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Ⅱ类 MHC 在接种流感疫苗后诱导保护性免疫应答中的作用
MHCⅡ类缺陷( MHC-II KO; Aβ-/-)小鼠用于评价MHC-II类分子在接种疫苗后诱导保护性免疫应答中的作用。接种流感 A/P R8病毒样颗粒( VLP )疫苗后,完全不同于CD4 T细胞缺陷小鼠,在MHCⅡ类分子缺陷小鼠体内外均未检测到疫苗特异性免疫球蛋白IgG抗体。缺乏MHCⅡ类分子并没有明显影响血清中诱导产生特异性IgM抗体。用流感VLP (全灭活流感病毒)或减毒活流感病毒免疫MHCⅡ类分子缺陷小鼠,并没有保护小鼠免受流感A /PR8病毒的感染。从野生型小鼠过继转移分级分离的脾细胞到MHCⅡ类分子缺陷小鼠,表明, MHC-II提供的CD43(+)细胞群在产生疫苗特异性IgG抗体方面明显比 CD43(-) B220(+)保守B细胞或CD4 T细胞群更重要,而且能对致死性感染提供保护。来自MHC -II KO小鼠的骨髓树突状细胞,在产生白介素-6和肿瘤坏死因子α时表现出明显的缺陷。因此,结果证明,接种流感疫苗后,MHC-II 分子在诱导保护性免疫应答中有多种作用。
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水泡性口炎病毒载体共表达的热休克蛋白70可以增强抗人诺瓦克病毒的黏膜免疫
作为病原体,人类诺瓦克病毒( NOV )占全球非细菌性胃肠炎的95%。目前,没有可用于对抗人类NOV病毒的疫苗,因为它不可培养,而且缺乏小动物模型。近研究表明,表达人类NoV 衣壳蛋白(rVSV-VP1)的重组水泡性口炎病毒(rVSV)在小鼠体内引起强烈的免疫应答。为了进一步改善候选疫苗的安全性和有效性,热休克蛋白70(HSP70)被插入到rVSV-VP1骨架载体。作为双重插入,萤火虫荧光素酶( luc)基因插入到HSP70,形成第二构建物。相比 rVSV-VP1,所得到的重组病毒( rVSV-HSP70-VP1和rVSV-luc-VP1)在小鼠体内的细胞繁殖和病毒传播有所衰减。在接种剂量为1.0×106 PFU时,相对于 rVSV-VP1, rVSV-HSP70-VP1触发了显著增高的阴道IgA应答;相对于rVSV-luc-VP1,诱导显著加强的粪便和阴道IgA 应答,尽管血清IgG和T细胞的应答是相似的。在接种剂量为5.0×106PFU 时,rVSV-HSP70-VP1比rVSV-VP1刺激显著增高的T 细胞应答,粪便及阴道 IgA 应答。当rVSV-VP1和rVSV-HSP70构成联合疫苗时,粪便和阴道IgA应答也显著上升。总的来说,这些数据表明:(ⅰ)插入一个附加的基因( HSP70或 luc )到rVSV-VP1骨架,可以进一步衰减以VSV为基础的疫苗在体外和体内的毒性,从而提高了候选疫苗的安全性;( ii ) HSP70增强基于VSV的人NOV疫苗引发的人类NOV病毒特异的黏膜和T细胞的免疫。
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肠炎沙门菌SPI1缺陷突变体诱导抗鼠伤寒和肠炎沙门菌攻击的交叉免疫
本论文作者研究了疫苗接种过的小鸡对沙门菌感染的免疫应答,研究了沙门菌致病岛1( SPI1)减毒的肠炎和鼠伤寒沙门菌疫苗株的血清交叉保护能力。运用实时 PCR 定量白细胞介素 IL1β、IL17、IL22,干扰素γ( IFNγ),诱导性一氧化氮合成酶( iN-OS),免疫球蛋白IgM、IgA、IgY和Ig轻链的转录物,以及急性期应答包括生物素蛋白、血清淀粉样蛋白A、细胞外脂肪酸结合蛋白( Ex-FABP )、免疫应答基因1、趋化因子AH221和Trappin-6的六种基因来鉴定免疫应答。接种了两种血清型的SPI1突变体的小鸡,不会受到沙门菌感染,且与攻击的血清型无关,与感染后的时间无关。但是,所有白细胞介素、iNOS和Ex-FABP的表达显示了感染后4 d静脉攻击后的保护效果,同源性血清型显著好于异源性血清型。接种肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌SPI1的突变体混合物后,诱导了抗两种血清型攻击的中等程度的保护作用,即混合菌比单一沙门菌组成的疫苗接种的小鸡提供了附加的保护效力。
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由灭活疫苗、弱毒活疫苗及DNA疫苗诱导的抗日本脑炎病毒免疫应答的特征
预防接种是保护个体对抗日本脑炎病毒感染的有效的手段。目前在中国使用了2种日本脑炎病毒疫苗;即Vero细胞衍生性灭活疫苗和弱毒活疫苗。在这项研究中,作者在小鼠模型中鉴定了由灭活疫苗、弱毒活疫苗以及 DNA 疫苗侯选物〔( pCAG-JME),它表达了JEV-prM-E蛋白〕诱导的免疫应答的特征以及它们的保护效果。试验结果显示活的减毒疫苗能够提供100%的保护,并且导致高水平的抗JEV抗体和细胞因子的产生。 pCAG-JME疫苗诱导了与弱毒活疫苗一样好的保护性免疫。出人意料的是,用灭活疫苗免疫的动物仅仅诱导产生有限的免疫应答,并且产生部分保护,这可能是由于小鼠中树突细胞的活性降低以及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞扩张所致。总之,该项试验结果证实弱毒活疫苗在提供抗日本脑炎病毒感染方面比灭活疫苗更有效,而且pCAG-JME是一种潜在的JEV疫苗候选物。
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常规接种卡介苗(BCG)引起免疫应答的非特异效应
BCG是世界范围内常接种的疫苗之一,它除了对结核病( TB )有预防作用外,研究表明,接种BCG还具有许多额外、有益的非特异性免疫效应,包括在高死亡地区降低由非TB引起的婴儿和儿童的整体死亡率。接种BCG引起的抗体应答,为研究BCG影响非相关抗原引起的免疫应答提供了机会。本研究比较了常规接种对已接种BCG和没有接种BCG的婴儿的抗体应答水平的影响。已接种BCG的婴儿来自于出生后就接种BCG的相关研究组,没接种BCG的婴儿来自于接种门诊。所有婴儿依澳大利亚国家免疫计划接受BCG常规接种。后一组婴儿免疫接种后(6个月),对抗肺炎链球菌抗体( anti-Pn Ps )、抗 B 型流感嗜血杆菌抗体( anti-Hib)、抗破伤风类毒素抗体( anti-TT)和抗乙肝表面抗原抗体( anti-HBs)进行了为期4周的检测。总共有127位父母同意他们的婴儿参加本次研究,有108位进行了后的分析(其中56位已接种BCG,52位没接种BCG),结果发现,已接种BCG的一组,其anti-Pn Ps IgG(针对所有血清型)、anti-Hib IgG和anti-TT IgG的几何平均浓度( GMC )高于没有接种BCG的一组。对于血清型9V (P<0.01)和18C ( P=0.04),其差异具有统计学意义。而 anti-HBs IgG,比较几何平均浓度( GMC),发现已接种BCG的一组要低于没有接种BCG的一组( P=0.03)。两组中大多数婴儿的抗体水平高于保护值。刚出生的婴儿接种BCG影响后来常规接种的抗体应答。本研究为资源匮乏的国家引入肺炎结合疫苗和新型结核病疫苗提供重要启示。
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肺炎球菌表面蛋白A不影响小鼠对百白破疫苗的免疫应答
肺炎球菌表面蛋白A( PspA)是一种抗肺炎链球菌的构成蛋白疫苗的很有希望的候选物。之前我们已经表明,全细胞百日咳疫苗( wP )对于PspA是一种很好的佐剂,在小鼠中诱导抗肺炎球菌感染的保护性应答。在巴西, wP 与白喉、破伤风类毒素( DTPw)及氢氧化铝(明矾)佐剂一起施用于儿童。在小鼠中P spA5-DTP 。的单一皮下注射剂量(配方包含得自进化支5的PspA和新一代DTPw,并含有低剂量的百日咳杆菌脂多糖和明矾)诱导高水平的全身P spA5抗体,并针对两种不同的呼吸道致命性肺炎球菌菌株攻击提供保护。在这里,我们评估针对了小鼠接种P spA5-DTP 。后对P spA5的黏膜免疫应答,以及对 DTP 抗原的免疫应答。 P spA5-DTP 。于小鼠皮下免疫,在呼吸道中诱导了高水平的抗-PspA5 IgG而不是IgA。另外观察到,接种后小鼠与对照组小鼠在受到攻击后,细胞涌入呼吸道黏膜的情况没有差异。接种DTP 。或P spA5-DTP 。的小鼠中循环的抗百日咳、抗破伤风和抗白喉抗体的水平是等价的。 DTP 。和 P spA5-DTP 。诱导的抗体在中和Vero细胞中白喉毒素的细胞毒时显示出相似的能力。此外,与P spA5组合丝毫不影响小鼠对百日咳杆菌和破伤风毒素的预防。我们的研究结果支持联合P spA-DTP疫苗的方案。
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加单磷酰类脂A佐剂的呼吸道合胞病毒病毒体疫苗的效力与安全性
在婴儿以及免疫功能低下的成人和老人中,呼吸道合胞病毒感染仍然是一个严重的健康问题,没有有效的可利用的疫苗的原因是由于存在一些障碍:非复制性呼吸道合胞病毒疫苗可引起过度的Th2型应答,增强了疫苗接种者自然感染呼吸道合胞病毒而引起的呼吸系统疾病。作者以前发现含有Toll样受体4配体单磷酰类脂A的重组呼吸道合胞病毒病毒体可加强疫苗诱导的免疫应答,并且使免疫应答倾向于Th1型应答,也就不会引起呼吸系统疾病,由于黏膜免疫接种是诱导呼吸道合胞病毒特异性的全身与黏膜抗体应答的有吸引力的方法,并且TLR配体可以增强这种应答,作者通过鼻内接种途径免疫小鼠和棉鼠研究了含有单磷酰类脂A的呼吸道合胞病毒病毒体疫苗的有效性和安全性。在小鼠中发现在鼻内投递加有单磷酰类脂A的呼吸道合胞病毒病毒体后提高了全身性IgG抗体和局部分泌性IgA抗体的水平,并且使活病毒攻击后肺部的病毒滴度明显降低。此外,与福尔马林灭活的呼吸道合胞病毒疫苗诱导的应答比较,上述病毒体疫苗诱导的应答更加倾向于Th1型应答。上述加有佐剂的呼吸道合胞病毒病毒体诱导的抗体应答以及Th1/Th2细胞因子应答同活的呼吸道合胞病毒感染所致应答是可比拟的。福尔马林灭活的呼吸道合胞病毒诱导的血清IgG在攻击时可抑制病毒释放,同时该疫苗诱导倾向于Th2型免疫应答。在棉鼠模型中,病毒体疫苗加单磷酰类脂A免疫时观察到类似的全身性抗体应答和抑制肺部病毒的释放,但黏膜分泌性IgA应答只有小幅度加强。重要的是,用病毒体加佐剂单磷酰类脂A进行鼻腔免疫与活病毒感染一样,没有导致接种疫苗的动物在活病毒攻击时引发呼吸系统病症的任何征象,而在其他方面可比的条件下,肌肉注射福马林灭活的呼吸道合胞病毒疫苗会诱发严重的肺部免疫病理学改变。总之,这些资料表明,黏膜投递呼吸道合胞病毒病毒体加单磷酰类脂A佐剂有望成为抵御呼吸道合胞病毒的一种安全有效的疫苗。
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在6或9月龄初次投递麻疹疫苗后5~10岁儿童中体液和细胞免疫
背景:鉴于婴儿麻疹死亡率高,故人们考虑在<12月龄就开始接种是否能提供持久的免疫力。
方法:70名儿童在6、9或12月龄初次接种麻疹疫苗,在5~10岁时对麻疹特异性免疫应答进行了评估。 -
孟加拉高砷低砷区儿童对口服灭活霍乱疫苗的特异免疫应答及其EPI疫苗
背景:对口服灭活全菌体霍乱毒素B ( CTB )亚单位霍乱疫苗Dukoral溍和国家免疫接种体系中的3种儿童疫苗的免疫应答,在生活于孟加拉高砷和低砷污染区的儿童中进行了比较,并对他们的血清补体因子C3和C4水平进行了评估。
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关于禽流感病毒的通用疫苗
当前靶向表面蛋白的疫苗可驱使抗原变异,其结果或是导致更高致病性病毒的出现,或是产生抗原上不同的病毒能逃逸疫苗接种下的控制从而在宿主人群中生存下来。通常的流感疫苗是靶向高度易变的表面蛋白且不能抗异源病毒的攻击。诱导抗流感保守表位的免疫应答的疫苗可提供抗异源病毒攻击的保护作用。作者在此文中报道了用经修饰的痘病毒Ankara( MVA)与腺病毒( Ad)表达核蛋白和基质蛋白( NP+M1)的融合体形成重组体用其接种的后果,以序贯的疫苗接种方式在不同年龄的鸡中进行试验,发现是安全和具免疫原性的。用干扰素-γ( IFN-γ)斑点试验法评估第二针接种后的细胞免疫应答。卵内Ad初免孵化后4周用MVA加强免疫对近交系和远交系小鸡都是具免疫原性的方式。近交系鸡( C151)用致病性的禽流感病毒( LPAI ) H7 N7攻击。用Ad-NP+M1初免、MVA-NP+M1加强的小鸡在感染后的第17天,根据空斑试验测定的泄殖腔病毒排量比用含非相关抗原的重组病毒的免疫者减少了。这种初步的效力可证明鸟中的概念验证:含流感病毒内部抗原的病毒载体诱导鸡的T细胞应答可能是研制流感疫苗有效的策略,这种疫苗可诱导抗禽流感的异源保护作用。
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利用工程树突细胞定向的纳米颗粒增强免疫应答的简单策略
在这项研究中,作者证实了一种简单的能够增强免疫应答的策略,这种策略是使用两组分树突细胞定向抗原投递系统。一种组分是由用于树突细胞导向的双功能性融合蛋白所构成,另一组分是由生物素化的PLGA纳米颗粒( NPs)制备而成,用来包裹抗原。由截短的与抗-DEC-205单链抗体( scFv )相融合的核心链霉抗生物素蛋白构成的融合蛋白与荷载卵白蛋白的生物素化的NP s相混合(这种生物素化的NPs是使用生物素-PEG (2000)-PLGA配制而成)。融合蛋白功能化NP s被用于树突细胞定向性抗原投递。在体外树突细胞摄取研究中结果表明,当与非定向的NP s进行比较时,显示出高2倍的受体介导性融合蛋白功能化 NPs 的摄取结果。用融合蛋白功能化NPs 免疫并受树突细胞成熟刺激(抗CD40单抗)的小鼠增强了卵白蛋白特异性IgG和IgG亚类应答。这些小鼠的脾细胞当在体内用卵白蛋白再行刺激时则产生了更高水平的Th1型(γ干扰素和IL-2)细胞因子应答。融合蛋白功能化树突细胞定向系统的这种令人振奋的结果支持了可以将其作为一种通用的疫苗投递系统加以应用,以期用来设计单价或多价疫苗。
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结核杆菌 T细胞表位识别的免疫学足迹
活动性肺结核病人因咳嗽而产生的含有结核分枝杆菌( MTB )的气溶胶是结核杆菌感染的来源。大约70%的暴露于感染性气溶胶的个体并没有被感染,这主要取决于结核分枝杆菌暴露的强度和持续时间。其余的人的40%则发生原发性结核,余下的60%含有感染的人则伴随产生强免疫应答而导致潜伏性结核。在自然保护中涉及的机理还未被很好地了解,因此需要将分散的观察整合归纳成一连贯的系统的生物学方案,以期综合性地理解下述问题:即我们必须了解在人类中结核分枝杆菌感染的特性,在细胞免疫方面的进展将有助于达到这一目标。作者在此文中综述了结核分枝杆菌肽疫苗的特性、抗原提呈以及提呈Ⅰ类和Ⅱ类主要组织相容性复合物的T细胞表位的测定情况。有关针对疫苗开发的巨大努力的剖析将有助于分析结核分枝杆菌感染的临床上来龙去脉的生物学相关机理,其目的在于:①以期更好地理解能够抵抗结核病的个体中临床相关性T细胞应答以及研发免疫保护及疫苗标记物;②鉴定不含结核分枝杆菌感染的个体的免疫应答的特性;③鉴定判断针对治疗所产生的反应的标记物。
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疫苗接种与感染后的抗体应答在病毒中和及表位识别方面表现出明显的差异
猪圆环病毒相关疾病( PCVAD)包括一组综合征,与感染猪圆环病毒2型(PCV2)相关。基于疫苗接种和感染时的免疫应答在数量和性质上有所不同的假设,本研究的目的是在猪接种PCV2衣壳蛋白( CP )后和感染期间分别对其免疫力、病毒复制和疾病保护进行评估。此疾病模型包括了PCV2和猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的双重感染,后者是一个已知其加强疾病进展和严重程度的病毒。PRRSV感染的主要影响是使PCV2病毒血症的峰值增加近40倍,但PCV2未表现出对PRRSV的相互影响。在接种疫苗的猪中,没有任何证据显示在双重病毒攻击后出现疾病或PCV2的复制。疫苗接种后的免疫促成了中和PCV2的活性;而PCV2感染或其疾病则导致非中和抗体的高水平产生,主要是针对CP的C-末端区域的多肽。这些结果支持这一主张,即不能用总抗体应答的量来衡量免疫保护。因此,抵抗疾病的保护作用取决于特定表位的免疫优势。在设计P CV2疫苗时,应考虑抗原表位的特异性。
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MUTZ-3树突细胞对B型流感嗜血杆菌结合疫苗组分的应答
对于疫苗注册和批签发而言,疫苗效力测定应该是指令性进行的,由于体内效力测定受到各种各样因素的限制,因此有必要采用相关的体外替代效力测定.这些替代试验应当好包括来源于目标(人类)种系的细胞,针对人体体内发生的因免疫接种导致的一系列免疫应答是不可能通过使用单一细胞类型就可测定出来的,即使树突细胞能成为一种重要的候选细胞类型(由于它们在诱导和调节免疫应答方面起关键性作用).
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结核分枝杆菌ESAT-6抗原和HSP70截短后C端片段融合蛋白的克隆、表达及免疫原性研究
结核病(TB)仍是一个主要的威胁世界公共健康的问题.选定结核分枝杆菌(MTB)的免疫原,以期能有效诱导保护性免疫应答是开发研究TB疫苗的终目的.
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基因枪法和肌内注射法免疫HCV NS3/4A诱导小鼠免疫应答的比较
目的 比较肌内注射法和基因枪法对免疫效果的影响.方法 将携带HCV NS3/4A基因的质粒pcDNA3.1-NS3/4A,分别肌内注射和基因枪免疫BALB/c小鼠.基因枪免疫采用2μg/只和10μg/只两种剂量,肌内注射免疫的剂量为100 μg/只,共免疫3次.分别于第3次免疫后10 d和20 d,收集小鼠血清、分离脾细胞;ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体水平;ELIspot检测小鼠IFN-γ、IL-2和IL-4;非放射性细胞毒性试验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用,从而比较肌内注射和基因枪法激发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答的影响.结果 免疫后第10 d检测结果表明,2 μg/只和10 μg/只基因枪法免疫产生的抗体效价分别为1∶500和1∶1000,100 μg/只肌内注射免疫产生的抗体效价为1∶1 000.第20 d再次检测,基因枪法产生的抗体效价仍为1∶500和1∶1000,肌内注射降低为1∶500.2μg/只和10 μg/只基因枪免疫产生的IFN-γ和IL-2均高于100 μg/只肌内注射免疫.但这两种免疫方法均未激发IL-4的水平.在不同的效靶比情况下,10 μg/只和2μg/只基因枪免疫激发的CTL细胞杀伤活性均高于100 μg/只肌内注射免疫.结论 基因枪法免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答均显著高于肌内注射免疫.
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CpG 加入脂质体疫苗配方的效果
已经证明,脂质体疫苗配方中含有靶向天然免疫受体的刺激物会明显增加疫苗的免疫力。疫苗接种后,天然细胞群对免疫刺激物发生反应、吞噬和加工抗原,通过淋巴输入管道从注射点进入局部淋巴结。在这样的终端接受到的信号推动并塑造适应性免疫应答。然后效应淋巴细胞通过淋巴输出管离开淋巴结以执行其系统功能。作者直接将导管插入绵羊的淋巴管以详细研究疫苗用加入了 CpG 的基于脂质体投递系统接种后,在局部淋巴引流网络中发生的天然与适应性免疫应答,作者证明,CpG 诱导快速的中性粒细胞募集,提高树突细胞相关性抗原的输送,并影响加入输入淋巴的天然细胞的成熟作用,这转化成淋巴结封闭亦即 IFN-γ阳性 T 细胞诱导时间的延长和提高了 Ag 特异性 Abs 的生产。总结起来,此研究的结果可量化大动物模型中,在接种与人相似剂量的疫苗后免疫应答的体内实时动力学,此研究详细说明了许多免疫机理的强化,这些免疫机理是解释 CpG 当其用作为疫苗内佐剂时的免疫原性功能的理由。
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人整合素α4(CD49d)β7的纯化、检测及有关应用的讨论
使用亲和层析的方法,对人整合素α4β7进行纯化.通过ELISA检测尤其是对于免疫小鼠应答的监测,相应改变免疫策略.从讨论中获取正确的指导思路和适当的试验方法,在人整合素β7和抗体的研制方面取得了显著的进展.
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白细胞介素12真核表达载体对DNA疫苗诱导免疫应答的影响
目的:观察白细胞介素12真核表达载体(pWRG3169)对HBV-S DNA疫苗(pCR3·1-S)诱导Balb/c小鼠(H-2d)的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达HBsAg的小鼠肥大细胞瘤P815细胞(P815-HBV-S)成瘤性的影响.方法:肌肉注射 DNA疫苗及白细胞介素12真核表达载体,背部皮下接种P815-HBV-S细胞,观察成瘤情况,4 h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性.结果:对照组成瘤率100%,pCR3·1-S组小鼠成瘤率为12.5%,pCR3·1-S+IL-12真核表达载体组成瘤率为0,对照组平均存活期和6周后存活率分别为28.4 d和 0.后两组分别大于38.2 d及45 d,存活率为87.5%及100%,pCR3·1-S 组CTL细胞杀伤活性51.1%, 联合白细胞介素12真核表达载体组72.6%,对照组为20.5%(P<0.01).结论:DNA疫苗可以诱导小鼠细胞免疫应答,对体内HBV感染具有预防及治疗作用.白细胞介素12真核表达载体可加强 DNA疫苗的上述作用.
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外周血T细胞亚群检测在恶性肿瘤中的价值
肿瘤严重危害人类的健康,全世界每年大约有700万人死于恶性肿瘤[1].目前临床研究证实,恶性肿瘤患者机体免疫功能有不同程度的降低,对肿瘤的发生、发展、疗效以及预后有直接影响.T淋巴细胞介导的细胞免疫是肿瘤免疫的主要方面.肿瘤免疫应答学说和监视学说被广泛用于肿瘤疾病的临床疗效评价和预后判断中,T淋巴细胞亚群在肿瘤疾病的发病机制、疗效评价和预后判断中得到应用[2].近几年来,人们越来越多的把目光集中到肿瘤免疫的调节机制上来.以流式细胞技术分析恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群的文献已经很多了,但是没有系统的文献来总结和评价外周血T细胞亚群检测在恶性肿瘤中的价值,故笔者通过本文对外周血T细胞亚群检测在恶性肿瘤中的价值进行评价,探讨其与恶性肿瘤的关系,为恶性肿瘤的治疗提供依据.