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茶多酚对氧化型低密度脂蛋白损伤后内皮细胞微管蛋白的影响
目的 研究茶多酚(TP)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)α-微管蛋白和β-微管蛋白的影响.方法 将实验分为四组:TP组(25μg/ml),ox-LDL(200μg/ml)+TP组(25μg/ml),ox-LDL组(200μg/ml)及对照组(等体积溶剂).采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活性,免疫组化法测定α-微管蛋白和β-微管蛋白的表达.结果 MTT结果显示,ox-LDL可明显抑制HUVEC增殖,与对照组相比,增殖率降低了40%(P＜0.05).TP和ox-LDL共同培养,细胞增殖率明显上升,与对照相比仅降低7.8%(P＞0.05).免疫组化结果显示,ox-LDL下调HUVEC α-微管蛋白和β-微管蛋白表达,分别为35%(P＜0.01)和40%(P＜0.01),TP与ox-LDL共同培养后,α-微管蛋白表达无明显升高(12%,P＞0.05),β-微管蛋白表达升高了32%(P＜0.05).结论 TP具有抑制ox-LDL诱导的HUVEC生长抑制的作用,且可以逆转ox-LDL引起的β-微管蛋白表达的降低作用.
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高血压大鼠心脏细胞骨架蛋白α-微管蛋白和结蛋白
目的探讨高血压大鼠心血管重构时,心肌细胞骨架蛋白α-微管蛋白(tubulin)和结蛋白(desmin)的变化.方法建立腹主动脉缩窄高血压大鼠模型,术后2周、4周用尾动脉测压法观察大鼠血压和心率的变化,术后11周用免疫组织化学和形态计量学方法,观察心血管形态改变、细胞骨架蛋白α-微管蛋白、结蛋白在心脏原位蛋白表达的变化.结果与假手术组比较,高血压大鼠2周和4周血压显著升高[(144.7±4.9比110.0±4.0)mm Hg,P<0.01; (151.4±14.9比114.4±5.5)mm Hg,P<0.01)、心血管重构,细胞骨架蛋白在心脏过表达和聚集、分布异常,而且阳性表达面积和阳性表达面积百分数增大,α-微管蛋白[(102 927.8±20 561.9比18 304.4±9 661.0)μm 2,P<0.01]、结蛋白[(153 271.7±15 193.7 比 48 686.1±14 693.3)μm 2,P<0.01].结论细胞骨架蛋白α-微管蛋白、结蛋白表达上调,参与了高血压心血管重构时心肌细胞骨架重构.
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α-微管蛋白和多药耐药基因1表达与肺癌生物学特性的相关性
目的 探讨α-微管蛋白和多药耐药基因1(MDR1)在原发性非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达特征及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测158例NSCLC组织中α-微管蛋白和MDRI的表达情况,采用Western blot方法检测30例新鲜NSCLC组织及相应癌旁正常组织中α-微管蛋白和MDRI的表达,分析两者表达与肺癌生物学特性的关系.结果 α-微管蛋白和MDRI在NSCLC中的阳性表达率分别为65.2%和51.3%,而30例癌旁组织中均未见α-微管蛋白和MDRI阳性表达.Western blot检测结果显示,α-微管蛋白和MDR1在30例新鲜NSCLC组织中的表达(0.49±0.06和0.56±0.04)明显高于相应癌旁肺组织(0.07±0.01,0.65±0.02;t=3.693,t=6.769,P＜0.01).α-微管蛋白在Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期NSCLC中的阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.01),在中、高分化NSCLC中的阳性表达率明显低于低分化NSCLC(P＜0.01).α-微管蛋白的表达与患者的年龄、性别、组织类型、肿瘤大小以及淋巴结转移无明显关系(P＞0.05),MDR1的表达与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤大小、病理分级以及淋巴结转移无关(P＞0.05).在不同组织类型中,MDR1的表达水平有较大差异,肺腺癌中的MDR1阳性表达率明显高于鳞癌和大细胞癌(P＜0.01).α-微管蛋白和MDR1的表达与化疗疗效无关(X2=0.69,X2=1.30,P＞0.05).单因素生存分析显示,α-微管蛋白和MDR1阴性患者的5年生存率分别为30.7%和28.5%,明显高于α-微管蛋白和MDR1阳性表达患者(13.5%和11.8%),差异有统计学意义(X2=20.69,X2=15.52,P＜0.01).多因素生存分析显示,α-微管蛋白(RR=3.287,P=0.006)和临床分期(RR=1.954,P=0.025)可作为独立的预后指标.α-微管蛋白和MDR1在肺癌组织中的表达无明显相关性(r=0.093,P＞0.05).结论 α-微管蛋白和MDR1在肺癌的发生和恶性进展中有一定作用,联合检测可作为判断肺癌预后的重要指标.
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碘过量对仔鼠脑α-微管蛋白表达的影响及硒的干预作用
目的:研究碘过量摄入对小鼠仔鼠脑α-tubulin基因表达的影响及硒的干预作用.方法:将60只BALB/c小鼠随机分为四组:正常对照组(饮用自来水,NC)、碘过量组 (饮水含碘3 000 μg/L,EI+)、补硒组(饮水含Se 200 (g/L,Se+)、碘过量加硒(饮水含碘3 000 μg/L +Se 200 μg/L,EI+Se+)组.以纯系鼠饲料饲养.4个月后,雌雄交配.测定D14和D28仔鼠血清总T4和总T3水平,分别用实时荧光定量PCR和Western Blot 测定D0、D14和D28仔鼠大脑组织α-微管蛋白和α-微管蛋白mRNA表达.结果:D14仔鼠血清T4水平碘过量组显著低于对照组和碘过量加硒组(P＜0.05).D0仔鼠脑组织α-微管蛋白 mRNA水平碘过量组显著低于对照组、单独补硒组和碘过量补硒组(P＜0.05).14d仔鼠脑组织α-微管蛋白 mRNA和蛋白表达水平碘过量组显著高于其它组(P＜0.05).碘过量和补硒对D28仔鼠血清T4水平和脑组织α-微管蛋白表达水平无明显影响.结论:碘过量引起仔脑α-微管蛋白的发育迟滞,补硒具有缓解作用.
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荧光差异双向凝胶电泳法筛选大鼠脑缺血相关蛋白
目的 鉴定局灶性脑缺血相关蛋白并筛选早期神经保护蛋白.方法 应用先进的差异蛋白质组学荧光差异双向凝胶电泳(2D DIGE)技术,比较大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)6 h病灶侧大脑皮层和正常大鼠相应部位蛋白质变化;采用DeCyder-DIA软件、单因素方差分析ANOVA,选择两组间蛋白表达量差异具有统计学意义(P＜0.05)且AR＞1.4的蛋白点;基质辅助激光解析/电离-飞行时间(MALDI-TOF)质谱鉴定差异蛋白.结果 脑缺血6 h组与正常对照组比较13个蛋白点符合统计学要求;经质谱分析仅鉴定出一个缺血组明显减少的蛋白点为α-微管蛋白.结论 作为结构蛋白之一的α-微管蛋白在脑缺血早期即发生明显变化,是缺血性脑血管病早期相关蛋白.
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AGK-2对大鼠原代胰岛葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响
目的 观察Sirt2特异性抑制剂AGK-2对大鼠胰岛葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响,并探讨其可能机制.方法 用免疫组化和免疫细胞化学技术观察Sirt2在胰腺组织、单个胰岛β细胞的表达情况;将分离的大鼠胰岛置于24孔培养板培养,分别在2.8和16.7 mmol/L葡萄糖条件下加AGK-2处理lh后,收集上清,检测胰岛素浓度；抽提蛋白,以Western印迹法检测d-tubulin乙酰化水平；用离子成像技术检测单个胰岛β细胞钙离子浓度的变化.结果 免疫组化结果显示,在胰腺中Sirt2主要表达在β细胞胞浆中;Sirt2的特异性抑制剂AGK-2对基础胰岛素分泌无显著影响,但使16.7 mmol/L葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低,呈剂量依赖性,5μmol/L AGK-2能使胰岛素分泌降低75％；离子成像技术结果显示,AGK-2显著抑制高糖引起的钙离子浓度增加.结论 Sirt2抑制剂AGK-2可能通过抑制高糖刺激的β细胞钙离子浓度的增加降低胰岛素分泌.
关键词： AGK-2 葡萄糖刺激的胰岛素分泌 钙离子 α-微管蛋白 -
Tubacin对β细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响
目的:观察去乙酰化酶HDAC6特异性抑制剂Tubacin对MIN6细胞胰岛素分泌的影响,并探讨其可能机制.方法:用RT-PCR检测去乙酰化酶家族成员在MIN6细胞的表达,用免疫荧光技术观察HDAC6在小鼠胰岛和MIN6细胞内的定位;分别在5.6mmol/L和25mmol/L葡萄糖的DMEM中加和不加10μmol/L Tubacin,用其处理MIN6细胞24h,收集上清,ELISA检测胰岛素浓度.同时用MTT法检测Tubacin对MIN6细胞活力的影响,RT-PCR检测上述处理条件下Insulin基因的表达情况.以Western blot和免疫荧光技术检测Tubacin 对MIN6细胞骨架蛋白α-tubulin乙酰化水平的影响.结果:MIN6细胞中各乙酰化酶家族成员mRNA的表达水平相差较大,其中HDAC6表达相对较高.HDAC6主要表达于小鼠胰岛β细胞及MIN6细胞胞浆中.在5.6mmol/L和25mmol/L葡萄糖条件下,Tubacin处理24h可以显著抑制胰岛素分泌,但不影响MIN6细胞活力.同时,在5.6mmol/L葡萄糖存在条件下Tubacin不影响胰岛素基因表达,在25mmol/L葡萄糖存在条件下Tubacin可轻度上调胰岛素基因表达.Western blot和免疫荧光结果发现,Tubacin抑制胰岛素分泌的同时伴有α-tubulin乙酰化水平增加.结论:HDAC6抑制剂Tubacin可能通过增加MIN6细胞α-tubulin乙酰化水平,改变细胞骨架的活动度而抑制胰岛素分泌.
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促红细胞生成素对血管性痴呆模型大鼠认知功能、脑保护作用及海马α-微管蛋白表达的影响
目的 研究促红细胞生成素(Epo)对血管性痴呆(VD)模型大鼠认知功能、脑保护作用和海马α-微管蛋白(tubulin)表达的影响.方法 用"两血管阻断+硝普钠降压"法建立大鼠VD模型,并给予Epo腹腔注射治疗,采用Morris水迷宫试验检测大鼠的认知功能,Nissle染色、α-tubulin免疫组化染色观察细胞形态和Western blot法检测海马α-tubulin表达水平.并与VD大鼠及假手术组大鼠比较.结果 与VD组比较,Epo组大鼠水迷宫试验逃避潜伏期明显缩短(除试验第1 d)(均P＜0.05);海马神经元形态规则,尼氏小体数量多,α-tubulin阳性轴突数多,α-tubulin含量显著升高(P＜0.05).而Epo组与假手术组水迷宫试验逃避潜伏期及海马α-tubulin含量差异无统计学意义.结论 Epo可改善VD大鼠的认知功能,减轻缺血性脑损害,促进海马α-tubulin的表达.
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JWA 蛋白与α-微管蛋白结合和对微管稳定性的调节
目的:探讨了JWA蛋白与α-微管蛋白在细胞内的分布和相互关系,特别是在有丝分裂过程中的动态变化及与微管蛋白的关系.方法:用荧光显微镜技术研究低温处理、处理后恢复的NIH3T3细胞JWA蛋白和微管蛋白的相互作用;用激光共聚焦技术检测NIH3T3细胞的JWA蛋白与α-微管蛋白在细胞内的分布.结果:JWA蛋白在细胞内与α-微管蛋白的分布基本平行.结论:JWA蛋白,作为一种新的微管相关蛋白,在微管动力学变化过程和有丝分裂过程中与α-微管蛋白有交互作用,与α-微管蛋白结合,可能对微管稳定性起一定的调节作用.
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中心体α-微管蛋白、γ-微管蛋白在脑胶质瘤中的表达及其与Survivin表达的相关性研究
目的 探讨中心体α-微管蛋白和γ-微管蛋白在脑胶质瘤中的表达,及其与凋亡抑制基因Survivin表达的相关性.方法 应用免疫组织化学方法检测51例脑胶质瘤组织中α-微管蛋白、Survivin蛋白的表达,免疫荧光染色方法检测γ-微管蛋白的表达,并分析其之间的相关性.结果 脑胶质瘤高级别纽(Ⅲ～Ⅳ级)α-微管蛋白、γ-微管蛋白及Survivin蛋白表达阳性率(88.0%、80.0%、92.0%)明显高于低级别组(Ⅰ、Ⅱ级)(22.2%、47.1%;11.1%、35.3%;33.3%、52.9%),且差异具有统计学意义(P均<0.0125).α-微管蛋白、γ-微管蛋白与Survivin表达之间均呈正相关(r分别为0.4404、0.547 8,P<0.05).结论 α-微管蛋白、γ-微管蛋白和Survivin在胶质瘤中的表达随恶性程度升高而增加,且相互之间均呈正相关.微管蛋白与Survivin的相互作用可能是胶质瘤发生发展过程中的重要事件.
关键词： 脑胶质瘤 α-微管蛋白 γ-微管蛋白 Survivin蛋白 中心体 -
血管扩张刺激磷蛋白与微管蛋白的结合
目的 探讨血管扩张刺激磷蛋白(VASP)及其丝氨酸157(p-VASP S157)和239( p-VASP S239)位点磷酸化与α-微管蛋白(α-Tubulin)之间的关系,明确VASP是一个新的微管相关蛋白.方法 采用免疫荧光染色观察p-VASP S157、p-VASP S239和α-Tubulin在人宫颈癌上皮细胞HeLa的共定位；利用免疫共沉淀、微管沉淀和Western blot方法明确VASP及其不同位点磷酸化与α-Tubulin的结合情况.结果 VASP和p-VASP S157能够与α-Tubulin结合；p-VASP S239在细胞周期各个时期与α-Tubulin均无共定位关系.结论 VASP是一个新的微管相关蛋白,其丝氨酸157磷酸化与二者的结合相关.
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阿尔采默病患者皮肤α-微管蛋白的免疫细胞化学与胶体金免疫电镜观察
目的观察阿尔采默病(AD)患者皮肤基底细胞α-微管蛋白的变化.方法取患者背部皮肤,用免疫细胞化学和胶体金免疫电镜技术观察,并进行定量分析.结果免疫细胞化学染色显示,对照组皮肤免疫阳性染色主要位于表皮层基底细胞的胞质内,棘细胞层和颗粒层可见少量的阳性细胞;AD组基底细胞内着色深,棘细胞层和颗粒层亦有表达,但数量少.胶体金标记结果显示,对照组基底细胞可见较丰富的微管,标记的胶体金散在于胞质.AD组微管较对照组减少;标记的金颗粒数量较对照组明显增多.定量结果显示,AD组α-微管蛋白免疫细胞化学染色的AOD值(1.165±0.079)、VIOD值(186.000±15.853)均较对照组(0.814±0.152,96.020±14.755)明显增高(P＜0.01);α-微管蛋白胶体金标记颗粒数目AD组(20.74±3.99)亦较对照组(15.50±3.41)增多明显(P＜0.01).结论AD患者皮肤基底细胞内微管数量的减少,结构破坏,对皮肤组织的观察可能间接反映神经组织的改变.
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洛铂诱导胆管癌RBE细胞F-肌动蛋白和α-微管蛋白骨架改变
目的 观察洛铂对人胆管癌RBE细胞微丝F-肌动蛋白(F-actin)和α-微管蛋白(α-tubulin)作用.方法 体外培养胆管癌RBE细胞,分别用不同剂量洛铂处理,鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素(Phalloidin-FITC)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)双染后激光共聚焦显微镜观察微丝蛋白F-actin结构变化,免疫组织化学染色观察α-tubulin结构变化,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测α-tubulin mRNA转录水平变化.结果 激光共聚焦显微镜及免疫组织化学染色法观察到洛铂作用下,胆管癌RBE细胞微丝蛋白F-actin与微管蛋白α-tubulin均发生解聚和重排,而α-tubulin染色加深(P＜0.05),α-tubulin mRNA/β-actin结果:5.0 mg/L组:2.08 ±0.13;25.0 mg/L组:1.91±0.46(P ＜0.05),证实洛铂使胆管癌RBE细胞α-tubulin转录水平增加.结论 微丝、微管的解聚和重排在洛铂对胆管癌RBE细胞诱导凋亡过程中起重要作用.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589体外诱导人多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡及其机制
目的 研究新一代组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂LBH589单药或联合中药禹州漏芦含药血清对人多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266诱导凋亡作用及其机制.方法 利用免疫印迹技术(Western blot)分析不同浓度LBH589作用HDAC6特异底物α-微管蛋白乙酰化水平;采用免疫沉淀(IP)法检测不同浓度LBH589作用后热休克蛋白90(HSP90)与其客户蛋白的亲和力.结果 Westernblot分析显示不同浓度LBH589(0、20、50 nmol/L)单药及50 nmol/L与禹州漏芦含药血清(1g/ml)联合均能够抑制U266细胞增殖,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,α-微管蛋白乙酰化水平、HSP90乙酰化的程度逐渐上调,变化呈剂量依赖性(P＜0.05),且LBH589与禹州漏芦含药血清联合组抑制作用较单药组明显(均P＜0.05).结论 LBH589能够抑制MM细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导人MM细胞株U266凋亡.
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邻苯二甲酸二丁酯和苯并[a]芘对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白和微管蛋白表达的影响
背景与目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)和苯并[a]芘[benzo(a)pyrene,BaP]单独或联合染毒对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白和α-微管蛋白表达的影响.材料与方法:分离纯化大鼠睾丸支持细胞,以1、10、100 μg/ml DBP和0.1、1、10 μg/ml BaP单独或依次联合染毒12、24、48 h后,用免疫荧光方法检测细胞中波形蛋白和a.微管蛋白的表达. 结果:与DMSO组比较,染毒24 h后,10 μg/ml DBP与1 μg/ml BaP均可诱导波形蛋白表达水平下降(P<0.05),100 μg/ml DBP组和10 μg/ml BaP组的波形蛋白下降更为显著(P<0.01),100 μg/ml DBP+10 μg/ml BaP联合染毒组波形蛋白的表达显著降低(P<0.01).染毒48 h后,DBP和BaP单独染毒中、高剂量组波形蛋白的表达显著降低(分别为P<0.05和P<0.01);联合染毒各组的波形蛋白表达与DMSO组相比均显著减少(P<0.05或P<0.01),但与DBP和BaP各对应剂量单独作用组并无显著差异(P>0.05).染毒24 h后,10 μg/mlBaP组α-微管蛋白表达明显增加(P<0.05);48 h后,100 μg/ml DBP组α-微管蛋白表达显著上升(P<0.05),BaP各组α-微管蛋白表达均显著增加.结论:一定剂量的DBP和/或BaP可诱导大鼠支持细胞内波形蛋白表达降低,微管蛋白表达增加,二者联合作用呈现拮抗效应.
