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TET2参与ox-LDL对人脐静脉内皮细胞CSE/H2 S体系的调控作用
目的:观察DNA甲基化修饰酶TET2对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中CSE/H2S体系的影响。方法:用不同浓度(0、25、50、75、100 mg/L) ox-LDL处理HUVEC不同时间(0、12、24、48 h),RT-PCR和Western blot检测细胞TET2和CSE表达变化,改良亚甲基蓝分光光度法检测培养液中H2 S含量;用TET2过表达和TET2干扰质粒分别转染HUVEC,再用75 mg/L ox-LDL处理24 h,RT-PCR和Western blot检测细胞TET2和CSE表达,改良亚甲基蓝分光光度法检测培养液中H2 S含量。结果:ox-LDL呈浓度和时间依赖性下调HUVEC中TET2和CSE mRNA和蛋白表达,减少培养液中H2 S含量,以75 mg/L ox-LDL 处理24 h效果为明显;TET2过表达可逆转ox-LDL引起的HUVEC中TET2和CSE表达下调以及培养液中H2 S含量的降低,TET2干扰则作用相反。结论:DNA甲基化修饰酶TET2可上调HUVEC的CSE/H2 S体系,有望成为CSE/H2 S体系一个新的内源性调控靶点。
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FGF-2通过PI3K-PKB/Akt-GSK-3β信号通路抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡
目的:探讨成纤维细胞生长因子2(FGF-2)抗缺氧(H/R)/复氧诱导心肌细胞凋亡的新机制。方法:对各实验组分别检测心肌细胞活力与凋亡,p-Akt、p-GSK-3β、Bcl-2、Bax、caspase-3前体(32 kD)和活性体(17 kD)蛋白表达变化。结果:与control相比,H/R能明显抑制心肌细胞活力,诱导心肌细胞凋亡,下调p-Akt、p-GSK-3β、Bcl-2和caspase-3前体蛋白表达,上调Bax和caspase-3活性体蛋白表达;FGF-2可显著改善H/R对心肌细胞的损伤及对相关蛋白表达的影响,其作用能被PI3K特异性抑制剂LY294002和PKB/Akt特异性抑制剂SH-5拮抗。结论:FGF-2抗缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡,其机制与激活PI3K-PKB/Akt-GSK-3β信号通路有关。
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致炎与抗炎细胞因子对小鼠肺泡巨噬细胞SR、CD14表达的影响
清道夫受体(scavenger receptor,SR)是细胞膜上的一类重要防御性受体, 在LPS 的摄取与降解过程中发挥重要作用.早期研究显示,内毒素血症时机体在高表达多种致炎与抗炎因子如TNF-α、IL-10的同时,多种组织巨噬细胞的SR表达下调.目的: 研究致炎与抗炎细胞因子对小鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)SR、CD14表达的影响.[ HTH〗方法:分离昆明种小鼠肺泡巨噬细胞,培养24 h后以不同浓度TNF-α、 IL-6、IL-10刺激不同时间(0、2、4、8、12、16、24 h),用免疫细胞化学方法及RT-PCR方法分别检测SR/ CD14蛋白及mRNA表达变化,所有实验重复3次.数据(光密度分析)采用SPSS软件进行统计分析,P<0.05代表差异显著,P<0.01代表差异非常显著.结果:①TNF-α及IL-6单独刺激 AM均能以剂量-时间依赖关系增强CD14的表达,但抑制SR的表达.刺激后2 h可检测到CD14 /SR蛋白及mRNA的表达变化(P<0.05),随刺激时间增加变化更趋明显,12 h时变化为明显,CD14表达达高峰(P<0.01),SR表达至低谷(与正常对照组相比,蛋白水平及mR NA水平均有P<0.01),TNF-α浓度在0-100 μg/L范围内及IL-6浓度在0-1 000 μg/L范围内对CD14/SR表达的影响具有剂量依赖关系,刺激剂量越大,影响越明显;②IL-10刺激AM 6 h后能增强SRmRNA的表达并部份抑制CD14mRNA表达(P<0.05),刺激16 h对SR/CD14 的影响为明显(P<0.01),免疫组化同样显示出IL-10增强SR的表达(P<0.01),但对CD 14表达没有明显影响.结论: ①致炎细胞因子TNF-α、IL-6刺激小鼠肺泡巨噬细胞能以剂量-时间依赖关系从mRNA及蛋白水平上调CD14、下调SR的表达. ②抗炎细胞因子IL-10能以时间依赖关系从mRNA及蛋白水平上调SR表达,同时能在mRNA水平下调CD14表达.
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慢性缺氧对大鼠肺内动脉平滑肌细胞Kv1.3, Kv2.1, Kv3.1钾通道基因在急性缺氧时表达变化的影响
我们的研究发现肺动脉平滑肌细胞(PASMC)上某些钾通道基因也是缺氧反应基因,急性缺氧可使其表达发生改变.慢性缺氧对PASMC中Kv1.3、 Kv2.1、 Kv3.1钾通道基因在急性缺氧时基因表达变化的影响,尚无文献报道,本文就此进行研究.
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黄芪总皂甙对CVB3感染心肌细胞cTnI、SERCA活性及mRNA表达的影响
目的:探讨黄芪提取物-黄芪总皂甙对柯萨奇B3(CVB3)感染的培养SD乳鼠心肌细胞损伤模型的保护作用,对病毒引起的肌浆网钙泵(Sarco/Endoplasmic reticulum Ca2+ ATPase,SERCA)活力及其mRNA表达变化的影响.方法:将培养SD乳鼠心肌细胞分为正常组、模型组及黄芪组,模型组及黄芪组以柯萨奇B3亲心肌病毒株(CVB3m,TCID50为10-5.83)感染心肌细胞.72~96 h后,观察各组细胞病变作用(cytopathic effect, CPE),检测其培养上清心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量及NO浓度,测定心肌细胞中SERCA活力以及SERCA2型基因的mRNA表达水平.结果:(1)和正常组相比,模型组CPE分级数明显增高(P<0.001),而黄芪组CPE分级数比模型组降低,与正常组无显著差异(P>0.1).(2)模型组、黄芪组心肌肌钙蛋白I均高于正常组,但黄芪组与模型组相比,心肌肌钙蛋白I降低,与正常组无显著差异(P>0.05).黄芪组NO浓度增高.(3)模型组心肌SERCA活力以及SERCA2型基因的mRNA水平均显著低于正常组及黄芪组(P<0.05,P<0.001).结论:表明黄芪总皂甙可以减轻病毒引起的心肌细胞损伤,对病毒感染引起心肌细胞SERCA2型基因mRNA水平降低以及SERCA功能下调有逆转作用.
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Tau蛋白在缺氧/复氧诱导的PC12细胞凋亡中的机制初探
目的:初步探讨缺氧/复氧( hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导PC12细胞凋亡模型中tau蛋白及其磷酸化水平、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况。方法:类神经元PC12细胞体外培养并传至第三代,进行相应处理,实验分组为正常对照组( control组)、模型组( H/R组)。 Annexin V-PI双染流式细胞术分别检测各组凋亡率以确定模型是否成功;造模成功后,使用RIPA裂解液提取蛋白;Western blotting技术检测各组tau蛋白及其磷酸化、Bax和Bcl-2的表达变化。结果:与control组相比,H/R组细胞凋亡率显著升高( P<0.05),提示模型构建成功;Westem blotting结果显示,与control组相比,H/R组中tau蛋白表达显著减少(P<0.05),且tau蛋白Ser202位点的磷酸化水平显著升高(P<0.05),Bax/Bcl-2显著升高(P<0.05)。结论:Tau蛋白可能参与了缺氧/复氧诱导的神经细胞凋亡,其机制有待深入研究。
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炎症下调的miR-7促进胃癌发生
目的:检测miR-7在野生型、胃炎模型和胃癌模型小鼠胃组织及人胃癌组织和细胞株中的表达,探讨了其对胃癌发展中的作用及可能的机制。方法:实时荧光定量PCR法检测胃癌组织和胃炎组织中依赖性表达变化的miR-7的表达,并转染高表达miR-7的质粒制备高表达miR-7的AGS/miR-7细胞,检测其对胃癌细胞增殖和软琼脂克隆形成的影响。结果:胃炎组织中和胃癌组织中的miR-7的表达明显低于野生型小鼠胃组织,胃癌组织中的miR-7表达明显低于胃炎组织;幽门螺旋杆菌感染的小鼠胃组织miR-7的表达明显受抑制;高表达miR-7的AGS/miR-7细胞可明显抑制细胞的增殖和软琼脂克隆形成。结论:炎症可抑制miR-7的表达,下调的miR-7促进细胞增殖和软琼脂克隆形成是炎症促进胃癌发生可能的新机制。
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孤束核ghrelin对化疗呕吐大鼠胃运动的调控研究
目的:研究孤束核ghrelin对化疗呕吐大鼠胃运动的影响,探讨下丘脑外侧区的可能调控作用。方法:腹腔注射顺铂制备化疗呕吐大鼠模型;荧光免疫组化和Western blot法检测化疗呕吐大鼠孤束核ghrelin和ghrelin受体GHSR-1a的表达变化;神经元逆行追踪结合免疫组化观察下丘脑外侧区-孤束核ghrelin能纤维联系;在体胃运动记录观察孤束核微量注射ghrelin、电刺激下丘脑外侧区对化疗呕吐大鼠胃运动的影响。结果:化疗呕吐大鼠孤束核ghrelin表达低于正常大鼠,而GHSR-1a表达高于正常大鼠,且胃运动显著减弱( P<0.05);下丘脑外侧区有神经元投射至孤束核,且有部分神经元是ghrelin免疫阳性神经元;孤束核注射ghrelin和电刺激下丘脑外侧区可显著促进正常大鼠和化疗呕吐大鼠胃运动( P<0.05);孤束核微量注射ghrelin受体阻断剂[ D-Lys-3]-GHRP-6对正常大鼠电刺激下丘脑外侧区胃运动效应无影响,而对化疗呕吐大鼠电刺激下丘脑外侧区胃运动效应显著减弱( P<0.05)。结论:孤束核ghrelin可促进化疗呕吐大鼠胃运动,并受下丘脑外侧区调控。
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Orai1通道调控内质网应激反应参与糖尿病血管内皮损伤
目的:血管内皮损伤是糖尿病血管并发症的重要病理基础,早期研究发现Ca2+稳态失衡参与内皮损伤,但是何种钙通道参与尚不十分明确。高糖可诱导内皮细胞上钙池操控性钙内流增加,同时内质网应激水平升高,因此本研究旨在研究Orai1通道对内质网应激反应的调控在糖尿病血管内皮损伤中的作用。方法:在动物及细胞水平利用Western blot 和real-time PCR检测糖尿病状态下Orai1通道的表达变化及内质网应激反应水平;进一步利用Orai1 shRNA腺病毒抑制该通道表达,在细胞水平观察其对高糖状态下内质网应激反应相关蛋白及内皮细胞磷酸化eNOS、NO生成的影响;在动物水平,利用血管张力测定仪检测Orai1通道对糖尿病小鼠血管内皮依赖性舒张反应的影响。结果:糖尿病状态下,Orai1表达及内质网应激水平均显著升高,抑制Orai1的表达可减少内质网应激标志物ATF4、CHOP、BiP等的表达,同时逆转内皮细胞NO生成水平及内皮依赖性血管舒张功能障碍。结论:Orai1通道参与糖尿病内皮损伤,其机制与调控内质网应激反应有关。
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MG132对早期糖尿病肾病大鼠肾组织SnoN表达及病理的影响
核转录共抑制因子SnoN蛋白的表达变化与大鼠糖尿病肾病(DN)的发生发展密切相关.我们以蛋白酶体抑制剂MG132干预糖尿病大鼠模型,观察肾组织SnoN蛋白和mRNA表达,以及病理变化,探讨SnoN与DN的关系及MG132治疗DN的可行性.一、材料与方法1.材料:雄性Wistar大鼠(重庆腾鑫),链脲佐菌素(STZ,美国Sigma),SnoN蛋白(美国Santa Cruz),β-actin 单克隆抗体及辣根过氧化酶标记的二抗(江苏碧云天),MG132(美国Merck),Western印迹用PVDF膜(美国Millipore),RNA提取试剂盒(Trizol试剂盒,美国MRC),超低温冰箱(-70℃)、Mini-P3垂直电泳仪、湿转电转移仪及Gel Doc 1000凝胶成像系统(美国Bio-Rad),FTC2000实时荧光定量基因扩增仪(加拿大Funglyn).
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大鼠肾间质纤维化中微小RNA-21的表达变化及其机制
肾间质纤维化是许多肾脏疾病的重要病理变化,转化生长因子β(TGF-β)信号通路的活化是纤维化发生的重要标志,抑制TGF-β信号通路可以明显缓解肾间质纤维化[1].微小RNA(miRNA)是一组含21~25个核苷酸的非编码RNA,通过转录后调节机制参与机体各个器官的生物学功能,在细胞存活、增殖、分化、凋亡、炎性反应、纤维化等信号通路中扮演重要角色[2].
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大鼠肾脏组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白增龄性的表达变化
肾脏是衰老较快的器官之一,随年龄的增长出现肾小球肥大、系膜增生、肾小球硬化和肾小管-间质纤维化等病理变化.但这一现象的分子机制并不完全清楚.研究发现,雷帕霉素可显著抑制糖尿病肾病早期及单侧肾切除后代偿性的.肾小球肥大[1,2],并且它还能减轻蛋白尿相关的肾小管-间质的炎性反应及纤维化[3].
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血管内皮生长因子及其受体在单侧输尿管梗阻大鼠术侧肾脏的表达
血管内皮生长因子(VEGF)的主要作用是刺激血管内皮细胞的增殖与分化、抑制内皮细胞凋亡,主要通过两个受体Flk-1和Fl-1发挥作用[1].本研究旨在明确VEGF及其受体在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠术侧肾脏不同时间的表达变化情况,为进一步探讨其在UUO大鼠小管间质纤维化中的作用机制提供实验依据.
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核因子κB p65、一氧化氮合酶及血管内皮生长因子在原发性膜性肾病肾小球内的表达变化及意义
为探讨核因子κB(NF-κB)、一氧化氮合酶(NOS)及血管内皮生长因子(VEGF)在特发性膜性肾病(IMN)中的作用,我们用免疫组化方法检测了38例IMN患者肾小球内NF-κB p65、NOS(iNOS、eNOS、nNOS)及VEGF蛋白的表达变化及研究其对IMN患者的影响.
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基因芯片技术在乳腺癌诊断和治疗中的应用
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,据新资料统计,全世界每年约有130万人诊断为乳腺癌,有40万人死于此病,北京、上海等大城市的乳腺癌发病率逐年上升,已位居所有女性恶性肿瘤的第1位[1].肿瘤的发生发展涉及多基因表达水平的调控,是一个多步骤、复杂的过程,包括原癌基因的过度激活表达,抑癌基因的失活,DNA损伤修复机制的破坏等.仅研究单个或数个基因的表达变化,难以从宏观上对乳腺癌的诊断、治疗及预后做出全面预测,因此迫切需要一种新的技术以满足乳腺癌这种复杂疾病的研究要求.
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丝氨酸蛋白酶抑制剂B1在肝肺综合征大鼠肺组织中的表达变化
目的 探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(SerpinB1)在肝肺综合征(HPS)肺组织中的表达情况及其可能存在的调控机制.方法 定量PCR和免疫印迹的方法测试肺组织SerpinB1的mRNA和蛋白水平;免疫组化染色观察SerpinB1、Erk1/2、p-Erk1/2以及微血管内皮细胞表面标志物CD34在肺组织中的分布以及表达.结果 CBDL(CBDL)大鼠PaO2下调并且A-aDO2升高(P<0.01);HE染色表明CBDL组大鼠肺内有炎症细胞浸润,并伴有肺泡间隔增厚;CBDL大鼠肺组织SerpinB1、Erk1/2对应的基因及蛋白表达水平随周期升高(P<0.01);免疫组化结果提示SerpinB1主要高表达于CBDL大鼠肺微血管内皮细胞及炎症细胞,CD34阳性细胞在CBDL组表达上调并且与SerpinB1上调呈正相关(r=0.795,P<0.05).结论 SerpinB1在HPS大鼠肺组织中的表达显著上调,与激活Erk1/2并与肝肺综合征肺血管新生的形成有关.
关键词: 丝氨酸蛋白酶抑制剂B1 肝肺综合征 肺组织 表达变化 -
PTEN缺失在诱导大肠腺瘤样息肉产生及恶性演变机制中的作用
Morson[1]提出“腺瘤-癌”顺序学说,该学说支持大肠癌是由腺瘤发展而来的观点,而由腺瘤发展为大肠癌一般为10~15年。大肠腺瘤性息肉可分为管状腺瘤、绒毛状腺瘤和混合性腺瘤[2]。近年来我国大肠癌发病和病死率均呈上升趋势[3],因而早期发现大肠息肉具有重要意义。大肠息肉的发病机制尚未完全明晰,Yip 等[4]研究发现PTEN 在大肠息肉的发生及恶变中占据重要的地位,约12%~78%的大肠息肉患者随着病理类型的差异而有不同程度的PTEN 表达缺失,且与恶化程度也具有一定的相关性。 PTEN的缺失可导致肠干细胞生物学功能紊乱,导致自我更新和克隆增殖,分化与凋亡失去平衡,从而形成大肠息肉。本文就PTEN 对大肠息肉病变过程中的表达变化及影响做一简要综述。
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大鼠肝再生增强因子mRNA在损伤肝组织的表达
我们通过复制CCl4诱导的大鼠急性肝损伤模型,利用半定量RT-PCR法研究损伤肝组织肝再生增强因子(ALR)mRNA的表达变化,为从分子水平研究ALR在肝损伤修复过程中的保护作用提供实验依据。1. 材料与方法:将20只成年健康SD大鼠随机分为两组,正常对照组5只,不予任何处理;实验组15只,行一次性腹腔注射50% CCl4 4ml/kg,复制急性肝损伤模型。
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激活素A、TGF β 1在实验性肝纤维化中的表达比较
激活素(activin,ACT)与肝纤维化形成有关,本实验以四氯化碳(CCl4)制备大鼠肝纤维化模型,分析了肝纤维化时ACT A、转化生长因子β1(TGF β 1)的表达变化.
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降钙素基因相关肽与神经损伤修复
中枢及周围神经损伤可导致运动功能障碍,其损伤后的再生修复问题一直是困扰神经科学工作者的一大难题.中枢及周围神经损伤后可引起中枢及外周部位降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的表达变化.而CGRP的表达程度与神经损伤及修复再生的情况有一定的相关性.