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Celecoxib对胆囊癌细胞GBC-SD增殖的抑制作用
目的研究Celecoxib对人胆囊癌细胞GBC-SD生长和凋亡的影响及其作用机制.方法采用免疫细胞化学SABC法检测GBC-SD环氧合酶-2(Cox-2)蛋白表达,采用四唑氮蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡,酶联免疫吸附试验(LISA)检测前列腺素E2(PGE2)含量.结果 Celecoxib可下调GBC-SD细胞Cox-2蛋白表达.Celecoxib抑制GBC-SD细胞增殖作用呈时间依赖性,作用2天后就有轻度抑制,第3、第4和第5天抑制作用已相当明显(P<0.05,与对照组相比),并且这种增殖抑制作用能被200 g/ml GE2拮抗.Celecoxib诱导GBC-SD细胞G1-S期阻滞,40 μmol/L(P<0.05)和20 μmol/L(P<0.05)Celecoxib组G0-G1 期细胞含量比对照组( μmol/L)明显增高,而S期和G2/M期细胞含量比对照组明显降低(P<0.05).40 μmol/L(P<0.05)和20 μmol/L(P<0.05)Celecoxib处理48 后GBC-SD细胞凋亡率明显上升.结论 Celecoxib通过Cox-2和PGE2途径抑制GBC-SD细胞生长和诱导凋亡.
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NOS和COX抑制剂对PHT鼠COX表达和血流动力学的影响
目的探讨在门静脉高压症高动力循环发生发展中前列环素(PGI2)的作用以及一氧化氮(NO)和PGI2之间的关系.方法将肝内型门脉高压(IHPH)、肝前型门脉高压(PHPH)和手术对照(SO)三组大鼠模型,分别使用生理盐水、长短期N-硝基-L-精氨酸(L-NNA)和长短期吲哚美辛(INDO)治疗后,行血流动力学研究,采取股动脉血行血浆6-keto-PGF1α和 NO-2/NO-3浓度检测,并测定内脏和血管组织中COXmRNA的表达.结果与生理盐水对照组比较,长短期应用L-NNA和INDO均能显著改善门脉高压鼠的高动力循环状态(P<0.05),并显著降低血浆6-keto-PGF1α和NO-2/NO-3浓度(P<0.05);应用L-NNA长期较短期的内脏血流动力学明显改善(P<0.05),但内脏和血管组织COX-1mRNA表达增加和血浆6-keto-PGF1α浓度明显升高(P<0.05);应用INDO长期与短期比较,内脏血流动力学仍呈现高血流动力学状态(P<0.05),血浆NO-2/NO-3浓度显著性升高(P<0.05).结论在门静脉高压症高动力循环中PGI2和NO之间存在相互作用,其高血流动力学状态主要与NO有关.
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门静脉高压症鼠内脏和血管中环加氧酶的表达
目的研究门静脉高压症鼠血浆前列环素(PGI2)水平、血管和小肠中环加氧酶(COX)基因表达以及内脏血流动力学的变化,探讨PGI2、COXmRNA表达与门静脉高压症高血流动力学之间的关系.方法20只雄性SD大鼠随机分成肝内型门静脉高压症组(IHPH,n=7)、肝前型门静脉高压症组(PHPH,n=7)和假手术组(SO,n=6),同位素微球技术行内脏血流动力学研究,并采取股动脉血行血浆六-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)浓度测定;RT-PCR法半定量测定血管和小肠标本中COXmRNA表达.结果IHPH、PHPH组均具有内脏血流量增加、内脏血管阻力降低等高血流动力学特征;IHPH、PHPH组血浆6-keto-PGF1α及胸主动脉、肠系膜上动脉和小肠COX-1mRNA的表达均显著高于SO组(P<0.05),且其浓度或表达情况均与内脏血流量(PVI)、内脏血管阻力(SVR)和门静脉压力(FPP)显著相关(P<0.05).结论门静脉高压症时内脏、血管组织中COXmRNA表达和血浆6-keto-PGF1α浓度与内脏血流动力学变化显著相关.
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碱性成纤维细胞生长因子对脑微血管内皮细胞血管新生基因谱和环加氧酶-2表达的影响
本文研究了碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growthfactor,bFGF)对小鼠脑微血管内皮细胞(microvascular endothelial cell,MVEC)株bEnd.3中血管新生相关基因表达谱的改变,并重点从mRNA、蛋白质和细胞水平检测bFGF对血管新生旁观分子环加氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响.用特异性小鼠血管新生基因芯片高通量检测bEnd.3细胞基因谱表达的改变,分析促血管新生基因及抑制血管新生的基因表达谱的变化;用RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学等方法分别从mRNA、蛋白质和细胞水平检测COX-2表达变化及细胞内的定位.结果发现用10 ng/ml的bFGF刺激bEnd.3细胞2 h后多种促血管新生基因表达明显上调,如Adamts1、MMP-9、Ang-1、PDGF B、G-CSF、FGF16、IGF-1等分别上调3、8、120、5.2、4.5、1.7、2.7倍.与此同时,多种抑制血管新生的基因表达相应下调,如TSP-3、TIMP-2、TGFβ1等表达分别下调3.4、1.5和3.5倍.RT-PCR和Western blot的结果证实,bFGF可以上调COX-2 mRNA的表达和蛋白质的合成.免疫组化的结果表明,COX-2主要分布在胞浆.以上结果提示:bFGF具有上调促血管新生基因表达,下调抑制血管新生基因表达的作用,两者协同作用,促进血管新生.同时bFGF还可以明显促进血管新生旁观分子COX-2 mRNA的表达和蛋白质的合成.本文讨论了bFGF引起MVEC内COX-2表达上调的意义.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 微血管内皮细胞 血管新生 环加氧酶 -
阿司匹林抑制结肠癌细胞的分子机制
肠癌是一种常见的恶性肿瘤,位居西方国家肿瘤相关死亡原因的前列.在我国,结肠癌的发病率和病死率逐年升高,且呈现出年轻化趋势.Kishimoto等[1]认为,结肠癌的发生发展可能与腺瘤向腺癌的转化及多种癌基因和抑癌基因的联合失调控有关.目前手术切除仍是结肠癌的主要治疗方法,内科药物治疗进展有限.1982年Doubilet等[2]首次报道了长期服用阿司匹林的结肠癌发病率较普通人群明显降低,其后的研究[3,4]也显示阿司匹林可减少大肠癌的发病率.动物实验和体外细胞培养也提示阿司匹林具有抑制结肠癌细胞株增殖的作用.其作用机制包括多个方面,如抑制环加氧酶(COX)表达, Fas/FasL导致的细胞凋亡、抑制经转录活化蛋白-1(AP-1)和核因子κ-B(NFκ-B)的信号传导及诱导NOS生成等,但目前尚未完全阐明.本文对结肠癌发生中COX,Fas/FasL,AP-1及NFκ-B的作用和阿司匹林抗结肠癌细胞的分子机制做一综述.
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COX-2与突变型p53蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义
目的 研究COX-2蛋白和突变型p53蛋白在乳腺癌组织中的表达情况,探讨两者在乳腺癌发生、发展中的作用、相互关系及与临床病理学特征之间的关系.方法 运用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学方法 (S-P)对99例乳腺癌组织中COX-2蛋白和突变型p53蛋白的表达进行检测.结果 99例乳腺癌中COX-2蛋白表达阳性率为69.7%(69/99),COX-2蛋白表达与患者年龄、原发肿瘤大小、腋淋巴结转移状况、TNM临床分期、激素受体状况均无显著相关(P>0.05),而与C-erbB-2蛋白表达呈显著相关(P<0.05).99例乳腺癌中突变型p53蛋白表达阳性率为48.5%(48/99),突变型p53蛋白表达与患者年龄、TNM临床分期、激素受体状况无显著相关(P>0.05),而与原发肿瘤大小、腋淋巴结转移状况、C-erbB-2蛋白表达呈显著相关(P<0.05).COX-2蛋白表达与突变型p53蛋白在乳腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.288,P<0.05),两者共表达与肿瘤大小、腋淋巴结转移状况呈显著相关(P<0.05).结论 COX-2蛋白和突变型p53蛋白在乳腺癌组织中高表达,COX-2蛋白与突变型p53蛋白在乳腺癌组织中的表达呈正相关,两者在乳腺癌的发生、发展中可能起协同作用,是反映乳腺癌生物学行为的重要指标.
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野生型p53抑制宫颈癌HeLa细胞的研究
目的:研究外源性野生型p53(wt p53)基因对宫颈癌HeLa细胞中的致癌基因环氧合酶-2(COX-2)的影响,以及抑制HeLa细胞生长的作用.方法:用脂质体介导的转染技术将野生型p53基因转染到HeLa细胞.实验分为2组,p53转染组(p53-HeLa组)和空白对照组(HeLa组),wt p53表达用逆转录-多聚酶链反应鉴定,并检测p53 mR-NA和COX-2 mRNA瞬时转染及稳定转染前后表达的变化.CCK-8染色法绘制细胞生长曲线.结果:野生型p53基因转染后HeLa细胞中的p53 mRNA表达增加,COX-2 mRNA表达减少.通过对细胞生长曲线的分析,转染后与转染前相比,生长明显减慢(P<0.01),wt p53对HeLa细胞有抑制作用.结论:外源性wit p53基因表达可抑制宫颈癌He-La细胞中COX-2 mRNA的表达;wt p53可能通过抑制COX-2对宫颈癌HeLa细胞产生抑制作用,进而阻碍肿瘤的生长.
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宫颈癌组织中环氧合酶-2和诱生型一氧化氮合酶的表达及其意义
目的:研究环氧合酶-2(COX-2)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)在宫颈癌发生发展中的作用.方法:用免疫组化方法检测80例宫颈癌患者COX-2和iNOS的表达水平,并以31例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、30例慢性宫颈炎症患者和30例正常宫颈上皮为对照组.结果:(1)宫颈癌患者COX-2和iNOS表达阳性率分别为58.75%和86.25%,高于CIN、慢性宫颈炎症患者和正常宫颈上皮组;(2)宫颈癌患者COX-2和iNOS的表达水平与临床分期、组织学分型及细胞分化程度无关(P＞0.05);(3)伴淋巴结转移的宫颈癌患者COX-2的表达水平略高于不伴淋巴结转移者,但差异无显著性(P＞0.05) ,而iNOS的表达水平明显高于不伴淋巴结转移者(P＜0.05);(4)肿瘤直径≥5cm的宫颈癌患者COX-2的阳性表达率明显高于肿瘤直径＜5cm者(P＜0.05),而iNOS的阳性表达率高于肿瘤直径＜5cm者,但差异无显著性(P＞0.05);(5)伴宫旁浸润或脉管浸润的宫颈癌患者COX-2和iNOS表达水平明显高于不伴宫旁浸润或脉管浸润者(P＜0.01);(6)宫颈癌患者COX-2和iNOS的表达之间无相关性,而慢性宫颈炎症患者COX-2和iNOS的表达之间有相关性.结论:宫颈癌患者COX-2和iNOS的表达水平明显上调,其表达与宫颈癌的发生发展有关.
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环氧化酶-2前列腺素与妇科疾病研究进展
环氧化酶(cyclooxygenase,COX),又称环氧合酶、环加氧酶等,具有环氧合酶和过氧化物合成酶的双重功能;它是花生四烯酸(AA)转化为前列腺素(Prostglandin,PGs)的重要限速酶.细胞膜的磷脂在磷脂酶的作用下水解出AA,AA经过环氧化酶的作用转变为前列腺素,发挥多种生物学作用.研究表明环氧化酶和前列腺素在炎症、肿瘤、生殖以及各种疾病中起着非常重要的作用,与多种妇产科疾病相关.本文就COX-2的生物学特性及与妇科疾病的关系等加以综述.
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川芎嗪对血管炎性增生的抑制作用
目的 观察川芎嗪注射液对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖过程中炎性分子表达的影响,以探讨川芎嗪活血化瘀作用的新靶点.方法 采用贴块法培养VSMC建立PDGF诱导的细胞增殖模型,用细胞计数法观察不同浓度川芎嗪对VSMC增殖的抑制作用.用Western blotting方法分别检测各组细胞中环加氧酶(COX-2)及细胞增殖相关基因反式作用因子激活蛋白(C-Jun)的表达变化及川芎嗪对它们的影响.结果 与刺激组相比,川芎嗪呈剂量依赖性地抑制PDGF诱导的细胞增生,其机制与显著降低COX-2及C-Jun的表达有关.结论 川芎嗪通过抑制炎性相关基因的表达发挥抗VSMC增殖的作用.
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C.elegans fat-1基因结构、功能及其抗肿瘤机制的研究进展
C.elegansfat-1基因来源于小秀丽线虫(Caenorhabditis elegans),翻译产物是n-3 PUFAs脱氢酶.n-3 PUFAs脱氢酶以n-6 PUFAs为底物进行脱氢反应,生成相应的n-3 PUFAs,改变细胞膜n-6/n-3 PUFAs的比例,优化来源于n-6PUFAs的类花生酸的组成.体外实验表明,C.elegans fat-1 cDNA的表达可促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,并可下调与肿瘤细胞黏附和转移相关基因的表达.此基因的抗肿瘤机制不甚明确,可能是通过改变细胞n-6/n-3 PUFAs的比例从而触发了下游的抗肿瘤机制.
关键词： fat-1 cDNA 多聚不饱和脂肪酸 类花生酸 环加氧酶 线性脂加氧酶 -
高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠环加氧酶基因表达及血脑屏障通透性的影响
目的:探讨高压氧(HBO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注环加氧酶-1(COX-1)、环加氧酶-2(COX-2)mRNA的表达及血脑屏障(BBB)通透性的影响.方法:160只Wister大鼠随机分为A、B、C、D 4组各40只.成功制备为局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,术后C、D组于2、9、11、45及69 h点均行0.25 MPa HBO治疗.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法及比色法分别检测大鼠4、11、23、48及72 h点脑组织中COX-1、COX-2mRNA的表达及伊文思蓝(EB)的浓度.结果:与A、C组比较,B、D组各时间点COX-1mRNA的表达差异无统计学意义;而COX-2mRNA的表达及EB的浓度在11～72 h点组明显高于A、C组(P<0.05,0.01).结论:HBO具有降低脑缺血再灌注过程中COX-2mRNA的表达,对血脑屏障具有保护作用,而对COX-1mRNA的表达作用不明显.
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咽喉反流对声门型喉癌中COX-2mRNA表达的影响
目的:探讨咽喉反流对环加氧酶2 (COX-2)mRNA在声门型喉癌病变黏膜中表达的影响.方法:对40例声门型喉癌患者行电子鼻咽喉镜检查、反流检查计分量表(RFS)和反流症状指数量表(RSI)评分,将其分为声门型喉癌反流阳性组(20例)和声门型喉癌反流阴性组(20例),另取10例癌旁2 cm以上黏膜组织作为对照组.采用Real-time PCR方法,测定各组黏膜中COX-2mRNA的表达情况.结果:声门型喉癌组COX-2mRNA的表达明显高于对照组(P＜0.05);声门型喉癌反流阳性组的表达高于声门型喉癌反流阴性组(P＜0.05).结论:咽喉反流因素可能通过组织损伤、炎症及细胞恶性转化使声门型喉癌的COX-2mRNA的表达升高.
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LPS刺激牙龈成纤维细胞PGE2的产生及COX-2基因表达
目的:本实验观察两种重要的牙周致病菌(牙龈卟啉菌、中间普氏菌)细胞表面脂多糖(LPS)刺激人牙龈成纤维细胞后PGE2水平的变化,及PGE2产生过程中COX-1和COX-2的表达.方法:采用热酚-水法抽提牙龈卟啉菌ATCC33277和中间普氏菌ATCC25611细胞表面脂多糖,刺激体外培养的人牙龈成纤维细胞,通过放射性免疫技术检测上清液中PGE2的含量.同时利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学的方法,进一步观察牙龈成纤维细胞内COX-1、COX-2 mRNA和COX-2蛋白水平的表达.结果: 在LPS的作用下,PGE2水平明显升高,含量以剂量依赖和时间依赖的方式递增(*P＜0.01,* *P＜0.01).对COX-1和COX-2 mRNA和免疫组化的研究表明,未受刺激的牙龈成纤维细胞COX-2 mRNA和蛋白水平表达阴性,受LPS作用后呈阳性表达.COX-1 mRNA在正常和受刺激的牙龈成纤维细胞中均呈阳性表达,且表达不受LPS作用的影响.结论: 牙龈卟啉菌和中间普氏菌LPS能够刺激牙龈成纤维细胞分泌PGE2,PGE2水平主要受COX-2 mRNA转录水平的影响,与COX-1的表达无明确相关性.
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舒喘灵对环加氧酶PGI2合成酶和TXA2合成酶活性的影响
取猪肺微粒体用体外方法观察了舒喘灵对花生四烯酸(AA)实验代谢中环加氧酶、前列腺素(PGI2)合成酶及血栓素A(TXA2)合成酶的作用.结果表明,当以AA为底物反应时各组均无明显反应,而当以前列腺素内过氧化物(PGH2)为底物反应时,舒喘灵3×10-6 mol/L组6-酮基-PGF1α的生成量明显增加(P<0.05).提示舒喘灵对AA代谢中环加氧酶和TXA2合成酶影响不大,而对PGI2合成酶的活性有促进作用,故使PGI2生成量增加,6-keto-PGF1α/TXA2比值增大,因此有利于纠正PGI2-TXA2的平衡失调.
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前列腺素与血管新生
前列腺素(prostaglandins,PGs)是机体中由前列腺素环氧合酶催化细胞膜磷脂产生的一族二十碳不饱和脂肪酸,具有广泛的生物学活性.前列腺素具有强大的促进血管新生的作用,它们不仅可以介导炎症、发热和疼痛,而且在肿瘤的发生、发展、转移、预后及缺血性心脏病的治疗中具有重要作用.
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转化生长因子β1与成纤维细胞的相互作用影响食管癌细胞环氧合酶2表达
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)可否通过与成纤维细胞的相互作用调节食管癌细胞环氧合酶2(COX-2)表达.方法:以FS液、FSTB液(分别为10%FCS和加入5 μg/LTGF-β1培养24h后的成纤维细胞培养上清)及含5 μg/L TGF-β1的完全培养基分别为食管癌细胞ECa-109、EC-18培养体系完全换液,24h后逆转录-PCR及Western blotting分别检测各组COX-2mRNA和COX-2、TGF-β受体Ⅰ、Ⅱ(RI、Ⅱ)蛋白表达.结果:EC-18表达TGF-β RI、Ⅱ,ECa-109有RI而无RII表达.TGF-β1组、FS组及FSTB组COX-2蛋白与mRNA表达在EC-18细胞中分别为原来的0.103、2.368、2.793倍和0.368、1.895和4倍(均P＜0.05);在ECa-109细胞中为0.978、1.011(均P＞0.05)、2.292倍(P＜0.05)和0.980(P＞0.05)、1.959、2.531倍(均P＜0.05).结论:TGF-β1可能通过刺激成纤维细胞转而上调COX-2表达.
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环加氧酶在梗阻性肾病大鼠肾脏的表达及莫比可的作用机制研究
目的观察环加氧酶(COX)在梗阻性肾病大鼠肾脏的表达,比较选择性COX-2抑制剂莫比可与消炎痛对COX、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)和基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)基因转录的影响.方法将输尿管梗阻大鼠随机分成不用药组(U)、消炎痛组(I)和莫比可组(M),设假手术组(C)为对照.4周后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-1、COX-2、PAI-1及TIMP-1的mRNA表达,免疫组织化学检测COX-1和COX-2的蛋白水平,并采用放射免疫法测定术侧肾脏残余尿液的血栓烷素B2(TXB2)浓度.结果COX-1的mRNA和蛋白水平在4组间差异无显著性意义.U组大鼠尿TXB2浓度急剧上升,术肾PAI-1和TIMP-1的mRNA表达明显上调,COX-2的基因表达和蛋白质合成大幅增加.莫比可能够显著抑制上述基因的转录(P＜0.05),而I组的数值则与U组相仿.M组和I组的尿TXB2浓度明显下降,尤以M组为著.结论COX-2参与了UUO发生、发展的病理过程.选择性COX-2抑制剂能够从抑制COX-2活性、下调COX-2、PAI-1及TIMP-1的基因转录等多方面发挥其积极的治疗作用.
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新型非甾体抗炎药 COX－ 2选择性抑制剂的研究及应用进展
环加氧酶（ Cyclooxygenase,COX）是前列腺素（ Prostagla_ ndins,PGs）生物合成的关键酶，在膜磷脂的代谢中起重要作用。 PGs与炎症的发生发展有密切的关系，以阿司匹林为代表的非甾体抗炎药（ Nonsteroidal antiinflammatory drugs,NSAIDs），即解热镇痛抗炎药，能够降低 PGs的生物合成，在关节炎症和肌肉骨骼损伤的治疗中得到了广泛的应用。早在 1971年， Vane即提出 NSAIDs是通过抑制 COX来减少 PGs生物合成的。
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肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞环氧合酶2表达的影响
目的 探讨肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞的作用机制.方法 运用WST-8法检测肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞生存率的影响,倒置显微镜观察其形态学改变,Western Blot检测脂多糖(LPS)所诱导的小鼠小胶质细胞环氧合酶2(COX-2)的表达.结果 肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2细胞无明显毒性;可抑制谷氨酸对小鼠小胶质BV2细胞的形态学损害;抑制LPS所诱导的小鼠小胶质BV2细胞COX-2的表达.结论 肉豆蔻提取物对小鼠小胶质BV2小胶质细胞具有保护作用.
