首页 > 文献资料
-
肝细胞癌DNA修复酶hMTH1基因mRNA及其蛋白的表达
目的:通过检测DNA修复酶hMTH1 mRNA及其蛋白在肝细胞癌组织及细胞株中的表达,探讨hMTH1在肝细胞癌发生、发展及防御机制中的作用.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究肝癌(HT,n=33)、癌旁组织(HST,n=33)和正常肝细胞株(L-02)、肝癌细胞株(SMMC7721,HepG2)中hMTH1mRNA的表达,同时采用免疫组织化学方法原位检测了上述的肝癌组织(n=17)及癌旁组织(n=17)中hMTH1蛋白的表达.结果:绝大部分检测对象中均有不同程度hMTH1 mRNA及其蛋白的表达.肝癌组织中hMTH1 mRNA的表达较癌旁组织显著升高(t=2.424,P=0.021<0.05);SMMC7721,HepG2细胞中hMTH1 mRNA的表达显著高于L-02细胞(F=6.810,P=0.009<0.01).SMMC7721与HepG2细胞中hMTH1 mRNA的表达没有显著差异(P=0.395>0.05).hMTH1蛋白主要在肝细胞胞质中表达,肝癌组织中hMTH1蛋白水平明显高于癌旁组织(t=2.618,P=0.019<0.05).结论:hMTH1mRNA及其蛋白在肝癌组织及肝癌细胞株中表达升高.
-
胃癌候选抑癌基因Syk表达的意义
目的:探索酪氨酸激酶Syk(spleen tyrosine kinase,Syk)基因的表达与胃癌生成及转移的关系.方法:用半定量RT-PCR检测胃癌组织、正常胃组织61例Syk mRNA,p53的表达,同时用免疫组化方法检测Syk的表达.结果:所有正常胃组织都有Syk基因的表达,而61例胃癌组织中只有14例表达,正常胃组织Syk基因表达率显著高于胃癌组织(x2=72.3,P<0.05),且胃癌组织中SykmRNA含量比正常胃组织显著降低(t=2.1,P<0.05).31例有淋巴结转移的胃癌组织中,3例有Syk基因表达,30例无淋巴结转移的胃癌中有11例检测到Syk mRNA的表达,有淋巴结转移的胃癌Syk mRNA的表达率和表达水平显著降低(x2=4.85,P<0.05),且Syk mRNA表达与p53的表达呈正相关(x2=22.03,P<0.05).结论:Syk基因的表达缺失与胃癌的生长及转移相关,呈p53依赖性.
-
CDC25B在大肠肿瘤中的表达及意义
目的:探讨CDC25B(cell division cycle 25B,细胞分裂周期蛋白25B)在大肠肿瘤中的表达及临床意义.方法:应用半定量的RT-PCR及免疫组化染色(S-P法)方法检测该基因在大肠癌(RT-PCR法,n=24;S-P法,n=168),大肠腺瘤(RT-PCR法,n=62;S-P法,n=25)及大肠正常黏膜(RT-PCR法,n=10;S-P法,n=20)中的表达.结果:CDC25B mRNA在癌及大肠腺瘤中的相对含量明显高于正常大肠黏膜(1.41±0.07,1.32±0.17vs0.62±0.02,P<0.01),在大肠腺瘤伴轻-中-重度不典型增生组织中的相对含量逐渐增高(1.25±0.21,1.36±0.19和1.40±0.07,P<0.01);CDC25B基因翻译蛋白在正常大肠黏膜、腺瘤中未见表达,在大肠癌中以细胞核表达为主,其表达与大肠癌有无远处脏器转移相关(2/46 vs 14/106,P<0.05);经随访发现CDC25B蛋白阳性表达者,5 a生存率明显降低(25/31vs42/82,P<0.05).结论:CDC25B可能参与了大肠腺瘤到大肠癌的转变过程,其在大肠癌发展中可能起一定作用,为大肠癌预后不良的危险因素.
-
肠癌细胞株dynamin Ⅱ的差异表达
目的:应用半定量RT-PCR方法检测dynaminⅡ基因在大肠侧向发育型肿瘤细胞株同SW480细胞株及Lovo细胞株之间的差异表达.方法:以三种肠癌细胞株为标本,分别提取总RNA,逆转录合成cDNA,选择加入的模板量及循环数,优化PCR反应条件,确定适宜的反应体系,凝胶图像分析结果.结果:在大肠侧向发育型肿瘤细胞株同普通隆起型肠癌细胞株之间存在着dynaminⅡ基因的差异表达.结论:半定量RT-PCR方法具有简单,方便,经济的特点,通过该方法,我们发现在大肠侧向发育型肿瘤癌细胞株同SW480细胞株及Lovo细胞株之间存在dynaminⅡ基因的差异表达,此结果同我们基因芯片的筛选结果一致,结合dynaminⅡ基因的功能,我们推测该基因可能在LST的形态学或癌变机制中发挥一定作用.
-
幽门螺杆菌感染者胃黏膜中内质网分子伴侣Grp94的表达
目的:探讨幽门螺杆菌感染对胃黏膜组织中内质网分子伴侣Grp94mRNA及蛋白水平表达的影响及意义.方法:应用半定量RT-PCR方法及Western blot方法检测感染与未感染幽门螺杆菌的胃黏膜组织中Grp94mRNA及蛋白的表达情况.结果:未感染组28例,Grp94mRNA表达量为0.424±0.055,感染组32例,Grp94mRNA表达量为0.882±0.082.两组相比感染组Grp94mRNA的表达量明显高于未感染组(P<0.01);未感染组Grp94蛋白表达量为0.427±0.036,感染组Grp94蛋白表达量为0.671±0.072,两组相比感染组Grp94蛋白表达量明显高于未感染组(P<0.01).结论:幽门螺杆菌感染可使胃黏膜增加Grp94mRNA的表达及蛋白的合成,这可能有利于胃黏膜的自身保护作用.
-
纤毛轴动力蛋白基因在老年人支气管组织中的表达
人类呼吸系统的结构和功能随着年龄增长会发生衰退性改变,一般在60岁以后更加显著.我们采用半定量的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测了老年人和非老年人正常支气管组织纤毛轴动力蛋白基因的表达水平,目的是探讨衰老对纤毛运动影响的分子机制[1].
-
荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测白血病WT1 基因表达及动态监测的研究
Wilm瘤基因(WT1)在白血病细胞中高表达提示其可作为一种广谱的白血病标志,但早期由于定性或半定量RT-PCR技术的局限性使其在微小残留病(MRD)诊断中的价值难以得到一致认可.为此我们采用实时荧光定量(FQ)-RT-PCR技术,检测了不同类型白血病患者WT1基因的表达;并对部分急性白血病(AL)患者外周血WT1基因表达跟踪检测,以探讨WT1基因表达用于MRD检测的可行性.
-
类风湿关节炎患者CD+4T细胞亚群异常及其意义
为明确CD+4的T细胞亚群Th1、Th2之间的平衡在类风湿关节炎(RA)发病中的意义,我们分别以干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4作为Th1、Th2亚群的代表性指标,用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定RA患者外周血单个核细胞(PBMC)及滑膜组织中 IL-4、IFN-γ mRNA水平,并探讨IL-4、IFN-γ表达与疾病活动的关系.
-
Heparanase基因mRNA在肝癌、癌旁组织及正常肝组织的表达及意义
近年研究发现内切糖苷酶(Heparanase)[1,2]与肿瘤转移的关系密切,而转移是肝癌的重要特点[3],为此我们应用半定量RT-PCR检测7例正常肝组织,45例肝癌及癌旁组织内Heparanase基因mRNA的表达,以揭示Heparanase与肝癌侵袭转移的关系,并探索以Heparanase来判断肝癌侵袭转移能力的可能性及方法.
-
性激素受体及相关生长因子在前列腺基质细胞中的表达
我们采用半定量RT-PCR方法观察了性激素受体及相关生长因子在BPH体外细胞模型前列腺基质细胞中的表达,以及在前列腺基质细胞分化和逆分化中的表达变化.报告如下.
-
明胶酶及其组织抑制物基因在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及意义
卵巢上皮性癌(卵巢癌)在就诊时多已发生转移.目前的研究认为,明胶酶A(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和明胶酶B(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)与肿瘤的侵袭、转移密切相关[1].明胶酶均是以无活性的酶原形式分泌的,在卵巢的生理活动中,仅有少量的明胶酶被活化,从而发挥作用,但在病理状态下,明胶酶的活化与抑制的平衡被打破,大量活化的明胶酶直接参与肿瘤的侵袭和转移.组织基质金属蛋白酶抑制物(tissue inhibitors of matrix metalloproteinases, TIMPs)可以特异性地抑制明胶酶的活化,是明胶酶天然的抑制剂.本研究采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,研究TIMPs与MMP-2、9基因在卵巢上皮性肿瘤(卵巢肿瘤)中的表达及其临床意义.
-
细胞色素P450 1A1基因mRNA在子宫异位内膜及在位内膜中的表达
细胞色素P450 1A1(CYP 1A1)是参与外源性化合物在体内代谢的重要的Ⅰ相代谢酶,同时参与内源性雌激素的代谢[1],广泛分布于肺、胎盘及子宫等肝外组织.本研究采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测子宫内膜异位症(内异症)患者异位、在位子宫内膜及非内异症患者子宫内膜中CYP 1A1 mRNA的表达情况,探讨CYP 1A1与内异症发病的关系.
-
凋亡抑制基因survivin mRNA在子宫内膜癌组织中的表达
凋亡抑制促进了细胞的癌变及癌细胞耐药性的产生,survivin基因在肿瘤发生、发展中的抑制凋亡作用,日益受到重视.本研究采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测了survivin mRNA在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达情况,并结合临床病理学特征进行分析,以探讨survivin基因在子宫内膜癌发生、发展中的作用.
-
生殖道分泌物支原体培养、半定量与耐药率调查
近年来,泌尿生殖道支原体感染,越发引起重视(1).检出手段也不断创新(2),新药不断开发,而支原体的耐药谱也不断发生变化(3)(4),为此,要了解目前北京地区泌尿生殖道支原体中解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)的感染率和耐药性,笔者选用了IST与DM培养试剂盒,对170例生殖道标本进行了培养检测,又将前次培养阳性结果(5)与耐药率一并统计,临床分析另文报道,现就实验部分报告如下:
-
c-myc原癌基因在半乳糖性白内障晶状体中的表达
c-myc原癌基因是与细胞周期、细胞增殖和分化密切相关的基因[1],而晶状体细胞的增生和分化是白内障发生的病理基础[2].我们制作大鼠半乳糖性白内障动物模型,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription and polymerase chainrection,RT-PCR)对c-myc原癌基因的mRNA表达进行半定量检查,探讨c-myc基因与白内障发生的关系.
-
基质金属蛋白酶2及其抑制剂在口腔鳞癌中的表达
我们应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学法对口腔鳞癌及癌旁组织中的基质金属蛋白酶2(matrix matalloproteinases-2,MMP-2)及其抑制剂 (tissue inhibitor of matalloproteinase-2,TIMP-2)的mRNA及蛋白的表达进行半定量、定性及定位研究,探讨其与口腔鳞癌临床特征的关系.
-
乳腺定量MRI的进展及研究方向
乳腺MRI软组织分辨率较高,尤其是信噪比较高的高场强MRI在乳腺病灶的检出及良、恶性病变鉴别方面具有优势,已被公认为是对乳腺X线摄影不确定病灶的常用的辅助检查手段[1]。乳腺MRI检查不仅能够显示病灶的形态特征,功能成像还可以反映病灶微血管的形成及从分子水平反映细胞代谢。乳腺定量MRI是功能成像的重要组成部分,通过在体分析病变新生血管的变化,对病变性质做出定量判断。乳腺定量MRI方法主要包括MRI半定量动态增强检查、MRI定量动态增强检查及DWI,笔者对这几种技术的主要进展、存在问题进行概述,并对今后的研究应用方向进行展望。
-
脂肪肝CT图像、肝穿活检病理图像定量形态测量软件的设计和应用
实时超声和CT平扫可提示脂肪肝的肝脏肿大和肝实质内弥漫性或局灶性回声或密度改变,定性或半定量地判断脂肪肝的程度及类型.笔者制作了1个图像处理软件,对用面罩式覆盖法[1]得到的肝脏CT图像进行数字化处理,得出整个肝脏脂肪变性程度的参数,同样可用于病理图像的处理,从而达到了定量诊断的目的.
-
蛋白免疫印迹半定量分析在药理学研究中的影响因素
目的 探讨蛋白免疫印迹半定量分析的影响因素,为在蛋白水平上研究药物的药理作用提供指导.方法 提取丙型肝炎病毒(HCV)感染的Huh7.5细胞内总蛋白,蛋白定量后,以丙型肝炎病毒编码的核心蛋白为目的蛋白,以管家基因编码的蛋白Tubulin或Gapdh为内参对照,分析蛋白上样量、抗体浓度及孵育时间、发光液浓度等可变因素对蛋白免疫印迹半定量分析结果的影响.结果 蛋白免疫印迹半定量结果中目的蛋白相对强度与蛋白总上样量之间只在一定上样量范围内有线性关系,超出线性范围会导致相对蛋白强度变化幅度减少,甚至无变化;上样体积、内参的选择不影响实验结果;在条带质量较好的前提下,一抗浓度及其孵育时间和发光液浓度也不改变实验结果;但是半定量有一定的缺陷,实验结果有一定的误差,应在15%以内.结论 影响蛋白免疫印迹半定量结果的主要因素为目的蛋白的上样量;在能获得条带质量较好的前提下,改变上样体积和抗体孵育时间、适当稀释抗体和发光液浓度有利于实验进展而不影响实验结果.
-
定量和半定量PCR技术及其临床意义
1 半定量和定量PCR及定量核酸的方法1.1 内对照法将已知的目的DNA及内对照DNA混合,加入两对引物同时进行PCR扩增,后将PCR产物转膜,用特异性探针杂交,目的DNA扩增后的量通过系列稀释后与内对照的相对量进行比较即可确定[1].