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小白菊内酯对人肝癌BEL-7402细胞p53蛋白和增殖细胞核抗原表达的影响
小白菊内酯(parthenolide)为一种西方传统药物,是从艾叶菊属的短舌匹菊(小白菊)Pyrethrum Parthenium(L.)Smith中提取的化学成分(C15H20O3),主要用于治疗皮肤感染、风湿病和偏头痛[1].小白菊内酯以时间依赖关系抑制c-fos和c-myc蛋白表达,但不影响p15、p16、p18、p19蛋白表达,以剂量依赖关系使血管平滑肌细胞(VSMC)周期中的G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[3H]TdR掺人[2];前期研究表明小白菊内酯抑制人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖,并诱导其凋亡[3].本研究以BEL-7402细胞为靶细胞,研究小白菊内酯对其p53蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨其抑制细胞增殖的机制.
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FTY720联合吉西他滨对人非小细胞肺癌细胞株A549及H520的影响
目的:探讨FTY720联合吉西他滨对人非小细胞肺癌( NSCLC)细胞株A549及H520增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度的FTY720(0、2、4、6、8、10μmol/L)分别对体外培养的人NSCLC细胞株A549及H520进行处理,分别于培养后第24、48、72h检测吸光度值,观察不同浓度的FTY720对A549及H520细胞株的增殖抑制作用;分别对 A549及 H520细胞株加以 FTY720(7μmol/L)联合吉西他滨(0.2μmol/L)和FTY720(5μmol/L)联合吉西他滨(0.1μmol/L)进行处理,观察两组细胞培养48h后的抑制作用及凋亡作用差异。结果不同浓度的FTY270对体外培养的人NSCLC细胞株A549、H520的抑制作用不同(P<0.05),同一种浓度FTY720体外培养的人NSCLC细胞株A549、H520不同培养时间的抑制率不同(P<0.05),FTY720对体外培养的人NSCLC细胞株A549、H520的增殖抑制作用具有浓度、时间依赖关系。 FTY720联合吉西他滨对A549、H520细胞的抑制作用明显强于两种药品的单独应用( P<0.05)。 FTY720联合吉西他滨对A549、H520细胞的凋亡率用明显高于两种药品的单独应用( P<0.05)。结论 FTY720联合吉西他滨对人NSCLC细胞株A549及H520的增殖具有显著的抑制和促进细胞凋亡的作用,强于两者单独应用的效果。
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血管紧张素Ⅱ对细胞因子诱导一氧化氮合酶的表达引起心肌成纤维细胞凋亡的调控作用
目的:本实验采用大鼠心肌成纤维细胞培养的方法,观察A细胞因子引起的心肌成纤维细胞(CFbs)死亡时,是否与诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达有关;B. 血管紧张素Ⅱ是否具有抗iNOS表达引发CFbs死亡的保护作用.方法:A实验分为空白对照组,interleukin-1 β组(5 ng/mL), interferon-γ组(10 ng/mL),tumor necrosis factor-α组(10 ng/mL).B实验分为空白对照组,interleukin-1 β(5 ng/mL)组,interleukin-1β+Angiotensin Ⅱ(10-6mol/L, AngⅡ)组,interleukin-1β+S-methylisthiourea(3×10-5 mol/L, iNOS抑制剂)组,interleukin-1β+Angiotensin Ⅱ+losartan(3×10-5mol/L, AngⅡ一型受体拮抗剂)组,interleukin-1β+Angiotensin Ⅱ+DP123319(3×10-5 mol/L, AngⅡ二型受体拮抗剂)组.结果:我们发现,interleukin-1 β组(5 ng/mL)能够诱导iNOS蛋白的表达和一氧化氮(NO)的生成,并且存在剂量和时间依赖关系,而interferon-γ组(10 ng/mL)或tumor necrosis factor-α组(10 ng/mL)则没有这种作用.AngⅡ(10-6 mol/L)能够降低interleukin-1β诱导iNOS蛋白的表达和CFbs的死亡;iNOS抑制剂S-methylisthiourea (3×10-5mol/L)能够抑制NO的生成,减少CFbs的死亡;AngⅡ一型受体拮抗剂losartan具有拮抗AngⅡ抗iNOS表达引发CFbs死亡的保护作用,而AngⅡ二型受体拮抗剂DP123319(3×10-5mol/L)无此作用.结论:Interleukin-1β能够诱导CFbs中iNOS蛋白的表达,AngⅡ具有抗iNOS表达引发CFbs死亡的保护作用,而且可能是通过其一型受体发挥作用的.
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致炎与抗炎细胞因子对小鼠肺泡巨噬细胞SR、CD14表达的影响
清道夫受体(scavenger receptor,SR)是细胞膜上的一类重要防御性受体, 在LPS 的摄取与降解过程中发挥重要作用.早期研究显示,内毒素血症时机体在高表达多种致炎与抗炎因子如TNF-α、IL-10的同时,多种组织巨噬细胞的SR表达下调.目的: 研究致炎与抗炎细胞因子对小鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)SR、CD14表达的影响.[ HTH〗方法:分离昆明种小鼠肺泡巨噬细胞,培养24 h后以不同浓度TNF-α、 IL-6、IL-10刺激不同时间(0、2、4、8、12、16、24 h),用免疫细胞化学方法及RT-PCR方法分别检测SR/ CD14蛋白及mRNA表达变化,所有实验重复3次.数据(光密度分析)采用SPSS软件进行统计分析,P<0.05代表差异显著,P<0.01代表差异非常显著.结果:①TNF-α及IL-6单独刺激 AM均能以剂量-时间依赖关系增强CD14的表达,但抑制SR的表达.刺激后2 h可检测到CD14 /SR蛋白及mRNA的表达变化(P<0.05),随刺激时间增加变化更趋明显,12 h时变化为明显,CD14表达达高峰(P<0.01),SR表达至低谷(与正常对照组相比,蛋白水平及mR NA水平均有P<0.01),TNF-α浓度在0-100 μg/L范围内及IL-6浓度在0-1 000 μg/L范围内对CD14/SR表达的影响具有剂量依赖关系,刺激剂量越大,影响越明显;②IL-10刺激AM 6 h后能增强SRmRNA的表达并部份抑制CD14mRNA表达(P<0.05),刺激16 h对SR/CD14 的影响为明显(P<0.01),免疫组化同样显示出IL-10增强SR的表达(P<0.01),但对CD 14表达没有明显影响.结论: ①致炎细胞因子TNF-α、IL-6刺激小鼠肺泡巨噬细胞能以剂量-时间依赖关系从mRNA及蛋白水平上调CD14、下调SR的表达. ②抗炎细胞因子IL-10能以时间依赖关系从mRNA及蛋白水平上调SR表达,同时能在mRNA水平下调CD14表达.
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卡介苗胞壁蛋白诱导人肺腺上皮细胞hBD-1 mRNA表达及其抗菌活性的增强
目的:旨在分离和鉴定刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)β-防御素-1(hBD-1)基因表达的卡介苗胞壁活性蛋白,为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下基础.方法:采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、Sephadex G-150柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Northern杂交检测SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达;采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC-A-1细胞培养上清的抗菌活性.结果:RT-PCR和Northern杂交分析均证实卡介苗刺激SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达增强了2倍.卡介苗胞壁蛋白Sephadex G-150层析所得6个组分中,组分5(分子量范围约21×104-29×104)诱导SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达增强4倍,其培养上清的抗菌活性显著增强.这种诱导作用具剂量和时间依赖关系.结论:结果提示卡介苗胞壁蛋白是β-防御素基因诱导表达的一新的激活因子.