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植物血球凝集素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的作用
植物血球凝集素(phytohemagglutinin,PHA)是存在于豆科植物种子中的一种糖蛋白,它具有刺激淋巴细胞转化及分裂的作用.镉对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响及其机制已见报道[1].本实验在此基础上,检查PHA对染镉小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响.
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不同刺激剂对人外周血淋巴细胞亚群增殖的影响
目的:采用流式细胞术分析PHA、PMA、IL-2对PBMC和全血不同培养体系中人外周血淋巴细胞亚群增殖的影响,为不同的实验目的选取合适的培养体系提供实验基础.方法:收集健康受试者(n=6)静脉血肝素钠抗凝样本(10 ml/样本),每个样本取300 μl全血并直接裂解红细胞经荧光染色后流式细胞术检测淋巴细胞亚群.在400 μl全血接种淋巴细胞自体血浆培养液中,分别加入3种不同刺激剂,37℃、5％ CO2培养箱中培养60h;2ml全血分离PBMC,淋巴细胞培养液中分别加入3种不同刺激剂,于37℃、5％ CO2培养箱中培养60h.培养物经荧光染色后流式细胞术分析淋巴细胞亚群变化.结果:分离的PBMC经PHA刺激后淋巴细胞主要表达CD4-CD8-CD3+淋巴母细胞;PMA刺激后CDTCD4+T淋巴细胞和CD3-CD19+B淋巴细胞比例下降(P＜0.01,P＜0.05);IL-2刺激后淋巴细胞亚群比例增殖前后无明显变化.全血自体血浆经PHA刺激后转化为CD4+CD3+T淋巴母细胞和CD8+CD3+T淋巴母细胞,B淋巴细胞和NK细胞未见表达;PMA刺激后转化为CD8+CD3+T淋巴母细胞和CD4-CD8-T淋巴细胞,B/NK细胞用表面标志物无法区分IL-2刺激后NK细胞比例明显增加(P＜0.05).结论:PMA刺激增殖作用快,IL-2对淋巴细胞亚群增殖前后比例影响小,PHA刺激淋巴细胞分裂代数更多.
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重组人CTLA4-Ig对T细胞活化功能的影响
目的:分析真核表达产物CTLA4-Ig对T细胞活化功能的影响.方法:构建并用真核表达系统表达CTLA4-Ig,通过蛋白A亲合柱纯化获得纯品;然后观察CTLA4-Ig对淋巴细胞转化功能及T细胞表面分子CD25表达的影响;用3H-TdR掺入法研究CTLA4-Ig对混合淋巴细胞反应的影响.结果:CTLA4-Ig抑制PHA对淋巴细胞的转化;同时,抑制PHA刺激的淋巴细胞表面CD25分子的表达,抑制率达53%,与对照相比抑制显著(P<0.05),且这种效应有剂量依赖性;CTLA4-Ig 抑制单向混合淋巴细胞反应,抑制率达87.53%,与对照相比亦抑制显著(P<0.05),且效应亦呈剂量依赖性.结论:CTLA4-Ig能有效阻断T细胞的活化,并且阻断效应是通过多种信号途径起作用的.
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口腔颌面部恶性肿瘤患者CD4+T细胞缺陷的初步分析
目的:初步探讨口腔颌面部恶性肿瘤患者免疫抑制的原因.方法:检测患者外周血淋巴细胞亚群及体外淋巴细胞增殖水平.结果:患者的 CD4+ T细胞数量增多,但对PHA和SEB刺激的反应性均低于正常人.在PHA刺激下,恶性肿瘤患者组 CD4+ T细胞百分含量呈下降趋势.结论:患者外周血中 CD4+ T细胞表面受体的vβ部分可能存在缺陷.
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B16F10黑素瘤细胞培养上清对同基因小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用
目的:研究B16F10黑素瘤细胞培养上清对同基因小鼠脾淋巴细胞的抑制作用.方法:制备B16F10黑素瘤细胞培养上清,作用于同基因小鼠脾淋巴细胞,通过PHA刺激和混合淋巴细胞反应,用MTT法检测淋巴细胞的增殖活性.结果:在B16F10黑素瘤细胞培养上清的作用下,PHA诱导的同基因小鼠脾淋巴细胞增殖率平均为63.00%,明显低于对照组,差异有显著性(t = 16.447,p = 0.000);混合淋巴细胞反应的淋巴细胞增殖率平均为61.82%,亦明显低于对照组,差异有显著性(t=8.097,P=0.000).结论:B16F10黑素瘤细胞培养上清对同基因小鼠脾淋巴细胞的增殖具有抑制作用.
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PCG-PPD与PHA联合皮试诊断肺结核的临床观察
目前肺结核病的诊断主要靠痰检、X线或CT,PPD试验.但痰菌阳性率即使在活动性肺结核病人中也仅有30%～40%,而X线是靠间接影像推断,由于肺门结构的复杂、呼吸量及吸入病原体的不同可造成"同病异影"或"异病同影"或X线、CT片上肺结核表现常呈多种形态,PPD试验有时存在假阴性.
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猴头蘑硒多糖对正常小鼠免疫功能影响的实验研究
1 实验材料猴头蘑、富硒猴头蘑:由黑龙江省铁力林业局食用菌生产基地提供.猴头蘑硒多糖、猴头蘑多糖:由黑龙江中医药大学植化教研室协助提取.植物血凝素(PHA):上海伊华医学科技有限公司产品.昆明种小鼠:购自黑龙江中医药大学动物中心.
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斑秃患者外周血单一核细胞中Th1/Th2型细胞因子的表达
我们用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测斑秃患者外周血单一核细胞(JPBMC)经PHA刺激后,γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)、白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)因子基因表达,以探讨细胞因子在斑秃发病中的作用.
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CYP1A1基因多态性在妇科肿瘤中研究进展
在细胞色素P450 (CYP)家族中,CYP1A1 是激活多环芳烃类化合物(PAH)的主要代谢酶之一,CYP1A1 基因的转录是通过反相作用因子和一个具有诱导剂的增强子相互作用得以调控,被诱导的CYP1A1活性呈现多态性.CYP1A1基因多态性与肿瘤的发生发展相关,本文就CYP1A1基因多态性在妇科肿瘤中的研究进展做一综述.
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婴儿手术后细胞免疫的变化
近年来,一些研究表明,成人和儿童在麻醉和手术后,产生免疫功能抑制.本文应用经PHA刺激的3H-胸腺嘧啶核苷掺入法,了解淋巴细胞转化状况,以探讨在麻醉下手术对婴儿细胞免疫的影响,并结合本组资料,对预防术后感染略加讨论.
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恶性实体瘤患儿IL-2R的变化及其表达的研究
为进一步探讨恶性肿瘤患儿免疫紊乱发生饥制,检测了30例恶性肿瘤,10例良性肿瘤患儿外周血IL-2R、CD16的含量变化,并观察经PHA刺激后培养0,24,48,72小时肿瘤患儿外周血淋巴细胞膜上IL-2R的活性表达,目的是了解肿瘤患儿免疫功能受抑的程度,探讨机体免疫机制与肿瘤的关系.
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LAK细胞之诱导条件的探讨
目的探讨LAK细胞的诱导条件.方法采用不同含量的r-IL-2T和PHA制备LAK细胞,经台盼兰拒染实验计数法及MTT比色法检验LAK细胞数目及活性.结果在r-IL-2 300μ/ml和PHA10μg/ml时,制备的LAK细胞数量多,杀伤活性较高.结论结论r-IL-2和PHA可诱导LAK细胞增殖.
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PHA、ConA及CD3ε单克隆抗体对小鼠淋巴细胞迁移及分泌趋化因子的影响
目的 探讨不同浓度的PHA、ConA及CD3ε单克隆抗体对Balb/c小鼠淋巴细胞迁移及分泌趋化因子的影响,初步了解这3种刺激剂与小鼠淋巴细胞迁移功能之间的关系.方法 通过研磨法分离Balb/c小鼠脾脏淋巴细胞,用不同浓度的PHA、ConA及CD3ε单克隆抗体分别刺激培养淋巴细胞,收集细胞上清,用Traswell法测定细胞上清对淋巴细胞迁移率的影响；ELISA法检测细胞上清中趋化因子XCL1、CCL4、CCL5、CCL3、IL-16、IL-8及CCL20的水平.结果 PHA组各个浓度刺激下淋巴细胞的迁移率和对照组无明显差异；ConA组的刺激浓度为20 μg/ml时,其对应的淋巴细胞迁移率明显高于对照组；CD3ε单抗组,其浓度分别为2.5、10 μg/ml时,对应的淋巴细胞迁移率明显高于对照组.在各个刺激组中,ELISA测得的多种趋化因子水平在总体上存在明显差异.结论 ConA及CD3ε单克隆抗体分别刺激小鼠淋巴细胞后,其分泌趋化因子的功能发生了明显的改变,这些趋化因子影响着小鼠淋巴细胞的迁移功能.趋化因子XCL1、CCL4、CCL5、CCL3的水平明显高于对照,说明这几个因子在淋巴细胞迁移中起到重要的作用.根据实验结果初步推荐CD3ε单抗可以作为小鼠淋巴细胞迁移试验中的首选阳性对照,次选为ConA.
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IL-6、PHA联合磁珠分选对CIK增殖能力和杀伤肾癌786-O细胞功能的影响
目的 通过体外实验研究白介素-6(IL-6)、植物血凝素(PHA)联合免疫磁珠(IMB)分选对CIK增殖能力和杀伤肾癌786-O细胞功能的影响,为肾脏肿瘤的免疫治疗提供理论依据.方法 分离肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC),经Mini MACS免疫磁珠去除CD4+ CD25+ Treg细胞后分为4组:对照组以CD3 McAb、IL-2和IFN-γ诱导培养;PHA-CIK组、IL-6-CIK分别在对照组的基础上加用PHA、IL-6;PHA-IL-6-CIK组在对照组的基础上加用PHA和IL-6.CCK-8法检测各组CIK细胞的增殖率;流式细胞术(FCM)检测各组CIK细胞CD3+ CD8+、CD3+ CD56+、Treg表型比例;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测各组CIK细胞对肾癌786-O细胞的杀伤功能.结果 磁珠分选后,PBMC中Treg细胞的比例降低至(1.21±0.53)％;PHA-IL-6-CIK组细胞的增殖率达(28.33±3.05)％;PHA-IL-6-CIK组细胞的CD3+ CD8+、CD3+ CD56+比例分别升高至(63.13±2.70)％和(35.32±2.96)％,Treg细胞比例降低至(1.11±0.07)％;在效靶比为30:1时,PHA-IL-6-CIK组细胞对肾癌786-O细胞的杀伤率可达(42.76±3.40)％.结论 IL-6、PHA联合磁珠分选可显著增强CIK的增殖和杀伤肾癌786-O细胞能力.
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植物血球凝集素（PHA）在拔牙位点保存中的可行性研究
目的：探讨局部应用PHA对拔牙创愈合的影响。方法：选用健康大耳白兔30只，雌雄不限，随机分为实验组15只、对照组15只；拔除右上颌中切牙后，棉球压迫止血，血凝块形成后于实验组拔牙窝的局部牙槽嵴周围及血凝块内注射PHA溶液，对照组注入等量的生理盐水，所有兔子每隔2天注射一次，连续3次。于术后1周、2周、4周、8周、12周每组分别处死3只兔子，行大体观察、影像学观察及组织病理学观察。结果：实验组与对照组之间剩余牙槽嵴相对长度的差异无统计学意义（P＞0.05）；术后HE染色实验组与对照组的成骨活动未见明显差异，但同期相比实验组拔牙窝内的新生毛细血管较对照组多；术后12周的Masson染色实验组与对照组的新生骨中胶原的成熟度亦未见明显差别。结论： PHA可以促进拔牙窝内毛细血管的新生，但对剩余牙槽嵴的保存未见明显作用。
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艾滋病防治中的健康权与受教育权之冲突化解探析
健康权是一项基本权利,是人得以生存的必要前提;PHA与普通公民一样享有平等的受教育权.而从艾滋病的立法依据、现实传播路径以及实践情况考量,在PHA的受教育权与普通公民的健康权发生冲突时,应首先选择保护PHA的受教育权,但实际上PHA的受教育权难以实现.其所以如此,缘于两权性质不同、法律规范欠缺和社会对之认识不足.本文认为应当通过完善相应立法、加强社会认识、规制教育机构等方式平衡两权冲突,使PHA的受教育权得以实现.
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PHA-M体外诱导脐血单个核细胞分化为内皮细胞的实验研究
目的:探讨植物血球凝集素(PHA)在体外定向诱导人脐血单个核细胞(UBMNC)分化为内皮细胞的可行性.方法:分离人UBMNC加入PHA体外诱导培养1～8 d,在倒置显微镜下动态观察细胞的生长分化,并以流式细胞术(FCM)检测培养的细胞中Von Willebrand 因子(vWF)的表达,在电镜下观察内皮细胞特异性的Weibel-Palade(W-P)小体.结果:在PHA的诱导下,UBMNC可分化为典型的梭形内皮细胞.FCM检测诱导分化效率达60%以上;电镜观察发现,在胞质中含有内皮细胞特异性的W-P小体.结论:UBMNC在PHA的诱导下,可定向分化为内皮细胞,为用脐血治疗缺血性疾病的可能性提供了实验依据.
