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低相对分子质量肝素联合紫杉醇对鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力的影响
目的 探讨低相对分子质量肝素(LMWH)联合紫杉醇对鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其相关的分子机制.方法 采用MTT法检测药物对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2的增殖抑制效应；细胞划痕实验、Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力；Western blot检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的表达；ELISA法检测细胞培养液中乙酰肝素酶(HPA)的表达.结果 MTT结果显示,不同浓度LMWH和紫杉醇对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2均具有显著的增殖抑制作用.200 U·ml-1 LMWH与0.1 μmol·L-1紫杉醇联合作用于CNE1、CNE2细胞24 h的迁移抑制率分别为66.70％、70.53％,较单用紫杉醇的迁移抑制率明显提高.同时LMWH与紫杉醇联合作用于CNE1、CNE2细胞的侵袭抑制作用也明显高于单用紫杉醇的作用.LMWH与紫杉醇均可下调MMP-9和HPA的表达,且合用时作用更加明显.结论 LMWH具有增强紫杉醇抑制鼻咽癌细胞侵袭和迁移的作用,其机制可能与下调MMP-9和HPA的表达有关.
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乙酰肝素酶和核转录因子κB在胰腺癌中的表达及其临床意义
目的 检测乙酰肝素酶(heparanase)和核转录因子κB(NF-κB p65)在胰腺癌中的表达,分析其与预后的关系并探讨NF-κB对调节heparanase的可能机制.方法 用免疫组化方法检测48例胰腺癌和26例癌旁组织中heparanase和NF-κB p65蛋白的表达,并分析与临床病理因素以及预后之间的关系.结果 heparanase和NF-κB在48例胰腺癌中的阳性表达率分别为62.5%和45.9%,显著高于癌旁组织.heparanase阳性表达与TNM分期(P=0.031)、淋巴结转移(P=0.003)呈正相关,与3年生存率呈负相关(20.0% vs 0%,P=0.001);NF-κB p65与淋巴结转移(P=0.017)、远处转移(P=0.031)正相关,与预后无相关.heparanase与NF-κB p65有较高的共同阳性表达率(P=0.018).多因素分析显示heparanase和NF-κB均非影响预后的独立因素.结论 heparanase在胰腺癌中表达增高且与预后不良相关,NF-κ可能上调heparanase表达水平,促进heparanase介导的肿瘤浸润转移.
关键词： 乙酰肝素酶 胰腺肿瘤 核转录因子kappaB -
乙酰肝素酶和缺氧诱导因子-1α在宫颈癌淋巴管形成中的作用
目的 探讨宫颈癌中乙酰肝素酶和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及其与临床病理参数关系.方法 应用免疫组化法检测33例宫颈癌标本中乙酰肝素酶、HIF-1α表达,并分析二者与临床病理参数关系.结果 乙酰肝素酶阳性表达率为75.8％,与FIGO分期和淋巴结转移有关(P＜0.05);HIF-1α阳性表达率为66.7％,与淋巴结转移有关(P＜0.05).乙酰肝素酶和HIF-1α阳性表达病例中淋巴管密度均显著高于阴性表达组(P＜0.05).乙酰肝素酶与HIF-1α表达呈显著正相关(r=0.758,P＜0.05).结论 乙酰肝素酶表达与HIF-1α有关,二者参与宫颈癌淋巴管形成及淋巴结转移.
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人乙酰肝素酶稳定表达CHO细胞株的建立
目的 在CHO细胞中表达人乙酰肝素酶(HPA)并建立该酶的稳定表达细胞株.方法 在脂质体的介导下,用本实验室构建的pEGFP-N1-HPA重组质粒转染CHO细胞,经G418筛选稳定表达的细胞.通过荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的表达情况,同时通过RT-PCR检测HPA基因转录水平、免疫细胞化学法检测HPA蛋白表达、MTT方法测定外源基因对CHO细胞增殖的影响.结果 荧光显微镜下可见转染的CHO细胞有绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR证实转染细胞中存在HPA基因mRNA的表达,成功获得HPA的稳定表达细胞株.结论 成功建立人HPA稳定表达CHO细胞株,为该酶的功能研究奠定了基础.
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人乙酰肝素酶的体外表达及诱导表达条件的优化
目的 构建人乙酰肝素酶重组表达质粒,以期获得足够的乙酰肝素酶蛋白,用于其功能研究.方法 将人全长乙酰肝素酶cDNA克隆至原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行体外表达,并探索C-端带一个His标签及C-端、N-端各带一个His标签对乙酰肝素酶表达量的影响.结果 重组原核表达质粒能在大肠杆菌中高效表达人乙酰肝素酶蛋白.结论 成功构建了人乙酰肝素酶原核表达系统,C-端、N-端均带His标签的表达载体表达的乙酰肝素酶蛋白量明显高于仅在C-端带His标签的表达载体表达的乙酰肝素酶蛋白量.
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抗乙酰肝素酶单抗联合紫杉醇对肺癌A549增殖及侵袭的影响
目的 探讨抗乙酰肝素酶(heparanase,HPA)单抗联合紫杉醇对肺癌A549细胞的增殖及侵袭抑制作用.方法 选用浓度梯度递增的抗HPA单抗和紫杉醇,单独或联合作用于A549细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,细胞划痕试验、Transwell试验检测细胞侵袭,观察抗HPA单抗与紫杉醇对细胞增殖及转移的抑制作用.结果 抗HPA单抗与紫杉醇联用后将抑制率从20％、31％、37％、45％、51％增大至52％、56％、60％、67％、77％.两药分别干预后细胞S期分别降低至4.7％、6.8％,联用后出现了36.5％的细胞凋亡期.在体外侵袭实验中抗HPA单抗、紫杉醇、紫杉醇联用抗HPA单抗使肺癌A549细胞侵袭能力分别下降(23.3±5.3)％、(63.3±3.9)％、(85.0±3.2)％.结论 抗HPA单抗联合紫杉醇对肺癌A549细胞的增殖及侵袭能力的抑制作用比两药单用时更为显著.
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胃肠道间质瘤中乙酰肝素酶及基质金属蛋白酶-9的表达及意义
目的：探讨乙酰肝素酶（HPSE）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在胃肠道间质瘤（GIST）中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法（ SP法）检测76例GIST组织HPSE和MMP-9表达水平，分析两者的表达与临床病理因素的关系。结果 HPSE 和MMP -9在 GIST 恶性组织的阳性表达率分别为85.4％和75.6％，在良性和交界性组织的阳性表达率分别为51.4％和45.7％，两者之间差异有统计学意义（ P＜0.05）。 Log-rank分析提示HPSE和MMP-9表达阳性者生存率低于阴性者。两者在GIST的表达与组织学分级、肿瘤复发或转移有关，与年龄、性别和肿瘤大小无关。结论 HPSE和MMP-9高表达可能与GIST发生发展转移有关，联合检测GIST中HPSE和MMP-9的表达，有利于对GIST的生物学行为和预后的判定。
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乙酰肝素酶及基质金属蛋白酶-9在甲状腺乳头状癌淋巴结转移中的作用
目的 初步分析乙酰肝素酶及基质金属蛋白酶-9在乳头状甲状腺癌淋巴结转移中的作用.方法 采用Envision免疫组织化学两步法检测150例甲状腺乳头状癌和200例结节性甲状腺肿患者乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶-9、D2-40的表达,计数D2-40阳性标记的微淋巴管密度,分析微淋巴管密度与乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶-9含量间的关系,同时与结节性甲状腺肿患者微淋巴管密度、乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶-9含量作比较.结果 甲状腺乳头状癌患者微淋巴管密度、乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶-9含量明显高于结节性甲状腺肿患者(均P＜0.01),癌组织乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶-9含量与微淋巴管密度呈正相关(P＜0.01).结论 甲状腺乳头状癌患者乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶-9与微淋巴管形成有密切关系,乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶-9可作为其临床疗效判断和新药研发的参考指标.
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脑星形细胞瘤中乙酰肝素酶和血管内皮生长因子表达与血管形成及预后的关系
目的 探讨脑星形细胞瘤中乙酰肝素酶(HPA)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)与血管形成和预后的关系.方法 采用免疫组化SP法检测69例星形细胞瘤中HPA蛋白和VEGF的表达,并以八因子相关抗原(Ⅷ-R-Ag)作为标记计数微血管密度(MVD).结果 HPA蛋白与VEGF表达有正向关联(P<0.01),HPA表达阳性者的MVD高于HPA表达阴性者(P<0.01)、生存时间小于表达阴性者(P<0.01).VEGF表达阳性者MVD高于HPA表达阴性者(P<0.01)生存时间小于表达阴性者(P<0.01).结论 HPA和VEGF可能参与了星形细胞瘤血管的形成,并且与预后有关,上调VEGF的表达可能是HPA促进血管形成的机制之一.
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整合素α5β1和乙酰肝素酶在胃癌中的表达及意义
目的 探讨整合素α5β1和乙酰肝素酶(HPA)在胃癌组织中的表达特点、相互关系以及它们在胃癌的发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化方法同步检测80例胃癌组织及50例癌旁正常组织中的整合素α5β1和HPA的表达情况,分析两者在胃癌组织中表达的相关性以及与临床病理指标的关系.结果 (1)胃癌组织整合素α5β1和HPA的阳性表达率分别为60.0%和66.2%,均高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)整合素α5β1和HPA在胃癌组织的表达与胃癌的不同分化程度密切相关(P＜0.05);(3)整合素α5β1、HPA在胃癌中的表达强度呈正相关关系(rs=0.564,P＜0.05).结论 整合素α5β1和HPA在胃癌组织中呈高表达,且与胃癌的分化程度相关,两者在胃癌组织的表达呈正相关,它们与胃癌的发生、发展密切相关,是胃癌早期诊断和抗转移治疗新的分子靶点,可为评估肿瘤的恶性进展、判断患者预后提供依据.
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乙酰肝素酶在卵巢癌中表达的临床意义
目的 探讨乙酰肝素酶在卵巢癌组织中表达的临床意义.方法 采用免疫组化方法 检测38例卵巢癌组织和20例良性卵巢肿瘤组织中乙酰肝素酶蛋白的表达,结合卵巢癌的病理分期和分化程度进行分析.结果 乙酰肝素酶蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为73.7%,在良性卵巢肿瘤组织中无阳性表达,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).卵巢癌组织分期越高,阳性率越高(2=102.2,P<0.001);分化程度越高,阳性率越低(2=79.5,P<0.001).结论 乙酰肝素酶表达在卵巢癌发展过程中起重要作用,其可作为临床诊治卵巢癌的参考指标之一.
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乙酰肝素酶与相关信号通路的研究进展
细胞的增殖、凋亡、调控失衡和恶性转化过程涉及多条信号转导通路的异常.许多癌基因由于信号转导通路的活化而表达,参与细胞重要的生理和病理过程.肿瘤的转移和侵袭与信号转导通路息息相关.这一过程中信号转导通路担当了重要的角色,本文将从蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)、Wnt/β-catenin信号转导通路与乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)之间的调控机制作一综述.
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乙酰肝素酶在肝细胞癌及胃癌中的表达及其临床意义
目的:探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及胃癌中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化法检测63例HCC组织及20例正常肝组织,81例胃癌组织及20例正常胃组织中HPSE的表达,并将检测结果与临床病理特征进行综合分析.结果:63例HCC组织及81例胃癌组织中HPSE表达率分别为61.9%(39/63)、56.8%(46/81),正常肝组织及胃组织均无HPSE表达.HCC组HPSE的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、甲胎蛋白(AFP)值均无显著相关性(P0.05),胃癌组HPSE的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、分化程度、浸润深度均无显著相关性(P0.05),而两组HPSE表达与临床分期及淋巴结转移有显著相关性(P<0.05).结论:HPSE在HCC及胃癌中表达率较高,HPSE表达与HCC及胃癌的临床分期及淋巴结转移有关,检测HPSE的表达情况对于判断恶性肿瘤的转移有重要价值.
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乙酰肝素酶基因在U251胶质瘤细胞株中的表达
目的:探讨乙酰肝素酶基因(HPSE)在人脑胶质瘤细胞株U251中的表达水平.方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法分别检测HPSE基因及其蛋白在U251细胞株中的表达.结果:U251细胞株中HPSE基因mRNA及蛋白阳性表达,蛋白定位于瘤细胞的细胞质中.结论:U251细胞存在HPSE基因的表达,HPSE可能对于维持U251细胞株的生物学特性具有重要作用;并可能是恶性胶质瘤基因治疗的一个良好靶点.
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以乙酰肝素酶为靶点的肿瘤治疗研究进展
肿瘤的侵袭转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因,寻找引发肿瘤细胞侵袭与转移的因素并进行有效阻断是治疗肿瘤的重要方法之一.肿瘤细胞要实现侵袭和转移首先要穿越由细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)及基底膜(basement membrane,BM)组成的屏障.
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肝细胞癌中乙酰肝素酶与NM23的表达及其临床意义
目的:探讨乙酰肝素酶(HPA)和NM23在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测72例HCC,62例肝硬化及23例正常肝组织HPA和NM23的表达水平,并分析其与HCC临床病理特征的关系.结果:HPA阳性率在HCC中明显高于肝硬化组(P=0.000)及正常肝组(P=0.001);在临床TNM分期中Ⅰ、Ⅱ期明显低于Ⅲ、Ⅳ期(P=0.001);无转移组明显低于转移组(P=0.000);在AFP≥400 μg/L组、有门脉癌栓组和多个肿瘤结节组分别明显高于AFP<400 μg/L组(P=0.01)、无门脉癌栓组(P=0.000)和单个肿瘤结节组(P=0.000).NM23阳性率在HCC中明显低于肝硬化组(P=0.009)及正常肝组(P=0.000);在TNM分期Ⅰ、Ⅱ期明显高于Ⅲ、Ⅳ期(P=0.001);在无转移组明显高于转移组(P=0.000);在AFP≥400 μg/L组和有门脉癌栓组分别明显低于AFP<400 μg/L组(P=0.02)和无门脉癌栓组(P=0.005).HPA与NM23表达呈负相关(r=-0.271,P=0.001).结论:HPA高表达与NM23低表达在HCC的发生发展及转移中起重要作用,联合检测HPA与NM23蛋白指标有助于HCC诊断和判断患者预后.
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乙酰肝素酶在卵巢癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨乙酰肝素酶(Hpa)蛋白在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理的相关性.方法:应用免疫组织化学方法检测50例卵巢癌患者,20例卵巢良性肿瘤患者,20例正常卵巢组织中Hpa蛋白的表达,并分析其与卵巢癌临床病理的相关性.结果:①卵巢癌组织中Hpa 蛋白表达阳性率为80%(40/50),卵巢良性肿瘤组织Hpa 蛋白表达阳性率为30%(6/20),正常组织为20%(4/20);②低分化肿瘤组织中Hpa蛋白阳性表达率显著高于中、高分化者(P<0.05); 淋巴结转移的癌组织Hpa表达高于无淋巴结转移组(P<0.05);术后残余灶>2 cm的癌组织Hpa表达高于术后残余灶>2 cm组(P<0.05).结论:卵巢癌中Hpa 蛋白阳性表达率明显增高,并与卵巢癌病情进展有关,可作为卵巢癌预测转移和预后的一个重要指标.
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乙酰肝素酶三质粒重组慢病毒系统的构建
目的:成功构建了HPSE基因的慢病毒表达载体.方法:用PCR法扩增HPSE cDNA与慢病毒载体pWPI连接后测序并经BLAST检索,证实后转染293T细胞,48 h后提取mRNA,RT-PCR检验HPSE基因表达情况.结果:重组慢病毒质粒HPSE-pWPI测序结果经BLAST证实与HPSE基因的同源性达99%且转染293T后有HPSE基因的表达.结论:成功的构建了HPSE基因的重组慢病毒系统,为今后的HPSE靶向治疗奠定了基础.
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人卵巢癌组织乙酰肝素酶基因的全长扩增及真核载体的构建
目的 通过基因工程技术,扩增出乙酰肝素酶基因全长,构建其真核载体.为进一步研究乙酰肝素酶与卵巢癌浸润转移的关系打下基础.方法 选取浆液性卵巢癌组织作为模板提取人卵巢癌组织总mRNA,RT-PCR技术扩增cDNA,利用PCR技术进行乙酰肝素酶基因全长的扩增.将其与真核表达栽体pcDNA3.1连接,进行克隆及酶切和测序鉴定.结果 成功扩增出目的 基因全长,并经测序验证其同源性达100%.结论采用基因工程技术成功从恶性卵巢癌组织中扩增出HPSE全长并构建了其真核表达载体.
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乙酰肝素酶与恶性肿瘤侵袭转移的研究进展
恶性肿瘤的侵袭和转移是导致病人死亡的主要原因.目前研究认为肿瘤细胞实现侵袭转移,必须首先穿越由细胞外基质(extracellular matrix,ECM)和基底膜(basement mambrance,BM)组成的屏障.这个屏障主要由两部分组成:一是结构蛋白;二是糖氨聚糖(GAGs),其主要成分是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteogcyean,HSPG),而 HSPG是由1个核心蛋白和数个与之共价连接的硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)侧链组成.乙酰肝素酶(heparanase,HPA)是新近克隆出来的一种内切糖苷酶,它编码的蛋白被认为是唯一降解HSPG的HS侧链的核苷内切酶,对肿瘤的侵袭和转移具有重要作用[1,2],是目前肿瘤研究的热点之一.本文就HPA的基因定位、活性调节、与恶性肿瘤侵袭转移的关系及活性测定等方面作一综述.
