首页 > 文献资料
-
人IκBα突变体诱导大鼠肝移植免疫耐受的作用
目的 探讨人IκBαM诱导大鼠肝移植免疫耐受的作用.方法 将DA→Lewis大鼠原位肝移植模型分三组:组Ⅰ为对照组,组Ⅱ为PcDNA3.0空载体转染组(移植前两天行人PcDNA3.0转染供肝),组Ⅲ为PcD-NA3.0-IκBαM转染组(移植前两天行人PcDNA3.0-IκBαM转染供肝).于术后1d,3d,7d,14d检测肝功能、血清IL-2.以及外周血CD4<'+>和CD25<'+>的表达变化.结果 组Ⅲ与组Ⅰ和组Ⅱ相比较:①肝脏功能指标术后3d,7d具有显著性差异(P<0.05);②术后3d、7d外周血单核细胞表面CD4、CD25的表达水平明显升高,具有显著性差异(P<0.05);③术后3d,7d血清IL-2明显降低,具有显著性差异(P<0.05).结论 IκBαM具有诱导免疫耐受的作用.
-
人IκBαM对大鼠肝移植缺血再灌注损伤中TNF-α的影响
目的 探讨人核转录因子抑制旦白(IκBαM)对大鼠肝移植缺血再灌注损伤中TNF-α的影响.方法 将SD大鼠原位肝移植模型分4组:组Ⅰ为假手术组(行游离肝脏手术),组Ⅱ为空白对照组(行大鼠原位肝移植手术),组Ⅲ为PcDNA 3.0空载体转染组(移植前2d行人PcDNA 3.0转染供肝),组Ⅳ为PcDNA 3.0-IκBαM转染组(移植前2d行人PcDNA 3.0-IκBαM转染供肝).分别于术后2h、12h、24h、3d取材.应用免疫组化、ELISA测定肝组织和血清中TNF-α的表达,同时检测各时点肝脏酶学的变化.结果 PcDNA 3.0-IκBαM转染组与组Ⅱ、组Ⅲ相比:免疫组化示TNF-α于移植后12h的表达具有显著性差异;术后2h血清TNF-α具有显著性差异;肝脏受损指标(ALT)在各时点具有显著性差异,尤其在术后12h为显著(P＜0.05).各移植组与组Ⅰ差异显著(P＜0.05).结论 IκBαM通过抑制TNF-α的表达减轻大鼠肝移植缺血再灌注损伤.
-
人IκBα真核表达载体的构建及其在大鼠肝移植缺血-再灌注损伤中的作用
目的:构建人IκBα真核表达质粒,探讨对大鼠肝移植缺血-再灌注损伤的保护作用.方法:应用RT-PCR和重叠延伸PCR技术,得到点突变的人IκBα, 定向克隆至PcDNA3.0真核表达载体.将SD大鼠原位肝移植模型分为三组:Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为PcDNA3.0空载体转染组, Ⅲ组为 PcDNA3.0-IκBα转染组.分别于术后2、12、24和72 h取材.用RT-PCR测定肝组织中核转录因子(NF-κB)p65、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1 (ICAM-1) mRNA的表达及肝功能变化.结果:经酶切和DNA序列测定鉴定,证实重组质粒构建正确;Ⅲ组与Ⅰ组、Ⅱ组相比:NF-κBp65、TNFα、ICAM-1 mRNA的表达水平及肝酶学指标均明显降低(P＜0.05).结论:真核表达质粒PcDNA3.0-IκBα构建成功,IκBα通过抑制NF-κBp65 mRNA的表达及其核移位减轻大鼠肝移植缺血-再灌注损伤.
-
核转录因子抑制蛋白α突变体对大鼠急性胰腺炎的保护作用
目的 观察核转录因子抑制蛋白α突变体(IκBαM)对大鼠急性胰腺炎的保护作用.方法 蛙皮素诱导建立SD大鼠急性胰腺炎模型.分4组:空白对照组A组、急性胰腺炎组B组、转染PcDNA3.0组C组、转染PcDNA 3.0-IκBαM组D组.分别于24 h检测各组血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、淀粉酶的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织中Fas、FasL、Caspase-3、mRNA的表达;组织学检测胰腺腺泡细胞坏死情况.结果 D组与B、C组比较:血清TNF-α、淀粉酶表达水平明显降低,差异有统计学意义[TNF-α(587±93比915±102;587±93比897±116);淀粉酶(6773±663比8973±825;6773±663比9021+_763),P＜0.05];胰腺组织Fas、FasL、Caspase-3 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义[Fas(0.572±0.103比0.473±0.084;0.572±0.103比0.468±0.071);FasL(0.627±0.124比0.397±0.084;0.627±0.124比0.391±0.072);Caspase-3 (0.893±0.142比0.513±0.122;0.893±0.142比0.508±0.130),P＜0.05];胰腺组织腺泡细胞坏死明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).B、C、D组与A组表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IκBαM通过诱导胰腺腺泡细胞凋亡对大鼠急性胰腺炎发挥保护作用.
-
人IκBα突变体在大鼠肝移植急性排斥反应中的作用
目的 探讨人IκBαM在大鼠肝移植急性排斥反应中的作用.方法 将DA→Lewis大鼠原位肝移植模型分3组:组Ⅰ为对照组,组Ⅱ为PcDNA3.0组,组Ⅲ为PcDNA3.0-IκBαM组.观察生存时间、肝脏组织病理、肝功能,流式细胞仪检测抗原递呈细胞(APC)表面CD80、CD86,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IL-2的表达.结果 Ⅲ组与Ⅰ、Ⅱ组相比较:(1)受体存活时间明显延长,差异有统计学意义[(23.0±6.5) d比(14.0±4.3) d;(23.0±6.5) d比(13.5±4.5) d,P＜0.05];(2)移植后7 d汇管区轻、中度量淋巴细胞浸润;(3)肝功能指标术后3、7 d差异有统计学意义(P＜0.05);(4)术后3 d APC表面CD86表达水平明显降低[(22.46±4.53)%比(37.29±4.15)%;(22.46±4.53)%比(35.82±3.92)%,P＜0.05],术后7 d APC表面CD80的表达水平明显降低[(24.47±7.10)%比(45.70±5.22)%;(24.47±7.10)%比(43.27±6.38)%,P＜0.05],差异有统计学意义;(5)术后3、7 d血清IL-2明显降低,以7 d为显著[(578.65±85.50) ng/L比(973.24±102.47) ng/L;(578.65±85.50) ng/L比(1 021.10±125.32) ng/L,P＜0.05].结论 IκBαM可通过抑制APC表面共刺激分子的表达在急性排斥反应中发挥保护作用.
-
人IκBαM真核表达载体的构建及其对大鼠肝移植缺血再灌注中ICAM-1的影响
目的 构建人IκBαM真核表达质粒,探讨人IκBαM对大鼠肝移植缺血再灌注中ICAM-1的影响.方法 应用RT-PCR和重叠延伸pCR技术,得到点突变的人IκBαM,定向克隆至PcDNA3.0真核表达载体.将SD大鼠原位肝移植模型分4组:组Ⅰ为假手术组(行游离肝脏手术),组Ⅱ为空白对照组(行大鼠原位肝移植手术),组Ⅲ为PcDNA3.0空载体转染组(移植前两天行人PcDNA3.0转染供肝),组Ⅳ为PcDNA3.0-IκBαM转染组(移植前两天行人PcDNA3.0-IκBαM转染供肝).分别于术后2 h、12 h、24 h和3 d取材.应用免疫组化、RT-PCR测定肝组织中ICAM-1的表达,同时检测各时点肝脏酶学的变化.结果 经酶切和DNA序列测定鉴定,证实重组质粒构建正确;PcDNA3.0-IκBαM转染组与组Ⅱ、组Ⅲ相比:免疫组化示ICAM-1于移植后12 h、24 h的表达差异具有显著性;术后12 h ICAM-1mRNA的表达水平具有显著性差异;肝脏受损指标(ALT)在各时点差异具有显著性,尤其在术后12 h为显著(P＜0.05).各移植组与Ⅰ组差异有显著性,(P＜0.05).结论 真核表达质粒PcDNA3.0-IκBαM构建成功,IκBαM通过抑制ICAM-1的表达减轻大鼠肝移植缺血再灌注损伤.
-
突变型IκBα对HL-60细胞凋亡和分化的影响
目的:探讨缺失突变型IκBα对HL-60细胞凋亡和分化的影响.方法:通过脂质体技术,将pCLX-IκBα△N重组载体质粒DNA转移到HL-60细胞并于转染48小时和72小时后,分别分析AnnexinV和PI以及CD11b的表达.结果:转染后,Annexin V+/PI细胞数增加.其中,转染72小时后的AnnexinV+/PI-细胞数高于转染后48小时的AnnexinV+/PI‘细胞数.然而,无论是转染后48小时还是72小时,表达CD11b 的阳性细胞数与未转染细胞的CD11b阳性数几乎无差别.结论:短暂表达IκBα△ N cDNA能够诱导HL-60细胞发生凋亡,但似乎并不影响该细胞向粒系的分化.
