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丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶及抑制剂研究进展
丙型肝炎病毒(heptitis cvirus,HCV)丝氨酸蛋白酶(serine protease)是催化病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶.对病毒复制和宿主细胞都有重要作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点.本文从丝氨酸蛋白酶结构、功能和抑制剂等三方面,介绍丝氨酸蛋白酶的研究进展,这对该酶抑制研究和丙型肝炎的治疗研究会有积极意义.
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食品中常见有机磷农药残留的检测方法
为有效解决食品安全事件频发问题,本文对食品中常见的有机磷农药残留的检测方法进行了介绍和分析。目前的检测方法包括传统色谱法(气相色谱法、高效液相色谱法)、快速检测法(荧光免疫法、放射免疫法、酶免疫分析法、流动注射免疫)与快速酶抑制检测法。
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基层食品快检应用初探
当前,我国食品快检技术可使用的方法较多,可根据实际情况而选择,如酶抑制快检法、传感器法、免疫技术、生物技术等,这些技术一般在5-30分钟左右就可以完成检验并出具检验结果,满足基层食品监管工作中现场快检的要求;另外,快检技术所使用的设备小巧,便于携带,具有一定的经济性和实用性价值.
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血浆中游离梭曼的电鳐乙酰胆碱酯酶抑制测定法
梭曼是一种对体内乙酰胆碱酯酶(AChE)有强烈抑制作用的有机磷化合物.由于梭曼毒性强且在体内降解迅速,国外目前主要通过大进样量气相色谱或气-质联用方法来检测[1,2],其优点是:(1)灵敏度较高,如检测下限可达1.5 pg/ml血浆;(2)可以将梭曼的4个异构体分开,以便研究各异构体在体内的动力学过程.
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有机磷农药中毒53例收治情况
有机磷农药中毒主要通过胃肠道、呼吸道,皮肤和黏膜吸收.吸收后迅速分布全身各脏器.其中以肝内浓度高,有机磷农药中毒对人畜的毒性主要对乙酰胆碱酯酶抑制,引起乙酰胆碱蓄积,使胆碱能神经受到持续冲动,导致先兴奋后衰竭的一系列毒草碱样、烟碱样和中枢神经系统等症状;严重患者可因昏迷和呼吸衰竭而死亡.我院近3年来共收治53例有机磷农药中毒病例.现作分析.
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阿托品中毒量在救治有机磷农药中毒中的应用分析
阿托品是抗胆碱酯酶抑制,M胆碱受体阻滞剂.临床常用于各种内脏绞痛,抗休克,解救有机磷农药中毒.其药理毒性是解除内脏平滑肌痉挛,抑制腺体分泌,扩大瞳孔,以及抗胆碱酯酶抑制.低致死量成人80~130mg,儿童10mg.本文主要总结阿托品中毒量在有机磷农药中毒救治中的重要性.
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340 五层龙属植物的多酚成分:α-葡糖苷酶及醛糖还原酶抑制活性成分芒果苷的定量分析
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多花少籽果中的醛糖还原酶抑制成分多花少籽果苷Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的结构
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注射用胶原酶对磷脂酶A2活性抑制作用的体外实验研究
目的:研究注射用胶原酶对炎性物质磷脂酶A2(PLA2)的水解作用和对其活性的抑制作用.方法:制备不连续SDS-PAGE垂直平板凝胶,将3种酶促反应体系的不同酶解时间的反应液样品,进行电泳、固定、染色、脱色.同时在PLA2活性测定体系中,加入定量的胶原酶溶液,测定各反应体系的PLA2活性相当值.以不含胶原酶的PLA2活性测定体系为标准,求出不同活性单位胶原酶体系的PLA2相对活性,并依据实验所获得的数据,绘制Lineweaver-Burk图加以识别.通过对注射用胶原酶在PLA2水解卵磷脂过程中所起的作用,确定注射用胶原酶对PLA2活性的抑制机制.结果:注射用胶原酶对PLA2无水解作用,但在体外对PLA2的活性有明显的抑制作用,其抑制类型为竞争性抑制,且抑制作用随胶原酶剂量的增加而增强.结论:虽然注射用胶原酶在体外对炎性物质PLA2的活性有明显的抑制作用,但根据酶促反应动力学的基本理论,"针抵患处、酶达底物"是构成化学溶解术这一微创技术的基本要素和应用该技术时必须遵守的基本原则.
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尿激酶抑制哮喘小鼠气道重塑
气道重塑是慢性哮喘的病理特征之一,是导致不可逆性气流阻塞及持续性非特异性气道高反应性的主要原因.尿激酶是组织纤溶酶原激活剂,国内外许多研究将其应用于肺等器官纤维化的治疗,但在哮喘气道重塑中的作用尚无报道.
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内皮型一氧化氮合酶来源的一氧化氮通过 S-亚硝基化修饰二氢叶酸还原酶抑制其降解
内皮型一氧化氮合酶(eNOS)作为内皮细胞一氧化氮(NO)产生的主要来源,在多种心血管疾病中扮演重要角色。eNOS的功能受多种因子调控,其中四氢生物蝶呤(BH4)可通过维持 eNOS 偶联状态而促进其形成 NO,而非解偶联状态下生成超氧阴离子,进而保护内皮生理功能。二氢叶酸还原酶(DHFR)作为生成四氢生物蝶呤(BH4)的主要蛋白酶,对内皮功能调控具有重要影响,然而 eNOS 对 DHER 是否具有调控作用及相关机制尚不清楚。
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锤头状核酶抑制色素衍生上皮因子对A549细胞活性影响的实验研究
色素衍生上皮因子(PEDF)是体内一种重要的血管抑制因子[1,2].在急性或慢性损伤下,PEDF也可以保护和营养多种神经元与雪旺细胞.体外实验也证实PEDF可以通过诱导子宫内膜癌细胞的凋亡而抑制其生长,其抑制作用呈时间与剂量依赖性[3].所以PEDF可以影响肿瘤血管的生长以及肿瘤细胞的生长过程.本实验利用锤头状核酶抑制PEDF基因在肿瘤A549细胞系中的表达,以了解PEDF对肿瘤细胞生长的影响.
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调控CD95的锤头状核酶抑制小鼠T细胞凋亡及杀伤活性的作用研究
供者淋巴细胞输注(DLI)在诱导移植物抗白血病(GVL)作用,治疗异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后复发等方面取得了可喜效果.研究表明供者T淋巴细胞可通过CD95-CD95L途径杀伤白血病细胞,以诱导DLI后的GVL效用 [1].但在体内异常微环境及一系列细胞因子的作用下,白血病细胞表面可高表达CD95L,并可通过CD95- CD95L途径诱导CD+95的T细胞凋亡,降低其GVL效应,从而逃逸机体的免疫应答.为减少供者T细胞的凋亡进而提高其GVL效应,本课题构建了针对小鼠CD95基因596位点的锤头状核酶,将其导入小鼠脾脏T细胞,观察该核酶对T细胞凋亡及增殖的影响,探索提高T细胞GVL作用的新途径.
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缬沙坦和依那普利对实验性心肌梗死后胶原重构的影响
本研究用结扎兔冠状动脉左前降支制作心肌梗死模型,观察Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(AB1B)、血管紧张素转化酶抑制(ACEI)对心肌梗死后心肌胶原重构的影响.
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纳米载体介导的抗转录激活因子核酶对血管内皮细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ分子的抑制
移植血管病(GVD)仍是心脏移植成功与否的关键因素.尽管GVD的发病机制尚不十分清楚,但Labarrere等[1]证实内皮细胞表面主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ分子与GVD密切相关.MHCⅡ分子转录激活因子(CⅡTA)是MHCⅡ结构及诱导性表达关键的总调节因子,只在MHCⅡ阳性细胞中出现[2,3].本文以抗CⅡTA的核酶抑制血管内皮细胞系表面MHCⅡ抗原的表达,为心脏移植排斥问题的解决开辟了一条新途径.
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他莫昔芬通过丝裂原活化蛋白激酶抑制前列腺癌细胞系PC3细胞增殖
他莫昔芬是选择性雌激素受体(ER)调节剂(SERM).丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)主要包括细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun N端应力激活蛋白激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38).
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苯丙氨酸解氨酶诱导人白血病HL-60细胞凋亡的初步研究
目的:研究苯丙氨酸解氨酶(L-phenylalanine ammonia-lyase,PAL)对白血病HL-60细胞生长的抑制作用,探讨其作用机制.方法:应用MTT比色法观察PAL对HL-60细胞的生长抑制作用,应用倒置显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳技术分析细胞凋亡.结果:PAL与HL-60细胞共育时,能明显抑制细胞生长,半数抑制浓度(IC50)为3.02 U/mL;细胞呈典型的凋亡形态学改变,细胞皱缩,染色质凝集,沿核膜内侧分布,可见新月形;细胞DNA裂解成180~200 bp及其倍数的片段,电泳得到特有的梯形条带,凋亡率与PAL剂量和作用时间呈依赖关系.结论:PAL能抑制HL-60细胞的生长,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一.
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瑞格非尼对人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶活性抑制作用的体外研究
应用体外人肝微粒体及重组人源代谢酶孵育体系考察了瑞格非尼(regorafenib,REG)对12种人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶(UGTs)的抑制作用,通过体外-体内外推(IV-IVE)预测REG与经过UGT1A1代谢消除药物共服引发药物-药物相互作用(DDI)的风险.以混合人肝微粒体(HLM)及重组人源UGTs作为酶源,4-甲基伞形酮(4-MU)作为UGTs的非特异性探针底物,N-(3-羧丙基)-4-羟基-1,8-萘酰亚胺(NCHN)和Ⅳ-(正丁基)-4-(4-羟苯基)-1,8-萘酰亚胺(NPHN)作为UGT1A1的特异性探针底物,三氟拉嗪(TFP)作为UGT1A4的特异性探针底物,评估REG对12种人UGTs的抑制作用.通过非线性回归并拟合曲线求得半数大抑制浓度(IC50),Lineweaver-Burk和Dixon作图法确定抑制类型,二次作图法求得抑制动力学常数(K),并基于体外抑制动力学参数预测了REG抑制UGT1A1所引发DDI的潜在可能性.体外抑制实验表明,REG对UGT1A1、UGT1 A7、UGT1A9和UGT2B7具有较强的抑制作用,IC5o为0.15~6.6 μmol·L-1,Ki为0.027~14 μmol·L-1.REG可竞争性的抑制UGT1A1催化的4-MU-O-葡糖醛酸化反应及UGT1A1催化的NPHN-O-葡糖醛酸化反应,而非竞争性的抑制UGT1A1催化的NCHN-4-O-葡糖醛酸化反应,对UGT1 A7、UGT1A9和UGT2B7催化的4-MU-O-葡糖醛酸化反应呈现混合型的抑制类型.口服治疗剂量的REG (160 mg·d-1)可导致UGT1A1代表性底物NPHN和NCHN的AUC分别增加101%~302%和13%~109%.结果提示,REG与主要经UGT1A1代谢的底物药物联合应用时,可通过强效抑制UGT1A1进而影响其在机体内的代谢清除,在临床使用过程中需要密切关注.
关键词: 瑞格非尼 尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶 酶抑制 药物-药物相互作用 -
斑蝥酸钠维生素B6和复方苦参注射液对人肝微粒体细胞色素P450酶活性的抑制作用
目的 考察斑蝥酸钠维生素B6和复方苦参注射液对人肝微粒体细胞色素P450酶(CYP450)7种同工酶活性的体外抑制作用.方法 将66.70%,33.40%,16.70%,6.67%,2.22%,7.41‰,2.47%浓度的斑蝥酸钠维生素B6和100.00%,50.00%,25.00%,10.00%,3.33%,1.11%,3.70%复方苦参注射液分别与人肝微粒体进行孵育,以非那西丁、双氯芬酸、(S)-美芬妥英、右美沙芬、咪达唑仑、安非他酮、阿莫地喹分别作为CYP1 A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4、CYP2B6、CYP2C8的探针底物,用LC-MS/MS检测探针底物代谢物的生成量,计算半数抑制浓度(IC50).结果 斑蝥酸钠维生素B6注射液对CYP450亚型活性的IC50> 10 mg,远高于其日用药量(0.1 ~0.5 mg).复方苦参注射液对CYP1 A2和CYP2D6的IC50值分别是15.2,10.3 mL,均小于其日用药量(20mL);对CYP2C8和2C19的IC50值均为21.1 mL,均接近其日用药量;对CYP2B6、2C9、3A4-M和3A4-T的IC50值分别为63.5,72.0,95.5,92.5 mL,均远高于其日用药量(20 mL).结论 临床剂量下,斑蝥酸钠维生素B6注射液在体外对CYP450亚型活性无影响;复方苦参注射液在体外对CYP1 A2和CYP2D6均有明显的抑制作用,对2C8和2C19均有一定程度的抑制作用,对CYP2B6、2C9、3A4-M和3A4-T均无明显的抑制作用.临床静脉用复方苦参注射液时,应注意可能因CYP450酶抑制引起的药物相互作用.
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新型他克林衍生物ST09与ST10的体外代谢研究
目的 研究新型他克林衍生物ST09、ST10的体外代谢稳定性并分别考察了其对人肝微粒CYP450各亚型酶的抑制作用.方法 采用人肝微粒体模型分别孵育ST09、ST10,液相色谱-质谱联用法测定不同孵育时间体系中剩余底物浓度,通过底物消除法计算其消除半衰期.利用LC-MS/MS测定6种CYP450主要代谢产物生成量,计算得到IC50,分别评价ST09、ST10对主要人CYP450酶的抑制活性.结果 ST09在0.1 mg· mL-1人肝微粒体中消除半衰期小于1 min;其主要代谢产物ST10为NADPH非依赖性代谢,体外消除半衰期为32 min,体外固有清除率为0.043 mL·min-1·mg(protein)-1.ST09与ST10抑制人肝微粒体CYP3 A4(咪达唑仑为底物)、CYP3A4(睾酮为底物)、CYP1 A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6的IC50分别为0.42/0.25、1.27/0.81、24.92/18.21、36.53/54.34、67.64/144.9、6.43/5.30 μmol·L-1.结论 ST09与ST10在人肝微粒体系统代谢消除较快,两者均对人肝微粒体中CYP3A4及CYP2D6有显著抑制作用.