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重组单克隆抗体的纯化研究
重组单克隆抗体是新一代生物工程技术产品,其通过特定的靶点发挥药效[1]。随着大规模哺乳动物细胞培养技术的发展,工业化细胞培养液体积可达1万升以上,抗体表达量可达5 g/L以上,极大地加重了重组单抗下游纯化的压力[2-3],下游纯化成为限制重组单抗工业化扩大的主要因素[4-6]。重组单抗杂质控制浓度指标见表1,这些指标必须通过离心、过滤和色谱层析纯化后控制在一定浓度以下[7-10]。重组抗体的纯化一般可以分为细胞培养液澄清、抗体捕获、抗体精制纯化、病毒灭活和纯化工艺的放大等流程。
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TORCH感染检测技术在异常妊娠中的临床应用
随着围生医学的发展以及优生优育检测技术的发展,孕妇宫内感染已引起了医学界的关注,其中弓形虫(TOX)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV)和其他(Other)共同称为TORCH系列病原体,孕妇感染其中任何一种病原体后,可经胎盘感染胎儿造成习惯性流产、早产、死胎、胎儿先天畸形及神经管发育障碍[1].本项目研究采用血清,用抗体捕获ELISA法对我院产前检查及近期自然流产诊治的妇女共593例,进行了TORCH-IgM抗体的检测,以研究我市孕妇TORCH感染与异常妊娠的相关性,做到早诊断、早治疗、早预防,提高出生人口质量.
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乙型脑炎病毒抗体捕获ELISA检测方法的初步建立
目的 建立检测乙型脑炎病毒抗体的抗体捕获ELISA方法.方法 以乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位E39特异的单克隆抗体包被ELISA板,吸附乙型脑炎减毒活疫苗株SA14-14-2病毒粒子,再以吸附的病毒粒子捕获乙型脑炎病毒抗体,建立抗体捕获ELISA方法:同时与以乙型脑炎病毒细胞培养上清包被的间接ELISA方法进行对比,并检测临床血清样品105份.结果 间接ELISA方法背景无法消除,1:10、1:100、1:1000各稀释度的阳性血清与阴性血清吸光度(A)值相近,A阳性血清/阴性血清分别为1.02、0.99、1.13,均<2.1.而抗体捕获ELISA方法1:10、1:100稀释度的A阳性血清/阴性血清分别为3.57、2.94,均>2.1;1:1000稀释度的A阳性血清/阴性血清为1.42,<2.1,表明血清稀释度为1:100时可以显著区别乙型脑炎病毒感染的阳性血清与阴性血清,明显消除间接ELISA方法中背景过高的问题.抗体捕获ELISA方法检测105份临床血清样品,A阳性血清/阴性血清为0.257~0.321(0.262±0.050),均<2.1,为乙型脑炎病毒抗体阴性血清.结论 初步建立了乙型脑炎病毒抗体捕获ELISA方法,该方法特异性较高,对于建立乙型脑炎病毒群的快速鉴别诊断方法具有重要意义.
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肾综合征出血热IgM抗体特异性临床观察
肾综合征出血热(HFRS)作为一种严重的急性病毒性传染病,早期快速诊断是降低病死率的关键,及早检测血清中的特异性抗体有助于早期诊断.我院自1997年4月以来共收治HFRS 84例,采用IgM抗体捕获ELISA法检测病人血清中IgM抗体.现将IgM抗体的临床特异性总结如下.
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微阵列抗体捕获技术在脑脊液恶性肿瘤细胞中的应用
微阵列抗体捕获技术是以活细胞作为研究对象的一种生物芯片技术,它是适应后基因时代人类对生命科学探索的要求而产生的[1]。作为细胞研究领域的一种新技术,其既保持传统的细胞研究方法的优点,又满足了高通量获取活细胞信息等方面的要求[2]。为了更好地将科技应用于临床实践,我们在日常工作中设计了一种新型微阵列抗体捕获芯片,其原理是应用细胞膜表面的不同抗原物质与结合在玻片上的不同抗体发生特异性结合,通过自动捕获将所获目的细胞固定在特定区域,以此对脑脊液中恶性肿瘤细胞进行诊断和鉴别诊断。
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IgM抗体捕获ELISA法在流行性出血热早期诊断上的应用
流行性出血热(EHF)早期诊断、早期治疗对预后有着重要意义.我们应用IgM抗体捕获ELISA法(Mac ELISA)检测EHF特异性IgM(EHF-IgM),认为该法EHF早期诊断具有重要价值,优于间接免疫荧光(IFAT)、反向被动血凝抑制试验(RpHA)等方法.对此,我们从方法学与临床应用方面对MacELISA法检测EHF-IgM进行了实验观察,获得满意结果.