/G1期细胞明显减少,G2/M期细胞明显增多.结论 马钱子碱可明显抑制人类白血病细胞株HL-60的增殖,其机制可能是诱导细胞凋亡和阻滞细胞于G2/M期.
-
芦丁诱导HL－60细胞凋亡作用的研究
芦丁在体外培养的白血病细胞（HL－60）株上，采用噻唑兰法（MTT）和聚丙烯酰胺凝胶电泳法（Western blot）分别测定了细胞增殖抑制率和半胱天冬酶3（caspase 3）的表达。结果显示其IC50为108．9μM，通过活化caspase 3诱导其发生凋亡。
