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人IκBα真核表达载体的构建及其在大鼠肝移植缺血-再灌注损伤中的作用

秦涛;郑启昌;屈新才;王继亮;胡青钢;卢昕;张勇

摘要: 目的:构建人IκBα真核表达质粒,探讨对大鼠肝移植缺血-再灌注损伤的保护作用.方法:应用RT-PCR和重叠延伸PCR技术,得到点突变的人IκBα, 定向克隆至PcDNA3.0真核表达载体.将SD大鼠原位肝移植模型分为三组:Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为PcDNA3.0空载体转染组, Ⅲ组为 PcDNA3.0-IκBα转染组.分别于术后2、12、24和72 h取材.用RT-PCR测定肝组织中核转录因子(NF-κB)p65、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1 (ICAM-1) mRNA的表达及肝功能变化.结果:经酶切和DNA序列测定鉴定,证实重组质粒构建正确;Ⅲ组与Ⅰ组、Ⅱ组相比:NF-κBp65、TNFα、ICAM-1 mRNA的表达水平及肝酶学指标均明显降低(P<0.05).结论:真核表达质粒PcDNA3.0-IκBα构建成功,IκBα通过抑制NF-κBp65 mRNA的表达及其核移位减轻大鼠肝移植缺血-再灌注损伤.

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