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噬菌体展示技术在真菌毒素检测中的应用研究
噬菌体展示技术是一项筛选技术,能将外源多肽或蛋白质与噬菌体的衣壳蛋白融合表达,并展示在噬菌体颗粒的表面.因此,可通过该技术获得真菌毒素的模拟表位和抗真菌毒素的重组抗体,这为利用免疫学原理建立无毒检测体系检测真菌毒素带来了新的模式.本文综述了近几年噬菌体展示技术在真菌毒素检测中的应用研究.
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人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒-Gn蛋白重组抗体的研究
为研制人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)Gn蛋白重组抗体,本研究利用噬菌体表面展示技术,以SFTSV全病毒颗粒和重组表达SFTSV-Gn蛋白为抗原,从人源抗SFTSV Fab噬菌体抗体库中筛选抗SFTSV-Gn蛋白的重组Fab抗体,通过ELISA对Fab抗体的结合特异性进行检测.将Fab抗体基因克隆入哺乳动物细胞表达载体HL51-14,瞬时转染293T细胞获得分泌表达的IgG抗体.通过ELISA、IFA和Western-blotting检测IgG抗体的结合特异性.采用亲和层析纯化IgG抗体,并用微量中和试验检测IgG抗体的中和活性.结果表明经过三轮富集筛选,以SFTSV病毒颗粒为抗原筛选出364株针对SFTS病毒核蛋白Fab抗体,没有筛选出特异性结合Gn蛋白的阳性克隆,而通过Gn蛋白筛选得到8株特异结合Gn蛋白的Fab抗体,其中5株来自Lambda库,3株来自Kappa库.ELISA、IFA和Western-blotting检测证实这8株IgG抗体均能特异性结合Gn蛋白.微量中和试验显示8株新筛抗体没有中和活性,但仍可为后续SFTSV人源单克隆抗体的研究提供借鉴和参考.
关键词： 噬菌体抗体库 重组抗体 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 -
重组单克隆抗体的纯化研究
重组单克隆抗体是新一代生物工程技术产品，其通过特定的靶点发挥药效[1]。随着大规模哺乳动物细胞培养技术的发展，工业化细胞培养液体积可达1万升以上，抗体表达量可达5 g/L以上，极大地加重了重组单抗下游纯化的压力[2-3]，下游纯化成为限制重组单抗工业化扩大的主要因素[4-6]。重组单抗杂质控制浓度指标见表1，这些指标必须通过离心、过滤和色谱层析纯化后控制在一定浓度以下[7-10]。重组抗体的纯化一般可以分为细胞培养液澄清、抗体捕获、抗体精制纯化、病毒灭活和纯化工艺的放大等流程。
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重组抗体高效表达的研究进展(Ⅰ)
重组抗体在哺乳动物细胞中的高效表达有赖于高效表达载体的构建、抗体基因序列的优化、抗体稳定细胞株的筛选、表达宿主细胞的改造及细胞培养工艺的优化等.本文对上述问题的研究进展进行综述.
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用于放射免疫显像的基因工程抗体简介
近来作为放射性核素高特异性载体的单克隆抗体(简称单抗)在临床应用的发展较慢.其主要原因是,人体内完整抗体由于具有高抗原性、不良的药代动力学等特点而影响了靶向性[1].另外尚缺乏简易快速高效的单抗核素标记方法.基因工程的发展为抗体的人工设计和优化提供了新思路.基因工程抗体不但保留了抗原结合性,降低了免疫原性,有良好的药代动力学和生物学分布,而且易于产业化生产[2].基因工程抗体和新目标抗原的发现必将加速放射免疫显像和治疗的发展.笔者就各型重组抗体的设计、结构、性质、放射性标记和在肿瘤诊疗中的应用进行综述.
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治疗性抗体在脑部相关疾病中的研究进展
中枢神经系统疾病越来越严重的危害着人类的健康,由于血脑屏障上脑毛细血管内皮细胞的紧密连接,极大的限制了药物通过血液进入脑组织而发挥作用.目前所研发的传统脑部治疗性抗体临床Ⅲ期结果均不理想,究其原因主要由于抗体主动进入脑内的含量太低未能达到其治疗剂量,因此如何在疾病发现早期使抗体可以稳定、大量的进入血脑屏障(BBB)成为研究的关键.在众多使药物进入脑内的策略中利用血脑屏障自身的转运系统,通过与脑内腔表面特定受体结合经转胞吞作用来转运大分子的转运形式具有开发前景.临床研究显示靶向转铁蛋白受体(TfR),胰岛素受体(IR)等的抗体可以有效促进药物跨血脑屏障进入脑内发挥作用.因此研发重组抗体成为了抗体治疗中枢神经系统疾病的研究趋势,将治疗性抗体与靶向脑部特异性受体的抗体相“组合”形成具有双功能的治疗性抗体,使其与血脑屏障上特定靶点结合进入脑内并在脑部达到治疗剂量从而发挥作用.文章对治疗脑部疾病的抗体,脑部靶点应用及其研究趋势进行综述.
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噬菌体展示库筛选构建血管细胞黏附分子-1单链抗体及其效价检测
目的：从噬菌体重组抗体库中筛选获得靶向血管细胞黏附分子‐1（Vcam‐1）的单链抗体，纯化浓缩后进行亲和性鉴定，并与单克隆抗体效价进行比较。方法扩增Vcam‐1基因克隆质粒并转入真核细胞中表达获得Vcam‐1抗原蛋白，纯化后包被免疫管，通过4轮压力逐渐增大的“吸附‐洗脱‐扩增”过程筛选获得阳性克隆。对阳性克隆进行ELISA检测，选取效价高的克隆送予测序并转入大肠埃希菌进行表达，认定高表达的样品为终的阳性克隆。将该阳性克隆转染入感受态细胞表达单链抗体，纯化后经ELISA检测并评价其抗原亲和性。结果真核细胞表达的Vcam‐1抗原蛋白的分子量为85～90 kD。以Vcam‐1抗原蛋白为免疫原筛选4轮所得的阳性克隆进行单噬菌体ELISA检测，从检测结果中选取9个效价高的克隆经基因测序共获得3个序列，其中1个序列对应的克隆高表达。表达的单链抗体分子量约30 kD ，ELISA检测其对Vcam‐1抗原蛋白有较高亲和性，效价较单克隆抗体低。结论利用噬菌体展示技术获得了靶向Vcam‐1的单链抗体，为随后的诊断和治疗应用奠定了基础。
关键词： 噬菌体展示 单链抗体 血管细胞黏附分子-1 重组抗体 -
抗人CD138单克隆抗体以及重组双特异性抗体的开发及应用
目的 制备鼠源抗人CD138单克隆抗体,经Western blot验证后,利用其基因序列构建重组抗人CD138抗体以及一种能够同时靶向CD138分子和CD3分子的双特异性抗体并对其功能进行验证.方法 通过杂交瘤技术获得鼠源抗人CD138抗体,分子克隆构建重组抗体,Protein A纯化,综合运用Western blot (WB)、Flow cytometry (FC)、ELISA等实验方法进行相关的功能验证.结果 鼠源的CD138单克隆抗体特异性强,可用于后续重组抗体的制备,而且重组的抗人CD138单克隆抗体经流式验证,同样可以与表达CD138的肿瘤细胞系(RPMI-8226,U266)进行结合,且不与CD138-的肿瘤细胞系(Jurkat)结合,在此基础上构建的双特异性抗体经功能验证,可以激活T细胞,从而对CD138+的细胞系进行特异杀伤.结论 基于鼠源单克隆抗体重组构建表达的双特异性抗体anti-CD138×CD3具有靶向杀伤骨髓瘤细胞的生物活性,为细胞免疫治疗骨髓瘤疾病提供了临床研究基础.
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分子生物学在重组抗体中的应用
本文综述了以DNA重组技术为代表的分子生物学技术在重组抗体方面的应用.
